композиция в качестве бактерицидного средства, способ получения материала на ее основе и макропористый бактерицидный материал на основе данной композиции

Формула изобретения

1. Средство с бактерицидной и антифунгальной активностью, включающее восстановленное стабилизированное наноразмерное серебро и полимерный структурообразователь, отличающееся тем, что в качестве полимерного структурообразователя используют полимеры и их смеси, выбранные из группы: поливиниловый спирт, желатин, крахмал, агароза, коллаген и их смеси, а в качестве стабилизаторов наноразмерного серебра используют амфифильные сополимеры малеиновой кислоты с сомономерами, выбранными из группы: этилен, изобутилен, стирол, винилпирролидон, акриламид, винилацетат, метилметакрилат и стеариламидные производные этих сополимеров, а также лечебные вещества и их смеси, выбранные из группы: трипсин, химотрипсин, террилитин, аскорбиновая кислота, глюкоза, ацетилсалициловая кислота, лидокаин при следующем соотношении компонентов, мас.ч.:

Полимер структурообразователь	2,0-13,0
Наноразмерное серебро	0,007-0,3
Сополимер стабилизатор наноразмерного серебра	0,02-0,6
Лечебные вещества	0,01-0,6
Вода дистиллированная	Остальное

2. Способ получения макропористого материала с бактерицидной и антифунгальной активностью на основе средства по п.1, включающий приготовление водного раствора или дисперсии структурообразователя с последующим введением в него водного раствора стабилизированного сополимерами малеиновой кислоты наноразмерного серебра и лечебных веществ, с дальнейшим однократным или двукратным криоструктурированием, которое включает замораживание, выдерживание в замороженном состоянии при температуре минус 15-30°С в течение 10-20 ч и ступенчатое оттаивание в течение 2-4 ч последовательно при 2-6°С и 20-24°С.

3. Макропористый материал с бактерицидной и антифунгальной активностью на основе средства по п.1, полученный способом по п.2.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области композиционных полимерных материалов биомедицинского назначения, содержащих наряду с биосовместимыми полимерами наполнители в виде стабилизированного наноразмерного серебра и лечебных веществ. Изобретение может быть использовано для получения макропористых структурированных материалов, обладающих бактерицидными, антифунгальными и ранозаживляющими свойствами.

Наиболее эффективно предлагаемая композиция и материал на ее основе могут быть использованы как для обеззараживания воды и водных растворов, так и для получения паро- и водопроникающих покрытий на раны с ранозаживляющими свойствами и пролонгированным бактерицидным и антифунгальным действием.

Известна бактерицидная композиция на основе комплекса ионизированного серебра (0,01-0,4 мас.%) с глицином (1-5,0 мас.%), полученная путем электролиза с использованием серебряных электродов, причем электролизный раствор помимо аминокислоты содержит аммиак (0,002-0,055 мас.%) (патент RU 2281107). Недостатком данной композиции является присутствие в системе аммиака (pH до 9,2), а также 2% уксусной кислоты (используемой для нейтрализации щелочных растворов серебра), а также использование и хранение соли серебра с глицином только в виде раствора, содержащего неорганические ионы. Помимо этого использование растворов катионного серебра приводит к снижению стабильности препарата вследствие высокой окислительной способности металла.

Известна бактерицидная композиция на основе водорастворимого серебросодержащего препарата повиаргола в концентрации 0,1-0,3%, предназначенная для лечения и профилактики гнойных осложнений ран (патент RU 2142279). Повиаргол представляет собой водорастворимый комплекс серебра (7%) с поливинилпирролидоном. Недостатком предложенной композиции является возможность ее использование только в виде раствора, пропитывающего сменяемые перевязочные средства на тканевой основе.

Известна композиция для получения поперечно-сшитого гидрогелевого полимерного материала на основе сополимеров акриламида и метиленбисакриламида, содержащая 0,002-0,45 мас.% повиаргола, что составляет максимально 0,032 мас.% серебра (патент RU 2205034). При этом гидрогель имеет микропористую структуру. Это обусловливает только локальные поверхностные обеззараживающие свойства геля, не предполагающие эффективного обеззараживания окружающей водной среды серебром, заключенным в объем микропористого гидрогеля.

Известен пористый коллагеновый материал в виде пластинок, содержащих бактерицидные и лекарственные вещества, полученный путем сублимационной сушки с последующим увлажнением и прессованием (патент RU 2116801). Недостатком данного материала является его хрупкость и невысокая прочность. Невозможность формирования прочной гелевой структуры при сублимационной сушке коллагеновой дисперсии с добавками лекарственных веществ требует введения дополнительной стадии прессования коллагенового материала с целью увеличения его прочности. Это ограничивает область использования наполненных лекарственными веществами коллагеновых пластин в водной среде. Помимо этого данная композиция не содержит в качестве бактерицидного вещества стабилизированное наноразмерное серебро, обладающее высокой бактерицидной и антифунгальной активностью при низких концентрациях, а также отсутствием аллергических реакций в используемых лечебных дозах.

Наиболее близкой к заявляемой нами композиции, взятой за прототип, является композиция для получения макропористого полимерного криогеля, полученного из 12% смеси поливинилового спирта (8,4% ПВС) и поливинилпирролидона (3,6% ПВП), содержащего до 1 мас.% серебра от массы структурообразователей, т.е. максимально содержащего 0,12 мас.% серебра, восстановленного из ионного состояния и стабилизированного с помощью трехзамещенного цитрата натрия (20 мг цитрата на 18 мг ионного серебра в 102 мл раствора) при кипячении системы в течение 1 часа с последующим трехкратным замораживанием и оттаиванием конечной смеси. Образующийся при криоструктурировании композитный криогель, содержащий частицы серебра диаметром 20-170 нм, обладал антибактериальными свойствами в концентрациях от 2,4 до 10 мг/л (H.Yu, X.Xu, X.Chen, T.Lu, P.Zhang, X.Jing. / J.Appl. Polymer Sci., v.103, N 1, 125-133 (2007).

Недостатком композиции, взятой за прототип, является ограничение по выбору структурообразователей, необходимость длительного кипячения смеси перед замораживанием с целью эффективного восстановления серебра цитратом натрия, невозможность использования низких концентраций полимеров-структурообразователей, формирующих наиболее макропористые криогели, а также необходимость трехкратного замораживания-оттаивания смеси с целью увеличения прочности образующихся наполненных серебром криогелей.

Задачей настоящего изобретения является получение бактерицидной композиции и разработка способа получения макропористого материала на основе этой композиции, включающей биосовместимые полимеры-структурообразователи из группы желатина, крахмала, агарозы, коллагена, поливинилового спирта и их смеси, а также комплекс наноразмерного серебра, стабилизированный амфифильными сополимерами малеиновой кислоты, а также необходимые лечебные вещества и их смеси из группы протеолитических ферментов, витаминов, обезболивающих и противовоспалительных препаратов. Замораживание, выдерживание в замороженном состоянии и оттаивание композиции - т.н. криоструктурирование приводит к получению наполненных наноразмерным серебром и лечебными веществами макропористых полимерных гидрогелей и пленок, обладающих удовлетворительными структурно-механическими свойствами, а также бактерицидной и антифунгальной активностью пролонгированного действия вследствие контролируемого уровня диффузии комплекса наноразмерного серебра из макропористых криогелей в водную среду.

Решение поставленной задачи достигается путем создания бактерицидной композиции на основе полимера-структурообразователя, выбранного из группы: желатин, крахмал, агароза, коллаген, поливиниловый спирт и их смеси с концентрацией от 2 до 13 мас. частей, восстановленного наноразмерного серебра 0,007-0,3 мас. частей, в качестве стабилизатора которого используются амфифильные сополимеры малеиновой кислоты с сомономерами, выбранными из группы: этилен, изобутилен, стирол, винилпирролидон, акриламид, винилацетат, метилметакрилат и стеариламидные производные сополимеров в количестве 0,02-0,6 мас. частей, а также лечебные вещества и их смеси, выбранные из группы: трипсин, химотрипсин, террилитин, аскорбиновая кислота, глюкоза, ацетилсалициловая кислота, лидокаин в количестве 0,01-0,6 мас. частей.

Способ получения макропористых бактерицидных материалов на основе данной композиции включает приготовление водного раствора или дисперсии структурообразователя с последующим введением в него водного раствора стабилизированного сополимерами малеиновой кислоты наноразмерного серебра и лечебных веществ, с дальнейшим однократным или двукратным криоструктурированием, которое включает замораживание, выдерживание в замороженном состоянии при температуре минус 15-30°C в течение 10-20 часов и ступенчатое оттаивание в течение 2-4 часов последовательно при 2-6°C и 20-24°C.

Материалы, полученные на основе данной бактерицидной композиции по приведенному способу, представляют собой наполненные стабилизированным наноразмерным серебром и лечебными веществами макропористые гидрогели или пленки, обладающие удовлетворительными структурно-механическими свойствами и регулируемым уровнем диффузии серебра в водную среду.

Амфифильные сополимеры малеиновой кислоты, используемые в качестве стабилизатора наноразмерного серебра, были получены сополимеризацией соответствующих мономеров с последующим введением 10% октадецильных остатков по одной из двух карбоксильных групп остатков малеиновой кислоты [Краюхина М.А., Козыбакова С.А., Самойлова Н.А. и др. Синтез и исследование свойств амфифильных сополимеров малеиновой кислоты. / Журнал прикладной химии. 2007, т.80, вып.7, с.1175-1180].

Раствор комплекса стабилизированного наноразмерного серебра может быть получен непосредственно перед смешением с раствором структурообразователя путем химического восстановления ионного серебра в присутствии одного из сополимеров-стабилизаторов (0,3-0,5 мольных частей серебра на 0,7-0,5 частей стабилизатора с концентрацией 0,005-0,01 M, при 0,3-5,0 мольных частей восстановителя) в нейтральной среде. В качестве восстановителя ионного серебра используется аскорбиновая кислота или ее соль, глюкоза, борогидрид натрия.

Раствор комплекса стабилизированного наноразмерного серебра также можно приготовить путем растворения в воде сухого препарата, предварительно полученного и очищенного от низкомолекулярных примесей комплекса. Данный препарат хорошо растворяется в водной среде в широком диапазоне pH, а его растворы устойчивы к хранению на свету в течение длительного времени [Samoilova N., Kurskaya E., Krayukhina M., Askadsky A., Yamskov I. / Copolymers of maleic acid and their amphiphilic derivatives as stabilizers of silver nanoparticles. / J. Phys. Chem. B. 2009, v.113, N 11, p.3395-3403].

Содержание наноразмерного серебра в комплексе составляет от 13,7 до 44 мас.% в зависимости от молекулярной массы и мольной доли сополимера-стабилизатора (рассчитанной на осново-моль звена). Это от 2 до 6 раз превышает концентрацию серебра в известном препарате повиаргол (или арговит), в котором наноразмерное серебро (6-7 мас.%) стабилизировано поливинилпирролидоном.

При использовании в качестве восстановителя ионного серебра борогидрида натрия средний диаметр стабилизированных сополимерами малеиновой кислоты частиц составляет 30-70 нм с учетом полимерной оболочки при среднем диаметре металлических наночастиц 1-10 нм. При использовании в качестве восстановителя аскорбиновой кислоты или ее соли, а также глюкозы размеры частиц серебра возрастают до 50-160 нм.

Антифунгальная активность наноразмерного серебра, стабилизированного амфифильными сополимерами малеиновой кислоты, была проверена на примере патогенных грибов F. Oxisporum. Было установлено, что антисептическое действие комплекса наноразмерного серебра со средним диаметром частиц (1-10 нм) наблюдается уже при концентрации около 10 ppm, т.е. в пределах 0,01 мг/л [Samoilova N., Kurskaya E., Krayukhina M., Askadsky A., Yamskov I. / Copolymers of maleic acid and their amphiphilic derivatives as stabilizers of silver nanoparticles. / J. Phys. Chem. B. 2009, v.l 13, N 11, p.3395-3403]. При этом в ряде работ было установлено, что цитотоксическая активность наноразмерного серебра для теплокровных животных начинает проявляться при концентрациях свыше 2 мг/л ["Биобезопасность нанообъектов" данные лаборатории экологической генетики Института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН. Hussan S.М. e.a. Toxicological Sci. 2006, v.92, N 2, 456-463].

При использовании предварительно очищенного комплекса наноразмерного серебра исключается необходимость промывки образующегося после криоструктурирования материала.

Варьируя долю комплекса стабилизированного наноразмерного серебра в смеси со структурообразователем от 0,05 до 0,5 массовых частей, долю структурообразователя от 2 до 15 массовых частей и размер стабилизированных наночастиц серебра от 1 до 170 нм (за счет подбора восстановителя и условий восстановления ионов серебра), а также варьируя размер пор образующихся криогелей за счет подбора концентрации макромолекулярных компонентов системы и условий криогенной обработки, в итоге можно изменять уровень диффузии комплекса стабилизированного наноразмерного серебра из макропористых криогелей и пленок в водную среду до 75-85% (за десять дней) от исходного количества серебра в системе при сохранении удовлетворительных структурно-механических свойств криогелей или пленок.

Введение в раствор полимера-структурообразователя помимо комплекса стабилизированного наноразмерного серебра добавок протеолитических ферментов, а также других лечебных компонентов до 0,6 массовых частей в конечной системе с последующим криоструктурированием в тонком слое позволяет получить макропористые пленки не только с бактерицидным, но и с ранозаживляющим действием. Макропористый гидрогелевый материал можно сушить путем лиофилизации или ступенчатой замены воды спиртом.

Таким образом, преимуществами предлагаемой композиции по сравнению с прототипом являются следующие.

Предлагаемая композиция содержит до двух с половиной раз более высокую концентрацию стабилизированного наноразмерного серебра, чем композиция прототипа; при использовании наиболее эффективных восстановителей типа борогидрида натрия можно получать наночастицы серебра существенно меньшего размера, чем в прототипе, что позволяет увеличить эффективность бактерицидного действия предлагаемой композиции при тех же концентрациях наноразмерного серебра; наличие протеолитических ферментов и других лечебных добавок придает макропористым пленкам на основе предлагаемой композиции не только бактерицидные и антифунгальные, но и ранозаживляющие свойства; оптимальный выбор структурообразователя и сополимера-стабилизатора позволяют регулировать физико-химические свойства криогелей и уровень диффузии серебра в водную среду.

Конкретно заявляемая композиция и способ получения бактерицидного макропористого материала представлены в следующих примерах и таблице.

Приготовление любой конкретной композиции включает смешение водных растворов полимера-структурообразователя и комплекса восстановленного и стабилизированного сополимерами малеиновой кислоты наноразмерного серебра с добавлением лечебных веществ с последующим криоструктурированием системы.

Пример 1.

Для приготовления раствора структурообразователя 2 г агарозы подвергают набуханию в 68 мл холодной дистиллированной воды и растворяют при перемешивании и нагревании до 90°C. Готовят раствор стабилизированного наноразмерного серебра. Для этого к 26 мл водного раствора, содержащего навеску 0,044 г (0,13 ммоль) ТДМ 10 сополимера-тетрадецена с малеиновой кислотой, содержащего 10% стеариламидных групп, при pH 8 добавляют 1,3 мл раствора, содержащего 0,011 г нитрата серебра (что соответствует 0,007 г Ag+ или 0,065 ммоль) и 1,3 мл нейтрального водного раствора, содержащего 0,011 г (0,065 ммоль) аскорбиновой кислоты в качестве восстановителя. Затем все растворы смешивают и доводят вес смеси водой до 100 г. При этом концентрация наноразмерного серебра в смеси составляет 0,007 мас.%. Смесь прогревают при 70°C 5 минут, разливают в цилиндрические формы толщиной 0,5-2 см.

Затем производят криоструктурирование: замораживание и выдерживание в замороженном состоянии при температуре -30°C в течение 18 ч, затем ступенчатое оттаивание путем последовательного выдерживания образцов по 2 часа при температуре 4 и 22°C. Процесс замораживания-оттаивания проводят 2 раза. Сформированные образцы гидрогеля агарозы, наполненные стабилизированным наноразмерным серебром, имеют губчатую структуру (способны выделять растворитель при сжатии) и характеризуются высоким уровнем диффузии серебра в водную среду (до 80% от исходного количества в системе).

Учитывая, что уровень низкой цитотоксичности по наноразмерному серебру в водной среде для теплокровных животных составляет около 2 мг/л, можно приблизительно рассчитать количество нецитотоксичных бактерицидных доз стабилизированного наноразмерного серебра, способного диффундировать в водную среду из макропористого криогеля. Для 2% криогеля агарозы (концентрация диффузионного серебра в растворе 0,56 мг/л) величина составляет около 0,3. Данной концентрацией наноразмерного серебра при установленной антифунгальной концентрации 0,01 мг/л можно продезинфицировать около 60 литров воды без цитотоксических последствий. В водной среде образцы наполненного серебром гидрогеля агарозы, как и других структурообразователей, могут храниться в течение нескольких месяцев.

Пример 2.

Для приготовления 3% водного раствора крахмала в качестве структурообразователя 3 г крахмала растворяют в 72 мл воды как описано в примере 1. В 20 мл воды (pH 7-8) растворяют навеску 0,098 г сухого препарата комплекса наноразмерного серебра, стабилизированного эквимольным количеством СМ 10 - сополимера стирола и малеиновой кислоты, содержащим 10 мас.% стеариламидных групп. Наноразмерное серебро в сухом препарате комплекса составляет 30,6 мас.%. Навески трипсина 0,024 г и ацетилсалициловой кислоты 0,010 г растворяют в 5 мл воды при pH 7-8. Растворы всех компонентов системы смешивают, нагревают до 70°C, разливают в формы тонким слоем и криоструктурируют, как описано в примере 1, но криоструктурирование производят однократно и температура замораживания равна -25°C в течение 20 часов. После оттаивания материал представляет собой губчатые криопленки, содержащие бактерицидный компонент и протеолитическй фермент, способствующие заживлению ран. Уровень диффузии наноразмерного серебра из макропористых пленок составляет около 0,5 нецитотоксичных лечебных доз.

Пример 3.

В качестве смешанного структурообразователя используют 3,5% водный раствор желатина и 1,5% водный раствор поливинилового спирта (ПВС), которые готовят отдельно путем набухания навесок препаратов 3,5 г желатина и 1,5 г ПВС в холодной воде (в 50 и 20 мл соответственно), их растворения при нагревании с перемешиванием соответственно при 50 и 90°C с последующим смешением обоих растворов. Раствор комплекса наноразмерного серебра готовят путем растворения в 20 мл воды 0,094 г сухого препарата, содержащего 39 мас.% серебра, стабилизированного эквимольным количеством ЭМ 10 - сополимера этилена и малеиновой кислоты с 10 мас.% стеариламидных остатков. Навеску 0,069 г лидокаина в качестве обезболивающего вещества растворяют в 5 мл воды. Затем все растворы смешивают и подвергают криоструктурированию как описано в примере 1, но криоструктурирование проводят однократно и температура замораживания равна - 20°C в течение 10 часов. Концентрация наноразмерного серебра в криогеле составляет 0,06 мас.%. Сформированный макропористый материал имеет губчатую структуру и высокий уровень диффузии наноразмерного серебра в водную среду (свыше двух нецитотоксичных лечебных доз наноразмерного серебра).

Пример 4.

Раствор 6% ПВС в качестве структурообразователя готовят по примеру 1, растворяя 6 г ПВС в 74 мл воды. Раствор комплекса наноразмерного серебра готовят путем растворения в 10 мл воды 0,240 г сухого препарата, содержащего 33% серебра, стабилизированного МАМ - сополимером метилметакрилата с малеиновой кислотой в нейтральной среде. Раствор террилитина в качестве лечебного вещества готовят путем растворения навески 0,096 г в 10 мл воды. Концентрация наноразмерного серебра в конечной смеси составляет 0,08 мас.%. Далее все растворы смешивают и подвергают криоструктурированию по примеру 3, но при температуре замораживания минус 20°C. Полученный криогель не имел выраженной губчатой структуры и характеризовался более низким уровнем диффузии наноразмерного серебра в водную среду (20% от введенного количества серебра), чем материал, описанный в примере 3.

Пример 5.

Готовят раствор структурообразователя, подвергая набуханию и растворению 8 г желатина в 70 мл воды, как описано в примере 3. Готовят раствор комплекса наноразмерного серебра: в 18 мл воды при pH 7-8 растворяют 0,286 г ТДМ (0,85 ммоль) - сополимера тетрадецена с малеиновой кислотой в качестве стабилизатора, при перемешивании к этому раствору прибавляют 1 мл раствора, содержащего 0,146 г нитрата серебра (что составляет 0,092 г Ag+или 0,085 ммоль), затем в этот раствор добавляют 2 мл раствора, содержащего 0,153 г (0,85 ммоль) глюкозы в качестве восстановителя. Затем растворы структурообразователя и комплекса наноразмерного серебра смешивают, прогревают и криоструктурируют, как описано в примере 1, но температура замораживания составляет -15°C. Концентрация наноразмерного серебра в криогеле составляет 0,09 мас.%. Диффузионные параметры губчатого криогеля желатина приведены в таблице.

Пример 6.

Для приготовления раствора структурообразователя навеску 12 г ПВС подвергают набуханию и растворению в 72 мл воды, как описано в примере 1. Раствор комплекса наноразмерного серебра готовят путем растворения в 7 мл воды навески 0,407 г готового сухого препарата комплекса, содержащего 44 мас.% наноразмерного серебра, стабилизированного сополимером винилпирролидона и малеиновой кислоты - ВПМ (взятым по отношению к серебру в мольном недостатке 0,6:1 при использовании в качестве восстановителя десятикратного мольного избытка борогидрида натрия). К этому раствору прибавляют 2 мл раствора, содержащего 0,150 г трипсина. Затем все растворы смешивают, доводят водой до 100 г, прогревают и криоструктурируют, как описано в примере 1, но температура замораживания равна -25°C. Концентрация наноразмерного серебра в криогеле составляет 0,18 мас.%. Диффузионные характеристики материала приведены в таблице.

Пример 7.

В качестве структурообразователя используют 13% дисперсию тонковолокнистого коллагена, полученную путем кислотно-щелочной обработки дисперсии грубоволокнистого коллагена. Последнюю получают механическим измельчением дермы (золеной шкуры) крупного рогатого скота (pH около 11,5). Дисперсию промывают водой от неколлагеновых примесей и с помощью 0,5 M раствора соляной кислоты доводят pH до 3, выдерживают в течение нескольких часов для получения тонковолокнистого коллагена, а затем подщелачивают 0,5 M раствором гидроокиси натрия до pH около 3,5-4,5 или 11,5-12 (если требуется обработка дубителями или бифункциональными агентами). Раствор комплекса наноразмерного серебра готовят путем растворения в 8 мл воды (pH 11-12) навески 0,907 г комплекса, содержащего 33% наноразмерного серебра, стабилизированного эквимольным количеством сополимера винилацетата и малеиновой кислоты - ВАМ. Концентрация наноразмерного серебра в конечной системе составляет около 0,3%. Затем смесь разливают в формы слоем 0,5-1 см и криоструктурируют, как описано в примере 1, но замораживание проводят при температуре -20°C в течение 15 часов. Оттаявший материал промывают водой и пропитывают 2% водным раствором борной кислоты в качестве лечебного вещества. Высушенный материал может использоваться для поверхностной дезинфекции кожных покровов, например использоваться в качестве антифунгального средства в обувных стельках.

При использовании концентраций структурообразователей ниже 2% получаются механически непрочные криоструктуры, использование которых затруднительно. А при концентрациях структурообразователей выше 13% формируются криоструктуры с размером пор, ограничивающим диффузию стабилизированного наноразмерного серебра из криогеля в водную среду.

Для получения предлагаемой композиции были использованы мономеры для синтеза и модификации сополимеров-стабилизаторов наноразмерного серебра по методике, описанной в [1]: малеиновый ангидрид, этилен, стирол, N-винилпирролидон, акриламид, метилметакрилат, винилацетат, тетрадецен, а также стеариламин, аскорбиновую кислоту и глюкозу фирмы "Aldrich". ПВС с молекулярной массой 60000 и степенью дезацилирования 98% производства Стерлитомакского хим. комбината, желатин марки "Фото" с молекулярной массой 100000, крахмал картофельный, трипсин (панкреатический), химотрипсин и террилитин "Спофа" (Чехия), нитрат серебра (хч) и борогидрид натрия (хч) фирмы "Реахим".

	Полимер-гелеобразователь	Состав комплекса нано-серебра на 100 г смеси	Лечебные вещества на 100 г смеси	% Ag в компл./ % Ag в общей смеси	% диффузии Ag из криогеля и (конц. диффуз. Ag, мг/л)	Число нецитотоксичных лечебных доз наноAg в криогеле
1	2% агароза	(получают в растворе) Ag+=0,007 г (0,065 ммоль) ТДМ10=0,044 г (0,13 ммоль)	аскорбиновая к-та 0,012 г (0,065 ммоль)	13,7/0,007	80% (0,56)	0,3
2	3% крахмал	(получают из сухого препар.) (по 0,28 ммоль) Ag=0,030 г и СМ 10=0,068 г	трипсин 0,014 г и ацетилсалициловая к-та 0,010 г	30,6/0,03	35% (1,05)	0,5
3	3,5% желатин+1,5% ПВС	(из сухого препар.) (по 0,56 ммоль) Ag=0,060 г и ЭМ 10=0,094 г	лидокаин 0,069 г	39/0,06	85% (5,1)	2,6
4	6% ПВС	(из сухого препар.) (по 0,74 ммоль) Ag=0,080 г и МАМ=0,160 г	террилитин 0,096 г	33/0,08	20% (1,6)	0,8
5	8% желатин	(в растворе) (по 0,85 ммоль) Ag+=0,146г, ТДМ=0,286 г	глюкоза 0,153 г (0,85 ммоль)	25,7/0,092	42% (3,86)	1,9
6	12% ПВС	(из сухого препар.) Ag=0,180 r (1,67 ммоль) и VM=0,227 г (1,0 ммоль)	трипсин 0,150 г	44/0,18	9% (1,62)	0,8
7	13% коллагеновая дисперсия	(в растворе) (по 2,8 ммоль) Ag+=0,302 г и ВАМ=0,566 г	пропитка криогеля 2% раствором борной к-ты	33,3/0,30	32% (9,66)	4,8