способ диагностики очаговой склеродермии наружных гениталий

Формула изобретения

Способ диагностики очаговой склеродермии наружных гениталий путем лабораторного исследования больных с клиническими проявлениями патологического процесса, отличающийся тем, что дополнительно в очагах поражения методом полимеразной цепной реакции выявляется ДНК вируса папилломы человека высокого - 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 типа и/или низкого - 6, 11 типа канцерогенного риска, и при его обнаружении устанавливают диагноз очаговой склеродермии наружных половых органов.

Описание изобретения к патенту

Ограниченная склеродермия - хроническое заболевание с поражением соединительной ткани и преобладанием фиброзно-склеротических, воспалительных и сосудистых нарушений, преимущественно в коже и подкожной клетчатке (1). Этиология заболевания неизвестна.

Известно, что возникновению склеродермии способствует генетическая предрасположенность, реализация которой происходит при неблагоприятном воздействии ряда экзогенных факторов, в том числе, микробных и вирусных (2-4). Полагают, что инфекции сенсибилизируют организм, провоцируя склеродермический процесс (5).

Диагностика очаговой склеродермии (ОСД), локализованной в области наружных гениталий, представляет значительные трудности. Проявления ОСД при этом нередко принимают за крауроз вульвы, лейкоплакию, ограниченный нейродермит и пр. Последствием неправильной диагностики является неадекватное лечение.

В настоящее время диагноз очаговой склеродермии устанавливают на основании клинической картины. В сомнительных случаях или в начальной стадии заболевания, когда имеется лишь воспалительный отек, клинический диагноз подтверждают данными гистологического исследования патологического очага (6). Лабораторные исследования, выполняемые у больных ограниченной склеродермией (общий анализ крови, общий анализ мочи, биохимический анализ крови, исследование крови на антинуклеарные антитела), не являются специфичными. Отдельной методики для диагностики очаговой склеродермии наружных гениталий не существует.

Биопсия патологического очага, выполняемая для проведения патоморфологического исследования, является инвазивным методом, и в области наружных гениталий из-за наличия большого количества нервных окончаний и обильного кровоснабжения выполняется в исключительных случаях. Таким образом, в настоящее время, достоверно установить диагноз ограниченной склеродермии области наружных половых органов без проведения гистологического исследования не представляется возможным.

Цель предлагаемого изобретения: повышение точности диагностики очаговой склеродермии в области наружных гениталий.

Поставленная цель достигается тем, что дополнительно в очагах поражения методом полимеразной цепной реакции определяют наличие вируса панилломы человека (ВПЧ) высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 тип) и/или низкого (6, 11 тип) канцерогенного риска, и при его обнаружении устанавливают диагноз очаговой склеродермии наружных половых органов.

Способ осуществляется следующим образом: после клинического осмотра пациента с подозрением на очаговую склеродермию в области наружных гениталий, проводится забор (соскоб) клинического материала (эпителиальных клеток) урогенитальным зондом с патологического очага (зоны максимально выраженного уплотнения, изменения цвета кожи или слизистой). Полученный материал помещают в пробирку с транспортной средой, представляющей из себя водно-солевой буфер, в который добавлены муколитик, консервант и стабилизатор (для сохранения клинического материала в течение 28 суток) в соответствии с Правилами взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований (7). Затем в условиях ПЦР-лаборатории проводится выявление и дифференцировка ДНК ВПЧ высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 тип) и низкого (6, 11 тип) канцерогенного риска в клиническом материале методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле (с помощью сертифицированной ПЦР-тест-системы производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора «АмплиСенс ВПЧ ВКР скрин.»).

Метод ПЦР основан на принципе естественной репликации ДНК, включающей расплетение двойной спирали ДНК, расхождение нитей ДНК и комплементарное достраивание обеих нитей (т.е. синтез новых нитей ДНК) (8). Суть метода заключается в том, что, маркировав блоками специфический участок ДНК, добиваются протекания синтеза только в этом участке, а не по всей длине нитей ДНК. В результате происходит экспоненциальное увеличение количества копий специфического фрагмента по формуле 2ⁿ, где n - число циклов амплификации. В итоге получают положительный (наличие ДНК определенного серотипа ВПЧ) или отрицательный (отсутствие в препарате ДНК ВПЧ) результат.

С целью выявления ДНК вируса папилломы человека (высокого и низкого канцерогенного риска - ВКР и НКР), проведено лабораторное обследование методом ПЦР 10 больных (9 женщин и 1 мужчина) с ранее установленным диагнозом очаговой склеродермии с очагов, подозрительных на склеродермию, расположенных в области наружных гениталий.

У всех больных (в 100% случаях) были получены положительные результаты ПЦР-диагностики (см. таблицу).

Выявление ВПЧ с очагов в области наружных гениталий у больных ограниченной склеродермией
№ п/п	ФИО, возраст	Наличие экстрагенитальных очагов склеродермии	Типы ВПЧ, выявленные у больных
Высокого канцерогенного риска (ВКР)	Низкого канцерогенного риска (НКР)	BKP + HKP
1	С.З.А., 59	+	-	+	-
2	П.О.А., 69	+	+	-	-
3	Б.Т.М., 25	+	-	+	-
4	Р.А., 10	+	+	-	-
5	К.В.М., 54	+	-	+	-
6	Н.Н.Н., 70	+	+	-	-
7	К.Н.А., 31	-	-	+	-
8	Е.Г.В., 58	+	-	+	-
9	А.Л.П., 42	-	-	+	-
10	Х.В.Е., 23	-	-	-	+
	(муж.)

В контрольной группе были обследованы 5 больных с различными патологическими процессами в области наружных гениталий (крауроз и лейкоплакия вульвы, неспецифический баланопостит, осложненный фимозом, вульгарный псориаз), клинически сходными с проявлениями очаговой склеродермии. Ни в одном случае ВПЧ в материале с этих очагов обнаружен не был.

Примеры конкретного исполнения:

1. Б.Т.М., 25 лет, больна распространенной склеродермией в течение 2-х лет. Наблюдается в отделении общей дерматологии ФГУ «Нижегородский НИКВИ Росздрава», где был установлен диагноз, периодически получает комплексное лечение. Экстрагенитальные очаги склеродермии расположены в области бедер, век, аксиллярных областях. В области наружных гениталий (на больших половых губах, в области клитора) очаги уплотнения белого цвета с нечеткими границами, трещины. После клинического осмотра 15.04.09 г. был проведен забор (соскоб) клинического материала (эпителиальных клеток) урогенитальным зондом с патологического очага (зоны максимально выраженного уплотнения, изменения цвета кожи или слизистой). Полученный материал поместили в пробирку с транспортной средой, представляющей из себя водно-солевой буфер, в который добавлены муколитик, консервант и стабилизатор в соответствии с Правилами взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований. Затем в условиях ПЦР-лаборатории было проведено выявление и дифференцировка ДНК ВПЧ высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 тип) и низкого (6, 11 тип) канцерогенного риска в клиническом материале методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле (с помощью сертифицированной ПЦР-тест-системы производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора «АмплиСенс ВПЧ ВКР скрин.»). С очагов склеродермии, расположенных в области наружных гениталий, обнаружена ДНК ВПЧ 6 типа. Клинических проявлений папилломавирусной инфекции в области наружных гениталий не выявлено.

2. Р.А., 10 лет. Была прислана на консультацию для уточнения диагноза в ФГУ «Нижегородский НИКВИ Росздрава» из ОКВД г.Саранска 21.04.09. Жалобы на появление крупных белых пятен в аногенитальной области, затем мелких белых пятен в области спины, левого бедра. Больна в течение 5 месяцев, отмечает рост очагов. При осмотре в области наружных гениталий с переходом на перианальную область обнаружены белые пятна с четкими границами и розоватым венчиком по периферии очагов, в области спины и левого бедра - аналогичные единичные мелкие очаги (до 1 см в диаметре). Установлен клинический диагноз склеродермии. После клинического осмотра был проведен забор (соскоб) клинического материала (эпителиальных клеток) урогенитальным зондом с патологического очага (зоны максимально выраженного уплотнения, изменения цвета кожи или слизистой). Полученный материал поместили в пробирку с транспортной средой, представляющей из себя водно-солевой буфер, в который добавлены муколитик, консервант и стабилизатор в соответствии с Правилами взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований. Затем в условиях ПЦР-лаборатории было проведено выявление и дифференцировка ДНК ВПЧ высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 тип) и низкого (6, 11 тип) канцерогенного риска в клиническом материале методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле (с помощью сертифицированной ПЦР-тест-системы производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора «АмплиСенс ВПЧ ВКР скрин.»). С очагов в аногенитальной области методом ПЦР найдена ДНК ВПЧ ВКР. Клинических проявлений папилломавирусной инфекции в области наружных гениталий и перианальной области не выявлено.

3. К.В.М., 54 года. Обследована 21.04.09 г. Больна ограниченной склеродермией в течение 2-х лет (диагноз подтвержден гистологически), наблюдается у дерматолога МСЧ-153, получала стационарное лечение в отделении общей дерматологии ФГУ «Нижегородский НИКВИ Росздрава» (последний курс - в I-II 2009 г.). Процесс локализуется преимущественно в области наружных гениталий, единичные очаги расположены в области груди (типичная клиническая картина). После клинического осмотра был проведен забор (соскоб) клинического материала (эпителиальных клеток) урогенитальным зондом с патологического очага (зоны максимально выраженного уплотнения, изменения цвета кожи или слизистой). Полученный материал поместили в пробирку с транспортной средой, представляющей из себя водно-солевой буфер, в который добавлены муколитик, консервант и стабилизатор в соответствии с Правилами взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований. Затем в условиях ПЦР-лаборатории было проведено выявление и дифференцировка ДНК ВПЧ высокого (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 70 тип) и низкого (6, 11 тип) канцерогенного риска в клиническом материале методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле (с помощью сертифицированной ПЦР-тест-системы производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора «АмплиСенс ВПЧ ВКР скрин.»). С очагов в области наружных гениталий выявлена ДНК ВПЧ 6 и 11 типа. Клинических проявлений панилломавирусной инфекции в области наружных половых органов не выявлено.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики очаговой склеродермии наружных гениталий позволяет (без гистологического исследования патологического очага) провести дифференциальную диагностику с клиническими проявлениями других заболеваний, локализованных в данной области. Метод не имеет противопоказаний, не сложен в исполнении, в отличие от биопсии является органосохраняющим, доступен по цене.

Предложенный нами способ диагностики ОСД может быть рекомендован всем пациентам с клиническими проявлениями патологического процесса, локализованного в области наружных гениталий, подозрительных на очаговую склеродермию. Данный способ будет иметь особое значение при наличии изолированных (только в области гениталий) очагов ОСД, т.к. позволит назначать адекватную терапию больным.

Источники информации

1. Методические материалы по диагностике и лечению наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем, и заболеваний кожи. Протоколы ведения больных, лекарственные средства / Под ред. А.А.Кубановой. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003. - 448 с.

2. Meis J.F., Kofman R., van-Bergen B. et al. // Arch. Dermatol. B. - 1993. - № 129(3). - Р.386-387.

3. Bluechner S.A., Wilkelmann R.R., Lantenschlager S. et al. // J. Am. Acad. Dermatology. - 1993. - № 29. - P.190-196.

4. Bluechner S.A., Rufli Т. // J. Am. Acad. Dermatology. - 1994. - № 30 (3). - P.441-446.

5. Wiencke R., Schlupen E.M., Zochling N. et al. // J. Invest. Dermatol. - 1995. - № 104(1). - Р.23-26.

6. Скрипкин Ю.К. Кожные и венерические болезни: учебная литература для студентов медицинских вузов / Ю.К.Скрипкин, А.Л.Машкиллейсон, Г.Я.Шарапова. - М.: Медицина, 1997. - 463 с.

7. Правила взятия и доставки биологического материала для лабораторных исследований в НПО «Литех»: методические рекомендации / Л.В.Кудрявцева, Т.Н.Конарева, Е.В.Горбатенко [и др.]; НИИ Физико-химич. медицины МЗ РФ. - М., 2001. - 49 с.

8. Нестеренко Л.Н. Руководство по диагностике инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции / Л.Н.Нестеренко, Зигангирова Н.А., Попова О.В. - М.: Ниармедик плюс, 1998. - 26 с.