17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью

Классы МПК:	C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома A61P3/06 средства против повышенного содержания жира в крови (гиперлипемии)
Автор(ы):	Шавва Александр Григорьевич (RU), Морозкина Светлана Николаевна (RU), Антимонова Ольга Игоревна (RU), Суринов Борис Павлович (RU)
Патентообладатель(и):	Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный университет (RU)
Приоритеты:	подача заявки: 2008-12-25 публикация патента: 10.06.2010

Изобретение относится к биологически активным аналогам стероидных эстрогенов. Синтезирован 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="/images/patents/71/2391091/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрон, который обладает заметно выраженной гиполипидемической и кардиопротекторной активностью при отсутствии утеротропного действия. 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="/images/patents/71/2391091/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрон, может быть применен в медицине как основа для разработки эффективных лекарственных препаратов при лечении кардиоваскулярных болезней. 4 табл., 4 ил.

Формула изобретения

Рацемический 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="/images/patents/71/2391091/945.gif" BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрон формулы,

17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="/images/patents/71/2391351/2391351.gif" BORDER="0" TI="CF" HE="39" WI="62">

обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области синтеза биологически активных аналогов стероидных эстрогенов, конкретно к получению 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона, обладающего гиполипидемической и кардиопротекторной активностью при отсутствии утеротропного действия, что предполагает его применение в медицине для лечения кардиоваскулярных болезней.

Модифицированные стероидные эстрогены с такими свойствами очень редки. Ими обладает 18-метил-D-гомо-В-нор-9 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрон (Фиг.1) [1], выбранный в качестве прототипа, однако крупномасштабное получение этого соединения весьма сложно из-за нестабильности 2-этилцикло-гексан-1,3-диона, промежуточного вещества в синтезе данного стероида.

Техническим результатом заявленного изобретения является синтез модифицированного стероидного эстрогена 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (Фиг.2), обладающего гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, через ряд устойчивых промежуточных соединений, что позволяет осуществить крупномасштабный синтез данного стероида.

Техническая задача, решаемая заявленным изобретением, это синтез нового аналога стероидных эстрогенов, обладающего гиполипидемической и кардиопротекторной активностью при отсутствии утеротропного действия. Последнее обстоятельство весьма важно, поскольку имеется корреляция между эстрогенной активностью и способностью стероидов индуцировать образование опухолей [2].

Указанный технический результат и поставленная задача достигаются синтезом рацемического 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона формулы (Фиг.2).

Схема синтеза предложенного соединения представлена ниже.

Лабораторный синтез 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона формулы был осуществлен на базе Санкт-Петербургского государственного университета. Ниже приведен пример синтеза в соответсвии со схемой (Фиг.3).

Получение метилового эфира 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (Фиг.3б). К раствору 1.5 г метилового эфира D-гомо-B-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (Фиг.3а) [3] 135 мл безводного диоксана добавляют 10 г трет-бутилата калия. После его растворения смеси прикапывают 12.0 г йодистого метила, реакционную смесь кипятят в колбе с обратным холодильником 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и выливают в 500 мл воды. Продукты реакции экстрагируют четырьмя порциями хлористого метилена по 200 мл. Экстракт промывают 20% раствором уксусной кислоты, затем водой до нейтральной реакции промывных вод. Органическую фазу сушат безводным сульфатом натрия, осушитель отфильтровывают, растворители удаляют на роторном испарителе. После кристаллизации из метанола получают целевое соединение (Фиг.3б) с выходом 0.91-0.97 г (55.2-58.9%), т.пл. 230-234°C. Спектр ЯМР ¹Н, 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> , м.д.: 7.09 (Н-1), 6.70 (Н-2), 6.77 (Н-4), 2.81 (Н-6 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 2.94 (Н-6 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 2.58 (Н-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 2.84 (Н-9 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.82 (Н-11 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.28 (H-11 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.36 (Н-12 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.94 (Н-12 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.92 (Н-14 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.64 (Н-15 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 2.01 (Н-15 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.68 (Н-16 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.89 (Н-16 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> ), 1.19 (Н-18), 1.11 (С17- -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> СН3), 1.20 (С17- 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> СН3), 3.78 (СН₃O). Спектр ЯМР ¹³С, 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> , м.д.: 123.94 (С-1), 111.74 (С-2), 158.48 (С-3), 110.51 (С-4), 143.55 (С-5), 33.46 (С-6), 45.17 (С-8), 43.81 (С-9), 140.88 (С-10), 26.36 (С-11), 32.78 (С-12), 47.53 (С-13), 42.46 (С-14), 22.98 (С-15), 38.62 (С-16), 43.87 (С-17), 219.71 (С-17а), 18.02 (С-18), 28.39 (С17- 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> СН3), 28.26 (С17- -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> СН3), (55.25 (СН₃O). Масс-спектр, m/z (I_отн, %): 312 (М⁺, 92), 284 (7.5), 240 (13), 228 (47), 213 (46), 199 (13.5), 185 (14.5), 171 (13.5), 160 (32), 146 (100). Найдено, %: С 80.73; 80.95; Н 9.00; 9.05. С₂₁ Н₂₈О₂. Вычислено, %: С 80.73; Н 9.03.

Получение 17,17-Диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (Фиг.3в). К раствору 0.80 г соединения (фиг.3б) в 35 мл безводной уксусной кислоты добавляют по каплям 20 мл 45% бромистоводородной кислоты. Смесь нагревают при перемешивании на кипящей водяной бане 2.5 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и выливают в 100 мл холодной дистиллированной воды. Продукты реакции экстрагируют тремя порциями хлороформа по 75 мл. Экстракт промывают водой до нейтральной реакции промывных вод, сушат над безводным сульфатом натрия, осушитель отфильтровывают. Растворитель удаляют при пониженном давлении, остаток кристаллизуют из смеси гексан-диоксан (2:1). Получают 0.36 г (47%) 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (фиг.3в), т.пл. 277-281°C. Масс-спектр, m/z (I_отн, %): 298 (М+, 100), 280 (6), 270 (7), 265 (6), 226 (32), 214 (46), 199 (67), 186 (16), 185 (18), 171 (18), 156 (21), 146 (44), 132 (88). Найдено, %: С 80.44; Н 8.90. С₂₀Н₂₆O₂. Вычислено, %: С 80.49; Н 8.78.

Все синтезированные соединения - рацемические.

Гиполипидемические и антиатеросклеротические свойства стероида изучали в опытах на беспородных крысах-самцах и кроликах-самцах [4], влияние на иммунную систему - на мышах линии CBA×C57BI/6 F1 [5], утеротропную активность исследовали на мышах в условиях, описанных в прототипе [1].

Под действием препарата снижалось содержание холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и печени крыс по сравнению с животными, получавшими гиперлипидемическую диету. В условиях эксперимента не наблюдалось отложения избыточного холестерина в аорте крыс (таблица 1).

Таблица 1
Гиполипидемическое действие препарата (фиг.2) в опытах на крысах-самцах, получавших гиперхолестеринемическую диету.
Группа животных	Холестерин в сыворотке крови, ммоль/л	Холестерин в печени, мг/г	Холестерин в аорте, мг/г	Триглицериды в сыворотке крови, мг/дл	Триглицериды в печени, мг/г
Интактные	1.67±0.09**	3.82±0.18**	1.51±0.06*	53.3±4.5**	7.5±0.12**
Интактные, получавшие диету	4.09±0.37	9.64±0.74	1.83±0.14	84.4±5.4	10.5±0.7
Интактные, получавшие диету и стероид (II)	2.62±0.18**	6.60±0.41**	1.51±0.04*	57.7±4.8**	8.2±0.5*
** р<0.01; * р<0.05 по сравнению с группой овариэктомированных животных, получавших гиперхолестеринемическую диету.

Стероид использовали в дозе 15 мг/кг веса тела в день.

Такие же результаты получены в опытах на кроликах (таблица 2).

Таблица 2
Гиполипидемическое действие препарата (фиг.2) в опытах на кроликах-самцах, получавших с пищей холестерин (500 мг/кг веса тела в день) в течение 45 дней. Стероид использовали в дозе 15 мг/кг веса тела в день.
Группа животных	Холестерин в сыворотке крови, ммоль/л	Холестерин в печени, мг/г	Холестерин в аорте, мг/г	Триглицериды в сыворотке крови, ммоль/л	Триглицериды в печени, мг/г
Интактные	1.72±0.36**	3.20±0.20**	2.56±0.12**	1.13±0.04**	4.1±0.3**
Интактные, получавшие холестерин	48.9±2.2	19.6±2.2	33.8±3.4	6.50±1.141	18.5±1.1
Интактные, получавшие холестерин и стероид (II)	35.8±2.8*	16.9±2.7	19.4±3.9*	7.72±0.89	13.2±1.8*
** р<0.01; * р<0.05 по сравнению с группой интактных животных, получавших только холестерин.

В опытах на мышах линии CBA×C57BI/6 F1 показано, что стероид (Фиг.2) проявляет иммуномодулирующее действие (таблица 3), в то время как метиловый эфир D-гомо-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона (Фиг.4), типичный представитель D-гомо-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -аналогов эстрогенов, обладает иммуносупрессорной активностью (таблица 4). Это является дополнительным преимуществом стероида (Фиг.2) по сравнению с близкими по структуре соединениями.

Таблица 3
Иммунологические показатели (М±m, в скобках - % к контролю) у мышей после перорального введения стероида (фиг.2).
Опыт	Селезенка	Тимус
Масса, мг	Клеточность, 1×10⁶	АОК, 1×10³	АОК/10⁶ спленоцитов	Масса, мг	Клеточноcть, 1×10⁶
Контроль	157±9,6 (100±6, 1)	158±16,3 (100±10,3)	224±16,3 (100±7,3)	1460±160 (100±11,0)	35,4±1,5 (100±4,2)	54,4±5,2 (100±9,6)
Введение стероида, 5 мг/кг	141±3,3 (89,8±2, 1)	140±12,3 (88,6±7,8)	122±27,1 (54,5±12,0)*	910±219 (62,3±15,0)	44,6±3,5 (126±9,9)*	74,0±10,8 (136±19,9)
Введение стероида, 15 мг/кг	139±5,8 (88,5±3, 7)	128±16,0 (81,0±10,0)	108±15,6 (48,2±7,0)*	840±109 (57,5±7,5)*	50,8±4,1 (144±11,6)*	95,5±6,3 (176±11,6)

В опытах на неполовозрелых мышах стероид (Фиг.2) при пероральном введении в оливковом масле в дозе 15 мг/кг веса тела в день не оказывает влияния на вес матки, что является необходимым условием для практического использования стероидов с гиполипидемическим и кардиопротекторным действием.

Таблица 4.
Масса, клеточность и содержание АОК (антителообразующих клеток, % контролю) в иммунокомпетентных органах мышей после однократного п/о введения метилового эфира D-гомо-8 -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона.
Препарат	Масса cелезенки, мг	Содержание клеток в селезенке, 1×10⁶	АОК в селезенке (%)	АОК/10⁶ спленоцитов	Масса тимуса, мг	Клеточность тимуса, 1×10⁶
Контроль	122±18	124±7.5	100±21	100±23	36.4±3.4	52±5.8
Препарат, 1 мг/кг	96±5.6	94±14.4*	31±8.8*	39±12*	34.2±3.8	38±7.4
Препарат, 5 мг/кг	104±9.3	132±11.2	36.8±8.8*	46±5*	38.4±3.7	38±5.2*

Заявленное изобретение, как показывают приведенные примеры, достигает указанный технический результат и позволяет синтезировать стероидный эстроген 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрона, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью. Изобретение - 17,17-диметил-D-гомо-В-нор-8 17,17-диметил-d-гомо-b-нор-8<img src= -эстрон, обладающий гиполипидемической и кардиопротекторной активностью, патент № 2391351" SRC="" height=100 BORDER="0" ALIGN="absmiddle"> -эстрон, может быть применено в медицине как основа для разработки эффективных лекарственных препаратов при лечении кардиоваскулярных болезней.

Литература

1. Шавва А.Г., Злобина И.В., Нерсисян Г.Г., Матевосян И.Н., Рыженков В.Е., Прокопьев А.А. Рацемический В-нор-18,D-бисгомо-9-изоэстрон, обладающий гипохолестеринемической активностью. Авт. свид. СССР 1371962 (1987). Бюл. изобр., № 5, 1988. (прототип).

2. Schafer J.I.M., Liu К, Tonetti D.A., Jordan V.C. Cancer Research. 1999. V.59. P.4308-4313.

3. Крылова Е.Б., Мартынов В.Ф., Шавва А.Г. Журн. орг. хим. 1978. Т.14. Вып. 12. С.2518-2523.

4. Экспериментальное изучение гиполипидемических и антиатеросклеротических средств: Методические рекомендации. // Составители А.Н.Климов, В.Е.Рыженков. Москва, 1998, с.6.

5. Шавва А.Г., Селиванов С.И., Старова Г.Л., Бороноева Т.Р., Ищенко И.В., Глуздиков И.А., Шарецкий А.Н., Исаева В.Г., Суринов Б.П. // Биоорган. химия. 2002. Т.28. № 3. С.242-250.

Класс C07J63/00 Стероиды, в которых циклопента (а) гидрофенантреновый скелет модифицирован расширением только одного из колец на один или два атома

способ получения а-секотритерпеновых с-3(28) моно-и диамидов и их секоинтермедиатов - патент 2525546 (20.08.2014)
способ получения бетулина - патент 2524778 (10.08.2014)

способ получения бетулина (варианты) - патент 2523545 (20.07.2014)
способ синтеза производного эфира и глицирретиновой кислоты и соединение сложного эфира дезоксиглицирретиновой кислоты - патент 2522455 (10.07.2014)
способ получения производных 3,28-дисульфата бетулина - патент 2520971 (27.06.2014)
способ получения 3-ацетата-28-сульфата бетулина - патент 2477285 (10.03.2013)
средство, представляющее собой 3-o- -d-глюкуронопиранозил- -d-глюкуронопиранозид олеан-9( 11),12( 13)-диен-30-овой кислоты, проявляющее анти-вич-1 активность, и способ его получения - патент 2475246 (20.02.2013)
способ получения мороновой кислоты - патент 2472803 (20.01.2013)
способ получения 3,28-дисульфата бетулина - патент 2468031 (27.11.2012)
способ получения бетулина - патент 2465281 (27.10.2012)

Класс A61P3/06 средства против повышенного содержания жира в крови (гиперлипемии)

антагонисты pcsk9 - патент 2528735 (20.09.2014)
хиназолиноны как ингибиторы пролилгидроксилазы - патент 2528412 (20.09.2014)
экстракт семян fraxinus excelsior и его терапевтическое применение - патент 2523905 (27.07.2014)
способ профилактики и лечения нарушений обмена веществ по типу липидемии в сочетании с инсулиннезависимым сахарным диабетом методом питьевой бальнеотерапии с использованием природной минеральной галогенсодержащей воды - патент 2523886 (27.07.2014)
способ лечения и повышения качества жизни больных с синдромом диспепсии в сочетании с ожирением - патент 2523558 (20.07.2014)
фитокомплекс из плодов бергамота, способ производства и применение в качестве пищевой добавки и в области фармакологии - патент 2523384 (20.07.2014)
замещенные аминоинданы и их аналоги, и их применение в фармацевтике - патент 2522586 (20.07.2014)
соединение для лечения метаболических расстройств - патент 2521284 (27.06.2014)
фармацевтическая композиция, средство для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии и способ его получения - патент 2519744 (20.06.2014)
композиции и способы понижения уровня триглицеридов без повышения уровня хс-лпнп у субъекта, получающего сопутствующую терапию - патент 2519043 (10.06.2014)