способ получения молокосвертывающего ферментного препарата из плодовых тел вешенки обыкновенной

Формула изобретения

1. Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата из плодовых тел вешенки обыкновенной, характеризующийся тем, что плодовые тела вешенки обыкновенной гомогенизируют, замораживают полученный гомогенат с последующим размораживанием и разделением на экстракт и осадок, осадок соединяют с дистиллированной водой в соотношении 1:2, выдерживают при температуре 4-8°С, отделяют вторичный экстракт и соединяют его с ранее полученным экстрактом, в смесь экстрактов добавляют пищевую кислоту до достижения рН 3,8 и осуществляют осаждение насыщением раствора хлоридом натрия при температуре 4-8°С, отделяют полученный осадок и высушивают вымораживанием при температуре (-18)-(-20)°С.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что гомогенат замораживают при температуре (-18)-(-20)°С.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что осуществляют осаждение раствором хлорида натрия с концентрацией 35,9%.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве пищевой кислоты используют уксусную или соляную кислоту.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ферментным препаратам из грибного сырья и способам их получения и может быть применено в пищевой промышленности.

Плодовые тела вешенки обыкновенной являются доступным, дешевым и нетоксичным сырьем для получения ферментных препаратов.

Известен способ получения ренниноруссулина спиртовым осаждением культуральной жидкости базидиального гриба Russula decolorans Fr.0456, выращенного на кукурузном экстракте [Руденская Г.Н., Гайда А.В., Степанов В.М. //Биохимия. Т.45, № 3, 1980 г., с. 561-568]. Однако применение в качестве осадителя этилового спирта вызывает значительную инактивацию протеолитических ферментов и не способствует стабильности препарата.

Известен также способ получения ферментного препарата из штаммов Fomitopsis pinicola (Fr.) Karst (ATCC 20036) и Irpex lacteus Fr (IFO 5367), предусматривающий культивирование продуцентов на жидкой питательной среде при рН 2-7, температуре от 20°С до 38°С в условиях аэрации, и последующее отделение ферментов из культуральной жидкости фильтрацией или центрифугированием, осаждением спиртом (этанолом, метанолом), который может быть заменен ацетоном или изопропанолом, либо сульфатом аммония (50-75% насыщения экстракта). Полученные осадки высушиваются под вакуумом или в морозильной камере [патент US 3858492].

Способ прост в исполнении, непродолжителен по времени, не требует токсичных реагентов. Однако более предпочтительным для пищевой промышленности осадителем является хлорид натрия. А применяемые продуценты не относятся к широко культивируемым съедобным грибам. Кроме того, получаемый таким образом ферментный препарат обладает недостаточно высокой молокосвертывающей активностью и высокой протеолитической активностью. Что затрудняет применение такого препарата для ускорения коагуляции молока в сыроделии.

Наиболее близким к заявляемому способу по технической сущности является способ получения молокосвертывающих ферментов из плодовых тел вешенки обыкновенной, предусматривающий гомогенизацию, замораживание и размораживание гомогената, отделение экстракта, дополнительную экстракцию оставшейся грибной массы раствором заданного рН в соотношении 1:1 при комнатной температуре в течение двух часов с последующим осаждением молокосвертывающих ферментов с помощью хлорида натрия в экстракте рН 3,6 [Лебедева Г.В., Проскуряков М.Т.//Актуальные проблемы научных исследований 2007. 2007 г., c. 34-35].

Способ прост в исполнении, непродолжителен по времени, не требует токсичных реагентов. Однако дополнительная экстракция при комнатной температуре (+20°С) может привести к инактивации значительной части протеолитических ферментов.

Задача настоящего изобретения - создать ферментный препарат, который бы обладал высокой молокосвертывающей и низкой общей протеолитической активностью.

Задача решается предложенным способом получения молокосвертывающего ферментного препарата из плодовых тел вешенки обыкновенной. Способ характеризуется тем, что плодовые тела вешенки обыкновенной гомогенизируют, замораживают полученный гомогенат с последующим размораживанием и разделением на экстракт и осадок. Осадок соединяют с дистиллированной водой в соотношении 1:2, выдерживают при температуре +4 - +8°С, отделяют вторичный экстракт и соединяют его с ранее полученным экстрактом. В смесь экстрактов добавляют пищевую кислоту до достижения рН 3,8 и осуществляют осаждение насыщением раствора хлоридом натрия при температуре +4 - +8°С. Отделяют полученный осадок и высушивают вымораживанием при температуре -18 - -20°С. Высушенный осадок хранят в холодильнике. Перед применением растворяют в минимальном количестве воды и центрифугируют.

Замораживание гомогената проводят при температуре -18 - - 20°С.

Осаждение проводят при концентрации хлорида натрия в растворе 35,9%.

В качестве пищевой кислоты используют уксусную или соляную кислоты.

Совокупность существенных признаков заявляемого способа обеспечивает получение технического результата, который заключается в увеличении выхода молокосвертывающего фермента за счет частичной очистки его от других протеаз плодовых тел вешенки обыкновенной, а также в увеличении соотношения молокосвертывающей и общей протеолитической активности по сравнению с аналогом.

Примеры осуществления изобретения.

Пример 1.

Плодовые тела вешенки обыкновенной (500 г) гомогенизируют, замораживают-размораживают, разделяют на экстракт и осадок. Получают 315 мл экстракта. К осадку добавляют дистиллированную воду (1:2), выдерживают при температуре +4°С и периодическом помешивании 8 часов, затем фильтруют. Вторичный экстракт объемом 325 мл соединяют с полученным ранее. Уксусной кислотой доводят рН экстракта до значения 3,8. Добавляют хлорид натрия до полного насыщения раствора (35,9 г на 100 мл экстракта). Осаждение проводят 8 часов при температуре +4°С. Затем отделяют осадок центрифугированием и высушивают при температуре -18°С.

Получают 3 г молокосвертывающего ферментного препарата. Препарат содержит 0,65 мг белка и 0,091 ед.МАС на мг препарата.

Пример 2.

Плодовые тела вешенки обыкновенной (1000 г) гомогенизируют, замораживают-размораживают, разделяют на экстракт и осадок. Получают 620 мл экстракта. К осадку добавляют дистиллированную воду (1:2), выдерживают при температуре +4°С и периодическом помешивании 8 часов, затем фильтруют. Вторичный экстракт объемом 640 мл соединяют с полученным ранее. Соляной кислотой доводят рН экстракта до значения 3,8. Добавляют хлорид натрия в количестве 35,9 г на 100 мл экстракта. Осаждение проводят 8 часов при температуре +4°С. Затем отделяют осадок фильтрованием под вакуумом и высушивают при температуре -20°С.

Получают 6,5 г молокосвертывающего ферментного препарата. Препарат содержит 0,60 мг белка и 0,09 ед.МАС на мг препарата.

При дальнейшем исследовании сравнили полученный ферментный препарат с известным. Полученные данные приведены в таблице.

Таблица Протеолитическая и молокосвертывающая активность препаратов
Название препарата	Удельная молокосвертывающая активность	Удельная рротеолитическая активность	МСА/ПА*
Молокосвертывающий препарат из Irpex lacteus Fr.	0,2	0,63	0,32
Молокосвертывающий препарат из плодовых тел вешенки обыкновенной Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm.	0,13	0,048	2,6
Примечание:* - МСА - молокосвертывающая активность, ПА - общая протеолитическая активность

Как видно из результатов, приведенных в таблице, молокосвертывающий фермент, полученный заявляемым способом, обладает высокой молокосвертывающей активностью, а также значительно большим, чем у аналога, соотношением молокосвертывающей и общей протеолитической активности.