способ лечения паралича и эпилепсии у собак

Формула изобретения

Способ лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза, включающий введение в организм больной собаке лекарственного средства, отличающийся тем, что в качестве лекарственного средства используют раствор мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты при концентрации 0,05-0,250·10 ⁶ клеток/кг веса животного и осуществляют поэтапное подкожное введение одной части раствора клеток в области плюсны, предплюсны и скакательного сустава задних лап и двух частей раствора в область крестца и вдоль поясничного отдела позвоночника.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза, последствие после чумки собак.

Чумка собак - острая контагиозная вирусная болезнь, проявляющаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек, поражением кожи, центральной нервной системы или сочетанием этих признаков.

Нервная форма чумки наиболее тяжелая у собак. Наиболее серьезными осложнениями при ней являются - менингит, энцефалит, параличи конечностей и сфинктеров внутренних органов, а также эпилепсия. В связи с общей интоксикацией организма и клеток ЦНС отмечаются дискоординация движений, болезненность мышц, резкое повышение тактильной чувствительности, неадекватная реакция на внешние раздражители. Меры профилактики и борьбы: ежегодная вакцинация.

Для этих целей известны биопрепараты, обладающие противовирусной активностью и обеспечивающие сохранность собак. Это вакцины, гипериммунные сыворотки, препараты иммуноглобулинов, интерферонов (Лазарева Д. и др. Стимуляторы иммунитета. М., 1985. с.285). Недостатком этих препаратов является их низкая активность и, как следствие, возможные осложнения после болезни.

Известен способ лечения нервно-мышечной системы, например последствий чумы и миэлита у собак, сотрясений и ушибов головного мозга, основанный на вакцинации сывороток, антибиотиков и др. (Внутренние незаразные болезни животных. / Под ред. А.М.Колесова. Л., 1972, с.374-386). Недостатками известного способа являются низкая эффективность лечения, осложнения и частые летальные исходы.

Известен способ профилактики и лечения чумки собак, включающий введение в организм биологически активного вещества, представляющего собой продукт культивирования индуцированных лимфоидных клеток собаки: белки, аминокислоты, соли минеральных кислот, жирные кислоты, сахара, аскорбиновая кислота (пат. РФ 2034567). Препарат вводят собаке интраназально или перентерально 1-2 раза в сутки в дозе 0,5-1,0 мл.

Для улучшения функций пораженных участков нервной ткани применяется введение витаминов группы В, аскорбиновой кислоты, липоцеребрина, прозерина, дибазола. В качестве противосудорожных препаратов применяют стрихнин и вератрин. Проводят также повторяющиеся курсы введения глюкозы с уротропином, аутогемотерапию. Однако все эти методы длительны и малоэффективны, особенно при лечении последствий нервной формы чумы у собак.

Известен способ лечения инфекционных заболеваний, например чумки собак, позволяющий эффективно купировать инфекционный процесс и восстанавливать функции центральной нервной системы в случае ее поражения. Данный способ (пат. РФ 2098126) включает комплексное применение препаратов, повышающих иммунную устойчивость организма к инфекту, а также ингибирование развития воспалительных процессов в мозговой ткани. Сущность способа сводится к тому, что проводят ряд последовательных введений антигена или антигенов возбудителя болезни в возрастающих дозах и одновременно вводят антигены аллогенной мозговой ткани в понижающейся дозировке.

Известен способ лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза, включающий введение в организм больной собаке лекарственного средства (пат РФ 2028801). Способ основан на пероральном введении больному животному лекарственных препаратов, стимулирующих производство катехоламинов, например НАКОМ в сочетании с купирующими гиперсинтез адреналина и норадреналина лекарствами, например седуксеном.

Наиболее близким техническим решением, которое следует взять за прототип, является способ лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза путем введения в организм больной собаки церебролизина ежедневно или через день в течение 1-2 месяцев (Машковский М.Д. М., 1984, с.99). Церебролизин представляет собой очищенный от белков гидролизат мозга.

Недостатком этих способов является низкая эффективность лечения.

Целью данного изобретения является повышение эффективности лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза.

Поставленная задача достигается за счет использования способа лечения у собак паралича и эпилепсии как следствие постинфекционного генеза, включающего введение в организм больной собаке лекарственного средства, в качестве которого используют раствор мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты при концентрации 0,05-0,250×10 ⁶ клеток/кг веса животного и осуществляют поэтапное подкожное введение одной части раствора стволовых клеток в области плюсны, предплюсны, и скакательного сустава задних лап и двух частей раствора в область крестца и вдоль поясничного отдела позвоночника.

Мезенхимальные стволовые клетки пуповины или плаценты были получены в соответствии со стандартной методикой следующим образом. Образцы пуповины или плаценты человека собирали после нормальных родов на 39-40 неделе гестации. Вены пуповины и плаценты канюлировали и промывали сначала раствором Хенкса, а затем ОД % раствором коллагеназы I типа, приготовленным на среде DMEM без сыворотки, и инкубировали при 37°С 30 мин. Затем сосуды вновь промывали раствором Хенкса, ткань подвергали непродолжительному мягкому механическому воздействию и собирали отделившиеся клетки. Полученные клетки осаждали центрифугированием. Осадок ресуспендировали в среде DMEM, содержащей 10% сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 ед./мл стрептомицина, 2 мМ глютамина, 1 мМ пирувата натрия, 10 нг/мл базальнного фактора роста фибробластов ( -FGF), переносили в культуральные чашки и культивировали до формирования монослоя, сменяя среду 2 раза в неделю. При достижении монослоя клетки пересевали в соотношении 1:3.

Способ осуществляется следующим образом.

Проводят подкожное введение мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты путем инъекции 1-2 мл физиологического раствора, содержащего 0,05-0,250×10⁶ клеток/кг веса животного. При этом осуществляют поэтапное подкожное введение одной части раствора клеток в области плюсны, предплюсны и скакательного сустава задних лап и двух частей раствора клеток в область крестца и вдоль поясничного отдела позвоночника. Это суммарно 14-20 инъекций. В зависимости от состояния собаки процедуру можно проводить 2 раза в год.

Исследование клинической эффективности способа на собаках, имеющих последствие после поражения чумкой, проводили в клиниках домашних животных.

Изобретение иллюстрируется следующим примером.

Пример 1. Собака, 6 лет, восточно-европейская овчарка, кобель, после чумки паралич передних и задних конечностей. По показаниям назначено подкожное введение мезенхимальных стволовых клеток пуповины или плаценты при концентрации 0,125×10 ⁶ клеток/кг веса животного одномоментно. Введение осуществляли поэтапно: одну часть раствора клеток в область плюсны, предплюсны и скакательного сустава задних лап, две части раствора - в область крестца и вдоль поясничного отдела позвоночника с двух сторон. Через 4 дня наблюдается улучшение подвижности передних конечностей, на следующий день - задних конечностей. Спустя неделю после начала лечения собака может стоять и даже перемещаться. Через 10 дней собака самостоятельно ходит.

Пример 2. Собаки, перенесшие чумку (продолжительность заболевания от 10 до 30 дней). У 3 животных - кишечная форма болезни, у 2 - легочная форма и у 3 животных нейропаралитическая стадия. Лечение осуществляли аналогично примеру 1. Вводимая концентрация мезенхимальных стволовых клеток 0,050×10⁶, 0,250×10⁶. После курса лечения все собаки выздоровели.