способ стабилизации лейкозного процесса

Формула изобретения

Способ стабилизации лейкозного процесса, включающий внутримышечное введение лигфола, отличающийся тем, что лигфол применяют телкам 12-15-месячного возраста, инфицированным вирусом лейкоза крупного рогатого скота, двумя последовательными трехмесячными курсами 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол. (первый курс) и 15,0 мл/гол. (второй курс).

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной лейкозологии, касается способа стабилизации лейкозного процесса у животных, инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), и может быть использовано в комплексе мероприятий по борьбе с лейкозом для повышения длительности эксплуатации высокопродуктивных животных при отсутствии прогрессирования болезни.

Лейкоз крупного рогатого скота является хронической болезнью вирусной природы и экологически опасной для человека. Болезнь поражает в первую очередь высокопродуктивных коров в возрасте 4-7 лет с ослабленными защитно-приспособительными реакциями. Лейкоз причиняет животноводству значительный экономический ущерб, который выражается в недополучении молока и приплода, преждевременной выбраковке коров и быков-производителей, утилизации туш больных животных, нарушении воспроизводительной функции больных коров, ограничении хозяйственной деятельности в связи с неблагополучием. Подсчитано, что животные, инфицированные вирусом лейкоза, имеют молочную продуктивность на 12,7% и содержание жира в молоке на 0,09% ниже, чем у серонегативных. Кроме этого омоложение оздоравливаемого стада за счет выведения из товарного производства полновозрастных коров и замены их нетелями снижает валовое производство молока на 6%. Лейкозная патология сильно подрывает племенную работу, наносится невосполнимый ущерб селекции и выращиванию чистопородных высокопродуктивных животных. Из-за ограничений по лейкозу племенные хозяйства не могут реализовать ценных в генетическом отношении бычков и телочек, по существу, они превращаются в товарных производителей молока. Удельная величина ущерба от лейкоза на одно животное достигает 1,48 тыс. руб. /1/

Развитию болезни способствуют не только генетическая предрасположенность и дефекты иммунитета, но и сниженная естественная резистентность и иммунологическая реактивность, особенно параметры клеточной системы. Нарушение неспецифических защитных механизмов может привести к расстройству клеточного взаимодействия, необходимого для индукции иммунного ответа. Восстановление активности иммунной системы и естественной резистентности до физиологической нормы повышает иммунобиологические и защитные свойства организма животных в отношении лейкозного процесса.

Коррекцию клеточных и гуморальных факторов активности иммунной системы и естественной резистентности обеспечивает использование (i) комбинации иммуномодуляторов Т- и В-активина /2/, (ii) коррегирующего препарата, содержащего Т- и В-активины /3/, (iii) комбинации иммуномодулятора цитоден и пробиотика интестевит /4/, (iiii) лигфола /5/. При введении известных препаратов телятам раннего возраста в большей или меньшей степени повышается устойчивость к инфекции ВЛКРС.

Задачей изобретения является разработка способа стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных.

Технический результат заключается в сохранении продуктивного здоровья инфицированных ВЛКРС высокопродуктивных животных, продлении сроков их эксплуатации и повышении качества животноводческой продукции.

Возможность хронизации лейкозного процесса обусловлена патогенетическими особенностями ВЛКРС, в частности его способностью персистировать в организме животного без клинического проявления. Из-за отсутствия цитопатогенного действия ВЛКРС, находясь в цитоплазме лимфоцита, не причиняет клетке видимого вреда. При ослаблении иммунологического контроля ВЛКРС проникает в ядерный аппарат клетки, внедряя в него свою РНК-информацию, запуская механизм превращения нормальной клетки в лейкозную /6/.

Поставленная задача решается тем, что инфицированным ВЛКРС животным 12-15-месячного возраста внутримышечно вводят лигфол по оригинальной схеме.

Способ осуществляется следующим образом.

Инфицированным ВЛКРС телкам 12-15-месячного возраста препарат лигфол вводят внутримышечно двумя последовательными 3-месячными курсами 1 раз в месяц в дозах 10,0 мл/гол (первый курс) и 15,0 мл/гол (второй курс).

Препарат лигфол - самопролонгированный препарат, действующим началом которого являются гуминовые вещества. В основе фармакологической активности лигфола лежат противоопухолевые и иммунооксидантные механизмы /7/. Эффективность лигфола в качестве средства неспецифической иммунотерапии опухолевых заболеваний у собак составила 47,6% /8/. Противоопухолевое действие лигфола обусловлено нарушением обменных процессов в тканях опухоли, снижением активности патологических ферментов, стимулирующих рост и неконтролируемое размножение клеток и активизацией образования нормальных ферментов /9, 10/.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. По принципу аналогов (возраст, живая масса, клиническое состояние, иммунологический статус) формировали две группы телок 12-15-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза (положительный результат в РИД с гликопротеидным антигеном ВЛКРС) по 10 голов в каждой. Животным первой группы (опыт) внутримышечно вводили лигфол в дозе 10,0 мл/гол трехкратно с интервалом в 30 дней и в дозе 15,0 мл/гол по той же схеме. Животным второй группы (контроль) внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме опытной группы. Обе группы животных находились на одном скотном дворе с одинаковыми условиями кормления и ухода. Для оценки состояния животных учитывали серологические, гематологические, иммунобиохимические и весовые показатели до начала и через 6 месяцев после начала опыта. Результаты представлены в таблицах 1 и 2 (в таблицу 1 не включены иммунобиологические показатели, по которым не выявлено математически достоверной разницы, в частности, уровни -, -глобулинов, содержание общего белка, альбуминов, общего холестерина, уровни триглицеридов общих, -липопротеидов, иммуноглобулинов G, А, М). Эндогенную интоксикацию оценивали по уровню высокомолекулярных веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНСММ), представляющих собой небелковые производные различной природы, в частности мочевины, креатинина, мочевой кислоты, глюкозы, молочной и других органических кислот, аминокислот, жирных кислот, холестерина, фосфолипидов, продуктов свободнорадикального окисления, промежуточного метаболизма, нуклепротеидного обмена и т.д., накопление которых в концентрациях, превышающих нормальные, является фактором нарушения гомеостаза.

Таблица 1
Серологические, гематологические, иммунобиохимические показатели животных опытной и контрольной групп
Показатели	Опытная группа (n=10)	Контрольная группа (n=10)
до начала опыта	через 6 месяцев	до начала опыта	через 6 месяцев
РИД	Положит.	Положит.	Положит.	Положит.
Титр антител к антигенам ВЛКРС (min-max)	1:4-1:96	1:2-1:4	1:8-1:30	1:16-1:32
Ср. геом. титров антител log2	24,0±1,23	3,0±0,97*	16,0±1,11	25,0±1,58*
Лейкоциты, 109/л	10,59±1,34	8,75±0,71	10,14±1,29	12,0±2,2
Лимфоцитов, %	75,6±3,2	67,5±7,9	70,4±3,5	74,7±3,0
Лимфоциты, 109/л	7,83±1,27	6,05±1,1	7,3±1,3	8,9±1,97
ВНСММ, у.е.	17,3±0,44	14,58±0,37*	14,75±0,98	18,68±1,26*
Нейтрофилы сегментоядерные, %	17,1±2,49	25,75±5,36*	18,2±2,97	13,4±3,5*
Примечание: * - разница между опытной и контрольной группами достоверна (Р<0,95; 0,99).

Таблица 2
Весовые показатели животных опытной (10 голов) и контрольной (10 голов) групп
№ животного	Живая масса животных, кг	Привес живой массы, %
Опытная группа	Контрольная группа	Опытная группа	Контрольная группа
До опыта	После опыта	До опыта	После опыта
1	210,0	260,0	215,0	250,0	23,8	16,3
2	230,0	275,0	240,0	270,0	17,4	12,5
3	245,0	290,0	250,0	280,0	18,4	14,3
4	240,0	280,0	230,0	265,0	16,7	15,2
5	250,0	290,0	250,0	285,0	16,0	14,0
6	255,0	295,0	260,0	285,0	15,7	9,6
7	250,0	290,0	240,0	275,0	16,0	14,6
8	240,0	305,0	260,0	295,0	27,1	13,5
9	235,0	270,0	225,0	255,0	14,9	13,3
10	250,0	300,0	235,0	270,0	20,0	14,9

Как видно из таблицы 1, у животных опытной группы средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС уменьшилась с 24,0±1,23 до 3,0±0,97 log₂, показатели крови по абсолютному числу лейкоцитов и лимфоцитов крови снизились с 10,59±1,34 до 8,75±0,71 10⁹/л и с 7,83±1,27 до 6,05±1,1 10⁹ /л соответственно, что свидетельствовало о стабилизации лейкозного процесса, т.е. отсутствии перехода бессимптомной стадии лейкозного процесса в гематологическую со снижением эндогенной интоксикации (концентрация ВНСММ - с 17,3 до 14,58 у.е.) и повышением процента сегментоядерных нейтрофилов с 17,1±2,49 до 25,75±5,36. У животных контрольной группы через 6 месяцев после начала опыта отмечалась положительная динамика развития лейкозного процесса: средняя геометрическая титров антител к антигенам ВЛКРС повысилась с 16,0±1,11 до 25,0±1,58 log₂, абсолютное число лейкоцитов и лимфоцитов - с 10,14±1,29 до 12,0±2,2 10⁹/л и с 7,3±1,3 до 8,9±1,97 10⁹ /л соответственно, содержание ВНСММ - с 14,75±0,98 до 18,68±1,26 у.е., при этом процент сегментоядерных нейтрофилов снижался с 18,2±2,97 до 13,4±3,5. Прирост живой массы в опытной группе был ниже, чем в опытной группе (таблица 2). Отмеченные изменения указывали на развитие лейкозного процесса и переход ряда животных в категорию подозрительных на лейкоз животных, характеризующуюся повышением абсолютного количества лимфоцитов в данной возрастной группе до 9,0-11,0 10⁹/л.

Изменения по ряду показателей позволило сделать вывод о нарушении метаболических и биохимических процессов на клеточном уровне, что свидетельствовало о развитии инфекционного процесса в контрольной группе.

Пример 2. По принципу аналогов формировали 3 группы телок 12-месячного возраста с серологическим подтверждением лейкоза по 10 голов в каждой. Животным первой группы внутримышечно вводили лигфол в соответствии с изобретением, животным второй группы внутримышечно вводили лигфол в дозе 5,0 мл/гол. пятикратно с интервалом в 7 дней и в дозе 10,0 мл/гол, трехкратно с интервалом в 30 дней. Животным третьей группы внутримышечно вводили физиологический раствор в дозах и по схеме, как в первой группе. Животные всех трех групп проверялись по серологическому тесту, гематологическому обследованию периферической крови и биохимическим исследованиям сыворотки крови. Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3
Серологические, гематологические и биохимические показатели животных трех групп.
Показатели	1-я группа	2-я группа	3-я группа
РИД
Ср. геом. титров антител log2
Лейкоциты, 109/л
Лимфоциты, %
Лимфоциты, 109/л
ВНСММ, у.е.
Нейтрофилы сегментоядерные, %
Примечание: в числителе показатели до начала опыта, в знаменателе - после окончания опыта.

Проведенные исследования показали, что применение лигфола в группах 1 и 2 обеспечивало положительную динамику основного гематологического показателя, однако эта динамика наиболее выражена в первой группе. Динамика анализируемых показателей в первой группе свидетельствовала о стабилизации лейкозного процесса, во второй группе - сдерживание лейкозного процесса с сохранением риска перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую, а в третьей группе - о развитии лейкозного процесса (таблица 3).

Результатами исследований подтверждена возможность стабилизации лейкозного процесса у инфицированных ВЛКРС животных заявляемым способом. С одной стороны, предотвращение перехода лейкоза из бессимптомной стадии в гематологическую позволяет рассматривать животных как инфицированных, а не больных, а с другой - стабилизация онкологической болезни может быть единственно ожидаемым эффектом в исследовании новых типов противоопухолевых препаратов и рассматривается как показатель эффективности лечения /11/.

Источники информации

1. Гаврилова Г.А. Диагностика скрытых форм лейкоза крупного рогатого скота: метод, рекомендации. Благовещенск, 2009. - 13 с.

2. Александров И.Д., Потатуркин И.К., Сидоренко Н.М. и др. Иммуномодулирующая роль Т- и В-активинов и естественная резистентность у телят раннего возраста// Новые фармакологические средства в ветеринарии: матер. 8-й межвуз. науч.-практич. конф., СПб - СПб: Гос. акад. вет. мед., 1996. - С.61-62.

3. Патент РФ № 2188655, 2002.

4. Ермолаев С.В. Эколого-эпизоотологический анализ крупного рогатого скота в разных условиях Среднего Урала: автореф. дис канд. вет. наук: 16.00.03. - Барнаул. 2000. - С.20-21.

5. Патент РФ № 2320357, 2008.

6. Смирнов П.Н. Болезнь века - лейкоз крупного рогатого скота. - Новосибирск, 2007. - 300 с.

7. Наставление по применению лигфола в качестве адаптогена и стресс-корректора в ветеринарии: утв. Департаментом ветеринарии Минсельхоза РФ 03.05.2001, № 13-4-03-0063.

8. Беркович A.M., Бузлама B.C., Мещеряков Н.П. Лигфол - адаптоген и стресс-корректор нового поколения. Повышение продуктивного здоровья животных. - Воронеж: Кварта, 2003. - 148 с.

9. Григоренко В.Б. Лигфол - механизм действия, клиническое применение, некоторые выводы // Ветеринарная жизнь. - 2006. - № 4.

10. WO 95/08335, 1995.

11. Markman M. Challenges associated with evaluating the clinical utility of noncitotoxic pharmacological agents in oncology // J. Cancer Res. Clinic. Oncol., 1997. - Vol.123. - P.581-582.