способ санации спермы петухов

Формула изобретения

Способ санации спермы петухов, включающий разбавление спермы средой ВИРГЖ-2 с добавлением антибактериального средства, отличающийся тем, что в качестве антибактериального средства используют тилозина тартрат в сочетании с польодоксином, которые добавляют в среду для разбавления в дозе по 100 ЕД/мл.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к птицеводству, в частности к антибактериальным препаратам, которые используют для санации спермы петухов-производителей в средах для ее разбавления.

Известна среда для разбавления спермы петухов ВИРГЖ-2, которая состоит из глутамата натрия и глюкозы. Среда нашла широкое применение благодаря удобству ее использования - малое количество компонентов, сохранение высокой активности спермиев (1-4 часа), высокие показатели по оплодотворенное яиц (92,6-98,4%) и выводу цыплят (81,7-84,2%) (3).

Известны способы санации спермы петухов - введение в среду для разбавления спермы петухов антибактериальных препаратов - пенициллин и стрептомицин в дозах 30-50 тыс ЕД, олеморфоциклин в дозе 5000 ЕД на 100 мл разбавителя (4, 5), гентамицин (2,5 мкг/мл среды), канамицин (31,2 мкг/мл среды), неомицин (62,5 мкг/мл среды) (12). Комплексных препаратов - спермосан-3 в дозе 25000-50000 ЕД/100 мл среды (2, 4) и полигон в дозе 600 мкг/мл среды (11, 6).

Однако известные способы санации обладают низкой активностью антибактериальных препаратов, применяемых в отношении микрофлоры, выделенной от птиц. Применяемые антибиотики не оказывают действия на микоплазмы, а в частности на М. gallisepticum (6, 7, 9, 10).

Петухи, без видимых клинических признаков болезни, выделяют М. gallisepticum со спермой и являются источником инфекции для потомства и кур репродуктивного стада. Заражение кур микоплазмозом через контаминированную сперму, в том числе и при искусственном осеменении, а также передача возбудителя через яйцо потомству приводит к широкому распространению инфекции и наносит экономический ущерб птицеводству (8).

Задача изобретения - повышение санитарного качества спермы петухов, которая достигается тем, что свежеприготовленная среда ВИРГЖ-2 перед разведением спермы в качестве санирующих препаратов дополнительно содержит тилозипа тартрат водорастворимый порошок производитель Балканфарма (Болгария) в дозе 100 ЕД/мл среды и польодоксин в форме раствора производитель Инвеса (Испания) в дозе 100 ЕД/мл среды.

Тилозина тартрат - макролидный антибиотик, обладающий высокой активностью в отношении микоплазм (в том числе М. gallisepticum), а также в отношении грамположительных и некоторых грамотрицательных микроорганизмов.

Польодоксин содержит в качестве действующего вещества доксициклин, антибиотик тетрациклинового ряда. Активен против широкого спектра возбудителей, в числе которых пастереллы, эшерихии, сальмонеллы, стрептококки, стафилококки, клостридии, микоплазмы, риккетсии, хламидии. Препараты обладают бактериостатическим действием, основанным на угнетении синтеза белка микроорганизмов. Тилозина тартрат потенцирует действие доксициклина.

Предлагаемый способ позволит повысить санитарные качества спермы петухов, исключить передачу условно-патогенных, патогенных микроорганизмов (в том числе М. gallisepticum) при искусственном осеменении, тем самым прервать одно из звеньев эпизоотической цепи распространения респираторного микоплазмоза и способствовать профилактики данной болезни, при этом не оказывая отрицательного влияния па активность спермиев и их оплодотворяющую способность.

Пример 1. Определение видового состава микрофлоры спермы петухов и чувствительности выделенных культур микроорганизмов к антибактериальным препаратам in vitro.

Свежеполученная сперма петухов содержит значительное количество условно-патогенной и патогенной микрофлоры и ассоциаций микроорганизмов. Среднее число микроорганизмов в 1 мл разбавленной спермы составило 4,04·10⁴. Микрофлора, выделенная из неразбавленной, а также разбавленной спермы, представлена, Е.Coli, Staphylococcus spp, Proteus spp, Citrobacter spp. и М. gallisepticum. Чувствительность выделенных культур in vitro к 18 антибиотикам отражена в таблице 1.

Таблица 1
Чувствительность микрофлоры спермы петухов к антибиотикам, %
Препараты	Proteus spp (n=2)	E.coli (n=4)	Citrobacter spp (n=3)	Staphylococcus spp (n=6)	М. gallisepticum (n=8)
Польодоксин	100	100	100	100	50
Энроксил	0	50	67	17	75
Колмик Е	50	100	100	33	75
Интерфлокс	50	50	67	67	75
Тилозина тартрат	0	25	33	17	100
Фурадонин	0	75	33	83	-
Гентамицин	50	75	33	33	-
Ципрофлоксацин	50	75	75	17	75
Стрептомицин	50	75	33	67	0
Левофлоксацин	0	0	67	0	-
Неомицин	0	25	33	67	-
Пенициллин	0	0	0	67	-
Линкомицин	0	0	0	0	-
Эритромицин	0	0	0	0	-
Окситетрациклин	0	25	33	0	50
Амоксициллин	0	100	67	83	-
Зинаприм	0	50	0	0	-
Энрофлокс	0	25	33	0	-

По результатам проведенных исследований наиболее активным в отношении микоплазм был тилозина тартрат (БалканФарма) - 100% чувствительных культур, в отношении энтеробактерий и стафилококков - польодоксин (Инвеса) - 100%.

Пример 2. Определение выживаемости спермиев при воздействии антибактериальных препаратов (тилозина тартрат в сочетании с польодоксином).

Для этого испытуемые антибиотики в разных дозах вносили в среду ВИРГЖ-2 для разбавления спермы птиц из расчета 25, 50, 100, 150, 200 ЕД/мл каждого препарата. Свежеполученную и смешанную от 15 петухов сперму с подвижностью не ниже 7 баллов и концентрацией не ниже 3,0-4,0 млрд/мл разбавляли из расчета 1:4 указанной средой с испытуемыми антибиотиками. Контролем служила сперма, разбавленная средой ВИРГЖ-2 без антибиотиков. Подвижность спермиев определяли после разбавления через каждые 24 часа при температуре +2-4°С (холодильник) и каждый час при температуре 20-24°С (в комнатных условиях) до момента их гибели. На основании полученных данных подсчитывали показатель абсолютной выживаемости спермиев (S, в ед. и часах). Каждую дозу препарата оценивали по 5 опытам в 3 повторностях, с последующей статистической обработкой данных. Результаты опыта отражены в таблице 2.

Таблица 2
Влияние добавки различных доз тилозина тартрата в сочетании с польодоксином к среде ВИРГЖ-2 на выживаемость спермиев
Группы	Концентрация антибиотиков, ЕД/мл	Выживаемость спермием при +2-4°С	Выживаемость спермием при +20-24°С
в ед.	в часах	в ед.	в часах
Контрольная	-	445,3±25,5	60	20,0±1,9	3,5
1 опытная	25	440,0±19,6	60	18,7±1,1	3,5
2 опытная	50	424,0±9,8	60	18,7±0,4	3,5
3 опытная	100	406,7±8,6	60	18,8±0,9	3,5
4 опытная	150	192,0±17,0*	36	15,7±3,3	2,5
5 опытная	200	100,0±9,8*	12	9,2±1,7*	1,5
Примечание «*» - P 0,05

По результатам опытов видно, что к нетоксично напряженным дозам (выживаемость спермиев остается в пределах контроля или на 10% ниже его) относятся разбавители спермы, содержащей 25, 50 и 100 ЕД/мл тилозина тартрата в сочетании с польодоксином. Так при температуре +2-4°С они вызывают снижение выживаемости спермиев соответственно на 1,2, 4,8 и 8,7%, а при температуре +20-24°С - на 6,7 и 7,5%.

Дозы 150 и 200 ЕД/мл относятся к токсичным и сильнотоксичным (снижают выживаемость спермиев на 30% и более) и далее в работе не использовались (1).

Пример 3. Влияние разбавителя ВИРГЖ-2 с испытуемыми препаратами на санитарное качество спермы.

Свежеполученную и смешанную от 15 петухов сперму делили на 5 равных частей (по 2 мл). Разводили сперму 2:1. В первый флакон вносили среду ВИРГЖ-2 без антибиотиков (контроль). Во второй, третий, четвертый флаконы добавляли среду с антибиотиками - тилозина тартрат в сочетании с польодоксином, соответственно в дозах 25 (1 опытная), 50 (2 опытная) и 100 (3 опытная) ЕД/мл каждого. Пятый флакон - полиген (4 опытная) в дозе 600 мкг/мл среды. Пробы смешивали и хранили при комнатной температуре (20-26°С). Через 10, 20, 40 и 60 минут хранения пробы высевали на питательные среды для определения: общего микробного числа (ОМЧ) - на 2% МПА и 1% глюкоза, коли-титра - среда Кода, идентификация микроорганизмов - простые (МПБ, МПА) и селективные среды (Эндо, ВСА, ЖСА, кровяной агар, Клиглера, Симмонса и др), а также среды для индикации глюкозоферментирующих микоплазм. Изучали морфологические, культуральные и биохимические свойства у выделенных микроорганизмов общепринятыми в микробиологии методами. Опыт повторяли 4 раза с последующей статистической обработкой данных. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3
Влияние различных доз антибактериальных препаратов на микробную контаминацию спермы
Группы	Концентрация антибиотиков, ЕД/мл	ОМЧ, в 1 мл спермы	Колититр, мл	Выделенные культуры
Е.coli	Staphylo-coccus spp	Proteus spp	Citrobacter spp	M. gallisepticum
Контрольная	-	4,04·104	0,001	+	+	+	+	+
1 опытная	25	1,74·10 4*	0,01	-	-	+	+	+
2 опытная	50	4,50·10 2*	0,1	-	-	+	-	-
3 опытная	100	-	-	-	-	-	-	-
4 опытная	600 мкг/мл	0,3·10 3	-	-	+	+	-	+
Примечание «+» - наличие роста, «-» - отсутствие роста

Из таблицы видно, что наилучшие результаты были получены при применении для санации спермы среды с добавлением антибактериальных препаратов тилозина тартрата в сочетании с польодоксином в дозе по 100 ЕД/мл каждого (3 опытная): отсутствуют условно-патогенные и патогенные микроорганизмы, отрицательный коли-титр.

Использование полигена (4 опытная) резко снижает микробную контаминацию спермы, при этом не оказывая действие на микоплазмы, стафилококки и протей.

Пример 4. Проведение научно-производственных и производственных опытов.

Опыты проводили в экспериментально-племенном хозяйстве "Сибирского НИИ птицеводства" на поголовье 50 и 1000 голов. Осеменение кур проводили полиспермой 1 раз в 7 дней, доза разбавленной полиспермы 0,05 см³. Контроль - среда ВИРГЖ-2 без антибиотиков, 1 опытная группа - в среду ВИРГЖ-2 дополнительно вводили тилозина тартрат в сочетании с польодоксином в дозе по 100 ЕД/мл каждого. Во 2 опытной группе в среду добавляли полиген в дозе 600 мкг/мл среды. Сбор яиц на инкубацию проводился в течение 7 дней. Полученные данные статистически обработаны.

Таблица 4
Влияние антибактериальных препаратов на качественные показатели спермы петухов
Показатели	Научно-производственные опыты	Производственные опыты
ВИРГЖ-2 (контроль)	ВИРГЖ-2 + тилозина тартрат + польодоксин (100 ЕД/мл)	ВИРГЖ-2+полиген (600 мкг/мл)	ВИРГЖ-2	ВИРГЖ-2 + тилозина тартрат + польодоксин (100 ЕД/мл)
Концентрация, млрд/мл	3,2±0,1	3,1±0,1	3,1±0,1	3,1±0,1	3,2±0,1
Подвижность, баллов	8,0±0,5	8,3±0,6	8,1±0,6	8,7±0,4	9,0±0,01
pH	6,8±0,02	6,8±0,03	6,8±0,03	6,8±0,03	6,8±0,04
Оплодотворенность яиц, %	94,9±0,4	98,0±0,4*	96,2±0,5	93,1±0,5	93,8±0,4
Выводимость яиц, %	85,2±2,3	85,3±2,2	92,2±1,2	84,4±1,7	85,9±1,8
Вывод цыплят, %	80,7±2,5	82,4±2,9	88,7±1,5	78,6±1,4	80,6±2,3
Примечание «*» - Р 0,05

Опытным путем установлено, что применение нового способа санации спермы петухов не оказало отрицательного влияния на подвижность и оплодотворяющую способность спермиев. Выводимость яиц и вывод молодняка также не снижались.

Таким образом, предлагаемый способ санации спермы петухов, заключающийся в добавлении к среде для разбавления спермы птиц ВИРГЖ-2 антибиотиков тилозина тартрата в сочетании с польодоксином в дозах по 100 ЕД/мл каждого, исключает передачу условно-патогенных и патогенных микроорганизмов, в том числе М. gallisepticum, тем самым способствуя профилактике респираторного микоплазмоза, не оказывая отрицательного влияния на активность спермиев и их оплодотворяющую способность.

Источники информации

1. Балашов Н.Г. Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных / Н.Г.Балашов // М. Колос, 1980. - 272 с.;

2. Давтян А.Д. Влияние различных компонентов среды-разбавителя на выживаемость и оплодотворяющую способность спермиев птицы / А.Д.Давтян // Труды ВНИТИП Эффективные приемы совершенствования племенных и продуктивных качеств птицы. - Том 43. -Загорск. - 1977. - с.16-24;

3. Давтян А.Д. Воспроизводство и искусственное осеменение сельскохозяйственной птицы / А.Д.Давтян // Сергиев Посад, 1999. - 239 с.

4. Курбатов А.Д. Микробная контаминация спермы птиц и борьба с ней при искусственном осеменении / А.Д.Курбатов [и др.] // Генетические и физиологические основы селекции с.-х. животных. - Л, 1977. - вып.25. - с.120-124).

5. Курбатов А.Д. Искусственное осеменение птицы / А.Д.Курбатов, Л.Е.Нарубина, В.В.Богомолов, А.Д.Давтян // М.: ВО "Агропромиздат", 1987. - 127 с.

6. Мацкова Л.H., Бактерицидное действие «Полигена» на микрофлору спермы петухов / Мацкова Л.Н., Хатько Н.Ф., Лыско С.Б. // Птицеводство. - № 1. - 2004. - С.14.

7. Лыско, С.Б. Эффективность химиотерапевтических препаратов в отношении полевых культур, выделенных от птиц / С.Б.Лыско, Н.Ф.Хатько, О.А.Суннова // Био. - 2005. - № 6. - С.10-11.

8. Лыско, С.Б. Схемы профилактики и лечения респираторного и ассоциативного микоплазмоза птиц /С.Б.Лыско// Автореф. дис. канд. вет. наук - Омск, 2005. - 18 с.

9. Мониторинг возбудителей бактериальных инфекций / В.Гусев [и др.] // Птицеводство. - 2003. - № 2. - С.8-10.

10. Лыско, С.Б. Патогенность и чувствительность микрофлоры /С.Б.Лыско, Макарова О.А., Панфилов Р.Ю // Птахiвництво: Мiжвiд темат. наук. зб.: Матерiали III Мiжнародноi науково-пррактич. конф. по птахiвництву (17-21 вересня, 2007 р., м. Судак) Ч.1 / IП УААН. - Харьюв, 2007. - Вип.60. - С.320-325.

11. Наставление по применению препарата "Полигон" для ветеринарии. Утвержденное 26 мая 1999 г.

12. Sexton Т.A new poultri semen extender. 4. Effect of bacterial contamination in chicken semen / T.Sexton // Poultry Science, 1980. - v.59. - N2. - p.274-281.