композиция на основе бактериофага (варианты)

Формула изобретения

1. Композиция на основе бактериофага, отличающаяся тем, что она содержит видоспецифические вирулентные бактериофаги и бактериофаги с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека изолятов бактерий в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий, и целевые добавки.

2. Композиция на основе бактериофага, отличающаяся тем, что она содержит видоспецифические вирулентные бактериофаги и бактериофаги с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека изолятов бактерий в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий, и целевые добавки.

3. Композиция по п.1, отличающаяся тем, что она содержит бактериофаги, выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг.

4. Композиция по п.2, отличающаяся тем, что она содержит бактериофаги, выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг.

5. Композиция по п.1, или 2, или 3, или 4, отличающаяся тем, что она содержит целевые добавки в количестве 1,0-95,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка, и представлена в виде суспензии.

6. Композиция по п.1, или 2, или 3, или 4, отличающаяся тем, что она может быть использована при профилактике и лечении инфекционного заболевания и для обработки пищевого продукта.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, пищевой промышленности, биотехнологии и может быть использовано в производстве медицинских иммунобиологических препаратов, биологически активных добавок и добавок к пище.

Известны способы изоляции лизогенных бактериофагов и изоляции бактериофагов от лизогенных бактерий с однократным использованием одного индуцирующего агента, например митомицина С, перекиси водорода, ультрафиолетового излучения (Siddiqui A., Hart Е., Mandagere U., Goldberg I.D. Rapid plate method for the isolation of lysogenic bacteriophages // Applied Microbiology - 1974. Vol.27, N 1. - P. 278-280, Parisi Joseph Т., Talbot Henry W., JR. Improved rapid plate method for the isolation of bacteriophages from lysogenic bacteria // Applied Microbiology - 1974. Vol.28, N 3. - P. 503-504).

Недостатком известных способов индукции профагов является отсутствие стабильной индуцированной вирулентности бактериофагов.

Известны бактериофаги, представляющие собой стерильные фильтраты фаголизата штаммов бактерий, которые предназначены для лечения и профилактики инфекционных заболеваний (Бактерийные, вирусные и сывороточные лечебно-профилактические препараты. Аллергены. Дезинфекционно-стерилизационные режимы поликлиник. - СПб.: Фолиант, 1998. - С.102-250).

Известен бактериофаг стафилококковый в виде мази, представляющий собой лиофилизированный концентрат фильтрата фаголизата стафилококков и мазевую основу. Активность бактериофага стафилококкового в мази по методу Аппельмана не должна быть ниже

10^-4. В качестве целевых добавок известный бактериофаг стафилококковый может содержать консервант (хинозол), стабилизаторы (кальция глюконат, молоко нежирное сгущенное стерилизованное, глюкозу), мазевую основу (вазелин, ланолин) (ФС42-239 ВС-89).

Известны суппозитории, содержащие в качестве биологически активного средства лиофилизированный концентрат фильтрата фаголизита стафилококковых бактерий с литической активностью по Аппельману не ниже 10^-4. в суппозитории или жидкий очищенный концентрированный стафилококковый бактериофаг с литической активностью по Аппельману не ниже 10^-7 в суппозитории. В качестве целевых добавок известные суппозитории могут содержать консервант (хинозол), стабилизаторы (кальция глюконат, молоко нежирное сгущенное стерилизованное, глюкозу), а также гидрофильную основу (полиэтиленоксид 400, полиэтиленоксид 1500) (ФС 42 - 241 ВС - 89, RU патент 2185817, А61К 9/02, 35/76).

Недостатком вышеперечисленных аналогов является то, что при регламентируемых пассажах и обновлениях штаммов бактериофагов в препаратах могут появиться бактериофаги, не проявляющие литические свойства, препараты не обладают адаптацией к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций и не имеют оптимальных размеров частиц суспензии фаголизата, фармацевтически приемлемых целевых добавок, а также их оптимального перечня и комбинации, что в совокупности снижает терапевтические свойства известных препаратов бактериофагов.

Известен препарат Секстафаг суппозитории ректальные, содержащий стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, протейный бактериофаг, клебсиеллезный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, коли бактериофаг со специфической активностью каждого концентрированного монофага не ниже 10^-7. В состав суппозитория (масса 1,2 г) входит: концентрированный стерильный Секстафаг (20 мас.%), эмульгатор Т-2 (5 мас.%), витепсолы марок Н-15 и W-35 в соотношении 1:1 (75 мас.%). Бактериофаги культивируются на коллекционных штаммах чувствительных микроорганизмов, лизируемых маточными бактериофагами в титре 10^-6 и выше. Коллекция штаммов чувствительных микроорганизмов пополняется и постоянно обновляется циркулирующими возбудителями. (Функнер Е.В. Микробиологические и технологические аспекты разработки комплексного препарата бактериофагов. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. - Пермь, 2007. - 24 с.).

Основным недостатком известного препарата является то, что при пассажах и обновлениях штаммов бактериофагов и при обновлениях штаммов чувствительных микроорганизмов в препаратах могут появиться бактериофаги, не проявляющие литические свойства, а в коллекцию могут быть включены потенциально лизогенные бактерии. Кроме того, в прототипе не указаны оптимальные размеры частиц суспензии фаголизата, целевых добавок, а также их оптимального перечня и комбинации. Все вышеизложенное в совокупности снижает терапевтические свойства известных препаратов бактериофагов.

В основу изобретения положена задача обеспечения стабильной вирулентности бактериофагов, их адаптации к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций.

Задача решена тем, что варианты композиции на основе бактериофага содержат видоспецифические вирулентные бактериофаги и бактериофаги с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека изолятов бактерий в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий и целевые добавки. Композиция на основе бактериофага может содержать видоспецифические вирулентные бактериофаги и бактериофаги с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже

10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека изолятов бактерий в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий и целевые добавки. Композиция может содержать бактериофаги, выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг. Композиция может быть представлена в виде суспензии и содержать добавки в количестве 1,0-95,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка.

В результате проведенных нами исследований впервые установлено появление бактериофагов, не проявляющих литические свойства, в препаратах бактериофагов при регламентируемых пассажах и обновлениях штаммов бактериофагов. Нами впервые предложены заявляемые варианты композиции на основе бактериофага, содержащие стабильно вирулентные бактриофаги и бактериофаги со стабильно индуцированной вирулентностью, полученные посредством впервые предложенного сочетания последовательных пассажей фагов заявляемых препаратов бактериофагов через тест-штаммы и выделенные из организма человека свежевыделенные изоляты нелизогенных бактерий с использованием при многократных пассажах эффективного индуцирующего агента (например, митомицина С, ципрофлоксацина, данофлоксацина, повышенной температуры при культивировании) и эффективной комбинации индуцирующих агентов. Также впервые подобраны размеры, оптимальный перечень целевых добавок и их комбинация. Все вышеизложенное в сочетании обеспечивает вирулентность бактериофагов в композиции, их адаптацию к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций.

Заявляемая композиция на основе бактериофага, содержащая видоспецифические вирулентные бактериофаги и бактериофаги с индуцированной вирулентностью в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека изолятов бактерий в виде фильтрата фаголизата нелизогенных бактерий, является новой и в литературе не описана.

Техническим результатом заявляемого изобретения является обеспечение стабильной вирулентности бактериофагов в композиции, их адаптация к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций за счет получения бактериофагов посредством последовательных многократных пассажей фагов препаратов бактериофагов через тест-штаммы и выделенные из организма человека свежевыделенные изоляты нелизогенных бактерий с добавлением в питательную среду индуцирующего агента, например митомицина С, а также за счет выбора оптимального перечня целевых добавок и их комбинации.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах.

Пример 1. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага, содержащая в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и целевые добавки. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученной композиции ее образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование композиции в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 2. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага, содержащая в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью в среде культивирования лизированных нелизогенных бактерий с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и целевые добавки. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 3. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 1,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 4. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 20,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 5. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 95,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 6. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью в среде культивирования лизированных нелизогенных бактерий с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 1,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 7. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью в среде культивирования лизированных нелизогенных бактерий с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 20,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Пример 8. Получена композиция (иммунобиологический бактерицидный препарат) на основе бактериофага в виде суспензии, содержащая в фильтрате концентрата фаголизата нелизогенных бактерий видоспецифические бактериофаги (табл.1), выбранные из ряда: стафилококковый бактериофаг, стрептококковый бактериофаг, коли бактериофаг, протейный бактериофаг, синегнойный бактериофаг, сальмонеллезный бактериофаг, шигеллезный бактериофаг, энтерококковый бактериофаг и клебсиеллезный бактериофаг, в виде вирулентных бактериофагов и бактериофагов с индуцированной вирулентностью в среде культивирования лизированных нелизогенных бактерий с литической активностью не ниже 10^-4 по Аппельману в отношении тест-штаммов и выделенных из организма человека циркулирующих изолятов бактерий и содержащая целевые добавки (табл.2) в количестве 95,0 мас.% от массы композиции, выбранные из ряда: глицин, цистеин, гистидин, хинозол, хитозан, экстракт корня солодки, экстракт шиповника, экстракт душицы, экстракт клюквы и вкусоароматическая добавка. Проведен тест на лизогению. При титровании начальных разведений образцов бактериофага, полученных при хранении и последовательных пассажах в течение года, выявлялись фагорезистентные формы бактерий. Произвольно отбирали 30 колоний фагоустойчивых штаммов бактерий из разных чашек. Штаммы трехкратно пассировали на чашках с питательной средой. Потом суспензии клеток первоначально инкубировали в жидкой питательной среде при 37°С в течение 3 часов. Затем в системы вносили митомицин С и продолжали инкубировать культуры еще 2,5-3 часа. На следующем этапе клетки отделяли центрифугированием, а фракции надосадочной жидкости анализировали на наличие фагов титрованием на тест-штаммах бактерий. Тест на лизогению был отрицательный. Для испытания биодоступности полученного иммунобиологического бактерицидного препарата его образец массой 0,6 г вносился в среду 199. Отмечалось равномерное диспергирование препарата в водной среде и сохранение в растворе не менее 99% литической активности композиции.

Таким образом, выполненные в виде суспензии заявляемые варианты композиции на основе бактериофага проявляли стабильную вирулентность бактериофагов, их адаптацию к циркулирующим возбудителям бактериальных инфекций.

Таблица 1 Варианты состава бактериофагов композиции
Бактериофаги	Вариант состава бактериофагов
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
стафилококковый бактериофаг	+	-	-	-	-	-	-	-	-	+	+
стрептококковый бактериофаг	-	+	-	-	-	-	-	-	-	-	+
коли бактериофаг	-	-	+	-	-	-	-	-	-	+	+
протейный бактериофаг	-	-	-	+	-	-	-	-	-	+	+
синегнойный бактериофаг	-	-	-	-	+	-		-	-	+	+
сальмонеллезный бактериофаг	-	-	-	-	-	+	-	-	-	+	-
шигеллезный бактериофаг	-	-	-	-	-	-	+	-	-	+	-
энтерококковый бактериофаг	-	-	-	-	-	-	-	+	-	+	+
клебсиеллезный бактериофаг	-	-	-	-	-	-	-	-	+	-	+

Таблица 2 Варианты состава целевых добавок композиции в виде суспензии, содержащей бактериофаги
Целевые добавки	Вариант состава целевых добавок
1	2	3	4	5	6	7	8	9
глицин	+	+	-	+	+	-	+	-	-
цистеин	+	-	+	-	-	+	+	+	+
гистидин	+	+	+	+	+	-	-	-	+
хинозол	+	+	+	-	-	-	+	+	-
хитозан	+	+	+	-	-	-	-	+	+
экстракт корня солодки	+	-	+	+	-	+	-	+	+
экстракт шиповника	+	+	+	+	-	-	-	+	+
экстракт душицы	+	+	-	-	-	+	-	+	+
экстракт клюквы	+	+	+	-	+	-	-	+	+
вкусоароматическая добавка	+	+	+	-	-	-	-	+	+