средство, обладающее анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием

Формула изобретения

Средство, обладающее анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием, характеризующееся тем, что оно представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°С до постоянной массы с последующим измельчением листьев.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области фармации, а именно к созданию средства на основе растительного компонента, обладающего анорексическим, гипогликемическим и гиполипидемическим действием.

Для лечения нарушений углеводного и липидного обмена чаще всего используют синтетические лекарственные препараты. Так, гипогликемической и гиполипидемической активностью обладают производные тиазолидина и тиазолидиндиона (патенты EP 013942, опубл. 05.02.1985; EP 0177353, опубл. 09.04.1986; EP 0306228, опубл. 08.03.1989). Для снижения в крови содержания холестерина и липопротеидов используются такие препараты, как пармидин, клофибрат, полиспонин и др. (Соколов С.Л., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). 2-е изд. - М.: Медицина, 1988. - 464 с.).

В качестве анорексигенных средств используют синтетические соединения негормональной природы, например 3,4-дифенилхроманы (патент RU 97113700, опубл. 20.07.99), производные 1,5-бензодиазепина (патент RU 2135486, опубл. 27.08.99).

Однако при использовании вышеперечисленных препаратов часто наблюдается появление побочных эффектов. Длительное применение полиспонина может вызывать потерю аппетита, потливость, кожный зуд. Прием препаратов клофибрат и пармидин вызывает расстройства пищеварения: тошнота, рвота, поносы, кожная сыпь (Машковский М.Д. Лекарственные средства, 12-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1998. Ч.2).

Бадан толстолистый (Bergenia crassifolia L.) обладает широким спектром биологической активности. В листьях бадана выявлено высокое содержание дубильных веществ, значительное количество арбутина, витамина C, фитонциды, а также значительное количество марганца, железа и меди. Бадан обладает церебропротекторным действием, антигипоксической и антирадикальной активностью (патент RU 214330, опубл. 20.11.1999; патент RU 214331, опубл. 20.11.1999), стимулирует образование интерферона (патент UA 7600, опубл. 15.06.2006), обладает адаптогенной активностью (патент RU 2076727, опубл. 10.04.1997). Листья бадана входят в рецептуру бальзама «Панта» с тонизирующим эффектом (патент RU 2111236, опубл. 20.05.1998) и «Витаген» (патент RU 2085579, опубл. 27.07.1997) с лечебно-профилактическим действием. Черные листья бадана В. crassifolia в сочетании с цветками Matricaria chamomilia L., травой Achillea millefolum L. и листьями Mentha piperita L. используются для получения экстракта с противовоспалительной активностью (Лубсанджоржиева П.Б., Ажунова Т.А., Цыбанов К.Ц. Получение экстракта сухого из 4-компонентного сбора и содержание в нем биологически активных веществ // Химия растительного сырья. - 2008, № 1. С.107-110). Кроме индивидуального использования черные перезимовавшие листья В. crassifolia входят в состав фиточая для получения профилактического напитка с гинекологическим профилем (патент RU 2169481, опубл. 27.06.2001), средства, обладающего радиозащитной активностью и применяющегося при лечении и профилактике лучевой болезни (патент RU 203558, опубл. 10.05.1995).

Задачей настоящего изобретения является создание растительного средства, обладающего гипогликемическим, гиполипидемическим действием и способностью подавлять аппетит при отсутствии побочных эффектов.

Поставленная задача решается созданием средства, обладающего анорексическим, гипогликемическим, гиполипидемическим действием, которое представляет собой водный экстракт черных и бурых листьев бадана Bergenia crassifolia, собранных после 1-2-х зимовок, которые перед экстрагированием сушат при температуре 35-45°C до постоянной массы с последующим измельчением листьев.

Способ приготовления экстракта.

Черные и бурые листья собраны после 1-2-х зимовок, их сушили при температуре 35-45°C до постоянной массы в течение 24 часов. После сушки образец дополнительно измельчали. Затем получали водные экстракты в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи XI (вып.2).

Содержание основных идентифицированных биологически активных веществ (БАВ) в экстракте бадана определяли методом ВЭТСХ в системе растворителей толуол/этил ацетат/муравьиная кислота/метанол (3:3:0.8:0.2, по объему) методом прямой денситометрии при 280 нм (Pozharitskaya O.N., Ivanova S.A., Shikov A.N. et al. Separation and evaluation of free radical-scavenging activity of phenol components of green, brown and black leaves of Bergenia crassifolia by using HPTLC-DPPH method // J Sep Sci. - 2007. - Vol.30, N 15. - P.2447-2451).

Содержание основных биологически активных веществ, идентифицированных в водном сухом экстракте листьев бадана, представлено в таблице 1.

Таблица 1
БАВ	Содержание, %
Выход (с учетом механических потерь)	17,6
Арбутин	0,3
Бергенин	2,0
Эллаговая кислота	0,15
Галловая кислота	1,6
Протокатеховая кислота	0,2
Гидрохинон	0,2

Влияние экстракта бадана на аппетит.

Эксперименты проведены на крысах-самках линии Wistar, вес к началу исследования 320-370 г, возраст 6-8 месяцев.

1. Животных размещали в клетках по 3 особи. Кормушки наполняли стандартным кормом. Обеспечивали достаточное количество жидкости.

2. Спустя две недели животных взвешивали и наполняли кормушки стандартным кормом и «диетой кафетерия». Регистрировали потребление пищи и вес на протяжении 23 дней.

3. Через 14 дней от начала «диеты кафетерия» начали введение исследуемого образца экстракта бадана. Экстракт вводили ежедневно однократно в одно и то же время суток в течение 8-ми дней. Разовая доза составляла 50 мг/кг.

4. На 9-й день после начала введения экстракта бадана животных лишали пищи на период 18 часов.

5. Через 18 часов еще раз вводили исследуемый экстракт и плацебо. Сразу после этого предварительно взвешенный корм помещали в клетку. Оставшуюся пищу взвешивали через 30, 90 минут, 3, 6 часов после помещения кормушки в клетку.

Рацион вивария представлял собой сухой гранулированный корм по 33,2 г на 1 животное с общей калорийностью на 1 животное 102,8 ккал. «Диета кафетерия» содержала 25-35% жиров и 25-30% легкоусвояемых углеводов в дополнение к стандартному рациону грызунов.

Калорийность питания групп, получавших «диету кафетерия», по сравнению с интактной группой была выше на 23%.

Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемого препарата в граммах представлена в таблице 2.

Таблица 2
День эксперимента	Интактные	Контроль	Экстракт бадана
1	22,6±0,2	23,0±1,8	20,9±1,2
2	26,4±1,2	26,2±1,2	17,8±2,1
3	27,3±0,6	21,2±1,1	27,3±0,4
4	19,3±0,6	26,0±0,6	22,8±1,0
5	23,0±0,6	24,6±1,3	21,9±1,3
6	26,9±0,1	24,0±0,8	22,2±1,3
7	27,1±0,7	28,3±1,0	24,6±1,4
8	21,0±0,8	29,2±0,6	27,3±1,5
9	23,4±1,1	29,9±0,5	28,4±0,7
10	23,7±0,8	31,2±0,6	28,6±1,1
11	28,0±1,2	31,5±0,8	31,6±1,5
12	19,7±0,3	30,1±0,9	27,2±1,5
13	23,6±0,3	28,2±1,2	20,6±1,2
14	24,8±1,1	26,5±1,9	17,5±0,7
15	22,5±0,8	25,4±1,5	16,5±0,9
16	19,4±0,8	27,0±0,8	13,9±1,2
17	27,8±0,7	24,5±1,5	15,3±0,6
18	28,1±1,4	25,7±1,5	13,7±0,4
19	21,9±0,7	29,9±1,8	17,4±0,3
20	27,8±1,5	27,3±1,5	16,2±0,5
21	31,6±1,1	27,8±1,9	21,4±0,6
22	27,8±1,5	27,3±1,5	16,2±0,5
23	31,6±1,1	27,8±1,9	21,4±0,6
Среднее потребление с 8 по 14 дни	23,2	30,0	27,3
Среднее потребление с 16 по 23 дни	25,5	26,8	16,5
между средними	-2,3	+3,2	+10,8

Из представленных данных следует, что на фоне применения «диеты кафетерия» отмечалось увеличение потребления пищи животными, которое носило устойчивый характер: начиная с 8-х суток потребления «диеты кафетерия» во всех группах по сравнению с животными, находящимися на стандартной диете (интактная группа), в 1,2-1,4 раза.

Введение экстракта приводило к снижению аппетита у животных: экстракт способствовал уменьшению потребления пищи через 23 дня на 38%.

Следующим этапом исследования было изучение влияния экстракта бадана на аппетит после голодания.

После 18-часового голодания животным был возвращен корм, массу потребленного корма регистрировали через 30, 90 минут, 3 и 6 часов.

Динамика потребления пищи на фоне «диеты кафетерия» после 18-часового голодания и применения исследуемых препаратов в граммах (М±м) представлена в таблице 3.

Таблица 3
Группы	30 мин	90 мин	3 часа	6 часов
Интактные	2,6±0,1	2,3±0,2	2,1±0,0	3,0±0,3
Контроль	4,8±0,9	3,5±0,3	3,1±0,5	2,5±0,5
Экстракт бадана	5,1±1,1	3,9±0,1	2,9±0,4	2,1±0,2

Между интактной и контрольной группами животных была установлена существенная разница в потреблении корма (таблица 3). Контрольные животные через полчаса после возвращения корма в кормовое углубление клетки потребляли корма на 85% больше, чем интактные животные. Через 90 минут разрыв между контрольной и интактной группами сократился до 52%, через 3 часа - до 48%, через 6 часов обе группы потребляли уже практически одинаковое количество пищи.

На фоне применения экстракта бадана в течение первых 90 минут наблюдалось увеличение аппетита по сравнению с контрольной и интактной группами, тенденция к снижению этого показателя наблюдалась через 3 часа (7%), а через 6 часов аппетит у животных был ниже, чем у интактной группы на 16%.

Таким образом, экстракт бадана обладает способностью снижать аппетит, эффект наступает через 3-6 часов после его введения.

Влияние экстракта на углеводный обмен.

Кровь для определения уровня глюкозы забирали пять раз: до начала «диеты кафетерия», на 9 и 15 день «диеты кафетерия» (до начала введения препарата), до и после голодания. Каждый забор крови включал в себя построение сахарной кривой (кровь забиралась натощак, после этого внутрижелудочно вводили раствор глюкозы из расчета 1 г/кг, после чего кровь отбирали через 1 и 2 часа).

Был исследован уровень глюкозы «натощак» и после сахарной нагрузки глюкозо-толерантный тест. Данные по концентрации глюкозы в крови животных, ммоль/л, на фоне «диеты кафетерия» и применения экстракта бадана представлены в таблице 4.

Таблица 4
Дни эксперимента	Часы	Интактные	Контроль	Экстракт
1 день	0	2,7±0,2	3,4±0,3	2,5±0,4
1	2,8±0,4	2,8±0,4	5,2±0,9
2	2,9±0,2	3,8±0,4	5,2±0,8
9 день	0	1,9±0,2	2,6±0,2	3,0±0,4
1	2,4±0,3	2,8±0,1	3,0±0,2
2	0,2±0,1** *	0,7±0,3** *	1,2±0,4** *
15 день	0	3,2±0,3	2,9±0,3	3,3±0,1
1	4,3±0,3	6,0±0,9	3,4±0,1
2	3,1±0,8	8,1±1,0	4,6±1,3
23 день	0	2,2±0,3	2,4±0,3	3,5±0,3
1	3,5±0,3	6,6±0,6	3,9±0,3
2	3,1±0,2	10,3±1,4 ** *	8,7±1,1** *
24 день	0	1,7±0,2	2,1±0,6	0,8±0,1
1	3,5±0,2	6,8±0,5	4,2±0,1
2	3,0±0,4	12,1±0,8 ** *	6,4±0,9*
Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 0 часом регистрации глюкозы (натощак); ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с 1 часом регистрации глюкозы (натощак).

Изменение уровня глюкозы у группы интактных животных, ммоль/л, приведено на фиг.1. У интактных животных уровень глюкозы изменялся в пределах физиологической нормы: в ответ на сахарную нагрузку почечный порог (10 ммоль/л) не был превышен.

Изменение уровня глюкозы у группы контрольных животных, ммоль/л, приведено на фиг.2. К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных было отмечено повышение уровня глюкозы в плазме крови через 1 и 2 часа после сахарной нагрузки, что характеризует нарушенную толерантность к глюкозе и является фактором риска для развития сахарного диабета II типа. К концу исследования у животных контрольной группы наблюдалось устойчивое нарушение толерантности к глюкозе с повышением уровня глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки выше почечного порога.

Изменение уровня глюкозы у животных, получавших экстракт бадана, ммоль/л, приведено на фиг.3. В группах животных, получавших сухой экстракт бадана на фоне «диеты кафетерия», в первые пятнадцать дней пребывания на диете сахарная кривая практически не отличалась от уровня интактных животных. При проведении сахарной нагрузки на вторые сутки наблюдали снижение содержания глюкозы в крови через 1 час - 41%, через 2 часа - 16%.

К 15 дню пребывания на «диете кафетерия» у животных этой группы было отмечено незначительное повышение уровня глюкозы в плазме крови через 2 часа после сахарной нагрузки в группе. К концу эксперимента у животных, получавших экстракт листьев бадана, уровень глюкозы через 2 часа после сахарной нагрузки не превышал почечного порога.

Влияние экстракта на липидный обмен.

Результаты исследования состояния липидного обмена у животных на фоне «диеты кафетерия» и применения исследуемых препаратов представлены в таблице 5.

Таблица 5
Группы	Триглицериды, ммоль/л	Холестерин, ммоль/л
Интактные	0,63±0,11	1,87±0,08
Контроль	2,84±0,57*	2,80±0,17*
Экстракт бадана	1,28±0,20** *	2,45±0,24*
Нормальные значения	0-1,70 (до 2,26)	0-5,7 (до 6,70)
Примечание: * - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой интактных животных; ** - здесь и далее различия статистически значимы по сравнению с группой контрольных животных, при p<0,05 (по критерию Стьюдента).

Уровень триглицеридов у животных на фоне применения «диеты кафетерия» увеличивался в 4,5 раза и превышал физиологический уровень, тогда как уровень холестерина оставался в пределах нормы (таблица 5). На фоне применения экстракта наблюдалось достоверное снижение (на 55%) уровня триглицеридов. На уровень холестерина животных экстракт не оказал существенного влияния.

Таким образом, сухой экстракт бадана обладает выраженным гипогликемическим, гиполидимическим действием и способен подавлять аппетит.