способ повышения качества половых продуктов и потомства осетровых рыб

Формула изобретения

Способ повышения качества половых продуктов и потомства осетровых рыб, включающий использование биологически активных веществ, отличающийся тем, что используют препарат витамина В₁₂ - цианокобаламина, при этом витаминную стимуляцию производителей осетровых осуществляют путем внутримышечных инъекций препаратом витамина B₁₂ за месяц до нереста двукратно с интервалом 7 сут при норме введения витамина 50 мкг/кг массы тела.

Описание изобретения к патенту

Известен способ подготовки повышения качества половых продуктов путем введения витаминов Е и С (см. патент РФ № 2233083, 27.04.2004, Бюл. № 21). Однако данный способ основан на применении смеси антиоксидантов для сохранения в норме окислительно-восстановительного состояния живой ткани ослабленных особей и не полностью удовлетворяет потребности организма рыб в преднерестовом состоянии и раннего онтогенеза.

Наиболее близким по сути является метод увеличения токсикорезистентности производителей карпа и растительноядных рыб и получения жизнестойких личинок в условиях промышленного загрязнения водоемов с помощью использования смеси витаминов B₁ и В₁₂ (см. Международный симпозиум «Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре»: Тезисы докладов. Октябрь, 21-24, 1996 г., Адлер, Россия/ АО «Краснодаррыба», КрасНИРХ. - Краснодар, 1996. - с.80). Однако этот метод разработан в основном для повышения токсикорезистентности и повышения репродуктивных качеств производителей только карповых рыб.

Техническая задача - создание способа, позволяющего повысить качество половых продуктов и потомства осетровых рыб с помощью инъекций витамина B₁₂ (цианокобаламина).

Технический результат - повышение качества половых продуктов и потомства осетровых рыб. Он достигается тем, что используют биологически активные вещества, препарат витамина В₁₂ (цианокобаламина), при этом витаминную стимуляцию производителей осетровых осуществляют внутримышечными инъекциями препарата витамина B₁₂ за месяц до нереста двукратно с интервалом 7 суток при норме введения витамина 50 мкг/кг массы тела.

Получение половых продуктов осетровых рыб осуществляют путем гормональной стимуляции завершающих этапов репродуктивного цикла. Цианокобаламин не синтезируется организмом, а доставляется с пищей, а поскольку кортикостероидные гормоны, а также нейролептики способствуют «вымыванию» цианокобаламина из организма, то при созревании ооцитов наблюдается снижение содержания этого витамина, что оказывает влияние на процент и созревание производителей, жизнестойкость икры, личинок и молоди осетровых рыб.

Самкам вводят фармацевтический препарат витамина В₁₂ (цианокобаламина) внутримышечно. Норма введения витамина - 50 мкг/кг массы тела. Витамин вводят шприцем сбоку в спинную мышцу на уровне третьей жучки. Влияние витамина B₁₂ (цианокобаламина) определяли на основании данных созревания производителей, процента оплодотворения икры, процента нормально развивающейся икры на разных стадиях, выживаемости эмбрионов, личинок и выхода молоди.

Пример 1 конкретного осуществления способа

Инъецирование цианокобаламином проводили самкам русского осетра, содержащимся в бассейнах ЦДВ Донского ОРЗ за месяц до получения половых продуктов без нарушения технологического процесса. Инъекции делали двукратно с интервалом 7 суток. Самки были разделены на опытную группу и контрольную, которая не инъецировалась витамином.

При инъецировании самок русского осетра препаратом цианокобаламина количество ответивших на гипофизарную инъекцию рыб в опытной группе составило 100%, в контрольной - 90%. Процент оплодотворения икры, полученной от опытных самок был 92%, тогда как в контроле -75%. Выявлено повышение процента нормально развивающейся икры на стадии маленькой желточной пробки (17 ст.) в опытном варианте на 18%, на стадии вылупления эмбрионов из оболочек (36 ст.) - на 20% по сравнению с контролем (табл.1).

Таблица 1 Показатели самок русского осетра при введении цианокобаламина
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Масса, кг	35,8±0,97	24,5±0,78
Длина, см	138,0±2,5*	127,5±2,2
Созревание, %	100	90
Средняя рабочая плодовитость, тыс.шт.	229,9±5,6	180,5±5,5
Оплодотворение икры (5 ст.), %	92	75
Развитие икры (17 ст.), %	88	70
Выход эмбрионов (36 ст.), %	85	65
Примечание: * различия достоверны при Р<0,01

Биохимический анализ показал (табл.2), что икра, полученная от самок, проинъецированных цианокобаламином, отличалась более высоким содержанием протеина (на 2,3%) и липидов (на 1,1%). Высокая концентрация липидов является свидетельством того, что их расход в организме был значительно ниже. Очевидно, в преднерестовый период содержания у контрольных самок происходили значительные траты липидных веществ на генеративный синтез и поддержание жизненных функций.

Таблица 2 Биохимический состав икры русского осетра
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Влага, %	48,7±1,5*	52,6±1,0
Сухое вещество, %	51,3±0,8**	47,4±1,2
Протеин	58,9±0,7*	56,6±0,7
Липиды	34,8±0,3**	33,7±0,2
Углеводы	2,4±0,6*	4,7±0,8
Зола	3,9±0,5*	5,0±0,2
Примечание: различия достоверны при *Р<0,05; **Р<0,01

Исследование морфометрических показателей предличинок русского осетра в период подращивания выявило некоторое преимущество тех из них, которые были получены из икры опытных самок. Эти предличинки отличались большей массой (на 3,1 мг) и длиной (на 1,0 мм), т.е. имели высокие потенции к росту (табл.3).

У предличинок, полученных из икры контрольных самок, не инъецированных витамином, был отмечен значительный процент нарушений в развитии (10%): у 4% предличинок обнаружено искривление позвоночника, у 6% - недоразвитие передних отделов головы. В опытном варианте таких нарушений было значительно меньше - всего 5,1%.

Таблица 3 Результаты выдерживания предличинок русского осетра
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Выживаемость предличинок, %	86	80
Отклонения в развитии, % от общего отхода	5,1	10
Масса, мг	21,1±1,6	18,0±2,0
Длина, мм	10,8±1,2	9,8±1,5
Длина желточного мешка, мм	4,28±0,5	3,85±0,2
Отношение длины желточного мешка к длине тела	0,396±0,07	0,392±0,09

Предличинки опытной группы своевременно переходили на смешанное питание, следствием чего явилась их высокая выживаемость в опытной группе 86%, в контроле - 80%.

В дальнейшем при изучении биохимического состава личинок русского осетра было выявлено, что рыба в опытном варианте отличалась хорошим физиологическим состоянием, о чем свидетельствовало высокое содержание протеина - 58,8%, в контрольной группе этот показатель был ниже на 2,2% (табл.4). Содержание липидов в теле личинок опытной группы в сравнении с контрольной было выше на 1,6%.

Было замечено, что в опытной группе личинки отличались активным поведением, лучше потребляли комбикорм и опережали в росте личинок контрольной группы.

Таблица 4 Общий химический состав личинок русского осетра после перехода на активное питание
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Влага, %	76,4±2,9	74,7±3,3
Сухое вещество, %	23,6±1,3	25,9±1,1
Протеин	58,8±0,7*	56,б±0,5
Липиды	28,9±0,8	27,3±0,8
Углеводы	5,1±0,6	6,8±0,7
Зола	7,2±0,5*	9,3±0,6
Примечание: различия достоверны при *Р<0,05

При выращивании молоди русского осетра лучшие показатели роста и выживаемости были отмечены в опытном варианте (табл.5). Через 40 суток масса молоди составила 4,3 г, что выше на 17% контроля.

Таблица 5 Показатели выращивания молоди русского осетра
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Масса начальная, г	0,54±0,04	0,58±0,04
Масса конечная, г	4,30±0,10*	3,55±0,11
Выживаемость молоди, %	95	90
Абсолютный прирост, г	3,76	2,97
Среднесуточный прирост, %	5,32	4,63
Коэффициент массонакопления, ед.	0,06	0,05
Период выращивания, сут.	40	40
Примечание: * - различия достоверны при Р<0,001

Исследования общего биохимического состава молоди русского осетра показали более высокое количество белка в теле рыб опытной группы (табл.6).

В этом варианте содержание белка в теле составило 65,9% (на 2,4% выше, чем в контроле), что свидетельствует о хорошем физиологическом состоянии выращенной молоди.

Таблица 6 Биохимический состав молоди русского осетра
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Влага, %	73,7±0,5*	76,0±0,5
Сухое вещество, %	2б,3±0,5*	24,0±0,6
Протеин	65,9±0,6*	63,5±0,9
Липиды	20,0±0,8	19,7±0,6
Углеводы	6,0±0,3**	8,0±0,3
Зола	8,1±0,4	8,8±0,5
Примечание: различия достоверны при *Р<0,01; **Р<0,001

Пример 2

Инъецирование цианокобаламином проводили самкам стерляди, содержащимся в бассейнах Береговой научно-экспедиционной базы «Кагальник» Южного научного центра РАН (Ростовская область) за месяц до получения половых продуктов без нарушения технологического процесса. Инъекции делали двукратно с интервалом 7 суток. Самки были разделены на опытную группу и контрольную, которая не инъецировалась.

Процент созревания самок в опытной группе составил 84%, в контрольной - 77%, оплодотворение икры в опыте - 85%, в контроле ниже на 15% (табл.7).

При дальнейшем наблюдении выявили повышение процента нормально развивающейся икры на стадии маленькой желточной пробки (17 ст.) в опытной группе на 16%, на стадии вылупления эмбрионов из оболочек (36 ст.) - на 20% по сравнению с контрольной группой.

Таблица 7 Показатели самок стерляди, инъецированных цианокобаламином
Показатели	Опытная группа	Контрольная группа
Масса, кг	1,2±0,1	1,1±0,1
Созревание, %	84	77
Кол-во самок, давших доброкачественную икру, %	84	70
Оплодотворение икры (5 ст.), %	85	70
Развитие икры (17 ст.), %	80	64
Выход эмбрионов (36 ст.), %	77	57

После сравнительного изучения и анализа эффективности применения цианокобаламина для повышения рыбоводного качества производителей необходимо было выяснить его влияние на общий химический состав икры, поскольку он может оказывать значительное влияние как на оплодотворяемость икры, так и на выживаемость зародышей и их дальнейшее развитие. Биохимический анализ показал (табл.8), что икра опытной группы отличалась более высоким содержанием протеина (на 1,9%) и липидов (на 1,8%).

Таблица 8 Биохимический состав икры стерляди
Показатели	Опыт	Контроль
Влага, %	47,5±0,5*	51,6±1,0
Сухое вещество, %	52,5±0,8**	48,4±1,1
Протеин	57,8±0,7	55,9±0,7
Липиды	35,6±0,3***	33,8±0,2
Углеводы	2,8±0,6*	4,9±0,8
Зола	3,8±0,5	5,4±0,2
Примечание: различия достоверны при * Р<0,05; ** Р<0,01; *** Р<0,001

В период эмбрионального развития определяли процент нормально развивающихся зародышей. За время инкубации в опытном варианте было отмечено снижение процента нарушений в развитии на 7,1% (табл.9).

Во время просмотра проб в эмбриогенезе встречались различные нарушения в развитии эмбрионов. В частности, ооциты с беспорядочным дроблением, у которых борозды закладывались не одновременно, большая область в ооците совсем не дробилась. Границ клеток практически не было видно, а зародыш приобрел белесую с разводами (мраморную) окраску. Такие эмбрионы никогда не переходят к гаструляции и медленно отмирают.

Таблица 9 Нарушения в развитии эмбрионов, %
Вид нарушений	Опыт	Контроль
Процесс дробления	2,2±0,40**	4,0±0,32
Закрытие бластопора	1,0±0,30	1,6±0,17
Недоразвитие передних отделов головы	2,6±0,25***	5,6±0,48
Искривленное тело	3,5±0,62*	5,2±0,54
Примечание: различия достоверны при * Р<0,05; ** Р<0,01; *** Р<0,001

Другой вид нарушения в развитии - недоразвитие борозд дробления, появление лишних борозд. Например, эмбрионы, у которых пять бластомеров вместо четырех. Встречались также яйца с выделившимся в центре бластомером. Кроме того, некоторые борозды дробления на концах имели раздвоения в виде вилочек. Это, в свою очередь, приводит к тому, что бластомеры не участвуют в дальнейшем развитии. Процент нарушений процесса дробления в опытной группе составил 2,2%, что почти в 2 раза ниже, чем в контрольной.

Во время инкубации икры русского осетра нарушения процесса гаструляции выражались в увеличении размера желточной пробки по сравнению с нормально развивающимися икринками (в опыте - 1,0%, в контроле - 1,6%), обрастание темных вегетативных клеток задерживается и зародыш переходит к следующему периоду, сохраняя желточную пробку значительного размера. В дальнейшем у него будут наблюдаться те или иные нарушения строения.

При исследовании проб икры на стадиях после гаструляции наблюдали неправильное строение головы (в опыте - 2,6%, в контроле - 5,6%), отмечали неправильную форму желточного мешка и отсутствие переднего отдела тела (единичные эмбрионы).

На стадии предличинки были обнаружены нарушения в строении тела. Среди них нарушения пропорций тела, развитие искривлений, укорачивание усиков, жаберных крышек. В основном встречались предличинки с искривленным телом (в опыте - 3,5%, в контроле - 5,2%).

Все вышеописанные нарушения могут быть следствием неправильного созревания ооцитов, приводящего к снижению качества икры и впоследствии к развитию аномалий у эмбриона (Детлаф и др., 1981).

Результаты исследований развития стерляди в эмбриональном периоде свидетельствуют о повышении резистентности развивающихся эмбрионов и эффективности применения инъекций витамина В₁₂ в период преднерестового содержания производителей.

Таким образом, введение витамина В₁₂ (цианокобаламина) производителям в преднерестовый период приводит к повышению качества половых продуктов и потомства осетровых рыб.

Источники информации, принятые во внимание

1. Патент РФ № 2233083, 27.04.2004, Бюл. № 21.

2. Детлаф Т.А., Гинзбург А.С., Шмальгаузен О.И. Развитие осетровых рыб (Созревание яиц, оплодотворение, развитие зародышей и предличинок). - М.: Наука, 1981. - 234 с.

3. Международный симпозиум «Ресурсосберегающие технологии в аквакультуре»: Тезисы докладов. Октябрь, 21-24, metricconverterProductID, 1996 г. Адлер, Россия/ АО «Краснодаррыба», КрасНИРХ. - Краснодар, 1996. - С.80 (прототип).