способ определения гепарина в гомогенате плаценты у родильниц, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции

Формула изобретения

Способ определения гепарина у родильниц, перенесших в третьем триместре беременности вспышку герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что у родильниц забирают кусочек плаценты, готовят гомогенат и обрабатывают его для выделения гликозаминогликанов, затем полученные экстракты глюкозаминогликанов разделяют методом гель-электрофореза в полиакриламидном геле и рассчитывают процентное содержание гепарина методом денситометрии по оптической плотности, при этом вспышку герпес-вирусной инфекции устанавливают спектрофотометрически по нарастанию титра антител к вирусу герпеса.

Описание изобретения к патенту

Цель настоящего способа - определить содержание гепарина в гомогенате плаценты у родильниц, перенесших вспышку герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности.

Контактирование хориального синцитиотрофобласта с кровью матери возможно только при условии существования механизмов, предотвращающих свертывание крови. В процессе формирования материнского кровотока в межворсинчатом пространстве происходит соприкосновение крови матери с большой эпителиальной поверхностью, так как кровь матери выходит за пределы эндотелия сосудов. Такой эпителий должен обладать специальными механизмами, предотвращающими свертывание крови (Климова Н.И., 1976; Цирельников Н.И., 1980). После родов фибринолиз резко усиливается, предотвращая тромбообразование (Скипетров В.П., 1968; Скипетров В.П., Кузник Б.И., 1973). Появление дистрофических изменений в хориальном эпителии, как правило, приводит к образованию фибриноида. Это, по-видимому, связано с нарушением способности хориального эпителия синтезировать поверхностные гликозаминогликаны (Стейси М.И., Баркер С.А., 1965). Исследуя литературу, мы не нашли данных, указывающих на изменение синтеза гликозаминогликанов у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции. Ближайшим аналогом по затронутому вопросу можно считать документ (SU 1178812 А1, Волгоградский государственный медицинский институт, 15.09.1985 г.).

Однако авторы в своей работе касаются определения гликозаминогликанов в сыворотки крови, но не в гомогенате плаценты, и тем более при беременности с осложнением герпес-вирусной инфекцией.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Исследовались плаценты после родов у 20 беременных, перенесших вспышку герпес-вирусной инфекции в третьем триместре с титром антител к вирусу простого герпеса 1:3200 (герпесная инфекция средней тяжести), и у 20 беременных, перенесших вспышку герпес-вирусной инфекции в третьем триместре с титром антител к вирусу герпеса 1:12800 (герпесная инфекция тяжелой формы). У 15 не болевших родильниц во время беременности плацента изучалась в качестве контроля. Исследования проводились на базе стационара акушерского отделения клиники Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.

2. Титр антител к вирусу герпеса (ВПГ-1) определялся (по динамике антител IgG) с помощью стандартных наборов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) иммуноферментным методом (ИФА) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

3. У родильниц, перенесших в третьем триместре вспышку герпес-вирусной инфекции различной агрессивности, что устанавливалось по титру антител к вирусу герпеса, забирались кусочки плаценты, из которых изготовляли гомогенат для определения гепарина. Контролем служил гомогенат плаценты от родильниц, не болевших во время беременности. Для получения гомогената плодовая часть плаценты (ворсинчатый хорион) срезалась скальпелем небольшими пластинками площадью до 2-3 см и толщиной 1 мм. Кусочки ткани помещали в химические стаканы, содержащие 200 мл физиологического раствора, отмывали от клеток крови, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 мин, и подсушивали на фильтровальной бумаге. Затем ткань растирали пестиком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до однородной кремообразной массы, которую в последующем обрабатывали для выделения гликозаминогликанов по прописи Р.В.Меркурьевой (1966). Полученные экстракты сывороточных и плацентарных гликозаминогликанов разделяли методом диск-электрофореза в полиакриламидном геле на аппарате «Biometra» (Германия). Оптическую плотность гелевых столбиков определяли с помощью денситометрии исследуемых образцов, а затем рассчитывали их процентное содержание на единицу площади.

Исследования показали, что при обострении герпес-вирусной инфекции по мере нарастания титра антител к вирусу герпеса в гомогенате плаценты снижается содержание гепарина: при титре антител 1:3200 определяется 25,82±0,80%. При титре антител к вирусу герпеса 1:12800 содержание гепарина снижается до 22,86±0,62% (контроль - 29,70±0,71%).

Источники информации

1. Климова Н.И. Влияние плаценты на свертываемость крови. Автореф канд. дисс. Чита, 1972. 29.

2. Меркурьева Р.В. Электрофоретическое разделение сывороточных мукопротеинов на фракции // Лабор. дело. 1966. 12. 712-715.

3. Скипетров В.П. Тканевые факторы свертывания крови в динамике беременности // Акуш. и гинекол. 1968. 1. 8-14.

4. Скипетров В.П., Кузник Б.И. Акушерский тромбогеморрагический синдром // Иркутск. 1973.310.

5. Стейси М.И., Баркер С.А. Углеводы живых тканей // М., 1965. 324.

6. Цирельников Н.И. Гистофизиология плаценты человека // Новосибирск, Изд. «Наука» Сибирское отделение. 1980. 183.

7. SU 1178812 A1, Волгоградский государственный медицинский институт. 15.09.1985 г.