способ моделирования гастропатии

Формула изобретения

Способ моделирования гастропатии путем перорального введения крысам нестероидного противовоспалительного препарата, отличающийся тем, что нелинейным белым крысам в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5%-ного раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата Найз из расчета 20 мг/кг за 1 ч до кормления 1 раз в сутки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к экспериментальной медицине, патологической физиологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для изучения патогенеза НПВП-гастропатии (гастропатии, вызванной применением нестероридных противовоспалительных препаратов) у животных и экспериментального исследования эффективности новых методов лечения данной патологии.

В современных условиях методологические подходы к моделированию на животных различной патологии человека определятся необходимостью обеспечить в эксперименте максимально точное воспроизведение патологического процесса, лишенное каких-либо побочных реакций, искажающих результаты эксперимента.

Blandizzi et al., 2005, моделировали НПВП-гастропатию у крыс мужского пола линии Спрейг-Доули, используя следующие агенты: индометацин (100 ммоль/кг), диклофенак (60 ммоль/кг), пироксикам 150 ммоль/кг и кетопрофен 150 ммоль/кг (Blandizzi et al., 2005). При этом авторы отмечают у экспериментальных животных появление воспалительной инфильтрации в слизистой оболочке желудка (полиморфно-ядерными лейкоцитами), в том числе собственной пластинки. Однако в результате моделирования НПВН-гастропатии по данной методике при использовании различных НПВП авторы получили нетипичную для НПВН-гастропатии гистологическую картину повреждения слизистой оболочки желудка.

Наиболее близким аналогом является способ моделирования НПВП-гастропатии у крыс-самцов линии Спрейг-Доули путем введения per os 1,0 мл 50% этанола, два раза в день в течение 5 суток, а затем препарата из группы НПВП напроксена в дозе 50 мг/кг (Тае Young Oh et al., 2005).

Недостатками данного способа является использование для воспроизведения в эксперименте НПВП-гастропатии этанола как дополнительного химического агента, обладающего местно-раздражающим действием и отсутствие таких патогномоничных для НПВП-гастропатии гистологических признаков, как гиперплазия ямочного эпителия с локальным истощением муцина, гипертрофия гладких мышц с минимально выраженными отеком и воспалением в собственной пластинке слизистой (Sobala G.M. Reflux gastritis in the intact stomach. / Sobala G.M., King R.F., Axon A.T., Dixon M.F. // J. Clin. Pathol. - 1990, Apr. - Vol.43. - 34. - P.303-306. Комптон К.К. Гастрит: новое в патоморфологической классификации и диагностике / К.К.Комптон // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. - 1998. - № 3. - С.84-80).

Технический результат: создание модели, наиболее полно отражающей морфологическую картину поражения слизистой оболочки желудка при НПВП-гастропатии у животных. В современных условиях разработка оптимального, приближенного к реальным условиям варианта моделирования НПВП-гастропатии является актуальной научно-практической задачей.

Указанная задача достигается путем перорального введения нелинейным белым крысам в течение 21 дня смеси 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз» («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.», Индия, г.Хайдерабад, международное непатентованное название - нимесулид, химическая формула - 4'-нитро-2'-фенокси-метан сульфонанилид) из расчета 20 мг/кг массы тела за 1 ч до кормления 1 раз в сутки.

Способ осуществляют следующим образом. Нелинейным белым крысам (самцам и самкам) в течение 21 дня перорально вводят смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз» из расчета 20 мг/кг за 1 ч до кормления 1 раз в сутки. По окончании эксперимента животных забивают под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии, материал (стенку желудка) фиксируют в 10% забуференном по Лилли (рН 7,2) формалине. Используя общепринятые методики, готовят гистологические препараты, в которых выявляют типичные гистологические признаки химического гастрита: гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, увеличение количества обкладочных (париетальных) клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток, отек собственной пластинки слизистой оболочки.

Эксперимент выполнен на 40 животных - самцах и самках беспородных белых крыс четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария. Все эксперименты проведены в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. N755) и «Европейской конвенцией о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г.

Животные были разделены на 2 группы, состав групп был следующий:

I группа - контрольная (интактные животные), n=20;

II группа - животные, получавшие в течение 21 дня перорально 1 раз в сутки за 1 час до кормления смесь 200 мкл 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз» («Д-р Редди'с Лабораторис Лтд.», Индия) из расчета 20 мг/кг, n=20.

На 22-й день от начала эксперимента животных выводили из эксперимента путем перерезки спинного мозга под эфирным наркозом с соблюдением правил эвтаназии. При проведении аутопсии гистологические образцы, полученные из различных отделов желудка крысы (пищеводный, кардиальный, пилорический отделы) фиксировали в 10% забуференном по Лилли формалине (рН 7,2), обезвоживали в спиртах восходящей крепости, заливали в парафин, срезы (3-4 мкм) получали на ротационном микротоме, наносили на стекла с адгезивным покрытием (яичный альбумин), окрашивали гематоксилином и эозином, и пикрофуксином по ван Гизону.

При проведении гистологического исследования у всех животных, получавших в течение 21 дня смесь 5% аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз», отмечали появление гистологических признаков, патогномоничных для химического гастрита: гиперплазию ямочного эпителия с локальным истощением муцина, уменьшение количества главных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофию мышечной пластинки слизистой оболочки желудка, увеличение в собственной пластинке слизистой оболочки желудка количества гладкомышечных клеток и ее отек.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Самцу белой крысы, массой 210 г, в течение 21 дня перорально за 1 час до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз» из расчета 20 мг/кг. На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При исследовании гистологических образцов в проходящем свете светового микроскопа выявлены выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка отмечались гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, увеличение количества париетальных клеток в дне желез слизистой оболочки желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладких миоцитов. Выявленные изменения соответствуют гистологической картине НПВП-гастропатии.

Пример 2. Самке белой крысы, массой 178 г, в течение 21 дня перорально за 1 час до кормления 1 раз в сутки вводили смесь 5% раствора аскорбиновой кислоты и нестероидного противовоспалительного препарата «Найз» из расчета 20 мг/кг.

На 22-е сутки животное было умерщвлено под эфирным наркозом путем перерезки спинного мозга с соблюдением правил эвтаназии, проведено гистологическое исследование стенки желудка.

При микроскопии гистологических образцов отмечались выраженное полнокровие сосудов и отек собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы желудка в пищеводном, кардиальном, фундальном и пилорическом отделах. В железистой части слизистой оболочки желудка выявлены гиперплазия ямочного эпителия, локальное уменьшение количества слизистых клеток, уменьшение количества главных клеток за счет преобладания обкладочных клеток в дне желез слизистой оболочки пилорического отдела желудка, гипертрофия мышечной пластинки слизистой оболочки, появление в собственной пластинке слизистой оболочки желудка большого количества гладкомышечных клеток.

Таким образом, у данного животного ежедневное пероральное введение 5% раствора аскорбиновой кислоты в сочетании с нестероидным противовоспалительным препаратом («Найз») привело к развитию химического гастрита, что подтверждается результатами гистологического исследования.

Положительный эффект от использования предлагаемого способа состоит в создании экспериментальной модели химического гастрита, обладающей 100%-ной воспроизводимостью и соответствующей по гистологической картине химического гастрита, наблюдаемого в ветеринарной практике.