способ диагностики опухолей поджелудочной железы

Формула изобретения

Способ диагностики опухолей поджелудочной железы путем морфологического изучения препаратов, отличающийся тем, что парафиновые гистологические препараты окрашивают реактивом Шиффа, проводят микрофотометрию ядер опухолевых клеток, определяют уровень их плоидности и при уровне плоидности более 3с диагностируют эндокринную опухоль, а при уровне плоидности менее 3с - солидно-псевдопапиллярную опухоль.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, в частности к морфологическим методам дифференциальной диагностики опухолей поджелудочной железы.

Известен способ диагностики эндокринных и солидно-псевдопапиллярных опухолей поджелудочной железы путем проведения комплексного иммуногистохимического исследования гистологических препаратов [Казанцева И.А., Гуревич Л.Е., Калинин А.П. и др. Нейроэндокринные опухоли поджелудочной железы (клинико-морфологическое, иммуногистохимическое и электронно-микроскопическое исследование). Архив патологии, 1999, № 6, с.32-38; Щеголев А.И., Дубова Е.А., Щеголева Н.Н., Мишнев О.Д. Кистозные опухоли: пособие для врачей. М., 2007. 56 с.].

Однако известный способ достаточно продолжительный по времени и требует использования большого количества дорогостоящих иммуногистохимических реактивов.

Целью изобретения является упрощение и ускорение диагностики.

Цель достигается тем, что парафиновые гистологические препараты окрашивают реактивом Шиффа, проводят микрофотометрию ядер опухолевых клеток, определяют их уровень плоидности и при уровне плоидности более 3с диагностируют эндокринную опухоль, а при уровне плоидности менее 3с - солидно-псевдопапиллярную опухоль.

Способ осуществляют следующим образом. Парафиновые гистологические препараты подвергают депарафинизации общепринятым методом путем проводки срезов по батарее, включающей 3 смены ксилола (по 5 минут), 3 смены 96° этилового спирта (по 3 минуты), 80° этиловый спирт (2-3 минуты), 50° этиловый спирт (3 минуты), 2 смены дистиллированной воды (по 2-3 минуты). После депарафинизации препараты подвергают окрашиванию.

1. Проводят гидролиз в 1 н. соляной кислоте при 60°С в течение 10-15 мин.

2. Охлаждают препараты в холодной 1 н. соляной кислоте в течение 1-2 мин.

3. Окрашивают реактивом Шиффа в течение 55-65 мин при комнатной температуре.

4. Помещают последовательно в три емкости, имеющие плотные крышки, с сернистой водой на 30-35 мин в каждую.

5. Промывают срезы в течение 5-10 мин в проточной водопроводной воде, затем в течение 2-5 мин - в дистиллированной воде.

6. Проводят обезвоживание срезов: 50° этиловый спирт (2-3 минуты), 80° этиловый спирт (2-3 минуты), 2 смены 96° этилового спирта (2-3 минуты), 3 смены ксилола (по 3-5 минут).

7. На препарат капают синтетическую смолу и накрывают покровным стеклом.

На окрашенных препаратах при помощи микроскопа проводят определение оптической плотности путем фотометрии 20-30 поперечно срезанных ядер опухолевых клеток и 10-20 ядер лимфоцитов. Рассчитывают средние арифметические значения полученных данных для ядер опухолевых клеток и лимфоцитов. Полученные значения оптической плотности ядер лимфоцитов соответствуют диплоидному набору хромосом - плоидности (П), равной 2с.

Затем высчитывают значение плоидности для ядер опухолевых клеток по формуле:

Если значения плоидности ядер опухолевых клеток П более 3с, то диагностируют эндокринную опухоль. Если значения плоидности ядер опухолевых клеток менее 3с, то диагностируют солидно-псевдопапиллярную опухоль.

Пример 1. Больная Т., 53 лет, была прооперирована по поводу подозрения на эндокринную опухоль головки поджелудочной железы. Из присланного операционного материала по стандартной методике были приготовлены парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после депарафинизации, проведенной общепринятым методом, окрашивали реактивом Шиффа. На готовых препаратах проводили микрофотометрию 20 ядер опухолевых клеток и 10 лимфоцитов. Получили, что среднее арифметическое значение оптической плотности ядер опухолевых клеток равняется 5,33, а лимфоцитов - 2,6. По формуле рассчитали значение плоидности для ядер опухолевых клеток:

Поскольку значение плоидности ядер опухолевых клеток более 3, то диагностируют эндокринную опухоль.

При проведении планового комплексного иммуногистохимического исследования в опухолевых клетках выявлена положительная реакция с хромогранином, синаптофизином, нейрон-специфической энолазой, в отдельных клетках - соматостатина, на основании чего подтверждено заключение о наличии эндокринной опухоли у больной Т.

Пример2. Больная К., 19 лет, поступила для обследования и лечения очагового образования поджелудочной железы. При морфологическом изучении операционного материала в головке поджелудочной железы выявлена опухоль размером 4×2×1 см, из которой взяты кусочки и приготовлены парафиновые срезы. После депарафинизации полученные срезы окрашивают реактивом Шиффа. Затем проводят микрофотометрию 30 ядер опухолевых клеток и 20 лимфоцитов. Получили, что среднее арифметическое значение оптической плотности ядер опухолевых клеток равняется 3,54, а лимфоцитов - 2,72. По формуле рассчитали значение плоидности для ядер опухолевых клеток:

Поскольку значение плоидности ядер опухолевых клеток менее 3, то диагностируют солидно-псевдопапиллярную опухоль. При проведении планового комплексного иммуногистохимического исследования с использованием виментина, цитокератина, альфа-химотрипсина, синаптофизина, хромогранина и CD56 был подтвержден диагноз солидно-псевдопапиллярной опухоли поджелудочной железы.

Пример 3. Больная М., 58 лет, была прооперирована по поводу подозрения на опухоль хвоста поджелудочной железы. Из присланного операционного материала по стандартной методике были приготовлены парафиновые гистологические препараты. Полученные срезы после депарафинизации, проведенной общепринятым методом, окрашивали реактивом Шиффа. На готовых препаратах проводили микрофотометрию 15 ядер опухолевых клеток и 15 лимфоцитов. Получили, что среднее арифметическое значение оптической плотности ядер опухолевых клеток равняется 6,05, а лимфоцитов - 2,62. По формуле рассчитали значение плоидности для ядер опухолевых клеток:

Поскольку значение плоидности ядер опухолевых клеток более 3, то диагностируют эндокринную опухоль.

При проведении комплексного иммуногистохимического исследования в опухолевых клетках выявлена положительная реакция с хромогранином, синаптофизином и нейрон-специфической энолазой, на основании чего подтверждено заключение о наличии эндокринной опухоли у больной М.

Предлагаемый способ дифференциальной диагностики опухолей поджелудочной железы, отличаясь простотой и кратковременностью проведения (4,5-5 ч), а также высокой информативностью, позволяет улучшить результаты постановки диагноза, а следовательно, и лечения данного контингента больных.

Диагностические возможности предлагаемого способа были проверены при анализе операционного материала, полученного от 20 больных, находившихся на лечении в Институте хирургии имени А.В.Вишневского в 2006-2008 гг. У 12 из них были диагностированы эндокринные опухоли поджелудочной железы, у 8 - солидно-псевдопапиллярные опухоли. Все диагнозы были верифицированы при плановом иммуногистохимическом исследовании препаратов.