способ коррекции эндотелиальной дисфункции азитромицином при экспериментальном реактивном васкулите

Формула изобретения

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют кроликам эндотелиальную дисфункцию однократным подкожным введением вакцины Salmonella Typhi в дозе 0,02 мл/кг и на фоне этого на вторые сутки однократно вводят макролидный препарат азитромицин внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является «Способ коррекции эндотелиальной дисфункции мидекамицином при L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота» - заявка № 2007143344/14.

Основным недостатком данного способа является одностороннее рассмотрение патогенетического звена развития и коррекции эндотелиальной дисфункции (ЭД), при котором учитывалась лишь одна сторона механизма развития ЭД - дефицит оксида азота, вызванной неселективным блокатором NO-синтазы: N-нитро-L-аргинин метиловым эфиром (L-NAME). Оксид азота (NO) - ведущий гуморальный эндотелиальный модулятор дилатации, релаксирующий сосуды, который вырабатывается эндотелиоцитами. Дефицит NO приводит к развитию эндотелиальной дисфункции, выражающейся в аномальной сосудистой реактивности. Точкой приложения терапевтического воздействия при ЭД в данном исследовании является восстановление дефицита оксида азота через ингибирование деградации NO.

Другими же точками приложения терапии ЭД являются восстановление равновесия провоспалительных и противовоспалительных медиаторов; прооксидантных и антиоксидантных механизмов, обеспечивающими в норме оптимальное течение всех эндотелийзависимых процессов.

Для устранения этого недостатка моделировали системную воспалительную реакцию сосудов и использовали макролидный антибиотик азитромицин в концентрации 30 мг/кг, для коррекции возникших функциональных нарушений.

Известно, что воспалительная реакция сопровождается образованием провоспалительных цитокинов, стимулирующих генерирование свободных радикалов кислорода (СРК), вызывающих повреждение эндотелия. СРК (особенно супероксид-анион - О²) обладают способностью тормозить экспрессию и снижать активность eNOS, а также связывать и инактивировать NO, уменьшать его содержание в клетке. Сдвиг физиологического равновесия между NO и О² в сторону последнего нередко ведет к образованию высокотоксичного пероксинитрита (ONOO-), вызывающего повреждение мембран и ДНК эндотелиальной клетки, мутации, апоптоз.

Таким образом, учитывая вышесказанное, вполне обоснованным является применение при состояниях, связанных с дефицитом NO, препаратов с антиоксидантными свойствами.

Исключительно актуальным является вопрос о плейотропных эффектах азитромицина - его антиоксидантном действии (Патент № 2226101) и его влиянии на иммунную систему, проявляющемся в диапазоне обычных доз. Макролидные антибиотики обладают рядом ценных фармакологических эффектов, направленных на модуляцию медиаторов воспаления, синтезируемых макрофагами, нейтрофилами и другими клетками. Так, азитромицин накапливается в высоких концентрациях в нейтрофилах и переносится ими в воспалительный очаг, где под действием ряда медиаторов воспаления, антигенов и других стимулов происходит выход антибиотика из клеток, что приводит к созданию повышенных концентраций препарата в очаге воспаления. Азитромицин подавляет образование форм активированного кислорода в нейтрофилах, адгезированных на эндотелии сосудов при воспалении, и, таким образом, уменьшает повреждение сосудов, вызванное активированными лейкоцитами. Антибиотик снижает экспрессию адгезинов комплекса МАС-1 на мембранах нейтрофилов, снижает цитокинзависимую индукцию гистидиндекарбоксилазы, что приводит к снижению уровня гистамина и, соответственно, уменьшению воспалительной реакции. Макролиды снижают в клетках уровень информационных РНК для интерлейкина 1- , интерлейкина-8. (Никитин А.В. Антибиотики как регуляторы механизмов воспалительных реакций организма при инфекционном процессе // Антибиотики и химиотерапия, 1998, № 9, стр.2-4).

Азитромицин уже на раннем этапе способен подавлять продукцию интерлейкина-8 и фактора некроза опухоли , поддерживающих воспаление, и подавляющих синтез NO, что позволяет его использовать для эндотелиопротекции.

Задачей изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование макролидного антибиотика азитромицина в дозе 30 мг/кг.

Задача достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте однократным подкожным введением вакцины Salmonella Typhi («Тифивак» вакцина брюшнотифозная спиртовая сухая, Р № 000661/01, Санкт-Перербургский НИИ вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов) в дозе 0,02 мл/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением обладающего антиоксидантным и противовоспалительным действием макролида азитромицина (субстанция азитромицина моногидрата, серия ¹/ ₂ (Chem-East LTD) в дозе 30 мг/кг однократно в сутки, который приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции при экспериментальном реактивном васкулите.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на кроликах самцах породы Шиншилла массой 3,0-3,5 кг. Вакцину Salmonella Typhi, вызывающую реактивную воспалительную реакцию сосудов, вводят однократно подкожно в дозе 0,02 мл/кг.На второй день после вакцинирования за 30 минут до операции азитромицин в исследуемой группе вводят однократно внутрижелудочно в дозе 30 мг/кг. Через 48 часов от начала эксперимента под наркозом (тиопентал-натрия 40 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию, туда же осуществляют болюсное введение фармакологических агентов. Посредством аппаратно-программного комплекса «Biopac» измеряют и непрерывно регистрируют показатели кардиогемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС). Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 17 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 12,8 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Оценку состояния реактивности сосудистой стенки осуществляли после проведения функциональных сосудистых проб, используя расчетный показатель - коэффициент эндотелиальной дисфункции (КЭД) по методике, разработанной в нашей лаборатории (Патент № 2301015).

Мы рассчитывали специальный показатель, характеризующий степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ, у каждого животного интактной группы и кроликов после моделирования реактивного васкулита и получили разницу данного показателя в 3,5 раза - соответственно 1,1 у интактных и 3,9 у вакцинированных животных.

Таким образом, для оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. В группе, где на фоне введения вакцины Salmonella Typhi 0,02 мл/кг вводился азитромицин в дозе 30 мг/кг, это отношение соответствовало значению 0,9±0,1 (таблица 1).

Таблица 1
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции азитромицином в дозе 30 мг/кг на фоне введения вакцины «Тифивак»
Группы животных	Функциональная проба	Время сосудистой реакции (сек)	Площадь сосудистой реакции	Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП (КЭД) (усл. ед.)
Интактные	АХ	72,8±5,0	1693,5±218,8	1,1±0,2
НП	103,5±10,4	1623,7±246,2
Вакцина Salmonella Typhi, 0,02 мл/кг	АХ	38,0±3,5*	1089,1±161,0*	3,9±0,5*
НП	145,6±7,4*	3746,0±392,3*
Вакцина+азитромицин, 30 мг/кг	АХ	82,9±7,2**	2389,3±279,9**	0,9±0,1**
НП	129,0±6,6	2002,5±305,7**
Примечание:*- р<0,05 - в сравнении с интактными, ** - р<0,05 - в сравнении с вакцинированными животными

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции азитромицином в дозе 30 мг/кг.