n-(2-бензотиазолил)амид 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты, обладающий противомикробной и противовоспалительной активностью

Формула изобретения

N-(2-Бензотиазолил)амид 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты формулы



обладающий противомикробной и противовоспалительной активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области органической химии, к новым биологически активным веществам класса N-гетериламидов 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот, а именно к N-(2-бензотиазолил)амиду 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты (1) формулы

обладающего противомикробной и противовоспалительной активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного противомикробного и противовоспалительного средства. Ближайшим аналогом по структуре и действию заявляемому соединению является N-(2-тиазолил)амид 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты (2) [Андрейчиков Ю.С., Милютин А.В., Крылова И.В. и др. Синтез и биологическая активность гетериламидов ароилпировиноградных и 5-арилпиразол-3-карбоновых кислот // Хим.-фарм. журн. - 1990. - № 7. - С.33-35]

Структурный аналог 2 не обладает противовоспалительной активностью. Данные по противомикробной активности структурного аналога 2 в литературе отсутствуют.

Эталонами сравнения выбраны следующие:

1) противомикробный препарат хлоргексидин [1,6-ди-(4-хлорфенилгуанидо)-гексан] (3), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Издательство Новая волна», 2005. - С.935-936];

2) противовоспалительный препарат диклофенак (натриевая соль 2-[(2,6-дихлорфенил)амино]фенилуксусной кислоты) (4), широко применяемый в лечебной практике и являющийся аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Издательство Новая волна», 2005. - С.170].

Задачей изобретения является поиск в ряду N-гетериламидов 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот веществ с выраженным противомикробным и противовоспалительным действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением N-(2-бензотиазолил)амида 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты (1), обладающего противомикробной и противовоспалительной активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют взаимодействием 5-(4-хлорфенил)-2,3-дигидрофуран-2,3-диона с 2-аминобензотиазолом при эквимолярном соотношении реагентов в среде безводного хлороформа при комнатной температуре с последующим выделением целевого продукта известными методами по схеме

Пример 1 получения соединения 1. К раствору 2,09 г (0,01 моль) 5-(4-хлорфенил)-2,3-дигидрофуран-2,3-диона в 30 мл безводного хлороформа прибавляют раствор 1,50 г (0,01 моль) 2-аминобензотиазола в 20 мл безводного хлороформа, выдерживают при комнатной температуре 24 часа. Реакционную смесь охлаждают до 0°С, выпавший осадок отфильтровывают, перекристаллизовывают из толуола и высушивают. Выход 3,4 г (95%). Т.пл. 210-212°С. Найдено, %: С 57.08; Н 3.12; N 7.92. C₁₇H₁₁ ClN₂O₃S. Вычислено, %: С 56.91; Н 3.09; N 7.81.

ИК-спектр (Specord М80, вазелиновое масло, v, см^-1): 3280 (NH), 1710 (CONH), 1640, 1610 (С ⁴=O, С=С, C=N). Спектр ЯМР ¹Н (Bruker DRX 500, ДМСО-d₆, ГМДС, , м.д.): 7.22 с (1H, СН), 7.33-7.99 м (10Н, С₆ Н₅, С₆Н₄) NH).

Заявляемое соединение 1 представляет собой желтое кристаллическое вещество, растворимое в толуоле, диоксане, диметилсульфоксиде, нерастворимое в воде и алканах.

Определение бактериостатической активности проводили методом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Фисенко В.П. (ред.). - М.: ИИА Ремедиум, 2000. - С.264-273]. Для всех исследуемых соединений были определены МПК в отношении фармакопейных штаммов: S.aureus АТСС 6538-Р и E.coli АТСС 25922. Результаты испытаний представлены в таблице 1. Посевы производили в мясопептонный бульон, рН 7,0, с различной концентрацией испытуемых соединений. Культуры выращивали в пробирках на скошенной агаризированной среде (мясопептонный агар). Для определения противомикробной активности использовалась 18-20-часовая культура. Для приготовления рабочей взвеси микробов производили смыв выросшей культуры изотоническим раствором натрия хлорида и устанавливали плотность микробной взвеси по стандарту мутности 5 единиц. Далее из полученной микробной взвеси (500 млн. м.т./мл) готовили рабочий раствор бактерий с концентрацией 5 млн. м.т./мл. Данную взвесь микробов вносили в количестве 0,1 мл в пробирки с серийными разведениями изучаемого препарата. Таким образом, микробная нагрузка при определении ПМА составила 250000 м.т./мл. Изучаемое соединение в количестве 0,05 г растворяли в 5 мл диметилформамида; 1 мл полученного разведения 1:100 соединяли с 4 мл мясопептонного бульона (1:500). Далее готовили ряд серийных разведений соединения с двукратно уменьшающей концентрацией. Учет результатов производили через 18-20 часов выдержки контрольных и опытных пробирок в термостате при температуре 37°С. Минимальную подавляющую концентрацию (МПК) устанавливали по отсутствию признаков роста на питательной среде: последняя пробирка с задержкой роста (прозрачный бульон) соответствует МПК препарата в отношении данного штамма. Бактериостатический эффект исследуемых соединений сравнивали с действием хлоргексидина.

Противовоспалительная активность изучена в опытах на 30 белых беспородных крысах обоего пола массой 220-260 г. Соединение 1 вводили перорально в дозе 50 мг/кг в виде взвеси в 2% крахмальном растворе за час до моделирования острого каррагенинового воспаления. Каррагениновый отек вызывали субплантарной инъекцией 0.1 мл 1% раствора флогогена в заднюю лапу крысы. О противовоспалительной активности судили по изменению выраженности воспаления в динамике, которое регистрировали онкометрически через 1, 3 и 5 часов после моделирования воспаления [Методические рекомендации по экспериментальному изучению нестероидных противовоспалительных веществ/ Фармакологический комитет МЗ СССР, протокол № 22 от 11 ноября 1982. - Москва, 1982. - 47 с.]. Контрольным животным вводили эквиобъемное количество 2% крахмального раствора. Препаратом сравнения служил диклофенак в дозе 10 мг/кг. Результаты обработаны статистически с помощью программы Excel 2003 и представлены в таблице 2.

Острую токсичность (ЛД₅₀ ) заявляемого соединения 1 определяли на 24 белых беспородных мышах обоего пола массой 18-22 г при пероральном пути введения в виде взвеси в 2% крахмальном растворе по экспресс-методу В.Б.Прозоровского [Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. // Фармакология и токсикология. - 1978. - № 4. - С.497-502]. Установлено, что ЛД₅₀ соединения 1 составляет 5800 мг/кг. Согласно классификации токсичности препаратов соединение 1 относится к классу практически нетоксичных веществ [Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977. - С.196-197]. Оно в 1,45 раз менее токсично, чем хлоргексидин, и 7,44 раза менее токсично, чем диклофенак.

Таблица 1
Противомикробная активность и острая токсичность соединения 1
Соединение	ЛД50, мг/кг	МПК, мкг/мл	МПК/ЛД50
St.aureus	Е.coli	St.aureus	Е.coli
1	5800	2,0	3,9	0,0003	0,0007
Хлоргексидин	4000	125	125	0,0313	0,0313

Как видно из таблицы 1, соединение 1 превышает по противомикробной активности хлоргексидин по отношению к золотистому стафилококку в 62,5 раза и к кишечной палочке - в 32 раза. Отношение МПК (мкг/мл) к токсичности ЛД ₅₀ (мг/кг) у соединения 1 составляет для стафилококка 0,0003 и для кишечной палочки 0,0007, в то время как у хлоргексидина эти показатели значительно уступают.

Таблица 2
Противовоспалительная активность и острая токсичность соединения 1
Соединение	Доза, мг/кг	ЛД50, мг/кг	% торможения каррагенинового отека
1 час	3 часа	5 часов
Контроль	-	-	0,0±0,0	0,0±0,0	0,0±0,0
1	50	5800	39,7±2,1**1	64,2±3,2 ***1	56,4±3,3 ***1
	*2	*2
Диклофенак	10	780	40,2±4,8	65,6±4,3***1	60,1±4,7 ***1
*=р<0,05, **=р<0,01, ***=p<0,001.
1 - по сравнению с контролем; 2 - по сравнению с диклофенаком.

Как видно из таблицы 2, соединение 1 проявило выраженную противовоспалительную активность в течение всего периода наблюдения, а на пике воспаления оно практически не уступает диклофенаку. Необходимо отметить, что эффективная доза диклофенака составляет 0,013 от его ЛД₅₀ , а у заявляемого соединения 0,008 от его ЛД₅₀, что свидетельствует об определенных преимуществах соединения 1 перед диклофенаком в плане его безопасности и эффективности.

Таким образом, N-(2-бензотиазолил)амид 2-гидрокси-4-оксо-4-(4-хлорфенил)-2-бутеновой кислоты (1) проявляет более высокую противомикробную и противовоспалительную активность по сравнению со структурным аналогом и эталонами сравнения, а также является практически нетоксичным, что делает возможным использование его для создания новых лекарственных средств, обладающих противомикробной и противовоспалительной активностью.

Литература

1. Андрейчиков Ю.С., Милютин А.В., Крылова И. В. и др. Синтез и биологическая активность гетериламидов ароилпировиноградных и 5-арилпиразол-3-карбоновых кислот // Хим.-фарм. журн. - 1990. - № 7. - С.33-35.

2. Машковский М.Д. Лекарственные средства.- 15-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: ООО «Издательство Новая волна», 2005. - С.170, 935-936.

3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Фисенко В.П. (ред.). - М.: ИИА Ремедиум. - 2000. - С.264-273.

4. Методические рекомендации по экспериментальному изучению нестероидных противовоспалительных веществ / Фармакологический комитет МЗ СССР, протокол № 22 от 11 ноября 1982. - Москва, 1982. - 47 с.

5. Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П., Демченко В.М. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и ее ошибки. // Фармакология и токсикология. - 1978. - № 4. - С.497-502.

6. Измеров И.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов. - М.: Медицина, 1977. - С.196-197.