способ снижения агрегационной активности тромбоцитов in vitro

Формула изобретения

Способ снижения агрегационной активности тромбоцитов in vitro путем введения антиагрегационного препарата, отличающийся тем, что коллоидный раствор гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией 0,01%-ного коллоидного раствора ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи, смешивают с раствором антиагрегационного препарата в эффективных рабочих концентрациях 0,7 мг/л для аспирина и 0,3 мг/л для тиклопидина, затем полученную смесь прогревают при температуре 60° в течение 30 мин и затем вводят in vitro в богатую тромбоцитами плазму.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к способам воздействия на агрегационную активность тромбоцитов in vitro, которые направлены на повышение эффективности медикаментозной коррекции гиперактивности тромбоцитарной функции. Изобретение может быть использовано для улучшения профилактики и лечения больных в ангионеврологических и кардиологических клиниках при применении существующих антиагрегантных препаратов или агента, повышающего эффективность их действия.

Известен способ оптимизации антиагрегантной терапии с помощью сочетания приема традиционных препаратов и потребления в пищу полиненасыщенных жирных кислот омега-3, а именно эйкола (ихтиеновое масло), в дозе 6-8 г в сутки в течение 4 месяцев. Этот способ применяется в случаях выявления неэффективности использования препаратов с антиагрегантными свойствами (патент RU № 2188008, кл. А61K 31/202, 35/60, А61Р 25/00, 2000).

Известен также способ исследования агрегационной активности тромбоцитов и оптимизации антиагрегационной терапии у больных с церебро-васкулярными заболеваниями (ЦВЗ) путем введения препаратов, подавляющих агрегацию тромбоцитов (Voen - Med - Zn, 1994, Feb. p.63). Однако у значительной части больных наблюдается определенная резистентность тромбоцитов к воздействию этих препаратов.

Наиболее близким к изобретению является способ снижения агрегационной активности тромбоцитов с целью дальнейшей коррекции стратегии терапии больных в ангионеврологических и кардиологических клиниках путем подбора антиагрегационных препаратов. Он включает в себя забор крови, стабилизацию ее после забора, разделение с получением богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования, введение антиагрегационного препарата с последующим перемешиванием, инкубацию плазмы с препаратом и без него при 36,5-37,5°С. Используют тромбоцитарную тест-систему для оценки in vitro эффектов антиагрегационных препаратов, имеющих различные механизмы действия на тромбоциты (патент RU № 2188419 кл. G01N 33/15, 33/86, 2000).

Этот способ позволяет определить индивидуальную чувствительность пациента к тому или иному препарату до назначения курса лечения. Однако остается вопрос о возможности применения минимальных доз антиагрегантов для нивелирования побочных эффектов препаратов.

В механизмах действия применяющихся в современной медицинской практике антиагрегационных препаратов на тромбоцитарные пластинки ведущую роль играет изменение рецепторной чувствительности мембран тромбоцитов (тиклопидин) или понижение активности внутриклеточных каскадов, участвующих в регуляции процесса агрегации. Эти пути включают связывание индуктора агрегации со своим рецептором на внешней мембране тромбоцита и передачу сигнала внутри клетки путем изменения концентрации вторичных внутриклеточных сигнальных факторов. Изложенные оба процесса приводят к активации рецепторов фибриногена, вследствие чего происходит его рецепция и связывание тромбоцитов друг с другом посредством фибриногеновых мостиков. Сопровождается это образованием активных форм тромбоцитов и их агрегатов.

Активация тромбоцитов может быть вызвана множеством различных биологически активных веществ (АДФ, адреналином, коллагеном и пр.), которые действуют через специфические рецепторы на поверхности мембран. Формирование ответа заключается в последовательной активации систем регуляции концентраций вторичных посредников с образованием цепи передачи сигнала и является общим для различных типов клеток.

Существование в кровяных пластинках многочисленных мембраносвязанных внутриклеточных механизмов активации позволяет вовлекать многоступенчатую модуляцию активности клеток в процесс тромбообразования.

Все это определяет существование многообразных биологически активных соединений, обладающих способностью изменять функцию тромбоцитов и способствующих вовлечению в процесс как активаторных, так и ингибиторных внутриклеточных механизмов. К числу биологически активных соединений, в том числе используемых в качестве лекарственных средств, относятся препараты, обладающие способностью модулировать функцию тромбоцитов посредством вовлечения в процессы ингибирования фосфолипазы А2, циклооксигеназы, тромбоксансинтазы, изменение фосфолипидной композиции мембран клеток, активности образования внутриклеточных посредников (цАМФ, цГМФ, NO) и блокирование специфических рецепторов на мембране клеток.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности действия антиагрегационных препаратов, вследствие чего достигается оптимизация антиагрегационной терапии больных с церебро-васкулярными заболеваниями.

Он достигается тем, что коллоидный раствор гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией 0,01% коллоидного раствора ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи, смешивают с раствором антиагрегационного препарата, затем полученную смесь прогревают при температуре 60 градусов в течение 30 минут и затем вводят ее in vitro в богатую тромбоцитами плазму в эффективных рабочих концентрациях антиагрегационного препарата 0,7 мг/л для аспирина и 0,3 мг/л для тиклопидина.

Для выделения ГСФЛ из головного мозга свиньи производят следующие операции: 1) получение гомогената; 2) обезвоживание холодным ацетоном, эктракция нейтральных липидов; 3) удаление остаточной части нейтральных липидов второй ацетоновой экстракцией; 4) экстракция фосфолипидов спиртом при температуре до 35°С; 5) экстракция ГСФЛ спиртом при температуре до 65°С; 6) кристаллизация ГСФЛ из спиртового раствора; 7) очистка ГСФЛ спиртом/ацетоном от примесей фосфолипидов/нейтральных липидов соответственно по схеме. Контроль состава полученной смеси проводится методом аналитической жидкостной хроматографии.

Способ выполняют следующим образом.

Антиагрегационный препарат вводят вместе с 0,01% коллоидным раствором гликосфинголипидных (ГСФЛ) липосом, полученных экстракцией ГСФЛ фракции из гомогената головного мозга свиньи. В процессе предварительной подготовки препарата коллоидный раствор ГСФЛ смешивают с раствором антиагрегационного препарата, затем полученную смесь прогревают 30 минут при температуре 60°С. При этом происходит разрыв ГСФЛ фибрилл и образование липосом тороидальной формы. Эффект проявляется в значительном снижении параметра АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов. При этом проверено, что при воздействии чистого препарата ацетилсалициловой кислоты, АДФ-АТ в среднем снижается на 8,6%. При введении аспирина с помощью ГСФЛ нанокапсул снижение АДФ-АТ составляет 44,2%. При воздействии чистого препарата тиклопидина, АДФ-АТ в среднем снижается на 17%. При введении тиклопидина с помощью ГСФЛ нанокапсул снижение АДФ-АТ составляет 43,8%).

Статистический анализ совместного действия антиагрегационного препарата с ГСФЛ в группах пациентов с пониженной и нормальной чувствительностью к препаратам показывает существенное нивелирование разницы в индивидуальных ответах. Больше всего данный эффект выражен в случае аспирина. Наблюдаемый эффект является результатом собственного действия сфинголипидных липосом как антиагрегантов, так и действия их как агентов повышения эффективности входа других лекарственных антиагрегантных препаратов в клетку.

Таким образом, предложенное изобретение позволяет снизить агрегационную активность тромбоцитов, увеличить эффект антиагрегантных препаратов с различными механизмами действия, понизить их эффективную концентрацию и нивелировать развитие резистентности к антиагрегантным препаратам.