способ получения гранул, содержащих иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы

Классы МПК:C12N11/02 ферменты или микробные клетки, иммобилизованные на или в органическом носителе
C12N11/04 помещенные в носитель, например гель, полое волокно
B09C1/10 микробиологическими способами или с использованием ферментов
Автор(ы):, , ,
Патентообладатель(и):Федеральное государственное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации" (RU)
Приоритеты:
подача заявки:
2009-07-31
публикация патента:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения гранул, содержащих иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы. Осуществляют иммобилизацию нефтеокисляющих микроорганизмов при температуре 15-30°С в гелеобразующей среде, образованной 3-5% раствором альгината натрия и 5% раствором сульфата кальция. Затем осуществляют одновременное гомогенизирование и гранулирование иммобилизованных микроорганизмов с гидрофобизированным порошком диоксида кремния при скорости вращения мешалки от 2000 до 3000 об/мин. Получают гранулы с гидрофобизированной поверхностью размером не более 0,5 мм. Полученные гранулы как композиция представляют собой легко сыпучий порошок с содержанием от 280 до 640 млн микроорганизмов/г. 1 табл.

Формула изобретения

Способ получения гранул, содержащих иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы, включающий иммобилизацию микроорганизмов в гелеобразующей среде с последующим гранулированием, отличающийся тем, что иммобилизацию нефтеокисляющих микроорганизмов при концентрации в суспензии 0,4-1,5 млрд клеток/см3 осуществляют при температуре 15-30°С, в качестве гелеобразующих реагентов используют 3-5%-ный раствор альгината натрия и 5%-ный раствор сульфата кальция, гранулирование осуществляют на стадии гомогенизации иммобилизованных микроорганизмов с гидрофобизированным порошком диоксида кремния при скорости вращения мешалки от 2000 до 3000 об/мин и получением гранул с гидрофобизированной поверхностью размером не более 0,5 мм при исходном соотношении компонентов, мас.ч.:

суспензия нефтеокисляющих микроорганизмов 14-21
3-5%-ный раствор альгината натрия 4-6
5%-ный раствор сульфата кальция 7-10
порошок диоксида кремния 1-1,5


полученные гранулы выдерживают в течение 30 мин для отверждения геля в них.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения иммобилизованных нефтеокисляющих микроорганизмов в гранулах со свойствами, характерными для порошкообразного биопрепарата, пригодного для использования в грунтовых и водных средах при очистке окружающей среды.

Известен способ [Композиция для получения носителя иммобилизированных микроорганизмов, расщепляющих углеводороды, и способ получения носителя. Патент РФ 2298033], состоящий в получении биодеструктора углеводородов путем иммобилизации микроорганизмов на целлюлозосодержащем носителе.

Композиция включает носитель с иммобилизованными клетками, гидрофобизатор, эмульгатор и разбавитель. Основой носителя могут быть опилки, стружка, щепа, солома, кукурузные кочерыжки; гидрофобизатором носителя является олифа; эмульгатор взят из группы (поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлоза, оксиэтилцеллюлоза, этилцеллюлоза, пектин, желатина, изопропиловый спирт, бутиловый спирт), а разбавитель - из группы (уайт-спирит, петролейный эфир, серный эфир, 5-20 - водный диметилсульфоксид, вода). Количественный состав композиции (мас.ч.):

целлюлозосодержащая основа 100
олифа 10-20
эмульгатор0-30
разбавитель 10-100.

Иммобилизацию клеток проводят путем их адсорбции на подготовленный носитель в течение 3 суток при инкубации на орбитальном шейкере.

К недостаткам этого способа следует отнести многостадийность и длительность процесса, включающего стадии измельчения микробной культуры, ее смешения, растворения, тепловой сушки и иммобилизации микробных клеток. Кроме того, предлагаемый способ получения носителя требует проведения дополнительных мероприятий по защите окружающей среды, поскольку в технологии его изготовления использованы растворители (петролейный, серный эфиры, уайт-спирит, диметилсульфоксид), которые по завершении процесса представляют опасные отходы. Способ не позволяет получать мелкодисперсные порошки биодеструкторы.

Также известен способ [Способ получения биокатализатора в полисахаридном носителе. Авторское свидетельство СССР № 1742330], состоящий в использовании полимера фурцеллорона, 4 г которого помещают в 100 см3 0,2% раствора хлорида калия на 1 ч при температуре 22°С, а затем перемешивают в течение 40 минут при температуре 80°С. Готовый раствор полимера охлаждают до 65°С и смешивают с суспензией клеток в равных объемах до конечной концентрации полимера 1,5-3,0% и прокапывают в двухфазную стабилизирующую систему, состоящую из вазелинового масла и 10% раствора хлорида калия, охлажденную до температуры 5°С. Продолжительность выдержки гранул в стабилизирующей системе составляет 10 минут. Сформированные сферические гранулы имеют размер 5-11 мм.

К недостаткам данного способа следует отнести:

- невозможность получения мелкодисперсного порошка биодеструктора;

- высокую температуру раствора полимера (65°С), приводящую к неизбежной термоинактивации части микробной популяции при смешении с ним;

- крупный размер гранул биокатализатора и малую площадь их поверхности, снижающие площадь контакта клеток с углеводородами и увеличивающие период высвобождения и адаптации иммобилизованных клеток в среде биохимического процесса, что недостаточно для эффективной деструкции.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому изобретению является способ [Способ получения иммобилизованных микроорганизмов, разрушающих ксенобиотики. Авторское свидетельство СССР № 1705345], состоящий в приготовлении 4% раствора агар-агара (агарозы) в физиологическом растворе (дистиллированной воде) и смешивании в равных количествах с культурой клеток до остаточной концентрации агар-агара - 2%. После тщательного перемешивания эту смесь через отверстие диаметром 3-4 мм прокапывают в охлажденное вазелиновое масло с динамической вязкостью около 400 Па·с. При этом получают гранулы, которые отделяют и отмывают от вазелинового масла с помощью ПАВ, а затем и от ПАВ. Общее время формирования гранул, включая отмывку, составляет 15-20 минут.

У известного и заявляемого изобретения общим является получение гидрогеля полисахарида с иммобилизованными в нем клетками и последующее его гранулирование.

К недостаткам известного способа следует отнести:

- отмывка гранул от масла с помощью ПАВ, с одной стороны, придает поверхности гранул гидрофильные свойства, что снижает их адгезию с углеводородами, а с другой, подвергает клетки инактивирующему воздействию детергента (ПАВ) [Самсонова А.С., Алещенкова З.М., Лим Б.Р., Хвин С.В., Семочкина Н.Ф. и др. Очистка сточных вод от дизельного топлива с помощью иммобилизованных микроорганизмов-деструкторов// Биотехнология, 2003, № 4, с.83-87];

- при смешивании микробной культуры с раствором агар-агара его температура должна быть выше 40°С (при температуре от 36 до 40°С раствор агар-агара застывает [Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П.Зыкова. - М.: Медицина, 1977]), а при таких температурах неизбежна термоинактивация нефтеокисляющих микроорганизмов;

- относительно большой размер получаемых гранул (3-4 мм) увеличивает период высвобождения и адаптации иммобилизованных клеток в среде биохимического процесса вследствие незначительной площади контакта клеток с субстратом [Коваленко Г.А., Перминова Л.В., Комова О.В., Симаков А.В., Хомов В.В., Боровцова О.Ю., Рудина Н.А. Углеводородсодержащие макроструктурированные керамические носители для адсорбционной иммобилизации ферментов и микроорганизмов. Биокаталитические свойства адсорбционной инвертазы// Биотехнология, 2003, № 4, с.52-62].

Основными условиями для повышения эффективности нефтеокисляющих микроорганизмов при деструкции углеводородов являются [Синицин А.П., Райнина Е.И., Лозинский В.И., Спасов С.Д. Иммобилизованные клетки микроорганизмов. М.: Изд-во МГУ, 1994, с.288]:

- наличие в зоне биохимического процесса высокой концентрации жизнеспособных углеводородокисляющих микроорганизмов;

- хороший контакт клеток (препарата) с углеводородами.

Задачей изобретения является разработка способа получения иммобилизованных нефтеокисляющих микроорганизмов в гранулах по композиции, представляющей собой конечный продукт для использования в грунтовых и водных средах при очистке окружающей среды от загрязнений углеводородами.

Технический результат достигается благодаря тому, что в способе получения гранул, содержащих нефтеокисляющие микроорганизмы, используют:

- в качестве основы гидрогеля для иммобилизации микроорганизмов 3 или 5% водный раствор альгината натрия (полисахарида), позволяющего при взаимодействии с солями металлов образовывать гель при температурах, не вызывающих термоинактивацию нефтеокисляющих микроорганизмов (15-30°С) [Lim F. // Microencapsulation of living cells and tissues - In: Biomedical applications of Microencapsulations/ Ed.F.Lim. Boca Raton, CRC Press, Inc., 1984, p.137-154];

- в качестве отвердителя (стабилизатора) геля малорастворимую соль кальция (сульфат кальция), обеспечивающую замедление (пролонгирование) процесса отверждения геля на период времени, достаточный для механического дробления геля на гранулы при соотношении гелеобразующих реагентов в смеси с микробной суспензией (на 1 дм3):

для 3% раствора альгината натрия - 0,36 дм3;

для 5% раствора альгината натрия - 0,15 дм3;

раствор 5% раствора сульфата кальция - 0,06 дм3 (0,07 дм3);

- для получения гранул, содержащих иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы - метод гомогенизации реагентов в присутствии гидрофобизированного высокодисперсного порошка диоксида кремния с размерами частиц 15-25 нм в смесителе с частотой перемешивания от 2000 до 3000 об·мин-1 , вместимостью 5 или 10 дм3, оснащенного комбинированной механической мешалкой и системой ввода реагентов в полость гомогенизатора [Макаров Ю.И. Аппараты для смешения сыпучих материалов. М., 1973, с.130-132];

- для придания получаемым гранулам композиции конечного продукта, по своим свойствам пригодного для использования в грунтовых и водных средах при очистке окружающей среды, - гидрофобизированный высокодисперсный порошок диоксида кремния, обеспечивающий модификацию поверхности гранул за счет придания им гидрофобных свойств и сыпучести [Инкапсулированные растворы обезвреживающих реагентов для химических и биологических средств. Solid-water detoxifying reagents for chemical and biological agents: Пат. США 7030071, МПК3 А62D 3/00, С01В 15/055. The Regents of the Univ. of California, Hoffman Dennis M., Chiu Ing Lap. № 10/085512; заявл. 26.02.2002; опубл. 18.04.2006; НПК 510/110. Англ.], [Нечаев А.П., Кочеткова А.А., Зайцев А.Н. Пищевые добавки. М., 2002, с.120-125].

Сущность предлагаемого изобретения заключается в следующем.

В суспензию клеток нефтеокисляющих микроорганизмов при температуре 15-30°С, содержащую 0,4-1,5 млрд клеток/см3, при постоянном перемешивании в смесителе при частоте перемешивания 2000-3000 об/мин вносят предварительно приготовленный 3 или 5% раствор альгината натрия. Процесс смешения продолжают в течение одной минуты (до получения однородной массы). Затем, не выключая перемешивание, в полученную альгинатно-микробную смесь вносят приготовленный раствор стабилизатора геля (5% раствор сульфата кальция) и процесс смешения продолжают в течение одной минуты.

Полученный полуфабрикат сразу же переносят в питатель, который подключен к системе подачи реагентов смесителя вместимостью 5 или 10 дм3, заполненный гидрофобизированным высокодисперсным диоксидом кремния (например, кабосил или флуосил) при соотношении диоксида кремния и полуфабриката (мас.ч.) 1:2,5. Полуфабрикат с расходом 300 см3/мин из питателя подается в полость смесителя. Перемешивание осуществляют при частоте 2000-3000 об/мин в течение 3 минут. После выключения перемешивания полученные гранулы в течение 30 минут выдерживают в полости гомогенизатора для завершения отверждения геля в гранулах (химической реакции замещения ионов натрия на ионы кальция).

Полученные гранулы как композиция, представляющая собой конечный продукт используемой технологии, представляет собой легко сыпучий порошок светло-бежевого цвета с размером частиц не более 0,5 мм, содержащий от 280 до 640 млн клеток/г. Порошок не смачивается водой, но хорошо сорбируется углеводородной пленкой нефтепродукта, находящейся на водной поверхности или в почвенном грунте.

Таким образом, технологический процесс получения гранул, содержащих иммобилизованные микроорганизмы, состоит из трех стадий:

- смешение суспензии нефтеокисляющих микроорганизмов с гелеобразующими реагентами (получение полуфабриката);

- диспергирование полуфабриката с диоксидом кремния в смесителе для получения гранул;

- выдержка полученного порошкообразного продукта в гомогенизаторе для отверждения геля в гранулах с иммобилизованными микробными клетками.

Наличие причинно-следственной связи между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом показано в таблице.

Таблица 1
Причинно-следственная связь между совокупностью существенных признаков заявляемого объекта и достигаемым техническим результатом
Виды технического результата и их размерность Показатели фактические или расчетные Объяснение, за счет чего (отличительный признак и/или их совокупность) стало возможным улучшение показателей предложенного объекта по сравнению с прототипом
прототипазаявляемого объекта
Минимальная температура процесса иммобилизации микроорганизмов, °С40 15Иммобилизация микроорганизмов в гель на основе 4% раствора агар-агара происходит при температуре не менее 40°С. Иммобилизация в альгинатно-кальциевом геле при концентрации альгината натрия 3 или 5% обеспечивается при температуре 15-30°С, что ниже порога начала термоинактивации нефтеокисляющих микроорганизмов и не влияет на текучесть полуфабриката при получении гранул
Размер гранул (частиц), мм 3-40,5. не более Получение гранул размером не более 0,5 мм достигается за счет механического дробления полуфабриката в гомогенизаторе в присутствии гидрофобизированного порошка диоксида кремния при частоте перемешивания от 2000 до 3000 об/мин
Сыпучесть, г/сОтсутствует 3,0, не менее Обеспечивается модификацией поверхности гранул за счет тонкой оболочки из высокодисперсных частиц диоксида кремния, препятствующей их слипанию
Гидрофобность поверхности гранул, нет/да НетДа Обеспечивается за счет образования на поверхности гранул оболочки из частиц высокодисперсного гидрофобизированного диоксида кремния

Изобретение позволяет за счет смешения микробной суспензии с гелеобразующими реагентами (растворами альгината натрия и сульфата кальция) и последующей гомогенизации полученной смеси с гидрофобизированным порошком диоксида кремния получать гранулы размером не более 0,5 мм, содержащие иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.

В качестве нефтеокисляющих микроорганизмов могут быть использованы культуры: дрожжевых клеток - рода Yarowia Lipolitica, бактерий: псевдомонад - рода Pseudomonas Stutzeri, родококков - родов Rhodococcus species и Rhodococcus erythropolis, входящие в состав ассоциации препарата «Деворойл» [Патент № 2114071 от 22.05.97 г. Способ очистки почвы, природных и сточных вод, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, с использованием биопрепаратов].

Количественный состав получаемых гранул (мас.ч.):

При использовании 3% раствора альгината натрия

суспензия микроорганизмов 14
раствор альгината4
5% раствор сульфата кальция7
диоксид кремния 1.

При использовании 5% раствора альгината натрия

суспензия микроорганизмов 21
раствор альгината6
5% раствор сульфата кальция10
диоксид кремния 1,5.

В качестве оборудования для получения гранул использован высокоскоростной смеситель-гомогенизатор вместимостью 5 или 10 дм3 производства ООО «Биомашприбор», г.Йошкар-Ола.

Пример 1. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Rhodococcus erythropolis.

В суспензию клеток Rhodococcus erythropolis при температуре 15-20°С (14 мас.ч.), содержащую 700 млн клеток/см3, при постоянном перемешивании в смесителе при частоте перемешивания 2000 об/мин вносят предварительно приготовленный 3% раствор альгината натрия (4 мас. ч.). Процесс смешения продолжают в течение одной минуты (до получения однородной массы). Затем, не выключая перемешивание, в полученную альгинатно-микробную смесь вносят приготовленный раствор стабилизатора геля (5% раствор сульфата кальция) (7 мас. ч) и процесс смешения продолжают в течение одной минуты.

Полученный полуфабрикат сразу же переносят в питатель, который подключен к системе подачи реагентов в смеситель вместимостью 5 дм3, заполненный гидрофобизированным высокодисперсным диоксидом кремния (например, кабосил или флуосил) (1 мас. ч.). Полуфабрикат с расходом 300 см3/мин из питателя подается в полость смесителя. Перемешивание осуществляют при частоте 2000 об/мин в течение 3 минут. После завершения перемешивания полученные гранулы в течение 30 минут выдерживают в полости гомогенизатора для завершения отверждения геля в гранулах (химической реакции замещения ионов натрия на ионы кальция).

Полученные гранулы как композиция по структуре представляют собой легко сыпучий порошок (сыпучесть 3,8 г/с) светло-бежевого цвета с размером частиц не более 0,5 мм, содержащий 500 млн клеток/г. Порошок не смачивается водой, но хорошо сорбируется углеводородной пленкой нефтепродукта, находящейся на водной поверхности или в почвенном грунте.

Пример 2. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Rhodococcus erythropolis.

В суспензию клеток Rhodococcus erythropolis при температуре 25-30°С (14 мас.ч.), содержащую 1,5 млрд клеток/см3, при постоянном перемешивании в смесителе при скорости вращения мешалки 2000 об/мин вносят предварительно приготовленный 5% раствор альгината натрия (6 мас. ч.). Процесс смешения продолжают в течение одной минуты (до получения однородной массы). Затем, не выключая перемешивание, в полученную альгинатно-микробную смесь вносят приготовленный раствор стабилизатора геля (5% раствор сульфата кальция) (10 мас.ч.) и процесс смешения продолжают в течение одной минуты.

Полученный полуфабрикат сразу же переносят в питатель, который подключен к системе подачи реагентов в смеситель вместимостью 5 дм3, заполненный гидрофобизированным высокодисперсным диоксидом кремния (например, кабосил или флуосил) (1,5 мас. ч.). Полуфабрикат с расходом 300 см3/мин из питателя подается в полость смесителя. Перемешивание осуществляют при частоте 2000 об/мин в течение 3 минут.

После завершения перемешивания полученные гранулы в течение 30 минут выдерживают в полости гомогенизатора для завершения отверждения геля в гранулах (химической реакции замещения ионов натрия на ионы кальция).

Полученные гранулы как композиция конечного продукта в используемой технологии представляли собой легко сыпучий порошок (сыпучесть 4,5 г/с) светло-бежевого цвета с размером частиц не более 0,5 мм, содержащий 640 млн клеток/г. Порошок не смачивается водой, но хорошо сорбируется углеводородной пленкой нефтепродукта, находящейся на водной поверхности или в почвенном грунте.

Пример 3. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Pseudomonas Stutzeri.

Получение гранул осуществляют в соответствии с порядком, приведенным в примере 1, при температуре 22-25°С при том же соотношении гелеобразователя, стабилизатора геля и диоксида кремния, с использованием 14 мас. ч. суспензии клеток, содержащей 400 млн клеток/ см 3.

Полученные гранулы по структуре представляли собой легко сыпучий порошок (сыпучесть 3,8 г/с) светло-бежевого цвета с гранулами размером не более 0,5 мм, содержащий 350 млн клеток/г. Порошок не смачивается водой, но хорошо сорбируется углеводородной пленкой нефтепродукта, находящейся на водной поверхности или в почвенном грунте.

Пример 4. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Pseudomonas Stutzeri

Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Pseudomonas Stutzeri, осуществляют в соответствии с порядком, приведенным в примере 1, только при температурных условиях и при соотношении компонентов по примеру 2.

Полученные гранулы по структуре представляли собой легко сыпучий порошок (сыпучесть 4,5 г/с) светло-бежевого цвета с гранулами размером не более 0,5 мм, содержащий 350 млн клеток/г Pseudomonas Stutzeri. Порошок не смачивается водой, но хорошо сорбируется углеводородной пленкой нефтепродукта, находящейся на водной поверхности или в почвенном грунте.

Пример 5. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Yarowia Lipolitica

Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Yarowia Lipolitica при их концентрации в суспензии 370 млн клеток/см3 , проводят по примеру 1 при той же температуре и при таком же соотношении компонентов. Полученные гранулы представляли собой сыпучий порошок (сыпучесть 3,8 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм. В 1 г порошка содержалось 290 млн клеток.

Пример 6. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки Yarowia Lipolitica при их концентрации 370 млн клеток/см 3, проводят по примеру 1, только при температурных условиях и соотношении компонентов по примеру 2. Полученные гранулы представляли собой сыпучий порошок (сыпучесть 4,5 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм. В 1 г порошка содержалось 280 млн клеток.

Пример 7. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки, проводят по примеру 1 при тех же температурных условиях и соотношениях компонентов, только в качестве микробной культуры используют ассоциацию культур на основе Rhodococcus erythropolisa, Pseudomonas Stutzeri, Yarowia Lipolitica, суспензии которых взяты в равных объемах и в прежних концентрациях. Полученные гранулы представляли собой сыпучий порошок (сыпучесть 3,8 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм.

Пример 8. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки на основе ассоциации микроорганизмов, приготовленной по примеру 7, проводят по примеру 1, только при температурных условиях и соотношении компонентов по примеру 2. Перемешивание проводят при частоте 3000 об/мин. Полученный продукт также представлял собой сыпучий порошок (сыпучесть 4,5 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм.

Пример 9. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки, проводят в гомогенизаторе объемом 10 дм3 с использованием исходных компонентов и при температуре по примеру 1, только механическое дробление полуфабриката проводят при частоте перемешивания 2000 об/мин. Полученный продукт представляет собой сыпучий порошок (сыпучесть 3,9 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм.

Пример 10. Получение гранул, содержащих иммобилизованные клетки, проводят в гомогенизаторе объемом 10 дм3 с использованием исходных компонентов и температуры по примеру 1, при частоте перемешивания 3000 об/мин. Полученный продукт представляет собой сыпучий порошок (сыпучесть 3,8 г/с) светло-бежевого цвета с размером гранул не более 0,5 мм.

Изобретение позволяет получать иммобилизованные нефтеокисляющие микроорганизмы в гранулах по композиции, представляющей собой конечный продукт для использования в грунтовых и водных средах при очистке окружающей среды от загрязнений.

Класс C12N11/02 ферменты или микробные клетки, иммобилизованные на или в органическом носителе

биосорбент для ликвидации нефти с поверхности водоемов -  патент 2529771 (27.09.2014)
наноразмерный ферментный биокатализатор для детоксификации фосфорорганических соединений in vivo -  патент 2525658 (20.08.2014)
способ получения липосомально-иммунопероксидазного конъюгата -  патент 2500813 (10.12.2013)
композиция для получения кремнийорганической золь-гель матрицы для иммобилизации микроорганизмов в биосенсорных анализаторах -  патент 2492236 (10.09.2013)
средство, обладающее регенеративной активностью -  патент 2480236 (27.04.2013)
способ и установка для определения эффективности адсорбционной иммобилизации микроорганизмов и мониторинга функционального состояния биокатализаторов на основе иммобилизованных микробных клеток -  патент 2475542 (20.02.2013)
способ иммобилизации бактериальных клеток -  патент 2435849 (10.12.2011)
биосенсор на основе клеток микроводорослей для определения тяжелых металлов и гербицидов в водных системах -  патент 2426779 (20.08.2011)
способ преобразования водорастворимых активных белков в гидрофобные активные белки, их применение для получения мономолекулярных слоев ориентированных активных белков и устройства, включающие водорастворимые активные белки, преобразованные в гидрофобные активные белки -  патент 2420580 (10.06.2011)
ферментативная переэтерификация масла -  патент 2415178 (27.03.2011)

Класс C12N11/04 помещенные в носитель, например гель, полое волокно

иммобилизованный биокатализатор для микробной биотрансформации стероидных соединений -  патент 2524434 (27.07.2014)
способ криоконсервации клеток фототрофных микроорганизмов -  патент 2508397 (27.02.2014)
способ получения иммобилизованного биокатализатора для синтеза водных растворов амидов -  патент 2500814 (10.12.2013)
биогибридный материал для сорбции и деградации нефти и нефтепродуктов -  патент 2483797 (10.06.2013)
композиция для получения полимерной пленки для иммобилизации микроорганизмов в биосенсорных анализаторах -  патент 2461625 (20.09.2012)
коллагеновые материалы, пленки и способы их изготовления -  патент 2455322 (10.07.2012)
способ получения биокатализатора, обладающего активностью в отношении синтеза цефалоспоринов-кислот -  патент 2420581 (10.06.2011)
способ и устройство для очистки, разделения, модификации и/или иммобилизации химических или биологических объектов, находящихся в текучей среде, и опора из микропроволоки -  патент 2411291 (10.02.2011)
новые сшивающие реагенты для получения биосовместимых материалов на основе хитозана -  патент 2408618 (10.01.2011)
люминесцентный биокатализатор для определения токсикантов -  патент 2394910 (20.07.2010)

Класс B09C1/10 микробиологическими способами или с использованием ферментов

способ получения биопрепарата для очистки и восстановления плодородия почвогрунтов, загрязненных нефтепродуктами -  патент 2529735 (27.09.2014)
способ детоксикации грунта, загрязненного нефтью и нефтепродуктами -  патент 2528198 (10.09.2014)
выделение белка, ответственного за восстановление урана (vi) -  патент 2527892 (10.09.2014)
способ очистки воды и мерзлотных почв от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий pseudomonas panipatensis вкпм в-10593 -  патент 2525932 (20.08.2014)
способ очистки мерзлотных почв и водной среды от нефти и нефтепродуктов спорообразующими бактериями bacillus vallismortis -  патент 2525930 (20.08.2014)
штамм бактерий exiguobacterium mexicanum - деструктор нефти и нефтепродуктов -  патент 2523584 (20.07.2014)
грунтошламовая смесь -  патент 2522317 (10.07.2014)
способ очистки мерзлотной почвы и водной среды от нефти и нефтепродуктов штаммом бактерий exguobacterium mexicanum -  патент 2521654 (10.07.2014)
способ учета нефтеокисляющих бактерий в морской воде -  патент 2520084 (20.06.2014)
штамм rhodococcus sp.-деструктор нефтяных углеводородов -  патент 2518349 (10.06.2014)
Наверх