фармацевтическая композиция для профилактики сибирской язвы и лечения энтомозов и гельминтозов у жвачных животных

Формула изобретения

Фармацевтическая композиция для профилактики сибирской язвы и лечения энтомозов и гельминтозов у жвачных животных, содержащая противопаразитарный препарат Иверсект или Новомек с концентрацией ивермектина 1% и суспензию спор вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ при следующем соотношении этих компонентов в композиции, об.%:

суспензия спор вакцинного
сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ	0,5-3,4
препарат Иверсект
или Новомек
с концентрацией ивермектина 1%	остальное

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению биологических препаратов для одновременной специфической профилактики сибирской язвы и профилактики либо терапии оводовых болезней, гельминтозов и клещевых инвазий.

В настоящее время известна вакцина против сибирской язвы, представляющая собой суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного сибиреязвенного штамма «55-ВНИИВВиМ» [1], и препараты широкого спектра действия Иверсект и Новомек, убивающие нематод, клещей, насекомых, личинок оводов, действующим началом которых является ивермектин [2, 3]. Вакцина и противопаразитарные препараты используются независимо друг от друга и, как правило, не одномоментно, причем перед вакцинацией рекомендуется проведение обработки животных против гельминтов. Совпадение сроков иммунизации против сибирской язвы, ранней и поздней фармакотерапии эдемагеноза (сентябрь-ноябрь и март-май соответственно) свидетельствует о целесообразности создания фармацевтической композиции для комплексной лечебно-профилактической обработки животных. Использование этих препаратов в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат (особенно в оленеводстве) и оказывает двойное стрессовое воздействие на организм животных. Борьба с гельминтозами может проводиться в разное время года, однако в настоящее время противогельминтозные мероприятия практически не проводятся.

В литературе описаны результаты исследований по разработке ассоциированных препаратов на основе вакцины против сибирской язвы с использованием антигенов бактериальной и вирусной природы: против сибирской язвы и оспы овец [4, 5]; против сибирской язвы и ящура [6]; сибирской язвы и некробактериоза [7]; сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота [8]. Известны также комплексные препараты против гельминтов и оводовых личинок, в состав которых входят одновременно два вещества, например ивермектин и клозантел [9]. Материалов по созданию комплексного препарата или использованию фармацевтической композиции против сибирской язвы, энтомозов и гельминтозов, обладающих высокой иммуногенной активностью (против сибирской язвы) и терапевтической эффективностью (против личинок овода, клещей, нематод), ареактогенностью, безвредностью в доступной литературе не обнаружено.

Применение предлагаемой фармацевтической композиции в животноводстве позволит избежать указанных недостатков раздельного применения противосибиреязвенных и противопаразитарных препаратов.

Целью изобретения является создание фармацевтической композиции для одновременной лечебно-профилактической обработки жвачных животных против сибирской язвы, энтомозов и гельминтозов, обладающей высокой иммуногенностью, ларвоцидной и противогельминтной эффективностью, ареактогенностью, безвредностью, индуцирующей формирование напряженного иммунитета, обеспечивающего защиту животных от заражения культурой вирулентного штамма возбудителя сибирской язвы, вызывающей гибель гельминтов, клещей и личинок подкожных оводов.

Указанная цель достигается фармацевтической композицией для профилактики сибирской язвы и лечения энтомозов и гельминтозов у жвачных животных, содержащей противопаразитарный препарат Иверсект или Новомек с концентрацией инвермектина 1% и суспензию спор вакцинного сибиреязвенного штамма 55-ВНИИВВиМ при следующем соотношении этих компонентов в композиции, об.%:

суспензия спор вакцинного сибиреязвенного
штамма 55-ВНИИВВиМ	0,5 -3,4
препарат Иверсект или Новомек
с концентрацией инвермектина 1%	остальное

Биологическая активность приготовленной таким образом фармацевтической композиции составляет: по сибиреязвенному компоненту 10,0-25,0 млн спор/см ³, по противопаразитарному компоненту 9,66-9,95 мг/см ³.

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая фармацевтическая композиция создает иммунитет у однократно привитых северных оленей через 10-14 дней против сибирской язвы длительностью не менее 12 месяцев, вызывает гибель личинок подкожного овода и гельминтов. При этом по иммуногенности она не уступает моновакцине против сибирской язвы животных.

Эффективность лечебно-профилактического действия предлагаемой фармацевтической композиции проверена в производственных испытаниях в период проведения массовых обработок оленей против личинок подкожного овода на группе северных оленей (115 голов в возрасте около 1 года) в ООО «Северный» и ПСК «Оленевод» (г.Воркута). Пораженность не обрабатываемого противопаразитарными препаратами поголовья оленей для эдемагеноза и гельминтозов составляет 100% и 85% соответственно, при этом только зараженность эхинококкозом и цистицеркозом, при которых пораженные паренхиматозные органы приходится выбраковывать, достигает 25-30% общего поголовья. Обработанные фармацевтической композицией животные оставались клинически здоровыми, поствакцинальных осложнений не наблюдалось. Через 14 дней и 12 месяцев после вакцинации выборочно у 10 животных были взяты пробы крови для исследования сывороток на наличие специфических антител. Результаты определения противосибиреязвенных антител показали, что у всех животных в крови присутствуют специфические антитела в титрах 1:160-1:640, уровень которых обеспечивает защиту животных от заражения сибирской язвой. Среди привитых животных случаев заболевания сибирской язвой не наблюдалось.

Применение предлагаемой фармацевтической композиции в животноводстве позволит существенно снизить трудозатраты ветеринарных специалистов, уменьшить стрессовое воздействие на организм животных при проведении прививок, снизить пораженность поголовья эдемагенозом, цефеномиозом и гельминтозами, увеличить резистентность к другим болезням, повысить привесы и качество продукции.

Примеры конкретного выполнения:

Пример 1

К 96,6 см³ препарата Иверсект с концентрацией ивермектина 10 мг/см³ добавляют 3,4 см³ суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» с концентрацией 662 млн спор/см³. Смесь тщательно перемешивают и используют для введения животным. 1 мл приготовленной таким образом фармацевтической композиции содержит 22,5 млн спор/см³ вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» и 9,66 мг/см³ ивермектина.

Фармацевтическая композиция имеет вид прозрачной, слегка опалесцирующей жидкости.

Результаты испытаний совместимости и сохраняемости приготовленной таким образом фармацевтической композиции приведены в таблицах 1 и 2.

Оценку споростатического и спороцидного действия препарата Иверсект на В. anthracis, проводили в соответствии с «Методическими указаниями по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов», разработанными во ВНИИВВиМ и рассмотренными и одобренными на Ученом совете ВНИИВВиМ и секции Инфекционной патологии животных Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии в 2002 г. [10]. Как видно из данных таблицы 1, препарат Иверсект не обладает споростатическим и спороцидным действием.

Таблица 1 Антиспоровая активность противопаразитарного препарата Иверсект (n=3)
Активность	Экспозиция	Разведение препарата
цельн.	1:2	1:4	1:8	1:16	1:32	1:64	1:128
Споростатическая	1	+	+	+	+	+	+	+	+
Спороцидная	5	+	+	+	+	+	+	+	+
Примечание: +наличие роста В.anthracis при посеве смеси спор с препаратом Иверсект на МПА.

Изучена сохраняемость фармацевтической композиции при температурах 4±2°С (рекомендуемая температура хранения), 18±2°С и 37±2°С.

Таблица 2 Сохраняемость спорового компонента фармацевтической композиции и рабочего разведения сибиреязвенной моновакцины при различных температурных режимах
Препарат	Температура хранения, °С	Количество жизнеспособных спор (млн/мл)
исходное	1 сут.	7 сут	14 сут
Фармацевтическая композиция	4±2	22,5	22,3	22,2	21,2
18±2	22,5	21,5	17,8	13,3
37±2	22,5	20,2	2,7	1,0
Сибиреязвенная моновакцина	4±2	22,5	22,5	22,4	22,1
18±2	22,5	22,4	21,0	14,8
37±2	22,5	21,1	12,5	11,1

Как видно из данных таблицы, при рекомендуемой температуре хранения (4±2°С) активность спорового компонента сохраняется на исходном уровне в течение не менее 2-х недель, как в фармацевтической композиции, так и в рабочем разведении моновакцины.

Пример 2

В экспериментах на морских свинках и северных оленях показано, что фармацевтическая композиция, приготовленная как описано в примере 1, не уступает по иммуногенности моновакцине против сибирской язвы животных.

Результаты сравнительной проверки иммуногенности фармацевтической композиции и сибиреязвенной моновакцины на морских свинках приведены в таблице 3.

Таблица 3 Оценка напряженности иммунитета к сибирской язве у морских свинок, привитых моновакциной против сибирской язвы и предлагаемой фармацевтической композицией
Препарат	Кол-во животных, способ введения препарата	Пало/всего	% защиты
после вакцинации	после контрольного заражения
Фармацевтическая композиция	5 подкожно	0/5	0/5	100

	5 внутримышечно	0/5	0/5	100
Сибиреязвенная моновакцина	5 подкожно	0/5	0/5	100
Биологический контроль (интактные животные)	5 препараты не вводились	-	5/5	0

Как видно из представленных данных, процент защиты морских свинок, зараженных референс-заражающей культурой возбудителя сибирской язвы, штамм М-71 2-й вакцины Ценковского, через 10-12 суток после вакцинации, составил 100%. Все контрольные (интактные) животные после заражения культурой штамма М-71 погибли. Таким образом, при введении морским свинкам фармацевтической композиции у животных формируется полноценный противосибиреязвенный иммунитет, не отличающийся от такового при использовании противосибиреязвенной вакцины.

После введения фармацевтической композиции северным оленям (n=5) местных реакций и осложнений не наблюдалось. Отклонения в клиническом состоянии животных в течение всего срока наблюдения отсутствовали. Данные динамики клинических показателей представлены в таблице 4.

Таблица 4 Показатели температуры тела, пульса и дыхания оленей после применения фармацевтической композиции (п=5)
Дни наблюдения	Температура, °С	Пульс, кол-во/мин	Дыхание, кол-во/мин
До введения препарата	38,3; 38,9; 39,0; 38,7; 38,8	57, 59, 58, 57, 59	26, 24, 28, 29,24
1	38,5; 39,0; 38,7; 38,5; 39,0	58, 60, 58, 57, 59	27, 25, 28, 29, 25
2	38,6; 38,9; 38,6; 38,7; 38,9	57, 59, 58, 57, 59	26, 28, 29, 26, 27
3	38,7; 38,9; 38,6; 39,0; 37,9	56, 58, 58, 57, 59	25, 27, 26, 28, 29
4	38,6; 38,0; 38,8; 37,6; 37,8	54, 58, 58,57, 59	26, 24, 27, 29, 27
5	39,0; 38,4; 38,6; 38,5; 37,7	59, 56, 58, 57, 59	25, 26, 29, 28, 25
6	38,6; 38,7; 39,0; 38,5; 38,7	57, 59, 58, 57, 59	27, 25, 27, 29, 26
7	38,9; 37,8; 37,9; 39,0; 38,6	58, 60, 58, 57, 59	26, 29, 29, 28, 25
8	38,7; 38,9; 38,9; 37,4; 38,6	57, 56, 58, 57, 59	27, 29, 26, 25, 29
9	39,0; 38,5; 38,6; 38,7; 38,8	59, 57, 58, 57, 59	27, 28, 26, 29, 26
10	38,9; 39,0; 38,6; 38,8; 38,7	57, 59, 58, 57, 59	26, 29, 25, 24, 27

Через 10 дней у всех подопытных оленей брали пробы сыворотки крови для исследования на наличие противосибиреязвенных антител в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА). Титры противосибиреязвенных антител колебались в пределах 1:160-1:640, что соответствует титрам антител после применения сибиреязвенной моновакцины. При неполном гельминтологическом вскрытии по К.И.Скрябину в легких и желудочно-кишечном тракте оленей, обработанных фармацевтической композицией, жизнеспособные гельминты не обнаружены. При вскрытии оленей, привитых моновакциной против сибирской язвы и не обработанных противопаразитарными препаратами, в 80% случаев обнаружены гельминты в желудочно-кишечном тракте и в 50% случаев в легких.

Пример 3

К 99,5 см³ препарата Новомек с концентрацией ивермектина 10 мг/см³ добавляют 0,5 см³ суспензии спор вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» с концентрацией 2,46 млрд спор/см ³. Смесь тщательно перемешивают и используют для введения животным. 1 мл приготовленной таким образом фармацевтической композиции содержит 12,3 млн спор/см³ вакцинного сибиреязвенного штамма «55 ВНИИВВиМ» и 9,95 мг/см³ ивермектина.

Фармацевтическая композиция имеет вид прозрачной, слегка опалесцнрующей жидкости.

Таблица 5 Сохраняемость спорового компонента фармацевтической композиции и рабочего разведения сибиреязвенной моновакцины при различных температурных режимах
Препарат	Температура хранения, °С	Количество жизнеспособных спор (млн/мл)
Исходи.	1 сут.	7 сут	14 сут	21 сут
Фармацевтическая композиция	4±2	12,3	12,4	13,2	12,9	12,1
18±2	12,3	12,0	9,8	6,1	0,5
37±2	12,3	10,1	3,4	0,6	0,05
Сибиреязвенная моновакцина	4±2	12,3	12,5	12,0	11,5	12,0
18±2	12,3	12,4	11,4	7,4	6,2
37±2	12,3	11,5	6,3	1,5	0,5

Из представленных в таблице данных видно, что концентрация спор вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ В. anthracis при совместном хранении с препаратом Новомек в течение трех недель при 4°С не изменяется.

В экспериментах на морских свинках, телятах и овцах показано, что фармацевтическая композиция не уступает по иммуногенности моновакцине против сибирской язвы.

Результаты проверки иммуногенности фармацевтической композиции приведены в таблице 6.

Процент защиты морских свинок, зараженных референс-заражающей культурой возбудителя сибирской язвы штамм М-71, через 10-12 суток после вакцинации составил для фармацевтической композиции 100%, а для сибиреязвенной моновакцины 86,7%. Через 21 сутки после введения вакцины у телят титр противосибиреязвенных антител в РНГА составил 1:160-1:320, у овец-1:80-1:320.

Таблица 6 Оценка напряженности иммунитета к сибирской язве у морских свинок и телят, привитых моновакциной против сибирской язвы и предлагаемой фармацевтической композицией
Препарат	Вид животного	Кол-во животных (голов)	Титры антител после вакцинации	Результаты контрольного заражения
14 сут.	21 сут.	Голов	% защиты
Выжило	Пало
Фармацевтическая композиция	морские свинки	9	Н.о.	Н.о.	9	0	100
телята	2	1:80-1:160	1:160-1:320	Н.о.	Н.о.	Н.о.
овцы	3	1:80-1:160	1:160-1:320	3	0	100
Сибиреязвенная моновакцина	морские свинки	30	Н.о.	Н.о.	26	4	86,7
телята	2	1:80-1:160	1:160-1:320	Н.о.	Н.о.	Н.о.
овцы	3	1:80-1-160	1:160-1:320	3	0	100
Биологический контроль (интактные животные)	морские свинки	10	Н.о.	Н.о.	0	10	0
Примечание: н.о. - показатель не определяется

В результате проведенных экспериментов установлено, что предлагаемая фармацевтическая композиция создает у однократно привитого крупного рогатого скота напряженный иммунитет к сибирской язве продолжительностью не менее 12 месяцев и не уступает выпускаемой в настоящее время моновакцине против этой болезни. При вскрытии опытных животных (крупный рогатый скот, овцы), убитых через 14 и 21 сутки после обработки фармацевтической композицией, в желудочно-кишечном тракте и легких жизнеспособные гельминты не обнаружены.

Пример 4

В период массовых обработок северных оленей против личинок подкожного овода (ранняя химиотерапия) изучена переносимость, безвредность и лечебно-профилактическая эффективность фармацевтической композиции в опытах на группе оленей в количестве 110 голов. Титры противосибиреязвенных антител в сыворотках крови случайно выбранных из этой группы животных составили 1:160-1:320. Через год после обработки в ноябре - декабре 11 оленей из опытной группы было убито, шкуры и туши оленей обследованы на предмет пораженности личинками подкожного овода. Эффективность фармацевтической композиции против носоглоточного и подкожного овода составила 98,8-100%.

Таким образом, предлагаемая фармацевтическая композиция создает у однократно привитых животных напряженный иммунитет против сибирской язвы и обладает терапевтическим эффектом против энтомозов и гельминтозов.

Источники информации

1. Патент РФ № 2095409. Способ изготовления вакцины против сибирской язвы животных. / Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Селиверстов В.В. и др. (РФ). 1997.

2. Taylor, M.A. Efficacy of ivermectin against benzimidazole-resistant nematodes of sheep. / M.A.Taylor, K.R.Hunt, C.A.Wilson, D.G.Baggott // Veterinary Record. - 1990. - V.127. - 12. - P.302-303.

3. Викторов, А.В. Ивермектин, развитие резистентности. / А.В.Викторов // Ветеринария. - 2002. - 4. - С.50-54.

4. Лихачев Н.В., Колесов С.Г., Борисович Ю.Ф., Преснов И.И. "Ассоциированная вакцинация овец против сибирской язвы и оспы". Тр. ГНКИ ветпрепаратов, 1967. - Т.14. - С.35-44.

5. Патент РФ 2181296, МПК А61К 39/295, А61К 39/07, 39/275. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и оспы овец. / В.М.Балышев, Ю.О.Селянинов, И.А.Бакулов, А.Н.Никулин, Н.С.Косяченко, Т.Ф.Горшкова, В.И.Жестерев, Е.Н.Глухарева, Ф.А.Бадаев (РФ). - № 2000118418; заявлено 13.07.2000; опубл. 20.04.2002, Бюл. № 11.

6. Патент РФ № 2056861, 1996, Бакулов И.А., Гаврилов В.А., Собакин А.С. и др. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и ящура и способ профилактики сибирской язвы и ящура.

7. Патент РФ 2286174, МПК А61К 39/116, А61Р 31/04. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза животных. / Ю.О.Селянинов, О.И.Соломаха, А.В.Коваленко, Л.В.Кириллов, Е.Г.Лавченко, В.М.Котляров, Е.С.Казановский, Т.Е.Фирсова, И.Д.Гнездилов (РФ). - № 2002127716, заявлено 16.10.2002; опубл. 27.10.2006, Бюл. № 30.

8. Патент РФ 2286173, МПК А61К 39/07, А61К 39/187, А61Р 31/00. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и чумы крупного рогатого скота. /Ю.О.Селянинов, Н.В.Грехова, Т.Ф.Горшкова, Н.С.Косяченко, Е.Н.Глухарева, И.Ю.Егорова, В.И.Жестерев (РФ). - № 2005108294; заявлено 24.03.2005; опубл. 27.10.2006, Бюл. № 30.

9. Сафиуллин P.P. Фармако-токсикологическая характеристика и терапевтическая эффективность комплексного препарата на основе ивермектина и клозантела при паразитарных болезнях крупного рогатого скота. Автореферат дисс. канд. биол. наук. М., 2003.

10. Методические указания по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных химиопрепаратов среди соединений различных химических классов. Покров, 2002.