штамм бактерий bacillus subtilis - продуцент фактора роста фибробластов

Формула изобретения

Штамм Bacillus subtilis, депонированный в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича под номером 288, являющийся продуцентом фактора роста фибробластов.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, к бактериям-продуцентам фактора роста фибробластов и может быть использовано в медицине, ветеринарии.

В настоящее время для получения факторов роста фибробластов ген, ответственный за его синтез, выделяют из животной или растительной клетки, пересаживают в штамм кишечной палочки. Полученный генномодифицированный штамм кишечной палочки выращивают на питательной среде (D.M.Ornitz, 2001). Из нее выделяют фактор роста фибробластов. В результате такой сложной технологии фактора роста фибробластов получают очень малое количество, при этом он очень дорог. Стоимость 1 мг достигает 40-70 тысяч долларов США. Это затрудняет его практическое использование как в биотехнологии, так и при создании новых лекарственных препаратов.

Штамм Bacillus subtilis 804 получен из раны больного, зажившей без осложнений. Он является природным штаммом бактерий, продуцирующим фактор роста фибробластов. Ранее природных штаммов-продуцентов фактора роста фибробластов из бактерий рода Bacillus не было известно. Штамм Bacillus subtilis 804 депонирован 13.04.2010 г. в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов III-IV групп Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских иммунобиологических препаратов под номером 288.

Штамм Bacillus subtilis 804 характеризуется следующими свойствами:

Палочки, размер клеток (3-4)×(0,7-0,9) мкм. Бактерии подвижные. По Граму окрашиваются положительно. Колонии на питательном агаре белые, шероховатые, с фестончатыми краями, со слабым розовым оттенком, диаметром 2-18 мм. Штамм на мясопептонном бульоне при 37°С через 18-24 часа образует белесоватую пленку на поверхности и небольшой придонный осадок.

Штамм обладает антагонистической активностью по отношению к тест-штаммам Staphylococcus aureus «Никифоров», Staphylococcus aureus «Филиппов», E.coli 157, Proteus mirabilis.

Вызывает гидролиз крахмала, редукцию нитратов. Расщепляет без выделения газа глюкозу, сахарозу, мальтозу, дульцит, галактозу, лактозу. Маннит, рамнозу, лизин, аргинин не ферментирует. Сероводород, индол не образует.

Чувствителен к стрептомицину, линкомицину, эритромицину; не чувствителен к бензилпенициллину, полимиксину.

Штамм нетоксигенен, нетоксичен, невирулентен и безвреден.

Продукт, синтезируемый штаммом: фактор роста фибробластов.

Для получения фактора роста фибробластов штамм Bacillus subtilis 804 выращивают на синтетической питательной среде в течение 1-7 суток. Проводят ультрафильтрацию, освобождаясь от живых бактерий. Химически чистый фактор роста из метаболита выделяют при помощи электрофореза. Из литра среды получают от 0,1 до 100 мкг фактора роста.

Фактор роста, который эффективно стимулирует миграционную и сократительную активность клеток кожи, а также пролиферацию фибробластов человека, усиливает действие инсулина как фактора роста, увеличивает синтез ДНК. Это комплекс 4 белков, молекулярной массой от 11 до 14 кД. В разведении 1:10⁹ способствует почти такому же росту числа фибробластов в культуре, как и эталон - 5% эмбриональная телячья сыворотка. Фактор роста чувствителен к протеолизу под действием трипсина, сохраняет активность после инкубации при 100°С в течение 1 минуты и имеет изоэлектрическую точку в области 9.2.-9.3. Препараты на основе полученного бактериального фактора ускоряют заживление кожных ран и слизистых у экспериментальных животных.

Стоимость 1 мг нашего фактора роста- около 120 долларов США.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК

1. Ornitz, D.M. Fibroblast growth factors. / D.M.Omitz, N.Itoh // Genome Biology - 2001 - № 2(3) - p.3005.1-3005.12.