селективные противотуберкулезные агенты, представляющие собой замещенные 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидины или замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидины или их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, фармацевтическая композиция на их основе и способ получения замещенных 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-a]пиримидинов
Классы МПК: | C07D239/70 конденсированные с карбоциклическими кольцами или циклическими системами C07D487/04 орто-конденсированные системы A61K31/519 орто- или пери-конденсированные с гетероциклическими кольцами A61P31/06 для лечения туберкулеза |
Автор(ы): | Русинов Геннадий Леонидович (RU), Федорова Ольга Васильевна (RU), Жидовинова Мария Сергеевна (RU), Горбунов Евгений Борисович (RU), Чупахин Олег Николаевич (RU), Кравченко Марионелла Анатольевна (RU), Мордовской Георгий Георгиевич (RU), Овчинникова Ирина Георгиевна (RU) |
Патентообладатель(и): | Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской академии наук (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2007-06-26 публикация патента:
10.07.2009 |
Изобретение относится к селективнм противотуберкулезным агентам, представляющим собой замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы А или Б или фармацевтически приемлемые аддитивные натриевые или калиевые соли соединения Б
где в формуле A R1 = атом водорода; R2 = арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерил, выбранный из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей метокси-, нитро-, гидроксигруппу, а в формуле Б R1 = атом водорода, С1-С12 алкил или С1-С12тиоалкил; R2 = арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерила, выбранного из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей метилендиоксигруппу, гидроксигруппу, нитро, бром, C1-С6алкил, C1-С6 алкокси, а в замещенном гетериле заместитель выбирается из брома, C1-С6алкокси, C1-С6 алкила. Изобретение также относится к способу получения соединений общей формулы А, включающий нагревание эквимолярных количеств арил- или гетероарилальдегида, ацетоуксусного эфира и аминотриазола в растворителя, такого как алифатический спирт, под воздействием ультразвука и к фармацевтической композиции. Предлагаемые агенты обладают более высокой активностью и более низкой токсичностью в сравнении с аналогами. 4 н.п. ф-лы, 8 табл.
Формула изобретения
1. Селективный противотуберкулезный агент, представляющий собой замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-6-карбэтокси-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы А
где R1 - атом водорода; R2 - арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерил, выбранный из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей метокси, нитро, гидроксигруппу.
2. Селективный противотуберкулезный агент, представляющий собой замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы Б или их фармацевтически приемлемые аддитивные натриевые или калиевые соли
где R1 - атом водорода, С1 -С12алкил или С1-С12тиоалкил; R2 - арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерила, выбранного из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей метилендиоксигруппу, гидроксигруппу, нитро, бром, C1-С6алкил, C1-С6 алкокси, а в замещенном гетериле заместитель выбирается из брома, C1-С6алкокси, C1-С6 алкила.
3. Способ получения соединений общей формулы А по п.1, включающий нагревание эквимолярных количеств арил- или гетероарилальдегида,ацетоуксусного эфира и аминотриазола в растворителя, такого как алифатический спирт, отличающийся тем, что реакцию ведут под воздействием ультразвука.
4. Фармацевтическая композиция, обладающая антимикобактериальной активностью, содержащая активное начало и фармацевтически приемлемый наполнитель, отличающаяся тем, что в качестве активного начала она содержит замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы А по п.1 или формулы Б по п.2 или аддитивные соли соединений общей формулы Б по п.2 в эффективном количестве.
Описание изобретения к патенту
Настоящее изобретение относится к замещенным 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинам, способам их получения, а также к фармацевтически приемлемым аддитивным солям и фармацевтической композиции на основе замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов. Указанные соединения могут быть использованы в качестве противотуберкулезных агентов в первую очередь для лечения больных туберкулезом.
Заявляемые в качестве селективных противотуберкулезных агентов соединения, их структура и способ получения описаны [Европейский патент № 183848]. Они известны как модуляторы кальциевых каналов [Европейский патент № 0217142], но их активность в отношении микобактерий туберкулеза не известна и не описана.
Аналогом вышеуказанных веществ по строению является противоопухолевый препарат из класса замещенных дигидропиримидинов - 5-фторурацил I, который был использован для лечения экспериментального туберкулеза лабораторных животных [Патент РФ № 2165761].
Однако 5-фторурацил токсичен, а его туберкулостатическая активность в опытах in vitro невысока (MIC=600 мкг/мл) [Патент РФ № 2153339].
Аналог по назначению, изониазид формулы II является селективным противотуберкулезным препаратом, однако, недостатками этого препарата является его высокая токсичность и различные побочные эффекты при применении. Изониазид вызывает аллергию, негативно влияет на функцию желудочно-кишечного тракта, имеет побочное действие на нервную систему [М.Д.Машковский, Лекарственные средства, т.II, Харьков, Торгсин, 1998, с.332 и Фармакология и токсикология, 1987, 50, (4), с.87]. Отмечено широкое распространение устойчивых к изониазиду клинических штаммов микобактерий.
Известен способ получения 7-арил(гетерил)-2-алкил-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов путем кипячения эквимолярных количеств 2-алкил-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина с ароматическим или гетероароматическим соединением в диоксане или спирте [Химия гетероциклических соединений, 1986, № 11, с.1544-1549; Химия гетероциклических соединений. 1989, № 6, с.811-816].
Описан способ получения соединений 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов кипячением в спирте ацетоуксусного эфира, 3-амино-1,2,4-триазола и ароматического или гетероароматического альдегида, с использованием промотирующего воздействия соляной кислоты [Изв. АН сер. хим. - 2003. - № 8. - с.1677-1678] (прототип), однако этот способ характеризуется длительностью (7-8 часов), недостаточно высоким выходом и приводит к получению побочных продуктов [Вестник УГТУ-УПИ. Серия химическая. 2005. № 5 (57), c. 164-167].
Задача изобретения - использование известных веществ в качестве селективных противотуберкулезных агентов, обладающих высокой активностью, специфично воздействующих на микроорганизм, и практически не воздействующих на макроорганизм, разработка эффективного способа их получения и фармацевтической композиции на их основе.
Поставленная задача решается тем, что в качестве противотуберкулезных агентов используют замещенные 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины, объединенные общим изобретательским замыслом, представленные двумя группами соединений, которые отличаются заместителем в положении 6 (либо карбэтокси- либо нитрогруппа) и способом получения. Это замещенные 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы А и замещенные 7-арил(гетерил)-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины общей формулы Б или их фармацевтически приемлемые натриевые или калиевые аддитивные соли
где R1 = атом водорода; R 2 = арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерил, выбранный из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей нитро-, метокси-, гидроксигруппу
где R1 = атом водорода, С 1-С12алкил или С1-С12тиоалкил; R2 = арил, выбранный из возможно замещенного фенила или гетерил, выбранный из тиенила, пиридила, индолила, пирролила, при этом замещенный фенил имеет 1-3 заместителя, выбранных из группы, включающей метилендиоксигруппу, гидроксигруппу, нитро, бром, C1-С6алкил, C1-С6 алкокси, а в замещенном гетериле заместитель выбирается из брома, C1-С6алкокси, C1-С6 алокси; С1-С6алкила.
Для получения замещенных 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов формулы А используют новый, сонохимический способ, включающий нагревание эквимолярных количеств соответствующего арил- или гетерилальдегида, ацетоуксусного эфира и аминотриазола в среде растворителя, такого как алифатический спирт, отличающийся тем, что реакцию ведут под воздействием ультразвука. Указанный способ отличается от прототипа высокой селективностью процесса, что выражается в повышении выходов целевых продуктов с 56.2-67.2% до 85-90%. При этом 1Н ЯМР спектры технических продуктов содержат сигналы только целевого и исходных продуктов. Тогда как технические продукты, полученные по обычной методике (без ультразвукового воздействия), наряду с целевым 7-арил(гетерил)-6-карбэтокси-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидином содержат побочные продукты - 7-арил(гетерил)-5-гидрокси-6-карбэтокси-4,5,6,7-тетрагидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин и 5-арил(гетерил)-5,8-дигидро-6-карбэтокси-1,2,4-триазоло[4,3-а]пиримидин [Вестник УГТУ-УПИ. Серия химическая. 2005. № 5(57), с.164-167].
Замещенные 7-арил(гетерил)-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины формулы Б получают способом, включающим кипячение эквимолярных количеств 2-алкил-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина с ароматическим или гетероароматическим соединением под воздействием ультразвука в среде растворителя, такого как алифатический спирт. При этом выходы целевых продуктов не стабильны и колеблются от 21.5 до 92%. Аддитивные соли 7-арил(гетерил)-6-нитро-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов формулы Б получают их взаимодействием с гидроксидом щелочного металла (натрия или калия) в этаноле.
В отличие от аналогов по строению и терапевтическому действию указанные соединения представляют собой азолоаннелированные арил(гетерил) замещенные дигидропиримидины наличие туберкулостатической активности у которых не было очевидным.
Туберкулостатическая активность и токсичность этих соединений по сравнению с ближайшими аналогами приведена в табл.1.
Таблица 1. | ||
Туберкулостатическая активность в опытах in vitro (штамм Н 37R ) и токсичность замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-три-азоло[1,5-а]пиримидинов (мыши) в сравнении с аналогами | ||
Соединение | МИК, мкг/мл | ЛД50 , мг/кг |
Изониазид | 0.03 | 200 |
5-Фторурацил | 600 | 150 |
6-Этоксикарбонил-5-метил-7-тиенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидин | 0.75 | >4000 |
6-Этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 | >5000 |
2-Октилмеркапто-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 | >4000 |
Значительная активность замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов при низкой токсичности может быть обусловлена их способностью к переносу через липофильные мембраны нейтральных молекул и заряженных частиц, в частности катионов металлов (табл.2), что по-видимому обеспечивает адресную доставку заявляемых соединений через клеточные мембраны возбудителя. С помощью QSAR расчетных методов проведена оценка проницаемости некоторых из заявляемых соединений (табл 3). Значения logP<5, что соответствует правилу Липински и означает, что данные вещества обладают приемлемой проницаемостью, чтобы рассматриваться в качестве потенциальных лекарств.
Эти особенности строения и физико-химических свойств приводят к повышению активности указанных соединений (табл.4, 5). За счет своей специфичности к микобактериям они не оказывают подавляющего действия на нормальную микрофлору организма, практически не токсичны (табл.6, 7), обладают высоким терапевтическим эффектом (сравнимым с таковым для изониазида) при лечении экспериментальных животных (табл.8).
Таблица 2. | |
Скорость переноса катионов через липофильную мембрану 6-этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидином | |
Катион металла | Скорость переноса, моль·ч-1·10-7 |
Fe (III) | 14,5 |
Cu (II) | 8,2 |
Таблица 3. | ||||
Оценка logP для некоторых замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов | ||||
№ | Соединения | МИК, мкг/мл (Н17 Rv штамм) | ЛД 50, мг/кг | Оценка logP |
1 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-тиенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 0.75 | >4000 | 0.647461 |
2 | б-Этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 | >5000 | 0.702779 |
Исследование антимикобактериальной активности соединений формулы А и Б в опытах in vitro проводят бактериологически, методом вертикальной диффузии на плотной питательной среде Ливенштейна-Йенсена или "Новая". В пробирку с засеянным тест-микробом по свободному краю на дно закапывают по 0,3 мл каждого разведения. Пробирки помещают в термостат в вертикальном положении и инкубируют при 37°С, результаты учитывают на 10-12 сутки.
Антибактериальную активность замещенных соединений формулы А или Б изучают методом высевания растворов препарата в лунки. В чашку Петри с простым питательным агаром вносят тест-микроб. В лунку, расположенную посредине чашки Петри, вносят по 0,02 мл препарата в необходимых концентрациях. Результаты учитывают после 24-часовой инкубации в термостате при 37°С определением зоны задержки роста микроорганизмов по краям лунки.
Изучение цитотоксичности соединений формулы А или Б проводят на клеточной культуре МТ-4 (перевиваемой линии клеток Т лимфоцитов человека). Токсичность различных концентраций соединений определяют по жизнеспособности клеток относительно контроля с использованием спектрофотометра при длине волны 540 нм, по полученным данным строят дозозависимые кривые и определяют концентрации, на 50% снижающие жизнеспособность клеток по сравнению с контролем (CD50).
Исследование острой токсичности соединений формулы А или Б осуществляют по стандартной методике на белых мышах. Животные получают препарат per os в 10% растворе крахмала. Изучение терапевтического действия указанных соединений осуществляют на белых лабораторных мышах весом 18-23 г, зараженных внутривенно, в хвостовую вену в дозе 0.5 мг двухнедельной культуры (штамм Н37Rv) в 0.5 мл физ.раствора. Лечение начинают через неделю после заражения и проводят ежедневно в течение 8 недель. Исследуемые препараты, в том числе контрольный изониазид дают мышам в дозе 10 мг/кг веса. После забоя животных методом эвтаназии, проводят макро- и микроскопическое, а также гистологическое исследования, рассчитывают индекс поражения органов.
Фармацевтическую композицию соединений на основе соединений формулы А или Б получают смешиванием фармацевтически приемлемого наполнителя и эффективного количества соединений формулы А или Б. В качестве наполнителя может быть использовано любое известное для этих целей твердое, жидкое или пластичное вещество.
Таблица 4. | |||||
Антибактериальная активность замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло [1,5-а] пиримидинов в опытах in vitro | |||||
Соединения | Ингибирующий уровень (МИК), мкг/мл | ||||
Е. coli | Klebsiella pneumoniae | Streptococcus группы С | S. aureus | Pseudomonas aeruginosa | |
6-Этоксикарбонил-5-метил-(7-тиен-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >100 | >100 | 100 | >100 | >100 |
2-Додецилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина натриевая соль | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(пиррол-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина натриевая соль | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(5-метоксииндол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
2-Метил-6-нитро-7-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 50 | 50 | 50 | 100 | 100 |
6-Нитро-7-(3,5-диметил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 25 | >100 | >100 | >100 | 50 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(3,4-метилендиоксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
Таблица 5. | ||
Туберкулостатическая активность замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов | ||
№ | Соединения | МИК, мкг/мл (H37 Rv) |
1 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-(7-тиенил-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 0.75 |
2 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 |
3 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-(2-нитрофенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 |
4 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 1.56 |
5 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(3,5-диметил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 3.12 |
6 | 6-Этоксикарбонил-5-метил -7-(4-пиридил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 6.25 |
7 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(5-броминдол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло [1,5-а]пиримидин | 6.25 |
8 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(пиррол-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина натриевая соль | 50 |
Таблица 6. | ||
Цитотоксичность замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-три-азоло[1,5-а]пиримидинов | ||
№ | Соединения | CD50, мкг/мл |
1 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 190 |
2 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-(2-нитрофенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 185 |
3 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 11 |
4 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(3,5-диметил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 16.5 |
5 | 6-Этоксикарбонил-5-метил-7-(4-пиридил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 250 |
6 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(5-броминдол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидин | 20 |
7 | 2-Октилтио-6-нитро-7-(3,4-дигидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | 80 |
Таблица 7. | |
Изучение острой токсичности замещенных 7-арил(гетерил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов на мышах (per os) | |
Соединение | ЛД 50, мг/кг |
6-Этоксикарбонил-5-метил-(7-тиен-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >4000 |
6-Этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >5000 |
6-Этоксикарбонил-5-метил-7-(2-нитрофенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >350 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин | >4000 |
2-Октилтио-6-нитро-7-(3,5-диметил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидин | >300 |
Таблица 8. | |||
Исследование терапевтического действия 7-арил(гетарил) замещенных 4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидинов на мышах (штамм Н37Rv) в дозе 10 мг/кг | |||
Группа мышей | Индекс поражения легких | Индекс поражения селезенки | Индекс эффективности химиотерапии |
Лабораторная норма | 0.0040 | 0.0013 | |
Животные без лечения | 0.0430 | 0.0508 | |
Лечение изониазидом | 0.0042 | 0.0019 | 46.1 |
Лечение 6-этоксикарбонил-5-метил-7-(тиен-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидином | 0.0098 | 0.0040 | 32.1 |
Лечение 6-этоксикарбонил-5-метил-7-фенил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидином | 0.0125 | 0.0039 | 42.6 |
Фармацевтическую композицию получают смешиванием фармацевтически приемлемого наполнителя и эффективного количества соединений формулы А или Б или фармацевтически приемлимых аддитивных солей соединений формулы Б. В качестве наполнителя может быть использовано любое известное для этих целей твердое, жидкое или пластичное вещество.
Чистоту полученных соединений контролируют методом ТСХ, значения Rf определяют с использованием пластинок "Sorbfil" (Силикагель СТХ-1А, УФ) (Россия) или "Silufol-UV" (Чехословакия). Структуру полученных соединений доказывают данными элементного анализа (С,Н,N,O-анализатор фирмы Karlo Erba). ИК-спектры регистрируют на ИК-Фурье спектрометре «Spectrum One» фирмы «PerkinElmer» с помощью приставки диффузного отражения (Diffuse Reflectance Sampling Accessory (DRA)). Спектры ЯМР 1Н соединений записывают в ДМSO-d6 на приборе "Bruker-400" с рабочей частотой 400 мГц и ТМС в качестве внутреннего стандарта. Масс-спектры регистрируют на приборе «Varian MAT 311 - А» с комбинированным FD/EI источником в результате прямого введения пробы в область ионизации. Энергия ионизирующих электронов 70 эВ, ускоряющее напряжение 3 кВ. Температуры плавления определяют на микронагревательном столике «Boetius». Для проведения реакций под ультразвуковым воздействием используют ультразвуковой диспергатор марки УЗДН-2Т с частотой 22 кГц. Катионтранспортные свойства соединений изучают по общепринятой методике, заключающейся в исследовании переноса катиона из одной водной фазы в другую водную фазу через слой неполярного органического растворителя.
Примеры конкретного выполнения.
Пример 1
6-Этоксикарбонил-7-фенил-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы А, где R1 = атом водорода; R 2 = фенил)
К суспензии бензальдегида (10 ммолей), ацетоуксусного эфира (1.30 г, 10 ммоль) и 3-амино-1,2,4-триазола (0.83 г, 10 ммоль) в 10 мл этанола добавляют 0.5 мл, (10.0 ммоль) концентрированной НС1, опускают излучатель ультразвукового диспергатора, который включают на время, необходимое для завершения реакции (5 мин). Растворитель упаривают, остаток промывают ацетонитрилом. Выход 2.5 г (90%). Т.пл. 190-192°С. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 1.04 (т, 3Н. СН3СН 2, J=4.0); 2.42 (с, 3Н, Me); 3.94 (м, 2Н, СН3 СН2); 6.27 (с, 1Н, С(7)Н); 7.26 (м, 5Н, Ph); 7.64 (с, 1Н, СН); 10.77 (с, 1Н, NH); ИК-спектр (DRA), /см-1: 3479, 3441, 3364, 3298 (NH); 1668 (C=O); 1657 (C=O); 1605, 1592, 1576, 1521 (C=N), 1368, 1194, 1157, 1130, 864, 847, 784, 740, 716, 602, 585, 412. Найдено (%): С, 63.36; Н, 5.52; N, 19.69. C15H16N4O 2. Вычислено (%): С, 63. 37; Н, 5.67; N, 19.71. Масс-спектр ЭУ m/z (Iотн., %): 284 (4.13) [М], 223 (7.87), 194 (5.21), 180 (22.44), 150 (37.86), 133 (35.98), 120 (43.48), 103 (100.00), 92 (33.81), 76 (63.28), 60 (67.81), 51 (44.17).
Пример 2
6-Этоксикарбонил-7-(тиен-2-ил)-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы А, где R1 = атом водорода; R 2 = тиен-2-ил)
Получают аналогично примеру 1 из 10 ммолей 2-тиенилальдегида, ацетоуксусного эфира (1.30 г, 10 ммоль) и 3-амино-1,2,4-триазола (0.83 г, 10 ммоль) в присутствии (10.0 ммоль) винной кислоты. Выход 2.50 г (87%). Т.пл. 202-203°С. Спектр 1Н ЯМР (CDCl3): 1.18 (т, 3Н, СН3СН2, J=7.2); 2.58 (с, 3Н, Me); 4.14 (м, 2Н, СН3СН2); 6.75 (с, 1Н, СН); 7.65 (с, 1Н, С(7)Н); 7.01 (м, 3Н, тиазол); 10.32 (с, 1Н, NH); ИК-спектр (вазелиновое масло), /см-1: 3283 (NH); 1711 (С=O). Вычислено (%) для C13H14N4O2S (290,35): С, 53.78; Н, 4.86; N, 19.30. Найдено (%): С, 54.03; Н, 4.61; N, 19.59.
Пример 3
6-Этоксикарбонил-7-(4-пиридил)-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы А, где R1 = атом водорода; R 2 = 4-пиридил)
Получают аналогично примеру 1 из 10 ммолей 4-пиридинальдегида, ацетоуксусного эфира (1.30 г, 10 ммоль) и 3-амино-1,2,4-триазола (0.83 г, 10 ммоль). Очищают кристаллизацией из смеси метанол-вода (1:2). Выход 2.55 г (90%). Т.пл. 178-180°С. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 1.15 (т, 3Н, СН3СН2, J=4.0); 2.42 (с, 3 Н, Me); 3.94 (кв, 2Н, СН3СН2, J-4.0); 6.27 (с, 1Н, С(7)Н); 7.24 (д, 2Н, Ру); 8.54 (д, 2Н, Ру); 7.64 (с, 1Н, СН); 10.42 (с, 1Н, NH); ИК-спектр, /см-1: 3260 (NH); 1775 (С=O). Вычислено (%) для C14H15N5O2 (285,31): С, 58.94; Н, 5.30; N, 24.55. Найдено (%): С, 58.70; Н, 5.17; N, 24.69.
Пример 4
6-Этоксикарбонил-7-(2-нитрофенил)-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы А, где R1 = атом водорода; R 2 = 2-нитрофенил)
Получают аналогично примеру 1 из 10 ммолей 2-нитробензальдегида, ацетоуксусного эфира (1.30 г, 10 ммоль) и 3-амино-1,2,4-триазола (0.83 г, 10 ммоль). Выход 2.83 г (85%). Т.пл. 240-242°С. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 1.05 (т, 3Н, СН3СН 2, J-=7.2); 1.63 (с, 3Н, Me); 4.04 (м, 2Н, СН 3CH2); 7.51 (с, 1Н, CH-Ph); 7.75 (м, 4Н, Ph); 7.60 (с, 1Н, СН); 10.83 (с, 1Н, NH); ИК-спектр, (вазелиновое масло), /см-1: 3350 (NH); 1735 (С=O). Вычислено (%) для C15H15N5O4 (329,32): С, 54.71; Н, 4.59; N, 21.27. Найдено (%): С, 54.79; Н, 4.58; N, 21.31.
Пример 5
6-Этоксикарбонил-7-(3,5-диметокси-4-гидроксифенил)-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы А, где R1 = атом водорода; R 2 = 3,5-диметокси-4-гидроксифенил)
Получают аналогично примеру 1 из 10 ммолей 3,5-диметокси-4-гидроксибензальдегида, ацетоуксусного эфира (1.30 г, 10 ммоль) и 3-амино-1,2,4-триазола (0.83 г, 10 ммоль).
Очищают кристаллизацией из смеси метанол-вода (1:2). Выход 1.44 г (87%). Т.пл. 175-177°С. Спектр 1H ЯМР (DMSO-d6): 1.05 (т, 3Н, СН3СН2, J=7.0); 2.41 (с, 3Н, Me); 3.68 (с, 3Н, ОМе); 4.06-4.11(м, 2Н, СН3CH2 ); 6.18 (с, 1Н, С(7)Н); 6.39-6.47 (м, 2Н, Ph); 7.66 (с, 1Н, С(2)Н); 8.41(с, 1Н, ОН); 10.70 (с, 1Н, NH); ИК-спектр (вазелиновое масло), /см-1: 1728 (СО); 1686 (C=N); 1620 (С=С). Вычислено (%) для C17H20N4O5 (360,37): С, 56.66; Н, 5.55; N, 15.55. Найдено (%): С, 56.67; Н, 5.56; N, 15.58.
Пример 6
2-Октилтио-6-нитро-7-(индол-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1 = 2-октилтио-группа; R2 = индол-2-ил)
В смесь 150 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина с 57 мг индола в 5 мл бутанола опускают излучатель ультразвукового диспергатора, который включают на время, необходимое для завершения реакции (5-10 мин). Раствор охлаждают, отфильтровывают осадок и промывают гексаном. Выход 190 мг (92%). Т.пл. 208-210°С. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 11.92 (уш.с., NH), 11.13 (с., NH), 8.36 (с., Н5), 7.37 (д., 1Н, СН,.7=2.4 Гц), 7.34 (д., 1Н, Ar, J=8 Гц), 7.29 (д., 1Н, Ar, J=8 Гц), 7.07-7.03 (м., 1Н, Ar), 6.97-6.93 (м., 1Н, Ar), 6.83 (с., Н7), 2.90 (т., 2Н, СН2), 1.58-1.50 (м., 2Н), 1.28-1.21 (м., 10 Н), 0.87 (т., 3Н, СН3). Найдено (%): С, 59.09; Н, 6.21; N, 19.75. C21H26 N6SO2. Вычислено (%): С, 59.15; Н, 6.10; N, 19.72.
Пример 7
2-Октилтио-6-нитро-7-(3,5-диметил-4-гидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R 2=3,5-диметил-4-гидроксифенил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 122 мг 2,6-диметилфенола. Выход: 200 мг (45%), т.пл. 112-114°. Вычислено (%): С, 58.47; Н, 6.73; Н, 16.24. C21H 29N5O3S. Найдено (%): С, 58.21; Н 6.80; N, 16.40. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 11.83 (с, NH), 8.34 (с, Н5), 8.21 (с, ОН), 6.80 (с, 2Н), 6.23 (с, Н7), 2.95 - 2.92 (м, 2Н, СН2 ), 2.13 (с, 6Н, 2СН3), 1.62-1.54 (м, 2Н, СН2 ), 1.32-1.24 (м, 10Н, 5СН2), 0.87 (т, 3Н).
Пример 8
2-Октилтио-6-нитро-7-(3,4-дигидроксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R 2=3,4-дигидроксифенил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 122 мг 1,2-дигидроксибензола. Выход: 90 мг (21.5%), т.пл. 135-138°. Вычислено (%): С, 54.42; Н, 5.97; N, 16.71. C19H 25N5O4S. Найдено (%): С, 54.68; Н, 6.11; N, 16.80. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 11.93 (с, 1Н, NH); 9.02 (с, 2Н, 2ОН), 8.50 (с, Н5), 6.71-6.59 (м, 3Н, Ar), 6.45 (с, Н7), 2.90 (т, 2Н, СН2), 1.59-1.62 (м, 2Н, СН2), 1.27-1.23 (м,10Н, 5СН2), 0.88 (т, 3Н, СН3).
Пример 9
2-Октилтио-6-нитро-7-(5-броминдолил-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло [1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R2=5-бромоиндолил-3-ил)
Получают аналогично Примеру 6 из 200 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 127 мг 5-броминдола. Выход: 180 мг (55%), т.пл. 166-169°. Вычислено (%):С, 49.90; Н, 4.95; N, 16.63. C21H 25N6O2SBr. Найдено (%): С, 49.92; Н, 5.00; N, 16.60. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6 ): 11.94 (с, NH), 11.34 (с, NH), 8.40 (с, Н5), 7.54 (д, 1Н, Ar), 7.38 (д, 1Н, Ar), 7.29 (д, 1Н, Ar), 7.16-7.13 (дд, 1Н, Ar), 6.84 (с, Н7), 2.92 (т, 2Н, СН2 ), 1.57-1.51 (м, 2Н, СН2), 1.27-1.21 (м, 10Н, 5СН 2), 0.87 (т, 3Н, СН3).
Пример 10
2-Октилтио-6-нитро-7-(тиен-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин
(Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R2=тиен-2-ил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 80 мкл тиофена. Выход:120 мг (30.5%), т.пл. 135-137°. Вычислено (%): С, 51.89; Н, 5.89; N, 17.80. C17H 23N5O2S2. Найдено (%): С, 51.56; Н, 6.00; N, 17.78. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d 6): 11.90 (с, NH), 8.44 (с, Н5), 6.60-6.58 (м, 1Н, Ar), 6.45 (с, Н7), 5.98-5.90 (м, 2Н, Ar), 3.00-2.96 (м, 2Н, СН2), 1.60-1.54 (м, 2Н, СН2), 1.30-1.23 (м, 10Н, 5СН2), 0.85 (т, 3Н, СН3).
Пример 11
2-Октилтио-6-нитро-7-(3,4-метилендиоксифенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R 2=3,4-метилендиоксифенил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 80 мг 3,4-метилендиоксибензола. Выход 293 мг (68%). т.пл. 128-130°С.
Найдено (%):С, 55.54; Н, 5.90; N, 16.38. C20 H25N5SO4. Вычислено (%): С, 55.67; Н, 5.84; N, 16.23. Спектр Н1 ЯМР (DMSO-d 6): 12.00 (c, NH), 8.64 (с, Н5), 7.25 (д, 1Н, J=8.0 Hz), 6.70-6.68 (м, 2Н), 5.22 (с, Н7), 4.03 (с, CH2), 2.95-2.91 (м, 2Н), 1.54-1.42 (м, 2Н), 1.27-1.14 (м, 10Н), 0.80 (т, 3Н).
Пример 12
2-Октилтио-6-нитро-7-(5-метоксииндол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R 2=5-метоксииндол-3-ил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 81 мг 5-метоксииндола. Выход 447 мг (76%). т.пл 104-106°С. Найдено (%):С, 57.78; Н, 6.03; N, 18.48. С22Н 28N6SO3. Вычислено (%): С, 57.89; Н, 6.14; N, 18.42. Спектр Н1 ЯМР (DMSO-d6 ): 12.00 (с, NH), 11.07 (с, NH), 8.48 (с, Н5), 7.42 (д, 1Н, J=2.4 Hz), 7.25 (д, 1Н, J=8.0 Hz), 6.86 (с, Н7 ), 6.75-6.71 (м, 2Н), 3.70 (с, 3Н), 2.95-2.91 (м, 2Н), 1.54-1.46 (м, 2Н), 1.26-1.16 (м, 10Н), 0.84 (т, 3Н).
Пример 13
2-Октилтио-6-нитро-7-(пиррол-2-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R 2=пиррол-2-ил)
Получают аналогично Примеру 6 из 309 мг 2-октилтио-6-нитро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина и 70 мкл пиррола. Выход: 260 мг (53.2%), т.пл. 186-188°. Вычислено (%): С, 54.26; Н, 6.38; N, 22.34. C17H 24N6O2S. Найдено (%): С, 54.21; Н, 6.32; N, 22.30. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 11.91 (с, NH), 11.12 (с, NH), 8.40 (с, Н5), 6.66-6.65 (м, 1Н, Ar), 6.58 (с, Н7), 5.97-5.90 (м, 2Н, Ar), 3.00-2.96 (м, 2Н, СН2), 1.59-1.54 (м, 2Н, СН2 ), 1.31-1.22 (м, 10Н, 5CH2), 0.85 (т, 3Н, СН3 ).
Пример 14
6-Нитро-7-(2-гидрокси-3,5-ди-трет-бутилфенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=Н; R2=2-гидрокси-3,5-ди-трет-бутилфенил)
Получают аналогично Примеру 6 из 211 мг 7-этокси-6-нитротриазолопиримидина и 206 мг
2,4-ди-трет-бутилфенола. Выход: 225 мг (54%), т.пл. 240-242°С. Найдено (%): С, 61,44; Н, 6,78; N, 18,86. C19H25N5O3 . Вычислено (%): С, 61,37; Н, 6,81; Н, 19,10. Спектр 1 Н ЯМР (DMSO-d6): 12.01 (уш.с, 1Н, NH); 8.57 (с, 1Н, Н1'); 8.55 (с, 1Н, ОН); 7.84 (с, 1Н, Н2 ); 7.17 (д, 1Н, H7 J=2A Hz); 7.08 (с, 1Н, Н5' ); 6.81 (д, 1Н, Н5, J=2.06 Hz); 1.37-1.24 (м, 9Н); 1.19-1.08 (м, 9Н).
Пример 15
2-Метил-6-нитро-7-(2,4-ди-трет-бутилфенил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидин (Соединение формулы Б, где R1=метил; R 2=2,4-ди-трет-бутилфенил)
Получают аналогично Примеру 6 из 200 мг 2-метил-6-нитротриазолопиримидина и 206 мг 2,4-ди-трет-бутилфенола. Выход: 170 мг (42%), т.пл. 257-259°С. Найдено (%): С, 61,95; Н, 7,03; N, 18,24. С30Н 27N5O3. Вычислено (%): С, 62,32; Н, 7,06; N, 18,17. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6 ): 11.9 (уш.с, 1Н, NH); 8.66 (с, 1Н, Н1'); 8.56 (с, 1Н, ОН); 7.17 (д, 1Н, Н7, J=2.3 Hz); 6.97 (с, 1Н, Н5'); 6.79 (д, 1Н, Н5' J=2.3 Hz); 2.01 (с, 3Н, СН3); 1.24 (с, 18Н).
Пример 16
2-октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидина натриевая соль (Соединение формулы Б, где R1=2-октилтио-группа; R2=индол-3-ил) 100 мг 2-октилтио-6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидина растворяют в 3 мл этанолоного раствора NaOH и оставляют на 2 часа, затем осадок фильтруют, промывают этанолом и сушат на воздухе. Выход: 90 мг (85%), т.пл. 204-206°. Вычислено (%): С, 56.25; Н, 5.58; N, 18.75. C21H27 N6O2SNa. Найдено (%): С, 56.45; Н, 5.70; N, 18.83. Спектр 1Н ЯМР (DMSO-d6): 11.13 (с, 1Н, NH), 8.32 (с, 1Н, Н5), 7.34-7.28 (м, 3Н, Ar), 7.07-7.03 (м, 1Н, Ar), 6.97-6.94 (м, 1Н, Ar), 6.83 (с,
Н7), 2.90 (т, 2Н, СН2), 1.56-1.50 (м, 2Н, СН3), 1.27-1.21 (м, 10Н, 5СН2), 0.85 (т, 3Н, СН3).
Пример 17
Фармкомпозиция на основе 6-этоксикарбонил-7-фенил-5-метил-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидина для исследования терапевтического эффекта 20 мг субстанции растирают в ступке и постепенно добавляют небольшими порциями 3 мл 0.1%-ного крахмального раствора до получения однородной суспензии. Полученную композицию используют для лечения экспериментальных животных (белые мыши) путем ее ежедневного, внутрижелудочного введения каждой мыши в дозе 10 мг/кг.
Пример 18
Фармкомпозиция на основе 6-нитро-7-(индол-3-ил)-4,7-дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а] пиримидина калиевой соли для исследования острой токсичности 100 мг субстанции растирают в ступке и постепенно добавляют небольшими порциями 5-10 мл 10%-ного крахмального клейстера до получения однородной суспензии. Полученную композицию используют для исследования острой токсичности путем однократного внутрижелудочного введения экспериментальным животным (белые мыши) в дозе от 75 до 5000 мг/кг.
Класс C07D239/70 конденсированные с карбоциклическими кольцами или циклическими системами
Класс C07D487/04 орто-конденсированные системы
Класс A61K31/519 орто- или пери-конденсированные с гетероциклическими кольцами
Класс A61P31/06 для лечения туберкулеза