ингибиторы киназы

Формула изобретения

1. Соединение формулы I

где W представляет собой

или

Х представляет собой N или C-R¹ ;

R представляет собой С₁-С ₇алкил, С₃-С₇ циклоалкил, (С₁-С₇ алкилен)-(С₃-С₇циклоалкил), -SO₂-(С₁-С ₇алкил) или -SO₂-NR ⁵R⁶;

R¹ представляет собой водород, амино, метил или -N=CH(NMe) ₂;

R² представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена;

R³ представляет собой водород, С₁-С₇ алкил, С₃-С₇циклоалкил или фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена и трифторметила;

R ⁴ представляет собой водород или С₁ -С₇алкил;

R⁵ и R⁶ независимо выбраны из группы, состоящей из С₁-С₇алкила; или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1 формулы I

где

R' представляет собой 2,2-диметилпропил или 1,2,2-триметилпропил;

R^2' представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил;

R^3' представляет собой трет-бутил, 2-хлор-6-фторфенил, 2-фтор-6-трифторметилфенил, 2,6-дихлорфенил или 2,6-дифторфенил, или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Соединение по п.1 формулы I'

где

a) R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил и R^3' представляет собой 2-фтор-6-трифторметилфенил;

b) R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R ^2' представляет собой 4-фторфенил, и R ^3' представляет собой 2,6-дихлорфенил;

c) R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил и R^3' представляет собой трет-бутил;

d) R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой фенил и R^3' представляет собой 2-хлор-6-трифторфенил;

e) R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 2,4-дифторфенил и R^3' представляет собой трет-бутил;

f) R' представляет собой 1,2,2-триметилпропил, R ^2' представляет собой 4-фторфенил и R ^3' представляет собой трет-бутил или

g) R' представляет собой 1,2,2-триметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил и R^3' представляет собой 2,6-дифторфенил, или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.1, представляющее собой 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3H-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Соединение по п.1, представляющее собой 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин или его фумаратную, диметансульфонатную, сукцинатную, дималеатную или дигидрохлоридную соль.

6. Соединение по п.1, представляющее собой диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3H-имидазо[4,5-b] пиридин-2-иламина.

7. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием в отношении киназы р-38, включающая соединение по любому из пп.1-6 в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

8. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления

лекарственного средства для лечения заболевания или состояния,

способного улучшаться или предотвращаться ингибированием киназы р-38.

9. Применение соединения по любому из пп.1-6 для изготовления лекарственного средства для лечения восприимчивых опухолей.

10. Применение п.9, где восприимчивой опухолью является множественная миелома.

Описание изобретения к патенту

Уровень техники

Киназа р-38 является митогенактивированной протеинкиназой (МАР-киназой), которая принадлежит к суперсемейству серин/треонинкиназ. Эта киназа активируется внеклеточными стрессами, такими как нагрев, УФ-свет, и осмотическим стрессом, а также воспалительными стимулами, такими как липополисахарид. При активации киназа р-38 фосфорилирует внутриклеточные белковые субстраты, которые регулируют биосинтез провоспалительных цитокинов, фактора некроза опухоли (TNF- ) и интерлейкина-1 (IL-1 ). Эти цитокины принимают участие в патологии ряда хронических воспалительных нарушений (Lee et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, 149-170 (1993); Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996)), сердечно-сосудистых нарушений и нарушений центральной нервной системы (Salituro et al., Current Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)) и аутоиммунных нарушений (Pargellis et al., Nature Structural Biology, 9(4), 268-272 (2002)).

Ряд соединений со структурными формулами пиридинилимидазола (WO 9621452, WO 9725045, US 5656644, US 5686455, US 5717100, WO 9712876, WO 9821957, WO 9847892, WO 99903837, WO 9901449, WO 0061576, WO 0172737) и пиримидинилимидазола (WO 9725048, WO 9901452, WO 9725046, WO 9932121, WO 9901131, WO 9901130, WO 9901136, WO 9807452, WO 9747618, WO 9856788, WO 9857996) были идентифицированы как ингибиторы киназы р-38 или как ингибиторы цитокинов. Известно, что селективные ингибиторы киназы р-38 подавляют экспрессию TNF- и IL-1 (McKenna et al., J. Med. Chem., 45 (11), 2173-2184 (2002)). Описана противовоспалительная активность для соединений со структурной формулой пиримидинилимидазола (Lantos et al., J. Med. Chem., 27, 72-75 (1984)), и ряд ингибиторов киназы р-38 находится в процессе активного исследования для лечения различных нарушений (Boehm and Adams, Exp. Opin. Ther. Patents, 10(1), 25-37 (2000)). По-прежнему сохраняется потребность в соединениях для лечения в этой области, которые являются цитокинсупрессивными лекарственными средствами, т.е. соединениями, которые способны ингибировать киназу р-38.

Настоящее изобретение предлагает новые ингибиторы киназы р-38, пригодные для лечения состояний, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов.

Краткое содержание сущности изобретения

Настоящее изобретение предлагает соединения формулы I:

где

W представляет собой

Х представляет собой N или C-R ¹;

R представляет собой С₁-С ₇алкил, С₃-С₇ циклоалкил, (С₁-С₇ алкилен)-(С₃-С₇циклоалкил), -SO₂-(С₁-С ₇алкил) или -SO₂-NR ⁵R⁶;

R¹ представляет собой водород, амино, метил или -N=CH(NMe) ₂;

R² представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена;

R³ представляет собой водород, С₁-С₇ алкил, С₃-С₇циклоалкил или фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена и трифторметила;

R ⁴ представляет собой водород или С₁ -С₇алкил,

R⁵ и R⁶ независимо выбраны из группы, состоящей из С₁-С₇алкила; или их фармацевтически приемлемых солей.

Настоящее изобретение предлагает способ ингибирования киназы р-38 у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ подавления продуцирования фактора некроза опухоли (TNF- ) у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ подавления продуцирования интерлейкина-1 (IL-1 ) у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ лечения состояний, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, подавляющее цитокины количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ лечения восприимчивой опухоли у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ ингибирования метастаза у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также способ лечения ревматоидного артрита у млекопитающего, включающий в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли.

Настоящее изобретение предлагает также фармацевтический препарат, включающий в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

Настоящее изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для ингибирования киназы р-38. Кроме того, настоящее изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при ингибировании киназы р-38 у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для ингибирования киназы р-38, включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими его фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Изобретение предлагает также применение соединения формулы I для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, способного улучшаться или предотвращаться ингибированием киназы р-38.

Настоящее изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для подавления продуцирования фактора некроза опухоли (TNF- ). Кроме того, данное изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при подавлении продуцирования фактора некроза опухоли (TNF- ) у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает также фармацевтическую композицию, адаптированную для подавления продуцирования фактора некроза опухоли (TNF- ), включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Изобретение предлагает также применение соединения формулы I для изготовления лекарственного средства, для лечения заболевания или состояния, способного улучшаться или предотвращаться подавлением продуцирования фактора некроза опухоли (TNF- ).

Данное изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для подавления продуцирования интерлейкина-1 (IL-1 ). Кроме того, данное изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при подавлении продуцирования интерлейкина-1 (IL-1 ) у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для подавления продуцирования интерлейкина-1 (IL-1 ), включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Изобретение предлагает также применение соединения формулы I для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, способного улучшаться или предотвращаться подавлением продуцирования интерлейкина-1 (IL-1 ).

Настоящее изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения состояний, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов. Кроме того, данное изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при лечении состояний, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для лечения состояний, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов, включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями. Изобретение предлагает также применение соединения формулы I для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, способного улучшаться или предотвращаться подавлением избыточного продуцирования цитокинов.

Настоящее изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения восприимчивой опухоли. Кроме того, настоящее изобретение предлагает также соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при лечении восприимчивой опухоли у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для лечения восприимчивой опухоли, включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями.

Настоящее изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для ингибирования метастаза. Кроме того, данное изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при ингибировании метастаза у млекопитающих. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для ингибирования метастаза, включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями.

Данное изобретение предлагает также применение соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для лечения ревматоидного артрита. Кроме того, данное изобретение предлагает соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль для применения при лечении ревматоидного артрита. Кроме того, данное изобретение предлагает фармацевтическую композицию, адаптированную для лечения ревматоидного артрита, включающую в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми эксципиентами, носителями или разбавителями.

Подробное описание изобретения

Общие химические термины, применяемые в приведенных выше формулах, имеют свои обычные значения. Например, термин "С₁ -С₇алкил" включает в себя радикалы метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил и гептил. Термин "С ₁-С₇алкилен" включает в себя радикалы метилен, этилен, пропилен, изопропилен, бутилен, изобутилен, втор-бутилен, трет-бутилен, пентилен, гексилен и гептилен. "С ₃-С₇циклоалкил" включает в себя радикалы циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Термин "(С₁-С ₇алкилен)-(С₃-С₇ циклоалкил)" применяют для обозначения С ₃-С₇циклоалкила, присоединенного через С₁-С₇алкиленовый мостик. Термин "галоген" включает в себя фтор, хлор, бром и иод.

Термин "киназа р-38" применяют для обозначения изоформ р-38 - и/или р-38 -киназы.

Термин "подавление продуцирования TNF- (цитокина IL-1 )" применяют для обозначения снижения избыточных уровней in vivo TNF- , IL-1 или другого цитокина у млекопитающего до нормальных или субнормальных уровней. Это можно достичь ингибированием in vivo высвобождения TNF- , IL-1 или другого цитокина всеми клетками, в том числе макрофагами; негативной регуляцией, на геномном уровне, избыточных уровней in vivo TNF- , IL-1 или другого цитокина у млекопитающего до нормальных или субнормальных уровней; ингибированием синтеза TNF- , IL-1 или другого цитокина как послетравматического случая, или негативной регуляцией TNF- , IL-1 или другого цитокина на трансляционном уровне.

Термин "минимальная эффективная доза (MED)" применяют для обозначения наименьшей дозы, которая вызывает действие, которое статистически значимо отличается от действия, наблюдаемого в группе контроля с наполнителем.

Термин "пороговая эффективная доза (TED)" применяют для обозначения дозы, требуемой для достижения определенной пороговой активности. Например, TED₅₀ является дозой, требуемой для достижения 50% восприимчивости.

Термин "пороговая минимальная эффективная доза (TMED)" применяют для обозначения наименьшей дозы, которая гарантирует статистически значимое действие, которое также обеспечивает пороговый уровень активности. Например TMED ₅₀ является наименьшей дозой, которая обеспечивает 50% восприимчивость и является обычно статистически значимо отличной от группы контроля с наполнителем.

Термин "эффективное количество" применяют для обозначения дозы соединения формулы I, необходимой для достижения требуемого фармакологического действия.

Квалифицированному специалисту в данной области будет понятно, что некоторые соединения формулы I содержат, по меньшей мере, один хиральный центр. Настоящее изобретение включает в себя все индивидуальные энантиомеры или диастереомеры, а также смеси энантиомеров и диастереомеров этих соединений, включая рацематы. Предпочтительно, чтобы соединения формулы I, содержащие, по меньшей мере, один хиральный центр, присутствовали в виде индивидуальных энантиомеров или диастереомеров. Индивидуальные энантиомеры или диастереомеры можно получить с применением исходных хиральных реагентов или стереоселективными или стереоспецифическими синтетическими способами. В альтернативном случае, индивидуальные энантиомеры или диастереомеры можно выделить из смесей стандартными хиральными хроматографическими способами или способами хиральной кристаллизации.

Квалифицированному специалисту в данной области будет также понятно, что, когда символ "W" обозначает имидазол (i) и R ⁴ представляет собой водород, кольцо имидазола существует в следующих двух таутомерных формах:

Хотя таутомеры I и II являются структурно различными, квалифицированному специалисту в данной области будет понятно, что они существуют в равновесии и способны к легкому и быстрому взаимопревращению в общепринятых условиях (см.: March, Advanced Organic Chemistry, Third Edition, Wiley Interscience, New York, New York (1985), pages 66-70; и Allinger, Organic Chemistry, Second Edition, Worth Publisher, New York, New York (1976), page 173). Как таковое, представление соединения формулы I, где символ "W" означает имидазол (i) и R⁴ представляет собой водород, в одной таутомерной форме включает в себя обе таутомерные формы кольца имидазола. Подобно этому, название соединения формулы I, где "W" представляет собой имидазол (i) и R⁴ представляет собой водород, либо как 1Н-имидазол, либо как 3Н-имидазол, включает в себя обе таутомерные формы кольца имидазола. В частности, название 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин включает в себя молекулу либо в 1Н-имидазол-4-ил-, либо 3Н-имидазол-4-илформе. Аналогично этому, когда термин "W" означает триазол (iv), триазольная часть существует в трех таутомерных формах, и представление или название одной таутомерной формы включает в себя все три таутомерные формы кольца триазола.

Квалифицированному специалисту в данной области будет понятно, что соединения настоящего изобретения способны образовывать соли. Во всех случаях фармацевтически приемлемые соли всех соединений включены в их названия. Соединения настоящего изобретения являются аминами и в соответствии с этим взаимодействуют с любой из числа неорганических и органических кислот с образованием фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются соли, образованные с малеиновой кислотой, фумаровой кислотой, янтарной кислотой, хлористоводородной кислотой и метансульфоновой кислотой. Особенно предпочтительными являются соли соединений формулы I с двумя молекулами метансульфоновой кислоты.

Некоторые классы соединений формулы I являются предпочтительными ингибиторами р-38-киназы. В нижеследующих абзацах описываются такие предпочтительные классы:

а) W представляет собой

b) W представляет собой

c) Х представляет собой C-R¹ ;

d) Х представляет собой C-NH₂;

e) R² представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил;

f) R² представляет собой фенил;

g) R² представляет собой 4-фторфенил;

h) R² представляет собой 2,4-дифторфенил;

i) R⁴ представляет собой водород;

j) W представляет собой Х представляет собой C-R¹, R ² представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил, и R⁴ представляет собой водород;

k) W представляет собой Х представляет собой C-NH₂, R ² представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил, и R⁴ представляет собой водород;

l) W представляет собой Х представляет собой C-R¹, R представляет собой С₁-С₇алкил, R² представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил, R³ представляет собой С₁-С₇алкил или фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена и трифторметила, и R⁴ представляет собой водород;

m) W представляет собой Х представляет собой C-NH₂, R представляет собой С₁-С₇алкил, R² представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил, R³ представляет собой С₁-С₇алкил или фенил, необязательно замещенный одним или двумя заместителями, независимо выбранными из галогена, и R⁴ представляет собой водород.

n) Соединение формулы I является свободным основанием.

о) Соединение формулы I является солью.

р) Соединение формулы I является метансульфонатной солью.

q) Соединение формулы I является диметансульфонатной солью.

Предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения включают в себя все комбинации абзацев а)-q).

Особенно предпочтительными подтипами соединений в объеме формулы I являются соединения формулы I':

где

R' представляет собой 2,2-диметилпропил или 1,2,2-триметилпропил;

R^2' представляет собой фенил, 4-фторфенил или 2,4-дифторфенил;

R^3' представляет собой трет-бутил, 2-хлор-6-фторфенил, 2-фтор-6-трифторметилфенил, 2,6-дихлорфенил или 2,6-дифторфенил, или их фармацевтически приемлемые соли.

Наиболее предпочтительными соединениями формулы I являются соединения, у которых:

1. R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил, и R^3' представляет собой 2-фтор-6-трифторметилфенил;

2. R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R ^2' представляет собой 4-фторфенил, и R ^3' представляет собой 2,6-дихлорфенил;

3. R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил, и R^3' представляет собой трет-бутил;

4. R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой фенил, и R^3' представляет собой 2-хлор-6-трифторфенил;

5. R' представляет собой 2,2-диметилпропил, R^2' представляет собой 2,4-дифторфенил, и R^3' представляет собой трет-бутил;

6. R' представляет собой 1,2,2-триметилпропил, R ^2' представляет собой 4-фторфенил, и R ^3' представляет собой трет-бутил; и

7. R' представляет собой 1,2,2-триметилпропил, R^2' представляет собой 4-фторфенил, и R^3' представляет собой 2,6-дифторфенил.

Предпочтительно также, чтобы каждое из этих соединений присутствовало в виде метансульфонатной, сукцинатной, фумаратной, дималеатной, дигидрохлоридной или диметансульфонатной соли. Особенно предпочтительно, чтобы каждое из этих соединений присутствовало в виде диметансульфонатной соли.

Соединения формулы I являются ингибиторами киназы р-38. Таким образом, настоящее изобретение предлагает также способ ингибирования киназы р-38 у млекопитающего, который включает в себя введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I. Предпочтительно, чтобы млекопитающим, которого подвергают лечению введением соединений формулы I, был человек.

В качестве ингибиторов киназы р-38 соединения настоящего изобретения являются применимыми для подавления продуцирования провоспалительных цитокинов, фактора некроза опухоли (TNF- ) и интерлейкина-1 (IL-1 ) и, следовательно, для лечения нарушений, являющихся результатом избыточного продуцирования цитокинов. Считается, что соединения формулы I являются пригодными при лечении воспалительных заболеваний, включая экзему, атопический дерматит, ревматоидный артрит, остеоартрит, воспалительное заболевание кишечника и синдром токсического шока. Считается, что соединения настоящего изобретения являются пригодными при лечении сердечно-сосудистых нарушений, таких как острый инфаркт миокарда, хроническая сердечная недостаточность, атеросклероз, вирусный миокардит, отторжение сердечного аллотрансплантата и связанная с сепсисом сердечная дисфункция. Кроме того, считают, что соединения настоящего изобретения являются также применимыми для лечения нарушений центральной нервной системы, таких как менингококковый менингит, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и рассеянный склероз.

Большинство солидных опухолей повышаются в массе посредством пролиферации опухолевых клеток и относящихся к строме клеток, включая эндотелиальные клетки. Чтобы опухоль росла больше, чем 2-3 миллиметра в диаметре, она должна образовывать сосудистую сеть, процесс, известный как ангиогенез. Описано, что подавление индуцированного опухолью ангиогенеза ангиостатином и эндостатином приводит к противоопухолевой активности (O'Reilly et al., Cell, 88, 277-285 (1997)). Обнаружено, что селективный ингибитор р-38 киназы SB22025 ингибирует ангиогенез (J.R. Jackson et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687 (1998)). Поскольку ангиогенез является критическим компонентом увеличения массы большинства солидных опухолей, разработка новых ингибиторов киназы р-38 для ингибирования данного процесса представляет собой надежный подход для противоопухолевой терапии. Этот подход к противоопухолевой терапии может иметь недостатком токсичные побочные действия или вызывающие резистентность к лекарственному средству свойства общепринятой химиотерапии (Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures, Series 92, pages 65-82, Wiley-Liss Inc., (1998)).

В качестве ингибиторов киназы р-38 соединения настоящего изобретения, следовательно, являются применимыми при ингибировании роста восприимчивых опухолей. Schultz, R.M. Potential of p38 MAP kinase inhibitors in the treatment of cancer. In: E. Jucker (ed.), Progress in Drug Research, 60, 59-92, (2003). Определено, что восприимчивой опухолью является опухоль, которая зависит от киназы р-38 для ее выживания, роста или метастаза. Восприимчивые опухоли включают в себя опухоли головного мозга, мочеполового тракта, лимфатической системы, желудка, гортани и легких (патент США #5717100). Предпочтительно, термин "восприимчивые опухоли", применяемые в настоящей заявке, включает в себя раковые заболевания человека, включающие в себя немелкоклеточную карциному легких человека (A. Greenberg et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), карциному молочной железы (J. Chen et al., J. Biol. Chem., 276, 47901 (2001); B. Salh et al., Int. J. Cancer, 98, 148 (2002); и S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)), карциному желудка (Y.D. Jung et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)), колоректальные карциномы (S. Xiong et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)), карциномы простаты (J-I Park et al., Oncogene, 22, 4314-4332 (2003); L. Chen et al., Cancer Lett., 215, 239-247 (2004); и A.R. Uzgara et al., Prostate, 55, 128-139 (2003)), злокачественную меланому (C. Denkert et al., Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)) и множественную миелому (Hideshima et al., Oncogene advance online publication, 1-11, (11 October 2004); и Hideshima et al., Blood, 101 (2), 703 (2003)).

Описано также, что ингибирование ангиогенеза подавлением TNF- является применимым при ингибировании или профилактике метастаза (патент США #6414150, патент США #6335336). Кроме того, подавление TNF- показано для лечения и профилактики кахексии, синдрома истощения, испытываемого приблизительно половиной всех раковых пациентов (T. Yoneda, et al., J. Clin. Invest., 87, 977 (1991)).

Кроме того, ингибирование киназы р-38 может быть эффективным при лечении некоторых вирусных состояний, таких как грипп (K. Kujime, et al., J. Immunology, 164, 3222-3228 (2000)), состояние, вызванное риновирусом (S. Griego, et al., J. Immunology, 165, 5211-5220 (2000)), и состояние, вызванное ВИЧ (L. Shapiro, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 7422-7426, (1998)).

Соединения настоящего изобретения можно получить различными методиками, некоторые из которых иллюстрированы в приведенных ниже схемах. Специалист в данной области поймет, что отдельные стадии в нижеследующих схемах могут быть изменены для обеспечения получения соединений формулы I. Конкретный порядок стадий, требуемых для получения соединений формулы I, зависит от конкретного соединения, которое синтезируют, исходного соединения и относительной лабильности замещенных остатков. Некоторые заместители были исключены в нижеследующих схемах для ясности и никоим образом не предназначены для ограничения объяснения схем.

Соединения формулы I, где W представляет собой имидазол (i), можно получить, как показано на нижеследующей схеме, где R, R¹, R² и R³ имеют значения, указанные ранее.

Схема I

Дикетон (а) подвергают взаимодействию с ацетатом аммония и подходящим альдегидом в подходящем растворителе, предпочтительно, уксусной кислоте, получая при этом соответствующий нитропиридинилимидазол (b). Нитрогруппу восстанавливают в стандартных условиях гидрирования или химического восстановления с получением соответствующего диамина (с). Этот диамин затем либо подвергают взаимодействию с бромидом циана с получением 3-замещенного-5-(имидазол-4-ил)-2-аминопиридинилимидазола (Ia), с подходящим ортоформиатом с получением 3-замещенного-5-(имидазол-4-ил)пиридинилимидазола (Ib), либо с подходящим нитритом с получением 3-замещенного-5-(имидазол-4-ил)пиридинилтриазола (Ic).

Требуемые дикетоны (а) можно получить, как описано в нижеследующей схеме, где R и R² имеют значения, указанные ранее.

Схема II

2,5-Дихлорнитропиридин (d) и подходящий амин или производное амина нагревают вместе в подходящем растворителе с получением соответствующего 2-амино-6-хлор-3-нитропиридина (е), который затем сочетают с подходящим образом замещенным ацетиленом, получая при этом соответствующий 1,2-дизамещенный ацетилен (f). Этот ацетилен окисляют с получением требуемого дикетона (а).

Соединения формулы I, где W представляет собой пиразол (ii) или (iii), получают, как описано на нижеследующей схеме, где X, R, R¹ и R² имеют значения, указанные ранее.

Схема III

Ацетилен (f) обрабатывают оксидом ртути (II) в водной серной кислоте с получением кетона (g). Этот кетон подвергают взаимодействию с диметилацеталем диметилформамида или трис(диметиламино)метаном в подходящем растворителе, обычно диметилформамиде, получая при этом енаминокетон (h). Енаминокетон затем обрабатывают гидразином в подходящем растворителе, обычно этаноле или метаноле, с получением фенилпиразола (j). Остаток имидазо- или триазолопиридина вводят, как ранее описано для получения соединений формулы Id.

Соединения формулы I, где W представляет собой [1,2,3]триазол (iv), можно получить, как описано в нижеследующей схеме, где символы Y, R и R² имеют указанные ранее значения.

Схема IV

Ацетилен (f) подвергают взаимодействию с источником азида, обычно азидом натрия, в подходящем растворителе, таком как диметоксиэтан, получая при этом триазол (k). Остаток имидазо- или триазолопиридина вводят, как ранее описано, с получением соединений формулы Ie.

Соединения формулы I, где W представляет собой триазол (v) или оксазол (vii), можно получить, как описано в нижеследующей схеме, где символы Х, R, R² и R³ имеют значения, указанные ранее, и Y представляет собой О или S.

Схема V

-Бромкетон (I) подвергают взаимодействию с подходящим амидом (m, Y=O) или тиоамином (m, Y=S) в подходящем растворителе, получая при этом соответствующий оксазол или тиазол (n). Оксазол (n, Y=O) затем обрабатывают бромом в подходящем растворителе с получением соответствующего бромированного гетероцикла (о, Y=O). Триазол (n, Y=S) обрабатывают н-бутиллитием и образовавшийся анион подвергают взаимодействию с трибутилоловохлоридом, получая при этом соответствующее производное олова (о, Y=S). Подходящим образом замещенный гетероцикл (о) подвергают взаимодействию с подходящей бороновой кислотой (р) в присутствии подходящего катализатора, как ранее описано, получая при этом соединения формулы If.

Необходимые -бромкетоны либо являются коммерчески доступными, либо их можно получить в стандартных условиях из соответствующего карбонильного соединения, например, как описано House (H.O. House, Modern Synthetic Reactions, W.A. Benjamin, Inc., Menlo Park, California (1972), pages 459-478) и Larock (R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, Inc., New York (1989), pages 369-471, 755). Необходимые амиды и тиоамиды либо являются коммерчески доступными, либо их можно получить стандартными способами, известными квалифицированному специалисту.

Дополнительные соединения формулы I, где W представляет собой имидазол (i) или изоксазол (vi), можно получить в стандартных условиях сочетания с применением палладия, как описано в нижеследующей схеме, где W' представляет собой имидазол (i) или изоксазол (vi), и Х и R имеют значения, указанные ранее.

Схема VI

Подходящим образом замещенный галогенгетероарил (q) сочетают с подходящим образом замещенной бороновой кислотой (p) в присутствии палладиевого катализатора, обычно бис(трифенилфосфин)палладий(II)хлорида, в подходящем растворителе, получая при этом требуемое соединение формулы Ie. Необходимые исходные вещества либо являются коммерчески доступными, либо их можно получить способами, хорошо известными среднему специалисту в данной области.

Многие из соединений настоящего изобретения являются не только применимыми в качестве ингибиторов киназы р-38, но также являются применимыми промежуточными продуктами для получения дополнительных соединений настоящего изобретения. Например, первичные и вторичные амины можно ацилировать, алкилировать или сочетать с карбоновыми кислотами или аминокислотами в стандартных условиях сочетания пептидов. Кроме того, остатки сложных эфиров можно восстановить в соответствующие спирты или превратить в амиды в стандартных условиях. Спирты можно активировать и заменять рядом нуклеофилов для получения других соединений изобретений. Такие уходящие группы включают в себя, но не ограничиваются перечисленным, галогениды, оксониевые ионы, алкилперхлораты, аммониоалкансульфонатные эфиры, алкилфторсульфонаты, нонафлаты, трезилаты, трифлаты и эфиры сульфоновых кислот, предпочтительно, мезилат или тозилат. Методики введения этих групп также хорошо известны квалифицированному специалисту в данной области; см., например, March, Advanced Organic Chemistry, 5 ^th Ed. John Wiley and Sons, New York, pg. 445-449 (2001). Кроме того, 2-аминогруппу кольца бензимидазола можно диазотировать и заменить для получения дополнительных соединений изобретения в стандартных условиях.

Квалифицированному специалисту будет также понятно, что не все заместители в соединениях формулы I могут проявлять устойчивость в некоторых условиях реакции, применяемых для синтеза соединений. Эти остатки можно вводить в подходящей точке синтеза или их можно защитить и затем снять защиту, как необходимо или желательно. Квалифицированному специалисту будет понятно, что защитные группы можно удалить в любой подходящей точке синтеза соединений настоящего изобретения. Методы введения и удаления защитных групп азота и кислорода являются хорошо известными в данной области; см., например, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons, New York, Chapter 7 (1999). Кроме того, квалифицированному специалисту будет понятно, что во многих случаях порядок, которым вводят остатки, не является критическим. Конкретный порядок стадий, требуемых для получения соединений формулы I, зависит от конкретного соединения, которое синтезируют, исходного соединения и относительной лабильности замещенных остатков.

Аббревиатуры, символы и термины, применяемые в примерах и анализах, имеют следующие значения: АсОН = уксусная кислота; ДМФА = N,N-диметилформамид; ДМСО = диметилсульфоксид; Et₂O = диэтиловый простой эфир; EtOAc = этилацетат; EtOH = этанол; ч = час(ы); МеОН = метанол; мин = минута(ы); МТВЕ = метил-трет-бутиловый простой эфир; Pd(OAc)₂ = ацетат палладия; к.т. = комнатная температура; ТГФ = тетрагидрофуран; VO(асас) ₂ = ванадилацетилацетонат.

Получение 1

[6-(2-трет-Бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-нитропиридин-2-ил]-(2,2-диметилпропил)амин

(6-Хлор-3-нитропиридин-2-ил)-(2,2-диметилпропил)амин

Неопентиламин (18 мл, 150 ммоль) добавляют к суспензии 2,6-дихлор-3-нитропиридина (20 г, 103 ммоль) и Na ₂СО₃ (18,5 г, 175 ммоль) в EtOH (1,6 мл/ммоль) при к.т. и смесь перемешивают на протяжении ночи. Образовавшуюся суспензию концентрируют и разбавляют водой (100 мл) и медленно нейтрализуют концентрированной HCl (приблизительно 40 мл) до рН 7. Суспензию охлаждают при 0°С в течение 1 ч и твердое вещество собирают вакуумным фильтрованием. Твердое вещество промывают ледяной водой (4×50 мл) и сушат на воздухе на протяжении ночи. Перекристаллизация вещества из EtOAc и гексанов дает указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (21,23 г, 84%).

МС (ES): m/z = 244 [M+H].

(2,2-Диметилпропил)-(3-нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)амин

(6-Хлор-3-нитропиридин-2-ил)-(2,2-диметилпропил)амин (7,3 г, 30,0 ммоль), фенилацетилен (5,0 мл, 45 ммоль) и трифенилфосфин (1,5 ммоль, 0,39 г) растворяют в триэтиламине (10 мл/г) в высушенной в сушильном шкафу круглодонной колбе, колбу с раствором промывают азотом и три раза вакуумом откачивают из нее газ. Добавляют Pd(OAc) ₂ (0,10 г, 0,45 ммоль) и цикл промывка азотом/откачка газа повторяют (3×). Смесь нагревают при 70-80°С с перемешиванием в атмосфере азота в течение 1-3 ч, затем охлаждают до к.т. в течение 2 ч. Смесь концентрируют и распределяют между водой (25 мл) и EtOAc (150 мл). Отделяют органический слой и промывают его водой (4×25 мл), насыщенным водным NaCl (25 мл), сушат MgSO₄, фильтруют и концентрируют. Неочищенное твердое вещество очищают перекристаллизацией из смеси EtOAc/гексаны, получая при этом указанный в заголовке продукт в виде ярко-оранжевого твердого вещества (6,5 г, 21,2 ммоль, 71%).

МС (ES): m/z = 310 [M+H]; т.пл. 90-92°С.

1-[6-(2,2-Диметилпропиламино)-5-нитропиридин-2-ил]-2-фенилэтан-1,2-дион

Смесь (2,2-диметилпропил)-(3-нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)амина (3,11 г, 10 ммоль), NaHCO₃ (0,420 г, 5,0 ммоль), MgSO₄ (2,40 г, 20 ммоль) в ацетоне (85 мл) и воде (25 мл) охлаждают до 0°С. К охлажденной смеси добавляют KMnO₄ (3,16 г, 20,0 ммоль) и реакционную смесь энергично перемешивают при 0°С в течение приблизительно 1-2 ч. Смесь гасят Na₂SO ₃ (5,67 г, 45 ммоль). Ледяную баню удаляют и смесь перемешивают при к.т. в течение 2 ч. Твердое вещество отделяют фильтрованием через подушку фильтрующего агента. Твердое вещество промывают водой (2×50 мл) и EtOAc (50 мл). Фазы разделяют и водную фазу экстрагируют EtOAc (3×50 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным водным NaCl (25 мл), сушат MgSO ₄, фильтруют и концентрируют. Неочищенный продукт очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексаны:CH ₂Cl₂), получая при этом указанное в заголовке соединение (1,586 г, 46%).

МС (ES): m/z = 342 [M+H]; т.пл. 88-90°С.

[6-(2-трет-Бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-нитропиридин-2-ил]-(2,2-диметилпропил)амин

Смесь 1-[6-(2,2-диметилпропиламино)-5-нитропиридин-2-ил]-2-фенилэтан-1,2-диона (1,0241 г, 3,0 ммоль), триметилацетальдегида (0,66 мл, 6,0 ммоль), ацетата аммония (3,47 г, 45 ммоль) в АсОН (5 мл/ммоль) нагревают при 80°С с мониторингом реакции сочетанием методов жидкостная хроматография-масс-спектроскопия на появление продукта. Реакционную смесь охлаждают до 0°С и нейтрализуют до рН 7 5,0 н. NaOH. Нейтрализованную водную фаз экстрагируют EtOAc (3×20 мл) и объединенные органические фазы промывают 20 мл порциями насыщенного водного NaHCO₃ до тех пор, пока не наблюдается дальнейшая нейтрализация. Органическую фазу сушат MgSO ₄, фильтруют и концентрируют. Оранжевое неочищенное твердое вещество растирают с EtOAc, получая при этом указанное в заголовке соединение (0,7578 г, 62%).

МС (ES): m/z = 408 [M+H]; т.пл. 224-226°С.

Соединения получений 2-21 можно получить по существу так же, как описано в получении 1.

Получение	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
2	{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	464
3	{6-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	496
4	{6-[2-(2-Хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	480
5	{6-[5-(4-Фторфенил)-2-изопропил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	412
6	{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	448
7	{6-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	480
8	{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	466
9	{6-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	498
10	{6-[5-(4-Фторфенил)-2-изопропил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	396
11	[6-(2-трет-Бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-нитропиридин-2-ил]циклопропилметиламин	392
12	{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	482
13	{6-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}циклопропилметиламин	410
14	[6-(2-Циклопропил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-нитропиридин-2-ил]-(2,2-диметилпропил)амин	392
15	{6-[5-(4-Фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	532
16	{6-[2-(2-Фтор-6-трифторметилфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	514
17	{6-[2-Циклопропил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	410
18	{6-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	514
19	{6-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	426
20	{6-[2-трет-Бутил-5-(2,4-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	444
21	{6-[5-(2,4-Дифторфенил)-2-(2,6-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин	500

Получение 22

6-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-N ²-изобутилпиридин-2,3-диамин

К раствору {6-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}изобутиламина (1,43 г, 2,96 ммоль) в 50 мл смеси 1:1 ТГФ:вода добавляют дитионит натрия (2,58 г, 14,82 ммоль) с последующим добавлением 32% NH ₄OH (9 мл). Смесь перемешивают при к.т. в течение 2 ч. Смесь разбавляют EtOAc. Органический слой промывают насыщенным водным NaCl и органическую фазу сушат над Na₂ SO₄. Органическую фазу концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение (1,32 г, 98%).

Получение 23

2-Изобутиламино-3-нитро-6-[3-(4-фторфенил)-1-морфолиноэтилпиразол-4-ил]пиридин

2-Изобутиламино-3-нитро-6-(4-фторфенилэтанон)пиридин

Водную суспензию HgO (0,55 г, 2,54 ммоль) в 100 мл 4% H₂SO₄ добавляют к раствору 2-изобутиламино-3-нитро-6-(4-фторфенил)этинилпиридина (3,99 г, 12,7 ммоль) в 100 мл МеОН. Смесь перемешивают при 95°С в течение 17 ч и охлаждают до к.т. Смесь фильтруют через фильтрующий агент и осадок растворяют в EtOAc (5×100 мл). Раствор концентрируют и остаток промывают смесью 10:2:1 гексан:диэтиловый эфир:МеОН (130 мл), получая при этом указанное в заголовке соединение (2,60 г, 62%).

МС (ES): m/z = 332 [M+H].

2-Изобутиламино-3-нитро-6-[3-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]пиридин

Диметилацеталь диметилформамида (4,50 мл, 33,8 ммоль) добавляют к перемешиваемому раствору 2-изобутиламино-3-нитро-6-(4-фторфенилэтанон)пиридина (5,63 г, 16,1 ммоль) в 15 мл сухого ДМФА. Смесь нагревают при 80°С в течение 6 ч, охлаждают до к.т. и концентрируют. Остаток растворяют в 100 мл EtOH, добавляют 8,30 мл гидразина (80% в Н₂О), раствор перемешивают в течение 2 ч и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексаны:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (4,51 г, 75%).

МС (ES): m/z = 356 [M+H].

2-Изобутиламино-3-нитро-6-[3-(4-фторфенил)-1-морфолиноэтилпиразол-4-ил]пиридин

Раствор 2-изобутиламино-3-нитро-6-[3-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]пиридина (1,25 г, 3,52 ммоль) в сухом ДМФА (15 мл) обрабатывают 95% NaH (0,36 г, 14,3 ммоль) при 0°С в течение 15 мин. Добавляют гидрохлорид морфолиноэтилхлорида (0,983 г, 5,28 ммоль) и смесь медленно нагревают до к.т. Спустя 1 ч добавляют дополнительный NaH (0,36 г, 14,3 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч. Смесь гасят МеОН (1 мл) и разбавляют водой (30 мл). Смесь экстрагируют EtOAc (100 мл), экстракт сушат MgSO ₄ и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:2 гексаны:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (1,35 г, 81%).

МС (ES): m/z = 469 [M+H].

Получение 24

(2,2-Диметилпропил)-[3-нитро-6-(5-фенил-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил)пиридин-2-ил]амин

Азид натрия (0,065 г) добавляют к раствору 2,2-диметилпропил-(2-нитро-5-фенилэтинилфенил)амина (0,153 г) в ДМСО (2,5 мл). Смесь нагревают при 80°С в течение 2 ч. Смесь охлаждают до к.т. Добавляют 10 мл 1 н. HCl и экстрагируют EtOAc (20 мл) и промывают насыщенным водным NaCl (2×10 мл). Оставшуюся органическую фазу сушат над Na₂ SO₄ и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:2 EtOAc:гексаны), получая при этом указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (0,176 г, 100%).

МС (ES): m/z = 353 [M+H].

Получение 25

Диметиламид 2-амино-5-(2-оксо-2-фенилацетил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

N,N-Диметил-N'-(6-хлор-3-нитропиридин-2-ил)сульфоновая кислота

Перемешивают смесь 2,6-дихлор-3-нитропиридина (1 г, 2,60 ммоль) и N,N-диметилсульфамида (0,78 г, 3,12 ммоль) в сухом ДМФА (5 мл). Добавляют гидрид лития (0,11 г, 6,76 ммоль) и смесь перемешивают при к.т. на протяжении ночи. Добавляют 10 мл воды и 3 н. HCl до рН 7. Смесь фильтруют, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде желтого твердого вещества (85%).

МС (ES): m/z = 279 [M+H].

N,N-Диметил-N'-(3-нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)сульфоновая кислота

Через смесь N,N-диметил-N'-(6-хлор-3-нитропиридин-2-ил)сульфоновой кислоты (3,86 г, 13,7 ммоль), фенилацетилена (2,3 мл, 20,67 ммоль), трифенилфосфина (0,09 г, 0,68 ммоль) и иодида меди(I) (0,06 г, 0,34 ммоль) в триэтиламине (30 мл) и ТГФ (60 мл) барботируют азот в течение 3 мин. К смеси добавляют бис(трифенилфосфин)палладий(II)хлорид (0,24 г, 0,34 ммоль) и смесь нагревают при 110°С в течение 4 ч. Смесь фильтруют через подушку фильтрующего агента и фильтрат концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексаны:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (80%).

МС (ES): m/z = 346 [M+H].

N,N-Диметил-N'-(3-амино-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)сульфоновая кислота

Смесь N,N-диметил-N'-(3-нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)сульфоновой кислоты (0,09 г, 0,26 ммоль) и дигидрата хлорида олова (0,35 г, 1,56 ммоль) в EtOAc (5 мл) и EtOH (2,5 мл) перемешивают при 70°С в течение 2 ч. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексаны:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (65%).

МС (ES): m/z = 317 [M+H].

Диметиламид 2-амино-5-фенилэтинилимидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

Смесь N,N-диметил-N'-(3-амино-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)сульфоновой кислоты (0,20 г, 0,63 ммоль), бромида циана (0,07 г, 0,69 ммоль) и метоксида лития (0,04 г, 0,94 ммоль) в 1,2-дихлорэтана (20 мл) перемешивают при 80°С на протяжении ночи. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексаны:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (45%).

МС (ES): m/z = 342 [M+H].

Диметиламид 2-амино-5-(2-оксо-2-фенилацетил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

Раствор диметиламида 2-амино-5-фенилэтинилимидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты (0,10 г, 0,31 ммоль) в ацетоне (4 мл) добавляют на механически перемешиваемый раствор NaHCO₃ (0,01 г, 0,15 ммоль) и MgSO₄ (0,07 г, 0,62 ммоль) в воде (4 мл) при 0°С. Добавляют KMnO₄ (0,12 г, 0,748 ммоль) и смесь перемешивают при 0°С на протяжении ночи. Добавляют Na₂SO₃ и смесь перемешивают в течение 1 ч. Добавляют EtOAc и смесь промывают насыщенным водным раствором NaCl и концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде оранжевого твердого вещества, которое применяют без дополнительной очистки (выход 68%).

МС (ES): m/z = 372 [M+H].

Получение 26

{3-Амино-6-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]пиридин-2-ил}амид пропан-2-сульфоновой кислоты

(3-Нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)амид пропан-2-сульфоновой кислоты

(5-Хлор-2-нитрофенил)амид пропан-2-сульфоновой кислоты (10 г, 35,7 ммоль), фенилацетилен (5,9 мл, 53,6 ммоль) и трифенилфосфин (0,46 г, 1,78 ммоль) добавляют к раствору триэтиламина (25 мл, 178,5 ммоль) в сухом ТГФ (25 мл) и систему промывают струей азота. К перемешиваемой смеси добавляют дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II) (0,625 г, 0,89 ммоль) и иодид меди(I) (0,17 г, 0,89 ммоль). Реакционную смесь нагревают для кипячения с обратным холодильником в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждают до к.т. и концентрируют до образования суспензии. Неочищенное вещество фильтруют через подушку силикагеля с применением EtOAc в качестве элюирующего растворителя. Фильтрат концентрируют и указанное в заголовке соединение кристаллизуют из смеси EtOAc-гексаны (7,9 г, 64%).

МС (ES): m/z = 346 [M+H].

[3-Нитро-6-(2-оксо-2-фенилацетил)пиридин-2-ил]амид пропан-2-сульфоновой кислоты

Смесь (3-нитро-6-фенилэтинилпиридин-2-ил)амида пропан-2-сульфоновой кислоты (1,8 г, 5,26 ммоль) и хлорида палладия(II) (0,93 г, 0,53 ммоль) в сухом ДМСО (20 мл) нагревают при 120°С в течение 12 ч в атмосфере азота. Смесь охлаждают до к.т., концентрируют до образования суспензии и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование с градиентом от 20:80 смеси EtOAc:гексаны до 30:70 смеси EtOAc:гексаны), получая при этом указанное в заголовке соединение (1,07 г, 54%).

МС (ES): m/z = 346 [M+H].

{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}амид пропан-2-сульфоновой кислоты

Смесь [3-нитро-6-(2-оксо-2-фенилацетил)пиридин-2-ил]амида пропан-2-сульфоновой кислоты (0,25 г, 0,67 ммоль), 2,6-дифторбензальдегида (0,146 мл, 1,35 ммоль) и ацетата аммония (0,78 г, 10,05 ммоль) в АсОН (5 мл) нагревают при 110°С в течение 2 ч. Смесь охлаждают до к.т. и концентрируют. Разбавляют EtOAc (30 мл), экстрагируют последовательно насыщенным NaHCO₃ и насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат над Na₂ SO₄, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 30:70 EtOAc:гексаны), получая при этом указанное в заголовке соединение (0,32 г, 95%).

МС (ES): m/z = 500 [M+H].

{3-Амино-6-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]пиридин-2-ил}амид пропан-2-сульфоновой кислоты

10% Pd/C (0,033 г) добавляют к перемешиваемому раствору {6-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}амида пропан-2-сульфоновой кислоты (0,33 г, 0,66 ммоль) в МеОН (10 мл). Порциями добавляют борогидрид натрия (0,124 г, 3,3 ммоль) и смесь перемешивают в атмосфере азота в течение 15 мин. Катализатор отделяют фильтрованием и фильтрат концентрируют. Концентрат разбавляют EtOAc (20 мл) и экстрагируют последовательно насыщенным NaHCO ₃ и насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат над Na₂SO₄ и концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение (0,3 г, 98%).

МС (ES): m/z = 470 [M+H].

Получение 27

{3-Амино-6-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]пиридин-2-ил}амид пропан-2-сульфоновой кислоты

Смесь {6-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}амида пропан-2-сульфоновой кислоты (0,262 г, 0,49 ммоль) и дигидрата хлорида олова(II) (0,55 г, 2,46 ммоль) в EtOH (10 мл) нагревают при 100°С в течение 1 ч. Смесь охлаждают до к.т. и концентрируют до образования суспензии. Реакционную смесь выливают в насыщенный NaHCO₃ (20 мл) и добавляют фильтрующий агент. Смесь фильтруют и фильтрат промывают EtOAc. Слои разделяют и органический слой экстрагируют последовательно насыщенным NaHCO ₃ и насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат над Na₂SO₄ и концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение (0,21 г, 85%).

МС (ES): m/z = 504 [M+H].

Получение 28

1-Бензил-2-метил-4-бром-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол

1-Бензил-2-метил-5-бром-1Н-имидазол

N-Бромсукцинимид (7,85 г, 44 ммоль) добавляют к раствору 1-бензил-2-метил-1Н-имидазола (8,0 г, 46 ммоль) в хлороформе (200 мл) и смесь перемешивают в течение 6 ч. Смесь промывают насыщенным водным гидрокарбонатом натрия и насыщенным водным NaCl, сушат над MgSO ₄ и фильтруют через подушку силикагеля. Фильтрат концентрируют и остаток суспендируют в диэтиловом простом эфире (600 мл), нагревают для кипячения с обратным холодильником и фильтруют в горячем состоянии. Фильтрат в эфире концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде рыжевато-коричневого твердого вещества (9,3 г).

МС (ES): m/z = 252 [M+H].

1-Бензил-2-метил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол

Смесь 1-бензил-2-метил-5-бром-1Н-имидазола (4,71 г, 18,7 ммоль), 2,4-дифторфенилбороновой кислоты (6,92 г, 43,8 ммоль), бис(ацетато)бис(трифенилфосфин)палладия(II) (1,4 г, 1,875 ммоль), 2 н. Na₂CO₃ (19 мл, 38 ммоль), МеОН (19 мл) и 1,2-диметоксиэтана (120 мл) нагревают для кипячения с обратным холодильником в течение 18 ч. Смесь охлаждают до к.т. Добавляют воду и EtOAc и слои разделяют. Органический слой сушат над MgSO₄, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесями EtOAc:CH₂Cl₂), получая при этом требуемое соединение (3,59 г).

МС (ES): m/z = 285 [M+H].

Бромирование

Смесь 1-бензил-2-метил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазола (3,58 г, 12,6 ммоль) и N-бромсукцинимида (2,24 г, 12,6 ммоль) в хлороформе (100 мл) перемешивают при к.т. в течение 18 ч. Реакционную смесь добавляют непосредственно на силикагель и элюируют смесями CH₂Cl₂:EtOAc, получая при этом указанное в заголовке соединение (3,41 г).

МС (ES): m/z = 364 [M+H].

Получение 29

2-трет-Бутил-4-(4-фторфенил)оксазол

Раствор коммерчески доступного 2-бром-4'-фторацетофенона (100,00 г, 460 ммоль), 2,2-диметилпропионамида (93,06 г, 20 ммоль) в 1,4-диоксане (600 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 2 дней. Осадок отделяют фильтрованием, фильтрат концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 60:1 гексаны:EtOAc), получая при этом требуемое соединение (55 г, 55%).

МС (ES): m/z = 220 [M+H].

Соединения получений 30-31 можно получить по существу так же, как описано в получении 29.

Получение	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
30	2-трет-Бутил-4-(2,4-дифторфенил)оксазол	238
31	4-(4-Фторфенил)-2-изопропилоксазол	206

Получение 32

2-трет-Бутил-4-(4-фторфенил)-5-триметилстаннанилоксазол

2-трет-Бутил-4-(4-фторфенил)оксазол (0,61 г, 2,77 ммоль) растворяют в ТГФ (15 мл) и добавляют трет-бутиллитий (3,3 мл, 1,7 М) при -78°С. Смесь перемешивают в течение 45 мин. Добавляют триметилстаннанилхлорид (0,58 г, 2,90 ммоль) и температуре дают возможность достигнуть к.т. Смесь перемешивают в течение 2 ч и добавляют раствор хлорида аммония (200 мкл, рН 8 с аммиаком) и концентрируют.

¹H-ЯМР (CDCl ₃) 7,46 (м, 2Н), 6,95 (м, 2Н), 1,32 (с, 9Н), 0,24 (с, 9Н).

Получение 33

4-(4-Фторфенил)-2-метилтиазол

Раствор 2-бром-4'-фторацетофенона (10 г, 46 ммоль) и тиоацетамида (6,9 г, 92 ммоль) в 1,4-диоксане (60 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 3 ч. Осадок отделяют фильтрованием и промывают EtOAc, получая при этом указанное в заголовке соединение (6,5 г, 73%).

МС (ES): m/z = 194 [M+H].

Соединение получения 34 можно получить по существу так же, как описано в получении 33.

Получение	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
34	2-Метил-4-фенилтиазол	176

Получение 35

Диметиламид 2-амино-5-бромимидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

2,6-Дибром-3-нитропиридин

Смесь 2,6-дихлор-3-нитропиридина (9 г) и бромистоводородной кислоты (90 мл) в АсОН (30%) нагревают при 50°С на протяжении ночи. Смесь охлаждают до к.т. и выливают в воду (600 мл). Твердое вещество отделяют фильтрованием, получая при этом указанное в заголовке соединение (87%).

¹H-ЯМР (CDCl₃) 7,93 (д, J=8,14 Гц, 1Н), 7,55 (д, J=8,14 Гц, 1Н).

N,N-Диметил-N'-(6-бром-3-нитропиридин-2-ил)сульфоновая кислота

Перемешивают смесь 2,6-дибром-3-нитропиридина (11,3 г, 39,25 ммоль) и N,N-диметилсульфамида (0,006 г, 47,10 ммоль) в ДМФА (40 мл). Добавляют гидрид лития (0,81 г, 102,05 ммоль) и смесь перемешивают при к.т. на протяжении ночи. Добавляют 100 мл воды и 3 н. HCl до рН 7. Желтое твердое вещество отделяют фильтрованием, получая при этом указанное в заголовке соединение (93%).

¹H-ЯМР (ДМСО-d ₆) 10,25 (ушир. с, 1Н), 8,41 (д, J=8,59 Гц, 1Н), 7,50 (д, J=8,59 Гц, 1Н), 2,95 (2, 6Н).

N,N-Диметил-N'-(3-амино-6-бромпиридин-2-ил)сульфоновая кислота

Смесь N,N-диметил-N'-(6-бром-3-нитропиридин-2-ил)сульфоновой кислоты (11,6 г, 35,69 ммоль) и хлорида олова (40 г, 178 ммоль) в смеси 500:250 EtOAc:EtOH нагревают в течение 4 ч. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексан:EtOAc). Растирание с водой дает указанное в заголовке соединение (85%).

МС (ES): m/z = 297 [M+H].

Диметиламид 2-амино-5-бромимидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

Смесь N,N-диметил-N'-(3-амино-6-бромпиридин-2-ил)сульфоновой кислоты (0,40 г, 1,35 ммоль), бромида циана (0,08 г, 1,48 ммоль) и метоксида лития (0,08 г, 2,02 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (400 мл) перемешивают при 80°С в течение 2 ч. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 гексан:EtOAc), получая при этом указанное в заголовке соединение (82%).

МС (ES): m/z = 322 [M+H].

Получение 36

1-[2-Амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(2,4-дифторфенил)этан-1,2-дион

5-(2,4-Дифторфенилэтинил)-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин

5-Бром-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин (30,00 г, 105,94 ммоль), Et₃N (60 мл) и Pd(OAc)₂[P(Ph)₃] ₂ (3,97 г, 5,30 ммоль) объединяют в толуоле (150 мл) и образовавшуюся смесь нагревают до ˜65°С в атмосфере азота. К вышеуказанной смеси по каплям добавляют 1-этинил-2,4-дифторбензол (21,95 г, 158,92 ммоль) в толуоле (30 мл) и затем образовавшуюся реакционную смесь нагревают при 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до 25°С и гасят насыщенным водным NH ₄Cl (300 мл). Образовавшуюся реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут, затем фильтруют, твердое вещество промывают Н₂О и сушат при вакуумном фильтровании в течение 30 минут. Твердое вещество суспендируют в МТВЕ (200 мл), затем фильтруют и промывают МТВЕ (50 мл). Выделенное твердое вещество сушат при вакуумном фильтровании, получая при этом 14,47 г указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества.

МС (ES): m/z = 341 (M+1).

Окисление

Раствор 5-(2,4-дифторфенилэтинил)-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (14,47 г, 42,51 ммоль) в ацетоне (350 мл) обрабатывают раствором MgSO₄ (10,23 г, 85,00 ммоль) и NaHCO ₃ (1,79 г, 21,30 ммоль) в воде (200 мл). Образовавшуюся реакционную смесь помешают на баню с Н₂ О. Добавляют целит (28,50 г) с последующим добавлением на протяжении 10 минут KMnO₄ (14,11 г, 89,28 ммоль), когда реакционная смесь экзотермическим образом нагревается до ˜30°С. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, затем гасят 10 мас.% водным Na ₂SO₃ (150 мл). Смесь перемешивают в течение 30 минут, затем фильтруют через подушку целита, промывают 10% раствором МеОН/EtOH (2×700 мл в каждом случае). Слои фильтрата разделяют и водный слой экстрагируют водным EtOAc (2×500 мл в каждом случае). Объединенные органические слои промывают Н₂О (500 мл) и насыщенным водным хлоридом натрия (500 мл), затем сушат над Na₂SO ₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая при этом твердое вещество. Фильтровальную подушку целита промывают 10% раствором МеОН/EtOAc и фильтрат концентрируют при пониженном давлении, получая при этом дополнительное твердое вещество. Твердые вещества объединяют и очищают колоночной хроматографией с элюированием 2% 2 н. NH₄/МеОН в EtOAc, затем 5% 2 н NH₄/МеОН в EtOAc, получая при этом 13,08 г (выход 82%) указанного в заголовке соединения в виде оранжево-коричневого твердого вещества.

МС (ES): m/z = 373 (M+1).

Получение 37

{6-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1R),2,2-триметилпропил)амин

1-[6-(1(R),2,2-Триметилпропиламино)-5-нитропиридин-2-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-дион

[6-(4-Фторфенилэтинил)-3-нитропиридин-2-ил]-(1(R),2,2-триметилпропил)амин (2,73 г, 8,00 ммоль) растворяют в ацетоне (60 мл). Добавляют воду (20 мл), затем NaHCO₃ (336 мг, 4 ммоль, 0,5 экв.) и MgSO₄ (1,9 г, 16 ммоль, 2,0 экв.) и реакционную смесь охлаждают приблизительно до 3°С. Порциями добавляют KMnO₄ (2,5 г, 16 ммоль, 2,0 экв.) с энергичным перемешиванием при поддержании температуры ниже 3°С. Спустя 1-2 ч реакционную смесь гасят добавлением воды (20 мл) и Na₂SO₃ (4,5 г, 36 ммоль) и смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 1 ч. Суспензию фильтруют через целит® с добавлением 600 мл этилацетата и приблизительно 300 мл воды. Слои разделяют и органический слой промывают четыре раза насыщенным водным NaHCO₃ и дважды насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат Na₂SO ₄, фильтруют для отделения твердых веществ и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении с элюированием с градиентом 50-70% CH₂Cl₂ в гексанах, получая при этом требуемое соединение в виде оранжевого масла (1,82 г, выход 61%).

МС (ES): m/z = 374,1 (M+H) ⁺.

Образование кольца

1-[6-(1(R),2,2-Триметилпропиламино)-5-нитропиридин-2-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-дион (747 мг, 2,0 ммоль) растворяют в ледяной уксусной кислоте (10 мл), добавляют ацетат аммония (2,3 г, 30 ммоль, 15 экв.) и затем добавляют триметилацетальдегид (344 мг, 4,0 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь нагревают до 100°С в течение 1 ч и концентрируют при пониженном давлении. Образовавшееся твердое вещество распределяют между этилацетатом и водой. Органический слой промывают 5 раз насыщенным водным NaHCO₃ и дважды насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат Na₂ SO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении с элюированием изократической системой 10% этилацетат/гексаны, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде оранжевого твердого вещества (589 мг, выход 67%).

МС (ES): m/z = 440,2 (M+H)⁺.

Соединения получений 38-40 можно получить по существу так же, как описано в получении 37.

Получение	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
38	{6-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1(R),2,2-триметилпропил)амин	496,1
39	{6-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1(R),2,2-триметилпропил)амин	546,2
40	{6-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1(R),2,2-триметилпропил)амин	512,2

Получение 41

{6-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин

1-(4-Фторфенил)-2-[5-нитро-6-(2,2-диметилпропиламино)пиридин-2-ил]этан-1,2-дион (1,08 г, 3,0 ммоль) растворяют в ледяной уксусной кислоте, добавляют ацетат аммония (3,47 г, 45 ммоль, 15 экв.) и затем добавляют триметилацетальдегид (517 мг, 6,0 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь нагревают до 100°С в течение 1 ч и концентрируют при пониженном давлении. Твердые вещества распределяют между этилацетатом и водой. Добавляют NaHCO₃ до прекращения выделения газа. Органический слой промывают 5 раз насыщенным водным NaHCO₃ и один раз насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат Na₂SO ₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая при этом указанное в заголовке соединение в виде желто-оранжевого твердого вещества (1,25 г, выход 97%).

Точная МС: вычисл.: m/z = 426,230 (М+Н)⁺; найдено: m/z 426,2313 (М+Н)⁺.

Пример 1

Метансульфонат 5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Суспензию 6-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-нитропиридин-2-ил]-(2,2-диметилпропил)амина (0,20 г, 0,5 ммоль) и 10% палладия на угле (0,025 г) в EtOH (10 мл) перемешивают при пропускании водорода из баллона на протяжении ночи. Суспензию фильтруют через фильтрующий агент и промывают EtOH (2×5 мл). Фильтрат концентрируют приблизительно до 5 мл и обрабатывают при к.т. бромидом циана (1,3 ммоль). Реакционную смесь гасят насыщенным водным бикарбонатом натрия (2 мл) и перемешивают в течение 15-60 мин. Смесь разбавляют водой (5 мл) и экстрагируют CH₂Cl₂ (2×10 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным водным NaCl (5 мл), сушат MgSO₄, фильтруют, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование со ступенчатым градиентом, начинающимся от 100% CH₂Cl ₂ и до 5:95 смеси насыщенный аммиаком МеОН:CH ₂Cl₂), получая при этом требуемое соединение. Свободное основание выделяют и затем превращают в метансульфонатную соль обработкой раствора в смеси МеОН-вода метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией с получением указанного в заголовке соединения.

МС (ES): m/z = 402 [M+H].

Соединения примеров 2-14 можно получить по существу так же, как описано в примере 1.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
2	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	459
3	Метансульфонат 5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-циклопропилметил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	387
4	Метансульфонат 5-(2-циклопропил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	387
5	Метансульфонат 3-(2,2-диметилпропил)-5-[5-(4-фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	527
6	Метансульфонат 3-(2,2-диметилпропил)-5-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	509
7	Метансульфонат 5-[2-циклопропил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	405
8	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	477
9	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	421
10	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-циклопропилметил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	405
11	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	439
12	Метансульфонат R-5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1,2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	435
13	Метансульфонат R-5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1,2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	491
14	Метансульфонат R-5-[5-(4-фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1,2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	541

Пример 15

Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Суспензию (циклопропилметил-{6-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}амина (0,250 г, 0,5 ммоль) в EtOH (10 мл) обрабатывают дигидратом дихлорида олова (0,5641 г, 2,5 ммоль) и нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 2,5 ч в атмосфере азота. Смесь охлаждают до к.т. и медленно гасят насыщенным водным NaHCO ₃ (5 мл) и EtOAc (5 мл). К образовавшейся суспензии добавляют фильтрующий агент и смесь разбавляют дополнительно 5 мл каждого из водного NaHCO₃ и EtOAc. Смесь фильтруют через подушку фильтрующего агента. Твердое вещество промывают 10 мл каждого из водного NaHCO₃ и EtOAc. Слои разделяют и водную фазу экстрагируют EtOAc (10 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным водным NaCl (5 мл), сушат MgSO₄, фильтруют и концентрируют. Неочищенный фенилендиамин растворяют в EtOH (5 мл) и обрабатывают бромидом циана (1,0 ммоль). Смесь гасят насыщенным водным NaHCO ₃ (2 мл) и перемешивают в течение 15-60 мин. Смесь разбавляют водой (5 мл) и экстрагируют CH₂Cl ₂ (2×10 мл). Объединенные органические фазы промывают насыщенным водным NaCl (5 мл), сушат MgSO₄ , фильтруют, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование со ступенчатым градиентом, начинающимся со 100% CH ₂Cl₂ и до 5:95 смеси 5% аммиак в МеОН:CH₂Cl₂), получая при этом требуемое соединение. Свободное основание выделяют и превращают его в метансульфонатную соль обработкой раствора в смеси МеОН-вода метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией.

МС (ES): m/z = 495,1 [M+H].

Соединения примеров 16-35 можно получить по существу так же, как описано в примере 15.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
16	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	461
17	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	509
18	Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	475
19	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фторфенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	443
20	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	476
21	Метансульфонат 5-[5-(2,4-дифторфенил)-2-(2,6-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	495
22	Метансульфонат 5-[3-(4-фторфенил)-1-метилпиразол-4-ил]-3Н-3-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	365
23	Метансульфонат 5-[5-(4-фторфенил)-1-метилпиразол-4-ил]-3Н-3-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	365
24	Метансульфонат 5-[3-(4-фторфенил)-1-морфолиноэтилпиразол-4-ил]-3Н-3-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	464
25	Диметансульфонат 5-[3-(4-фторфенил)пиразол-4-ил]-3Н-3-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	351
26	Диметансульфонат 3Н-3-изобутил-5-(3-фенил-1-изопропилпиразол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	375
27	Диметансульфонат 3Н-3-изобутил-5-(3-фенил-1-метилпиразол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	347
28	Диметансульфонат 3Н-3-изобутил-5-(3-фенилпиразол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	333
29	Диметансульфонат 5-[3-(2,4-дифторфенил)пиразол-4-ил]-3Н-3-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	369
30	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	445
31	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	491
32	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	477
33	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	495
34	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	513
35	Метансульфонат R-5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1,2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	507

Пример 36

Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

Проводят восстановление и выделяют {6-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин (0,43 г; 1,0 ммоль), как в примере 1. Неочищенный диамин подвергают взаимодействию с неразбавленным триэтилортоацетатом при 120°С на протяжении ночи. Смесь концентрируют и разбавляют 15 мл 1 н. HCl. Раствор нейтрализуют насыщенным NaHCO ₃ и экстрагируют CH₂Cl ₂. Органический слой промывают насыщенным NaCl, сушат Na ₂SO₄, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 50:50 EtOAc:CH ₂Cl₂), получая при этом указанное в заголовке соединение в виде рыжевато-коричневого твердого вещества (0,11 г; выход 53%). Продукт в виде свободного основания превращают в метансульфонатную соль по существу так же, как описано в примере 1.

МС (ES): m/z = 420 [M+H].

Соединения примеров 37-38 можно получить по существу так же, как описано в примере 36.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
37	Метансульфонат 5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	402
38	Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	474

Пример 39

Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин восстанавливают по существу так же, как описано в примере 16, и затем подвергают взаимодействию с диамином в триметилортоацетате, как описано в примере 36, получая при этом свободное основание в виде рыжевато-коричневого твердого вещества (0,11 г; выход 49%). Метансульфонат свободного основания получают по существу так же, как описано в примере 1.

МС (ES): m/z = 458 [M+H].

Соединения примеров 40-45 можно получить по существу так же, как описано в примере 39.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
40	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	476
41	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	508
42	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	442
43	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	474
44	Метансульфонат 5-(2-циклопропил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	386
45	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-2-метил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	490

Пример 46

Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина

{6-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин восстанавливают по существу так же, как описано в примере 15. Диамин подвергают взаимодействию с неразбавленным триэтилортоформиатом при кипячении с обратным холодильником в течение 24 ч и при к.т. в течение дополнительных 24 ч. Очищают и выделяют свободное основание по существу так же, как описано в примере 36 (0,11 г, выход 49%). Превращают в метансульфонат по существу так же, как описано в примере 1.

МС (ES): m/z = 460 [M+H].

Соединения примеров 47-48 можно получить по существу так же, как описано в примере 46.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
47	Метансульфонат 5-(2-циклопропил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	372
48	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридина	430

Пример 49

Диметансульфонат 5-[3-(4-фторфенил)-1-изопропилпиразол-4-ил]-3Н-изобутилимидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Гидросульфит натрия (2,55 г, 14,6 ммоль) добавляют к раствору 2-изобутиламино-3-нитро-6-[3-(4-фторфенил)-1-изопропилпиразол-4-ил]пиридина (0,50 г, 1,27 ммоль) в 25 мл смеси 1:1 ТГФ:Н₂ О в присутствии NH₄OH (8,70 мл, 32% в Н ₂О). Спустя 2 ч смесь разбавляют водой (25 мл). Экстрагируют EtOAc (100 мл), сушат MgSO₄ и концентрируют. Остаток растворяют в смеси 1:1 CH₂Cl ₂:EtOH (25 мл), добавляют бромид циана (0,16 г, 1,51 ммоль) и смесь перемешивают в течение приблизительно 48 ч. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 16:1 EtOAc:МеОН). Проводят перекристаллизацию из смеси диэтиловый эфир:гексаны, получая при этом свободное основание (0,44 г, 88%). Превращают в метансульфонат по существу так же, как описано в примере 1 (выход 58%).

МС (ES): m/z = 393 [M+H].

Соединения примеров 50-62 можно получить по существу так же, как описано в примере 49.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
50	Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	389
51	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-хлорфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	461
52	Метансульфонат 5-[2-циклопропил-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	373
53	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	495
54	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-хлорфенил)-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	479
55	Метансульфонат 5-[2-изопропил-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	375
56	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	531
57	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	425
58	Метансульфонат 5-[2-изопропил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	411
59	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-хлорфенил)-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	497
60	Метансульфонат 5-[2-циклопропил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	409
61	Диметансульфонат 5-[2-циклопропил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	391
62	Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	407

Пример 63

N'-{5-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-ил}-N,N-диметилформамидин

N'-{5-[(2,6-Дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин, полученный по существу так же, как описано в примере 1 (0,10 г, 0,225 ммоль), диметилацеталь N,N-диметилформамида (0,05 мл, 0,4 ммоль) в толуоле (1,5 мл) кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. Смесь охлаждают до к.т. и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 1:1 CH₂Cl₂:ацетонитрил), получая при этом указанное в заголовке соединение (0,11 г).

МС (ES): m/z = 500 [M+H].

Соединение примера 64 можно получить по существу так же, как описано в примере 63.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
64	N'-{5-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-ил}-N,N-диметилформамидин	533

Пример 65

N'-{5-[2-(2,6-Дихлорфенил)-3-метил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-ил}-N,N-диметилформамидин

N'-{5-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-ил}-N,N-диметилформамидин, полученный по существу так же, как описано в примере 63 (0,10 г, 0,188 ммоль), иодметан (0,040 г, 0,282 ммоль) и Cs ₂CO₃ (0,09 г, 0,28 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) перемешивают при к.т. в течение приблизительно 24 ч. Смесь экстрагируют EtOAc и промывают водой (3×), насыщенным водным NaCl, затем сушат над Na₂SO ₄. Раствор фильтруют и концентрируют, получая при этом смесь метиловых изомеров. Очистка (хроматография на силикагеле с элюированием смесью 1:1:0,4 CH₂Cl ₂:ацетонитрил:гексаны) дает указанное в заголовке соединение (0,02 г).

МС (ES): m/z = 548 [M+H].

Пример 66

5-[2-(2,6-Дифторфенил)-3-метил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин

N'-{5-[2-(2,6-Дифторфенил)-3-метил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-ил}-N,N-диметилформамидин (0,02 г, 0,04 моль) в смеси 1:1 ледяная уксусная кислота:концентрированная HCl (0,6 мл) нагревают при 100°С в течение 30 мин. Смесь охлаждают до к.т. Добавляют CH₂Cl ₂ и воду, нейтрализуют 5 н. NaOH до приблизительно рН 7 с быстрым перемешиванием. Водную фазу экстрагируют 3× CH ₂Cl₂, органические слои объединяют, промывают насыщенным водным NaCl и сушат над Na ₂SO₄. Раствор фильтруют и концентрируют, получая при этом указанное в заголовке соединение (0,02 г).

МС (ES): m/z = 459 [M+H].

Соединение примера 67 можно получить по существу так же, как описано в примере 66.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
67	5-[2-(2,6-Дихлорфенил)-3-метил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин	493

Пример 68

Метансульфонат 3-(2,2-диметилпропил)-5-(5-фенил-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

(2,2-Диметилпропил)-[3-нитро-6-(5-фенил-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил)пиридин-2-ил]амин (0,180 г, 0,51 ммоль) и 10% Pd/C (0,025 г) суспендируют в EtOH (10 мл) и перемешивают при к.т. при пропускании водорода из баллона в течение 5 ч. Реакционную смесь фильтруют с применением фильтрующего агента и концентрируют приблизительно до половины объема. Диамин применяют сразу, без дополнительного выделения или очистки (МС (ES): 323 [M+H]), и обрабатывая бромидом циана (0,09 г) в EtOH (5 мл). Смесь перемешивают в атмосфере водорода в течение 3,5 ч, гасят насыщенным водным NaHCO₃ (2,0 мл), перемешивают, разбавляют CH₂Cl ₂ (5 мл) и Н₂О (5 мл) и фазы разделяют. Водную фазу экстрагируют CH₂Cl ₂ (2×5 мл), объединенные органические фазы промывают 5 мл каждого из Н₂О и насыщенного водного NaCl и сушат MgSO₄. Раствор фильтруют и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 4:96 2,0 н аммиак в МеОН:CH ₂Cl₂), получая при этом свободное основание. Основание превращают в метансульфонатную соль обработкой раствора в смеси МеОН-вода метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией, получая при этом указанное в заголовке соединение (0,07 г, 39%).

МС (ES): m/z = 348 [M+H].

Соединения примеров 69-71 можно получить по существу так же, как описано в примере 68.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
69	Метансульфонат 3-(2,2-диметилпропил)-5-[5-(4-фторфенил)-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	364
70	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-[5-(4-фторфенил)-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	350
71	Метансульфонат 3-циклопропилметил-5-(5-фенил-3Н-[1,2,3]триазол-4-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	332

Пример 72

Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридина

Раствор 6-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-N ²-изобутилпиридин-2,3-диамина (1,1 г, 2,52 ммоль) в CH ₂Cl₂ (9 мл) и 50% водный АсОН (9 мл) добавляют по каплям к раствору нитрита натрия в воде (0,1 мл) (0,184 г, 2,66 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин, добавляют дополнительный CH₂Cl ₂ и органический слой промывают насыщенным водным раствором NaCl, водным NaHCO₃ (5%), сушат MgSO ₄ и концентрируют. Остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 4:1 - 1:2 гексан:EtOAc), получая при этом свободное основание (70%). МС (ES): m/z = 477 [M+H]. К раствору свободного основания (0,15 г 0,336 ммоль) в 10 мл смеси 9:1 CH ₂Cl₂:МеОН добавляют 0,34 мл 1 М раствора метансульфоновой кислоты в смеси 9:1 CH₂ Cl₂:МеОН. Раствор перемешивают 5 мин, концентрируют и белое твердое вещество растирают в диэтиловом эфире. Твердое вещество выделяют фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (71%).

МС (ES): m/z = 447 [M+H].

Соединения примеров 73-75 можно получить по существу так же, как описано в примере 72.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
73	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридина	463
74	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридина	499
75	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-изобутил-3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридина	393

Пример 76

Метансульфонат диметиламида 2-амино-5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

Смесь диметиламида 2-амино-5-(2-оксо-2-фенилацетил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты (0,07 г, 0,20 ммоль), триметилацетальдегида (65 мкл, 0,6 ммоль) и ацетата аммония (0,23 г, 3 ммоль) в АсОН (5 мл) нагревают при 90°С в течение 4 ч. Смесь охлаждают до к.т. Ее разбавляют насыщенным водным NaHCO₃ и экстрагируют EtOAc. Органическую фазу концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 15:1 CH ₂Cl₂:МеОН), получая при этом свободное основание (35%). МС (ES): m/z = 438 [M+H]. К раствору свободного основания (0,02 г 0,054 ммоль) в 5 мл смеси 95:5 CH ₂Cl₂:МеОН добавляют 5,4 мкл 1 М раствора метансульфоновой кислоты в смеси 95:5 CH₂ Cl₂:МеОН. Раствор перемешивают 5 мин, концентрируют и белое твердое вещество растирают в диэтиловом эфире. Твердое вещество выделяют фильтрованием с получением указанного в заголовке соединения (71%).

МС (ES): m/z = 440 [M+H].

Соединения примеров 77-79 можно получить по существу так же, как описано в примере 76.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
77	Метансульфонат диметиламида 2-амино-5-[(2-фтор-6-хлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)]имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты	512
78	Метансульфонат диметиламида 2-амино-5-[(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)]имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты	528
79	Метансульфонат диметиламида 2-амино-5-(2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты	476

Пример 80

Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)]-3-(пропан-2-сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Смесь {3-амино-6-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]пиридин-2-ил}амида пропан-2-сульфоновой кислоты (0,37 г, 0,79 ммоль), бромида циана (0,104 г, 0,99 ммоль) и метоксида лития (0,033 г, 0,87 ммоль) в метиленхлориде (10 мл) перемешивают в течение 12 ч при к.т. Добавляют насыщенный NaHCO₃ (10 мл) и перемешивают в течение 1 ч. Слои разделяют и органический слой экстрагируют насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат над Na ₂SO₄, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование с градиентом от 40:60 EtOAc:гексаны до 80:20 EtOAc:гексаны), получая при этом свободное основание (0,21 г, 54%). МС (ES): m/z = 495 [M+H]. К раствору свободного основания в 1 мл смеси 5:1 метанол:метиленхлорид добавляют метансульфоновую кислоту. Раствор концентрируют и добавляют диэтиловый эфир. Твердое вещество отделяют фильтрованием и сушат, получая при этом указанное в заголовке соединение.

МС (ES): m/z = 495 [M+H].

Соединения примеров 81-91 можно получить по существу так же, как описано в примере 80.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
81	Метансульфонат 3-бутил-5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	445
82	Диметансульфонат 3-бутил-5-[2-(2-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	427
83	Метансульфонат 3-бутил-5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	461
84	Метансульфонат 3-бутил-5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	389
85	Метансульфонат 3-бутил-5-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	495
86	Диметиламид 2-амино-5-(5-фенил-2Н-[1,2,3]триазол-4-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты	385
87	Метансульфонат 5-[2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(пропан-2-сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	545
88	Метансульфонат 5-(2-трет-бутил-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил)-3-(пропан-2-сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	439
89	Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(пропан-2-сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	529
90	Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(пропан-2-сульфонил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	511
91	Метансульфонат 3-бутил-5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	425

Пример 92

5-[2-трет-Бутил-4-(4-фторфенил)оксазол-5-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Через суспензию 2-трет-бутил-4-(4-фторфенил)оксазола (0,145 г, 0,66 ммоль), 5-бром-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (0,355 г, 1,32 ммоль), карбоната цезия (6,06 г, 18,6 ммоль), ацетата палладия(II) (0,201 г, 10%) и трифенилфосфина (0,14 г, 0,07 ммоль) в ДМФА (1,5 мл) барботируют азот. Реакционную смесь нагревают при 100°С на протяжении ночи, охлаждают до к.т. и распределяют между EtOAc и насыщенным водным NaCl. Органический слой промывают насыщенным водным NaCl. Сушат Na ₂SO₄, фильтруют, концентрируют и очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 2% 2 М аммиак/МеОН в CH₂Cl₂ ), получая при этом указанное в заголовке соединение (0,07 г, 34%).

МС (ES): m/z = 408 [M+H].

Соединения примеров 93-96 можно получить по существу так же, как описано в примере 92, с превращением свободного основания в метансульфонат по существу так же, как описано в примере 1.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
93	Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-4-(2,4-дифторфенил)оксазол-5-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	426
94	Метансульфонат 5-[4-(4-фторфенил)-2-изопропилоксазол-5-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	394
95	Метансульфонат 3-изобутил-5-(2-метил-4-фенилтиазол-5-ил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	364
96	Метансульфонат 5-[4-(4-фторфенил)-2-метилтиазол-5-ил]-3-изобутил-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина	382

Пример 97

Диметиламид 2-амино-5-(2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)оксазол-5-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты

Диметиламид 2-амино-5-бромимидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты (0,05 г, 0,156 ммоль) растворяют в толуоле (3 мл) в герметизированной трубке. Добавляют 2-трет-бутил-4-(4-фторфенил)-5-триметилстаннанилоксазол (0,07 г, 0,17 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (0,02 г, 0,015 ммоль). Смесь нагревают при 110°С в течение 4 ч. Смесь концентрируют и остаток очищают (хроматография на силикагеле, элюирование смесью 20:1 CH₂Cl ₂:МеОН), получая при этом указанное в заголовке соединение (14%).

МС (ES): m/z = 459 [M+H].

Соединение в примере 98 можно получить по существу так же, как описано в примере 97, с превращением свободного основания в метансульфонат по существу так же, как описано в примере 1.

Пример	Соединение	МС (ES): m/z [M+H]
98	Метансульфонат 2-амино-5-(2-изопропил-5-(4-фторфенил)оксазол-5-ил)имидазо[4,5-b]пиридин-3-сульфоновой кислоты	445

Пример 99

Метансульфонат 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

1-[2-Амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-дион (19,58 г, 55,24 ммоль), 2,6-дихлорбензальдегид (15,47 г, 88,39 ммоль) и NH₄OAc (42,58 г, 552,41 ммоль) смешивают в ледяной уксусной кислоте (200 мл) и смесь перемешивают при 85°С в атмосфере азота в течение 5 ч. Образовавшуюся реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате (2000 мл) и образовавшийся раствор промывают насыщенным водным бикарбонатом натрия (2×1000 мл в каждом случае), водой (1000 мл) и насыщенным водным хлоридом натрия (1000 мл). Органические слои сушат над MgSO₄ , фильтруют и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией, элюируя смесью этилацетат:гексаны (1:1), затем смесью этилацетат:гексаны (2:1), затем неразбавленным этилацетатом, затем 5% 2 н. NH₃/МеОН в этилацетате, получая при этом 11,70 г (выход 41,5%) 5-[2-(2,6-дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в виде не совсем белого твердого вещества. МС (ES+): m/z = 509 (M+1).

5-[2-(2,6-Дихлорфенил)-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин (11,20 г, 21,99 ммоль) перемешивают в метаноле (150 мл) и затем по каплям добавляют раствор метансульфоновой кислоты (2,11 г, 21,96 ммоль) в метаноле (10 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут и затем концентрируют при пониженном давлении. Добавляют этилацетат (150 мл), образовавшуюся суспензию фильтруют, и фильтровальный осадок промывают диэтиловым эфиром (200 мл). Образовавшееся твердое вещество сушат в вакуумном сушильном шкафу при 80°С в течение 2 ч, получая при этом 12,765 г (выход 95%) указанного в заголовке соединения в виде светло-красного твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD): 7,78-7,50 (м, 7Н), 7,24-7,20 (м, 2Н), 3,86 (с, 2Н), 2,70 (с, 3Н), 0,85 (с, 9Н).

TOF-MS [ES+, M+H]. Набл. m/z 509,1412, вычисл. m/z 509,1423.

Пример 100

Метансульфонат 3-(2,2-диметилпропил)-5-[5-(4-фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

1-[2-Амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-дион (18,32 г, 51,69 ммоль) и 2-фтор-6-трифторметилбензальдегида (15,00 г, 78,08 ммоль) и NH₄OAc (39,84 г, 516,90 ммоль) смешивают в ледяной уксусной кислоте (200 мл), и смесь перемешивают при 85°С в атмосфере азота в течение 4 ч. Образовавшуюся реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в этилацетате (2000 мл) и образовавшийся раствор промывают насыщенным водным NaHCO₃ (2×1000 мл в каждом случае), водой (1000 мл) и насыщенным водным хлоридом натрия (1000 мл). Органические части сушат над MgSO ₄, фильтруют и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией, элюирование неразбавленным этилацетатом, затем 2% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, затем 5% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, получая при этом 7,38 г 3-(2,2-диметилпропил)-5-[5-(4-фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в виде не совсем белого твердого вещества. Нечистые фракции очищают колоночной хроматографией, элюирование 1% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, затем 2% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, затем 3% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, получая при этом дополнительно 4,68 г требуемого соединения.

МС (ES+): m/z = 527 (M+1).

3-(2,2-Диметилпропил)-5-[5-(4-фторфенил)-2-(2-фтор-6-трифторметилфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин (11,56 г, 21,95 ммоль) смешивают в метаноле (150 мл) и затем по каплям добавляют раствор метансульфоновой кислоты (2,11 г, 21,96 ммоль) в МеОН (10 мл). Образовавшуюся реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 20 минут, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток суспендируют в диэтиловом эфире, фильтруют и промывают свежим диэтиловым эфиром. Образовавшееся твердое вещество сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение 48 ч, получая при этом 12,015 г (выход 87,9%) указанного в заголовке соединения в виде светло-красного твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD): 7,84-7,60 (м, 7Н), 7,24-7,20 (м, 2Н), 3,86 (с, 2Н), 2,70 (с, 3Н), 0,85 (с, 9Н).

TOF-MS [ES+, M+H]. Набл. m/z 527,1979, вычисл. m/z 527,1982.

Пример 101

Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

1-[2-Амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(2,4-дифторфенил)этан-1,2-дион (17,36 г, 46,62 ммоль) и триметилацетальдегид (6,42 г, 74,53 ммоль) и NH₄OAc (35,93 г, 466,20 ммоль) смешивают в ледяной уксусной кислоте (200 мл) и смесь перемешивают при 85°С в атмосфере азота в течение 4,5 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры на протяжении ночи. Реакционную смесь нагревают при 85°С в течение 5 ч, затем при 100°С в течение 3 ч, затем охлаждают до комнатной температуры на протяжении ночи. Образовавшуюся реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в EtOAc (2 л) и образовавшийся раствор промывают насыщенным NaHCO₃ (2×1 л), Н₂О (1 л) и насыщенным водным хлоридом натрия (1 л). Органические слои сушат над Na₂ SO₄, фильтруют и затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией, элюирование неразбавленным этилацетатом, затем 1% раствором 2 н. аммиак/МеОН в EtOAc, затем 2% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, затем 3% раствором 2 н. аммиак/МеОН в этилацетате, получая при этом 10,28 г 5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в виде не совсем белого твердого вещества.

МС (ES+): m/z = 439 (M+1).

5-[2-трет-Бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин (11,55 г, 26,33 ммоль) перемешивают в МеОН (150 мл) и затем по каплям добавляют раствор метансульфоновой кислоты (2,53 г, 26,33 ммоль) в МеОН (10 мл). Образовавшуюся реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 20 минут, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток суспендируют в Et ₂O, затем фильтруют и промывают свежим Et ₂O. Образовавшееся твердое вещество сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре на протяжении ночи, затем при 80°С в течение 1,5 ч. Соль растворяют в МеОН и затем обрабатывают NaHCO₃ до достижения основности. Образовавшийся раствор экстрагируют EtOAc, объединенные органические слои сушат над Na₂SO₄, фильтруют, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают колоночной хроматографией с элюированием неразбавленным этилацетатом, затем 1% раствором 2 н. аммиак/МеОН в EtOAc, затем 2% раствором 2 н. аммиак/МеОН в EtOAc, получая при этом 9,38 г 5-[2-трет-бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин. 5-[2-трет-Бутил-5-(2,4-дифторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин (9,38 г, 21,39 ммоль) перемешивают в безводном МеОН (150 мл) и затем по каплям добавляют раствор метансульфоновой кислоты (2,06 г, 21,43 ммоль) в МеОН (10 мл). Образовавшуюся реакционную смесь оставляют для перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут, затем концентрируют при пониженном давлении. Остаток суспендируют в Et₂O, затем фильтруют и промывают свежим Et₂O. Образовавшееся твердое вещество сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение 48 ч, получая при этом 10,695 г (выход 76%) указанного в заголовке соединения в виде рыжевато-коричневого твердого вещества.

¹H-ЯМР (400 МГц, CD₃OD): 7,74-7,66 (м, 2Н), 7,60-7,54 (м, 1Н), 7,15-7,08 (м, 2Н), 3,70 (с, 2Н), 2,70 (с, 3Н), 1,51 (с, 9Н), 0,81 (с, 9Н).

TOF-MS [ES+, M+H]: набл.: m/z 439,2398; вычисл.: m/z 439,2422.

Пример 102

Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Суспензию {6-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амина (426 мг, 1,0 ммоль) и 10% палладия на угле (85 мг) в 100% этаноле перемешивают в атмосфере водорода, подаваемого из баллона, на протяжении ночи. Суспензию фильтруют через 0,2 мкм фильтр-шприц и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10% водном этаноле и при комнатной температуре обрабатывают бромидом циана (80 мг, 0,75 ммоль, 1,5 экв.). После завершения реакции реакционную смесь гасят насыщенным водным NaHCO ₃. Для растворения всех твердых веществ добавляют этилацетат и воду. Органический слой промывают один раз насыщенным водным NaHCO₃, один раз насыщенным водным NaCl, сушат Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении, элюирование 50% смесью этилацетат/CH ₂Cl₂, затем с градиентом 1,5-3,5% (2 М аммиак в МеОН)/CH₂Cl ₂), получая при этом 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин в виде коричневой пены (156 мг, выход 74%).

Раствор 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в смеси метанол-вода обрабатывают метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией, получая при этом указанное в заголовке соединение.

Точный МС: вычисл.: m/z = 421,2516 (М+Н) ⁺; найдено: m/z = 421,2523 (М+Н)⁺ .

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆ ): 7,85 (д, 1H, J=7,9 Гц), 7,85 (д, 1H, J=7,9 Гц), 7,72 (д, 1H, J=8,4 Гц), 7,62 (дд, 2H, J=8,8, 4,8 Гц), 7,27 (т, 2H, J=8,8 Гц), 3,90 (с, 2H), 2,70 (с, 3H), 1,62 (с, 9H), 0,89 (с, 9H).

Пример 103

Фумарат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

126 мг (0,3 ммоль) 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина растворяют в 1,0 мл 88% ацетона*. При встряхивании с приращением количества добавляют раствор 70 мг фумаровой кислоты в теплом 88% ацетоне*. Добавляют затравочные кристаллы и образовавшийся осадок отделяют фильтрованием. Осадок сушат на воздухе, получая при этом 145 мг (74%) легких, красных, подобных волоскам кристаллов.

*(Остальным количеством по объему является вода).

Пример 104

Кристаллический диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

126 мг (0,3 ммоль) 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина растворяют в 2,0 мл ацетона. При возрастании добавляемого количества добавляют 58 мг метансульфоновой кислоты. Добавляют затравочные кристаллы и образовавшийся осадок отделяют фильтрованием. Осадок сушат на воздухе, получая при этом 114 мг (62%) не совсем белых, имеющих неправильную форму кристаллов. Т.пл. > 250°С.

Пример 105

Аморфный диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (300 мг) растворяют в 5 мл деионизированной воды. Раствор фильтруют через фильтр с 0,45 мкм в предварительно охлажденную мерную колбу на 500 мл. Раствор быстро замораживают на дне и стенках колбы. Проводят сушку вымораживанием в течение 24 часов, получая при этом аморфный диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина.

Пример 106

Сукцинат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

126 мг (0,3 ммоль) 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина растворяют в 2,0 мл 88% ацетона*. При возрастании добавляемого количества добавляют раствор 71 мг янтарной кислоты в 1 мл теплого 88% ацетона*. Добавляют затравочные кристаллы и образовавшийся осадок отделяют фильтрованием. Осадок сушат на воздухе, получая при этом 123 мг (63%) очень легких красных кристаллов.

*(Остальным количеством по объему является вода).

Пример 107

Дималеат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

126 мг (0,3 ммоль) 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина растворяют в 1,0 мл изопропанола. При возрастании добавляемого количества добавляют раствор 69,6 мг малеиновой кислоты в 1 мл теплого изопропанола. Добавляют затравочные кристаллы, и образовавшийся осадок отделяют фильтрованием. Осадок сушат на воздухе, получая при этом 120 мг (63%) очень легких красных кристаллов.

Пример 108

Дигидрохлорид 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

126 мг (0,3 ммоль) 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина растворяют в 2,0 мл ацетона. При возрастании добавляемого количества добавляют 120 мкл 5 н. хлористоводородной кислоты. Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием. Осадок сушат на воздухе, получая при этом 140 мг (93%) очень легких розовых кристаллов.

Пример 109

Метансульфонат 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

{6-[2-(2-Хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(2,2-диметилпропил)амин (240 мг, 0,50 ммоль) растворяют в 100% этаноле (10 мл) и добавляют дигидрат дихлорида олова(II) (564 мг, 2,50 ммоль, 5,0 экв.). Реакционную смесь нагревают до расходования исходного вещества. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры, медленно гасят насыщенным водным NaHCO₃. К гашеной реакционной смеси добавляют целит® и суспензию фильтруют на подушке целита® с промыванием водой и этилацетатом. Слои разделяют и органический слой промывают насыщенным водным NaCl. К образовавшемуся твердому веществу добавляют 10% водный этанол и бромид циана (106 мг, 1,00 ммоль, 2,0 экв.) и смесь перемешивают на протяжении ночи. Реакционную смесь гасят насыщенным водным NaHCO₃ (20 мл). Для растворения всех твердых веществ добавляют этилацетат и воду. Органический слой три раза промывают насыщенным водным NaCl, сушат Na₂ SO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении при элюировании с градиентом 1,5-3% (2 М аммиак в МеОН)/CH₂Cl₂, получая при этом 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин в виде желто-зеленого твердого вещества (196 мг, выход 60%).

Раствор 5-[2-(2-хлор-6-фторфенил)-5-фенил-3Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в смеси метанол-вода обрабатывают метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией, получая при этом указанное в заголовке соединение.

МС (ESI): m/z = 475,2 (M+H) ⁺.

Пример 110

Метансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

{6-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1(R),2,2-триметилпропил)амин (558 мг, 1,27 ммоль) растворяют в 100% этаноле (15 мл) и добавляют дигидрат дихлорида олова(II) (1,4 г, 6,3 ммоль, 5 экв.). Реакционную смесь нагревают до расходования исходного вещества. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры, медленно гасят насыщенным водным NaHCO₃. Добавляют целит® и суспензию фильтруют на подушке целита® с промыванием водой и этилацетатом. Слои разделяют и органический слой промывают насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат Na ₂SO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. К остатку добавляют 10% водный этанол (13 мл) и бромид циана (202 мг, 1,99 ммоль, 1,5 экв.) и смесь перемешивают на протяжении ночи. Добавляют еще 1,5 экв. бромида циана, смесь перемешивают 3 ч и гасят насыщенным водным NaHCO ₃ (20 мл). Для растворения всех твердых веществ добавляют этилацетат и воду. Органический слой три раза промывают насыщенным водным NaCl, сушат Na₂SO ₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении при элюировании с градиентом 1,5-4% (2 М аммиак в МеОН)/CH ₂Cl₂, получая при этом 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин в виде рыжевато-коричневого стеклообразного вещества (158 мг, выход 29%).

Раствор 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в смеси метанол-вода обрабатывают метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией, получая при этом указанное в заголовке соединение.

МС (ESI): m/z = 435,2 (M+H) ⁺.

Пример 111

Метансульфонат 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

{6-[2-(2,6-Дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-нитропиридин-2-ил}-(1(R),2,2-триметилпропил)амин (673 мг, 1,4 ммоль) растворяют в 100% этаноле (15 мл) и добавляют дигидрат дихлорида олова(II) (1,5 г, 6,8 ммоль, 5 экв.). Реакционную смесь нагревают до тех пор, пока исходное вещество не будет израсходовано. Реакционный раствор охлаждают до комнатной температуры, медленно гасят насыщенным водным NaHCO₃. К гашеной реакционной смеси добавляют целит® и суспензию фильтруют на подушке целита® с промыванием водой и этилацетатом. Слои разделяют и органический слой промывают насыщенным водным NaCl. Органический слой сушат Na₂SO ₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. К остатку добавляют 10% водный этанол (14 мл) и бромид циана (216 мг, 2,04 ммоль, 1,5 экв.) и смесь перемешивают на протяжении ночи. Смесь гасят насыщенным водным NaHCO₃ (20 мл). Для растворения всех твердых веществ добавляют этилацетат и воду. Органический слой промывают насыщенным водным NaCl, сушат Na₂SO₄, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографии на силикагеле при среднем давлении при элюировании с градиентом 1,5-3% (2 М аммиак в МеОН)/CH₂Cl ₂, получая при этом 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин в виде рыжевато-коричневого стеклообразного вещества (289 мг, выход 43%).

Раствор 5-[2-(2,6-дифторфенил)-5-(4-фторфенил)-3Н-имидазол-4-ил]-3-(1(R),2,2-триметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина в смеси метанол-вода обрабатывают метансульфоновой кислотой с последующей лиофилизацией, получая при этом указанное в заголовке соединение.

МС (ESI): m/z = 491,2 (M+H) ⁺.

Пример 112

Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Бромид 5-бром-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламмония

Смесь 50 мас.% водного раствора фосфорноватистой кислоты (0,555 г) и 5% Pt/C (2,5 г) в Н₂О (20 мл, 0,4 объема) перемешивают в течение 10 минут. Добавляют твердый VO(acac)₂ (0,420 г, 1,20 ммоль) и темную суспензию перемешивают в течение дополнительных 5 минут. Эту суспензию загружают в смесь 2-(2,2-диметилпропиламино)-3-нитро-6-бромпиридина (50,00 г, 173,61 ммоль) в толуоле (500,00 мл) в автоклаве на один литр при температуре окружающей среды. Автоклав нагревают до 75°С в присутствии Н₂ при 35 фунт/кв. дюйм (2,38 атмосфер) с перемешиванием при 100 об./мин. Спустя 3 часа реакционную смесь фильтруют через подушку Hyflo Super Cel® и фильтрат концентрируют при пониженном давлении до половины общей массы (273,0 г) раствора. Раствор перемешивают и добавляют бромид циана (18,4 г, 173,70 ммоль) с последующим добавлением МеОН (250 мл). Через 18 ч смесь нагревают до 40°С и концентрируют при пониженном давлении до тех пор, пока посредством перегонки с коротким путем дистилляции не соберется 350 мл растворителя. Образовавшуюся суспензию разбавляют МТВЕ (350 мл, 7,0 об.), охлаждают до 0°С и перемешивают 1 ч. Твердое вещество отделяют фильтрованием, промывают МТВЕ (75 мл, 1,5 об.) и сушат при пониженном давлении при 40°С в течение 24 ч, получая при этом 48,06 г (76%) требуемого соединения в виде белого твердого вещества.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d ₆): 0,96 (9Н, с), 3,91 (2Н, с), 7,45 (1Н, д, J=8,1 Гц), 7,64 (1Н, д, J=8,1 Гц), 8,73 (2Н, ушир. с).

МС (ES-): m/z = 282,0; (М-1)^-.

3-(2,2-Диметилпропил)-5-(4-фторфенилэтинил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин

Триэтиламин (27,10 г, 267,80 ммоль) добавляют к смеси бромида 5-бром-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламмония (25,00 г, 68,67 ммоль) в этаноле (25 мл) и толуоле (75 мл). Смесь нагревают до 75-75°С и затем добавляют Pd(OAc) ₂ (0,15 г, 0,69 ммоль), трифенилфосфин (0,72 г, 2,75 ммоль) и иодид меди(I) (0,13 г, 0,69 ммоль). Добавляют 2/3 раствора 4-фторфенилацетилена (12,37 г, 103,00 ммоль) в толуоле (50 мл, 2,0 об.) на протяжении 15 минут. Спустя 1 ч добавляют оставшийся раствор 4-фторацетилена. Спустя 3 ч добавляют дополнительный 4-фторфенилацетилен (1,5 г, 12,86 ммоль). После дополнительного часа EtOH удаляют дистилляцией. Реакционную смесь охлаждают до <40°С и добавляют воду (25 мл). Охлаждают до комнатной температуры. Суспензию фильтруют и осадок промывают водой (25 мл) и 2×25 мл толуола. Его сушат при пониженном давлении при 45-50°С, получая при этом 19,3 г (87%) требуемого соединения.

Стадия очистки

К объединенным порциям 3-(2,2-диметилпропил)-5-(4-фторфенилэтинил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (37,30 г) добавляют метанол (1200 мл) и смесь нагревают для кипячения с обратным холодильником. Добавляют активированный уголь (3,73 г, 10 мас.%) и смесь кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. Белую суспензию фильтруют в горячем состоянии, затем к фильтрату добавляют воду (375 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре. Твердые вещества отделяют фильтрованием, промывают 2×100 мл воды и сушат при пониженном давлении при 45-50°С, получая при этом 30,0 г (80%) требуемого соединения.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 0,99 (9H, с), 3,91 (2H, с), 6,98 (2H, с), 7,25-7,32 (3H, м), 7,40 (1H, д, J=7,8 Гц), 7,62-7,67 (2H, м).

1-[2-Амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-дион

MgSO₄ (82,7 г, 687,05 ммоль) и NaHCO ₃ (14,4 г, 171,41 ммоль) в деионизированной воде (1524 мл) на протяжении 5 минут добавляют к перемешиваемому раствору 3-(2,2-диметилпропил)-5-(4-фторфенилэтинил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (110,76 г, 343,57 ммоль) в ацетоне (3665 мл). Добавляют Hyflo Super Cel® (171,1 г) с последующим добавлением KMnO ₄ (108,6 г, 687,21 ммоль). Смесь нагревают при 40-45°С в течение 3 часов и затем охлаждают до комнатной температуры. Добавляют насыщенный водный Na₂SO ₃ (1800 мл) с последующим добавлением EtOAc (3500 мл) и воды (3500 мл). Смесь фильтруют через слой Hyflo Super Cel®, промывая смесью 9% МеОН/EtOAc (2860 мл). Слои фильтрата разделяют, водный слой обратно экстрагируют 2×2750 мл EtOAc. Органические экстракты объединяют, промывают 2×2380 мл насыщенного водного хлорида натрия (4760 мл) и сушат над Na₂ SO₄. Раствор фильтруют, затем концентрируют при пониженном давлении, получая при этом темное красно-коричневое твердое вещество (185 г). Добавляют ацетон (650 мл), суспензию фильтруют, собранное твердое вещество промывают 3×167 мл МТВЕ (501 мл) и сушат при пониженном давлении и 45°С, получая при этом 106,79 г (88%) требуемого соединения в виде светло-желтого твердого вещества.

¹Н-ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆): 0,72 (9H, с), 3,71 (2H, с), 7,47 (2H, дд, J ₁=7,5 Гц, J₂=8,5 Гц), 7,56 (2H, ушир. с), 7,65 (1H, д, 8,0 Гц), 7,97-7,99 (2H, м), 8,02 (1H, д, J=8,0 Гц).

MS(ES+): m/z = 355,4 (M+1)⁺

5-[2-трет-Бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламин

Смесь 1-[2-амино-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-5-ил]-2-(4-фторфенил)этан-1,2-диона (25,33 г, 71,48 ммоль), NH₄OAc (82,3 г, 1,04 моль) и триметилацетальдегида (13,0 мл, 116 ммоль) в МеОН (650 мл) нагревают для кипячения с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 20 ч. Смесь концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в EtOAc (2000 мл), деионизированной воде (500 мл) и насыщенном водном NaHCO₃ (1000 мл). Слои разделяют и органический слой промывают 1 л насыщенного водного NaHCO₃ (1000 мл), деионизированной водой (500 мл) и насыщенным водным хлоридом натрия (500 мл), затем сушат над Na₂SO₄ . Органический слой фильтруют и концентрируют при пониженном давлении, получая при этом 20,08 г темного твердого вещества/пены. Добавляют МТВЕ (60 мл) и смесь нагревают для кипячения с обратным холодильником. Добавляют гексан (290 мл) на протяжении 5 мин, затем суспензию охлаждают до комнатной температуры. Суспензию перемешивают 1,25 ч, фильтруют, собранное твердое вещество промывают гексаном (80 мл) и сушат при пониженном давлении и 45°С на протяжении ночи, получая при этом 17,31 г (58%) требуемого соединения в виде легкого рыжевато-коричневого твердого вещества.

Стадия очистки

Смесь объединенных порций 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (55,9 г) в МТВЕ (165 мл) нагревают для кипячения с обратным холодильником. Добавляют гексан (800 мл) и суспензию охлаждают до комнатной температуры. Твердое вещество отделяют фильтрованием, промывают гексаном (200 мл) и сушат при пониженном давлении и 45°С, получая при этом 54,35 г (97%) требуемого соединения в виде легкого рыжевато-коричневого твердого вещества.

¹Н-ЯМР (300 МГц, CD₃OD): 0,87 (9H, с), 1,45 (9H, с), 3,79 (2H, с), 7,05 (2H, дд, J₁=8,7 Гц, J₂=9,0 Гц), 7,30 (1H, ушир. с), 7,40-7,50 (3H, м).

MS(ES+): m/z = 421,4 (M+1)⁺.

Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Раствор 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (10,0853 г, 23,98 ммоль) в МеОН (24 мл) нагревают до 40°С. Источник нагрева удаляют и по каплям добавляют метансульфоновую кислоту (3,14 мл, 47,91 ммоль) в EtOAc (10 мл) на протяжении 3,5 минут. Смесь перемешивают в течение 1 ч при охлаждении до комнатной температуры. Добавляют EtOAc (20 мл) и смесь перемешивают 5 минут. Смесь фильтруют, твердое вещество промывают 2×50 мл EtOAc и сушат при пониженном давлении и 45-50°С в течение 2,5 ч, получая при этом 12,62 г (86%) указанного в заголовке соединения в виде белого порошкообразного твердого вещества.

¹H-ЯМР (500 МГц, CD₃ OD): 0,94 (9H, с), 1,65 (9H, с), 2,73 (6H, с), 3,91 (2H, с), 7,31-7,35 (2H, м), 7,63-7,67 (2H, м), 7,69 (1H, д, J=8,5 Гц), 7,87 (1H, д, J=8,5 Гц).

MS(ES+): m/z = 421,5 (M+1)⁺.

Пример 113

Диметансульфонат 5-[2-трет-бутил-5-(4-фторфенил)-1Н-имидазол-4-ил]-3-(2,2-диметилпропил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина

Метансульфонат 2-амино-3-(2,2-диметилпропил)-5-[2-(4-фторфенил)-2-оксоацетил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-1-ия

Смесь 3-(2,2-диметилпропил)-5-(4-фторфенилэтинил)-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-2-иламина (184,7 г, 0,573 ммоль), муравьиной кислоты (923,0 мл), метансульфоновой кислоты (110,0 г, 1,14 ммоль), ДМСО (224,0 г, 2,87 моль) и 48% HBr (9,7 г, 0,057 моль) нагревают при осторожном кипячении с обратным холодильником (105-107°С) с устройством для дистилляции на протяжении ночи. Летучую часть (550 мл) отгоняют при пониженном давлении. Остаток охлаждают приблизительно до 65°С и по каплям добавляют воду (1,2 л), содержащую Na₂ S₂O₃ (18,0 г, 0,114 моль), при энергичном перемешивании, поддерживая температуру приблизительно при 65°С. Реакционную смесь охлаждают до температуры окружающей среды (приблизительно 3 часа), затем на ледяной бане (приблизительно 30 минут). Твердое вещество отделяют фильтрованием, промывают водой (200 мл) и сушат в вакуумном сушильном шкафу приблизительно при 50°С, получая при этом 217,0 г (84%) требуемого соединения.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): 9,08 (с, 2H); 8,18 (д, J=6,0 Гц, 2H); 7,92-7,98 (м, 3H); 7,40 (т, J=8,0 Гц, 2H); 3,67 (с, 2H); 2,40 (с, 2H); 0,66 (с, 9H).

MS(ES⁺): m/z = 355,4 (M+1)⁺.

Образование кольца

Смесь метансульфоната 2-амино-3-(2,2-диметилпропил)-5-[2-(4-фторфенил)-2-оксоацетил]-3Н-имидазо[4,5-b]пиридин-1-ия (0,62 моль), этанола (2,5 л), ацетата аммония (500,0 г, 6,2 моль) и триметилацетальдегида (84,0 г, 0,93 моль) нагревают приблизительно при 70°С на протяжении ночи. Летучие компоненты выпаривают. Добавляют этилацетат (4,0 л) и воду (3,0 л) с последующим добавлением 1,0 н. NaOH (1,2 л) и смесь перемешивают в течение 20-30 минут при комнатной температуре. Фазы разделяют и водную фазу экстрагируют этилацетатом (2,0 л). Этилацетатные фазы объединяют, промывают дважды 10 объемами насыщенного водного хлорида натрия, обрабатывают Darco (30,0 г, 10 мас.%). Смесь фильтруют через подушку целита и фильтрат концентрируют приблизительно до 1,0 л. Добавляют этанол (2,50 л) и смесь нагревают приблизительно до 65°С и быстро в виде капель добавляют метансульфоновую кислоту (150,0 г, 1,55 моль) в этилацетате (500 мл), поддерживая температуру приблизительно при 65°С в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры с перемешиванием в течение более чем 2 часов. Суспензию фильтруют, твердое вещество промывают этилацетатом (500 мл) и сушат в вакуумном сушильном шкафу приблизительно при 45°С, получая при этом 226,0 г указанного в заголовке соединения.

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d ₆): 8,99 (с, 2H), 7,90 (д, 1H, J=9,0 Гц); 7,86 (д, 1H, J=9,0 Гц); 7,60 (дд, 2H, J=9,0 Гц), 7,34 (дд, 2H, J=9,0 Гц); 3,68 (с, 2H); 2,35 (с, 6H); 1,51 (с, 9H); 0,71 (с, 9H).

MS(ES ⁺): m/z = 421,5 (M+1)⁺ .

Пример 114

Общая методика получения затравочных кристаллов

Эталонный планшет приготавливают с 250 мкл свободного основания рассматриваемого соединения в метаноле (0,1 М), добавленного ко всем лункам, расположенным в 96-луночном планшете. Ряд кислот распределяют в каждую лунку в количестве одного и двух молярных эквивалентов. Растворители выпаривают из всех 96 лунок с применением испарителя Genevac Series II, в результате чего в планшете эталонов остается твердый остаток. Ряд растворителей распределяют в каждую из этих лунок через крышку-матрицу и затем нагревают до 55°С с перемешиванием и дают возможность достигнуть равновесие в течение 60-90 минут приблизительно при 55°С. Каждый образец затем фильтруют в горячем состоянии и переносят в соответствующие лунки в планшете выпаривания, планшете осаждения и планшете охлаждения. Планшет для выпаривания приготавливают переносом 200 мкл фильтрата из планшета эталонов с применением нагретых до 55°С шприцев в титрационный планшет с открытыми лунками и затем планшет выдерживают для выпаривания содержимого досуха на протяжении ночи при комнатной температуре и влажности окружающей среды. Планшет для осаждения приготавливают добавлением 100 мкл фильтрата из планшета эталонов с применением нагретых до 55°С шприцев в закрытый 96-луночный титрационный планшет, где каждая лунка содержит в качестве антирастворителя 200 мкл гептана или 2-пропанола. После достижения равновесия в течение периода девяти часов при комнатной температуре избыточный раствор удаляют впитыванием его предварительно нарезанной фильтровальной бумагой Ватмана. Планшет для охлаждения приготавливают переносом 200 мкл фильтрата из планшета эталонов в отдельные лунки с применением нагретых до 55°С шприцев в закрытый 96-луночный титрационный планшет и охлаждением экспоненциально от 55 до 10°С на протяжении периода 8 часов. Собирают фотомикроснимки материала на дне каждой лунки в 96-луночных планшетах с применением микроскопа с инвертированным падающим лучом Zeiss Axiovert 200M с объективом 2,5Х. Если вещество является кристаллическим, оно проявляет двойное лучепреломление, которое обнаруживают как белый цвет на темном фоне. Аморфные твердые вещества проявляются в виде темного снимка или в виде темных вкраплений или колец.

Ингибирование киназы р-38

Получения стандартных растворов

Буферный раствор для киназы получают смешением 2,5 мл 1 М Трис-HCl (рН 7,5), 0,1 мл 1 М дитиотреита, 1,0 мл 1 М хлорида магния и 300 мкл 1% тритона Х-100 и разведением смеси до 100 мл водой. 84 мл этого буферного раствора киназы смешивают с 16 мл ДМСО для получения 16% раствора в ДМСО.

200 мкМ раствора АТФ получают добавлением 102,6 мкл 10 мМ водного АТФ, 25 мкл ³²Р-АТФ и 163,5 мкл 4 мМ водного, являющегося эпидермальным фактором роста пептида 661-681 (Biomol, Catalog #P-121) в 5 мл буферного раствора для киназы.

Раствор фермента киназы р-38 получают растворением 9,5 мкл концентрированного раствора фермента (250 нг фермента р-38/мл раствора буфера для киназы) в 1536 мкл буферного раствора для киназы.

Приготовление образца

80 мкМ раствор каждого испытуемого соединения и контрольного соединения получают растворением 2 мкл 10 мМ исходного раствора соответствующих соединений в диметилсульфоксиде в 248 мкл 16% раствора в ДМСО в 96-луночном микротитрационном планшете Costar. Планшет помещают на автоматизированное устройство Tecan Genesis для манипулирования жидкостью для серийного разведения 1:3.

Анализ

10 мкл серийно разведенного соединения помещают 96-луночным автоматизированным устройством для манипулирования жидкостью Beckman Multimek в аналитический планшет. 20 мкл 200 мкМ раствора АТФ добавляют 8-канальным устройством для жидкостного манипулирования Titertek Multidrop. 10 мкл раствора фермента киназы р-38 переносят в аналитический планшет с применением Multimek. Смеси дают возможность реагировать в течение 40 мин при 30°С и затем реакцию останавливают добавлением 60 мкл свежеполученной 5% ледяной АсОН с применением Multidrop. 80 мкл этого раствора переносят в планшет "МАРН" с применением Multimek. Растворам планшетов дают возможность отверждаться в течение 30 мин при к.т. и затем промывают/аспирируют на устройство для экстракции Titertek MAP свежеполученной 0,5% ледяной АсОН (1×300 мкл, 2×200 мкл). Лунки подвергают блоттингу и с применением Multidrop добавляют 100 мкм сцинцилляционной жидкости MicroScint-20 (Packard Bioscience). Планшеты оставляют для перемешивания в течение 30 мин и ³³ Р-изотоп подсчитывают сцинтилляционным счетчиком PE/Wallac Microbeta Trilux.

Все являющиеся примерами соединения сначала испытывали при 10 концентрациях (20 мкМ - 1 нМ с применением серийного разведения 1:3). Соединения с величинами IC₅₀ меньше, чем 25 нМ, снова испытывали при начальных концентрациях 2 мкМ - 0,1 нМ (серийные разведения 1:3). Величины IC ₅₀ вычисляли (программное обеспечение IDBS ActivityBase) для каждого соединения с применением нелинейной регрессии. Все являющиеся примерами соединения испытывали по существу так, как описано выше, и было обнаружено, что они ингибируют фермент киназу р-38 с IC₅₀ 5 мкМ. Конкретно, нижеследующие соединения испытывали по существу так же, как описано выше, и было обнаружено, что они ингибируют фермент киназу р-38, как показано ниже в таблице.

ПРИМЕР	IC 50 (нМ)
6	7,2
9	4,6
11	2,3
12	3,6
13	3,3
18	3,6
19	3,2

Ингибирование TNF- in vitro

Мышиные перитонеальные макрофаги

1 мл тиогликолятного бульона (5,0 г дрожжевого экстракта, 15,0 г казитона или триптиказы, 5,0 г декстрозы, 2,5 г хлорида натрия, 0,75 г L-цистина, 0,5 г тиогликолята натрия, 1,0 мг резазурина и 0,75 г агара в 1,0 л дистиллированной воды) инъецируют в брюшинную полость самок мышей Balb/C. В день 4 или 5 после инъекции мышей умерщвляют и затем инъецируют им внутрибрюшинным путем 4 мл среды RPMI-1640 (Bio Whittaker) и перитонеальные макрофаги отбирают шприцем.

Продуцирование цитокина

Мышиные перитонеальные макрофаги подсчитывают гемоцитометром и содержание их регулируют до 5×10⁵ клеток/лунку в 96-луночных планшетах в среде RPMI-1640 10% фетальной бычьей сывороткой. 200 мкл/лунку помещают в 96-луночные планшеты и клеткам дают возможность осаждаться и прилипать ко дну лунки в течение, по меньшей мере, 3 ч. Испытуемое соединение или стандартный ингибитор киназы р-38 предварительно обрабатывают с применением ряда 8 концентраций в течение 1 ч при 37°С (20 мкл/лунку). Клетки обрабатывают смесью 50 нг/мл липополисахарида (LPS) и 10 Е/мл интерферона- в течение 18 ч при 37°С (20 мкл/лунку). Кондиционированную среду собирают и анализируют на продуцирование TNF- с применением методики Luminex.

Анализ для детектирования TNF- /Luminex (Bio-Rad Bio-Plex Kit - Catalog #171-G12221)

Лиофилизованный, предварительно перемешанный стандарт TNF- (1 стандартная пробирка/два 96-луночных планшета) пересоздают 50 мкл стерильной воды (500000 пг/мл). Образцы энергично перемешивают в течение 5 секунд, инкубируют на льду в течение 30 мин и энергично перемешивают в течение 5 секунд перед применением. Набор из двенадцати 1,5 мл пробирок метят #1-thru #12 и затем количества клеточных сред, указанные ниже, добавляют в соответствующие пробирки (стандартные концентрации являются следующими: 50000; 25000; 12500; 6250; 3125; 1562,5; 781,3; 390,6; 195,3; 97,7; 48,8 и 24,4 пг/мл). Предварительно перемешанные гранулы, конъюгированные с антителами против цитокинов, энергично перемешивают (25×) в течение 30 секунд. Конъюгированные с гранулами антитела против цитокина разводят до концентрации 1X с применением буфера для анализа 1X Bio-Plex. Для каждого планшета 240 мкл предварительно перемешанных гранул добавляют к 5760 мкл буфера для анализа Bio-Plex. 96-Луночный фильтрационный планшет Millipore блокируют 100 мкл/лунку блокирующего буфера. Блокирующий буфер фильтруют с применением системы фильтрования Millipore и затем вытирают полотенцем досуха. На фильтрационном планшете проводят 2 промывания с 100 мкл/лунку буфера для анализа Bio-Plex и вытирают полотенцем досуха. Гранулы, конъюгированные с антителами против цитокина 1Х, интенсивно перемешивают в течение 15 секунд и 50 мкл добавляют к каждой лунке. Их фильтруют и вытирают полотенцем. Проводят 2 промывания на планшетах с 100 мкл/лунку буфера для промывки Bio-Plex. И снова, проводят фильтрование и вытирают полотенцем досуха. 50 мкл образца или стандарта добавляют к каждой лунке для образца. Планшет инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 30 мин при режиме 3, и затем помещают в холодильник на ночь. Проводят 3 промывания с буфером для промывания Bio-Plex. Фильтруют и вытирают полотенцем досуха. Антитело для детекции цитокина получают (˜10 мин перед применением) для каждого планшета и 60 мкл предварительно перемешанного исходного раствора антитела для детекции цитокина добавляют к 5940 мкл разбавителя для детекции антитела Bio-Plex. Добавляют 50 мкл детектирующего цитокин антитела, и смесь инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 30 мин при режиме 3. Проводят 3 промывания буфером для промывания Bio-Plex. Проводят фильтрование и вытирание полотенцем досуха. Strept-PE (стрептавидин-РЕ) (за ˜10 минут перед применением) получают для каждого планшета и добавляют 60 мкл - 5940 мкл буфера для анализа Bio-Plex. 50 мкл стрептавидина-РЕ добавляют к каждой лунке и инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 10 мин при режиме 3. Проводят 3 промывания c буфером для промывания Bio-Plex. Проводят фильтрование. Гранулы снова суспендируют в 100 мкл/лунку буфера для анализа Bio-Plex. Считывание данных стандартов и образцов проводят на аппарате Luminex. Эти показатели интенсивности затем превращают в единицы пикограммы/миллилитр на основе 12-точечной стандартной кривой, построенной в двух повторностях с применением четырехпараметрического логистического регрессионного метода (Bio-Plex Manager 2,0, Bio-Rad), и вычисляют IC₅₀.

Репрезентативные члены выбранных в качестве примеров соединений испытывали по существу так же, как описано выше, и было показано, что они подавляют TNF- in vitro с IC₅₀ < 100 нМ. Конкретно, нижеследующие соединения испытывали по существу так же, как описано выше, и было обнаружено, что они подавляют TNF- in vitro, как указано ниже в таблице.

ПРИМЕР	IC 50 (нМ)
6	<9,1
9	1,2
11	2,4
13	<9,1
18	<9,1
19	<9,1
104	6,3

Ингибирование TNF- in vivo

Соединения вводят перорально (100, 30, 10 и 3 мг/кг) самкам мышей Balb/c (5 мышей/доза). Спустя 2 ч внутривенно вводят липополисахарид (LPS, серотип 0111:В4 E. Coli, 5 мг/кг) в вену хвоста каждой мыши. Спустя один час после введения LPS мышей асфиксируют ингаляцией СО₂ и вызывают у них кровотечение посредством сердечной пункции.

Анализ для детектирования TNF- /Luminex (набор Bio-Rad Bio-Plex - Catalog #171-G12221)

Лиофилизованный, предварительно перемешанный стандарт TNF- (1 стандартная пробирка/два 96-луночных планшета) пересоздают 50 мкл стерильной воды (500000 пг/мл). Образцы энергично перемешивают в течение 5 секунд, инкубируют на льду в течение 30 мин и энергично перемешивают в течение 5 секунд перед применением. Набор из двенадцати 1,5 мл пробирок метят #1-thru #12, и затем количества клеточных сред, указанные ниже, добавляют в соответствующие пробирки (стандартные концентрации являются следующими: 50000; 25000; 12500; 6250; 3125; 1562,5; 781,3; 390,6; 195,3; 97,7; 48,8 и 24,4 пг/мл). Предварительно перемешанные гранулы, конъюгированные с антителами против цитокина (25×), энергично перемешивают в течение 30 секунд. Гранулы, конъюгированные с антителами против цитокина, разбавляют до концентрации 1X с применением буфера для анализа 1X Bio-Plex. Для каждого планшета 240 мкл предварительно перемешанных гранул добавляют к 5760 мкл буфера для анализа Bio-Plex. 96-луночный фильтровальный планшет Millipore блокируют 100 мкл/лунку блокирующего буфера. Фильтруют через блокирующий буфер с применением системы фильтрования Millipore. Вытирают полотенцем досуха. На фильтровальном планшете проводят 2 промывания с 100 мкл/лунку буфера для анализа Bio-Plex и вытирают полотенцем досуха. Гранулы, конъюгированные с антителами против цитокина 1Х, интенсивно перемешивают в течение 15 секунд и 50 мкл добавляют к каждой лунке. Проводят фильтрование и вытирание полотенцем. Проводят 2 промывания на планшетах 100 мкл/лунку буфера для промывания Bio-Plex. Проводят фильтрование и вытирают полотенцем досуха. 25 мкл образца сыворотки и 25 мкл разбавителя (Bio-Rad) или 50 мкл стандарта добавляют к каждой лунке для образца. Планшет инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 30 мин при режиме 3, и затем помещают в холодильник на ночь. Проводят 3 промывания с буфером для промывания Bio-Plex. Фильтруют и вытирают полотенцем досуха. Детектирующее цитокин антитело получают (˜10 мин перед применением) для каждого планшета, 60 мкл предварительно перемешанного исходного раствора детектирующего цитокин антитела добавляют к 5940 мкл разбавителя для детектирующего антитела Bio-Plex. Добавляют 50 мкл детектирующего цитокин антитела и смесь инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 30 мин при режиме 3. Проводят 3 промывания буфером для промывания Bio-Plex. Проводят фильтрование и вытирание полотенцем досуха. Стрептавидин-PE (за ˜10 минут перед применением) получают для каждого планшета, добавляют 60 мкл -5940 мкл буфера для анализа Bio-Plex. 50 мкл стрептавидина-РЕ добавляют в каждую лунку, и смесь инкубируют в течение 60 секунд при к.т. на шюттль-аппарате, защищенном от света, при режиме 6 и затем в течение 10 мин при режиме 3. Проводят 3 промывания буфером для промывания Bio-Plex. Проводят фильтрование. Гранулы снова суспендируют в 100 мкл/лунку буфера для анализа Bio-Plex. Считывание данных стандартов и образцов проводят на аппарате Luminex. Эти показатели интенсивности затем превращают в единицы пикограммы/миллилитр на основе 12-точечной стандартной кривой, построенной в двух повторностях с применением четырехпараметрического логистического регрессионного метода (Bio-Plex Manager 2,0, Bio-Rad), и вычисляют IC ₅₀.

Репрезентативные члены выбранных в качестве примеров соединений испытывали по существу так же, как описано выше, и было показано, что они подавляют TNF- in vivo с IC₅₀ < 100 мг/кг. Соединение примера 104 испытывали по существу так же, как описано выше, и показали, что оно имеет IC₅₀ < 1 мг/кг.

Влияние на индуцированный внутрисуставным LPS TNF-

Внутрисуставная инъекция LPS в лодыжки крыс индуцирует синтез TNF- , который можно измерить в синовиальной промывной жидкости. Высокие уровни TNF- поддаются детектированию через 2 часа. Поскольку сустав является местом, где развивается артрит, эта модель может быстро определить, оказывает ли перорально введенное соединение влияние на воспалительную реакцию в синовиальной оболочке.

Шесть самок крыс Lewis (150-200 г) помещают в каждую группу обработки. Животным перорально дают наполнитель (1% Na-карбоксиметилцеллюлоза - 0,25% твин 80) или испытуемое соединение (1 мг/кг, 3 мг/кг, 10 мг/кг и 30 мг/кг). Спустя один час 10 мкл LPS (10 мкг) вводят внутрисуставным путем в правую лодыжку каждой крысы, тогда как левая лодыжка получает 10 мкл физиологического раствора. Спустя два часа каждую лодыжку подвергают лаважу 100 мкл физиологического раствора. Жидкость лаважа собирают и сохраняют при -80°С.

Группа #1: Наполнитель (1% NaCMC-0,25% Твина 80, 1 мл, РО).

Группа #2: Испытуемое соединение (1 мг/кг, 1 мл, РО).

Группа #3: Испытуемое соединение (3 мг/кг, 1 мл, РО).

Группа #4: Испытуемое соединение (10 мг/кг, 1 мл, РО).

Группа #5: Испытуемое соединение (30 мг/кг, 1 мл, РО).

TNF- измеряют коммерчески доступным набором ELISA (R&D, RTA00). Обработка соединением примера 104 вызывала дозазависимое ингибирование синтеза TNF- с TMED₅₀ 0,54 мг/кг.

Мишень меланома B16F10 (фосфорилирование MARKAP-K2)

Клеточную линию меланомы B16F10 получают из Американской коллекции типовых культур, Rockville, MD. Клетки культивируют в среде RPMI-1640, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой. Клетки, выращенные in vitro, собирают во время их экспоненциальной фазы роста мягкой трипсинизацией, промывают два раза в среде и снова суспендируют в среде RPMI-1640 без сыворотки. Число жизнеспособных клеток определяют с применением гемоцитометра и регулируют до 1×10 ⁷/мл. Опухолевые клетки инъецируют подкожно нормальным мышам С57В16. Объем инокулума на мышь составляет 2 мл (2000000 клеток). Когда размер опухолей достигает 300-500 мг, мышей применяют для исследований по направленному ингибированию либо за фиксированное времени (2,5 часа) после пероральной обработки соединением, либо фармакодинамическими изучениями, когда опухоли собирают при многочисленных моментах времени (например, спустя 3, 6, 9, 12, 15 и 18 ч) после пероральной обработки соединением.

Экстракция белка и иммуноблот-анализ

Опухоли, собранные, как описано выше, сразу быстро замораживают в жидком азоте и сохраняют при -80°С. Опухолевые ткани гомогенизируют на льду с применением гомогенизатора Daunce в буфере для экстракции (25 мМ Трис, рН 7,5, содержащий следующие ингибиторы протеазы: 10 мкг/мл лейпептина, 10 мкг/мл соевого ингибитора трип-химотрипсина, 10 мкг/мл N-тозил-L-фенилаланинхлорметилкетона, 10 мкг/мл апротинина, метилового эфира N -п-тозил-L-аргинина, 7 мМ бензамидина, 0,3 мМ фенилметилсульфонилфторида и две таблетки полного коктейля ингибитора протеазы Roche; следующие ингибиторы фосфатазы: 60 мМ бета-глицерофосфата, 1 мМ ванадат натрия, 10 мМ фторид натрия, 20 мМ п-нитрофенилфосфат, 1 мкМ окадиевая кислота, 1 мкМ микроцистин, 2,5 мМ пирофосфат натрия; и 1 мМ дитиотреит, 15 мМ EDTA, 5 мМ EGTA, 1% тритон Х100 и 150 мМ NaCl). Лизаты ткани осветляют центрифугированием в охлажденной микроцентрифуге при 14000 об./мин и при 1°С в течение 20 мин. Супернатанты переносят в свежие пробирки микроцентрифуги, предварительно охлажденные на льду, и быстро снова замораживают в жидком азоте или сухом льду. После быстрого размораживания приблизительно до 80% завершения в тепловатой воде образцы помещают на лед для полного размораживания. Образцы снова центрифугируют при 14000 об./мин и при 1°С в течение 15 мин. Супернатант переносят в свежие, предварительно охлажденные пробирки микроцентрифуги и концентрации белков измеряют с применением реагентов анализа белка Bio-Rad, в которых применяют альбумин бычьей сыворотки в качестве белкового стандарта.

Белковые экстракты уравновешивают буфером для экстракции. Равный объем буфера образца 2Х SDS добавляют к белковым экстрактам и кипятят на водяной бане в течение 5 мин. 100 мкг белкового экстракта на образец применяют для электрофореза на 4-20% градиентном геле SDS-PAGE и переносят на нитроцеллюлозные (NC) мембраны. Мембраны NC блокируют в 5% BSA в TBST (20 мМ Трис, рН 7,5, 500 мМ NaCl, 0,05% твина 20 и 0,02% азида натрия) в течение 1 ч. Мембраны затем инкубируют в первичном антителе при 1:1000 с 5% BSA в TBST на протяжении ночи на шюттль-аппарате с 80 об./мин при 4°С. Мембраны промывают 4×TBST, 10 мин каждый раз. Мембраны затем инкубируют в течение 40 мин с конъюгатом вторичного антитела HRP (пероксидаза из хрена) при разведении 1:10000 в 3% обезжиренном молоке в TBST и снова промывают 4 раза TBST, каждый раз 10 мин. Иммуноблотты затем визуализуют усиленной хемилюминесценцией (ECL, Amersham) согласно инструкциям изготовителя. Все первичные антитела покупают у Cell Signaling, и конъюгаты вторичного антитела HRP получают от Amersham. Гели, мембраны и аппаратура, применяемые для электрофореза и Вестерн-блоттинга, покупали у Invitrogen. Представляющие интерес полосы белка количественно определяли на пленках с применением Kodak Image Station 1000.

Соединение примера 104 испытывали по существу так же, как описано выше, и было показано, что оно имеет TMED₅₀ = 3,59 мг/кг.

Крысиная модель эффективности артрита, индуцированного коллагеном

Самок крыс Lewis ( 190 г, Charles River Labs) иммунизируют бычьим коллагеном типа II (2 мг/мл), эмульгированным равным объемом адъюванта (гидроксид алюминия). Крыс иммунизируют приблизительно 0,3 мг эмульсии, введенной внутрикожно на спине около основания хвоста. Всех животных снова иммунизировали спустя 7 дней согласно тому же протоколу. У животных начинает развиваться артрит (характеризующийся опуханием и покраснением одной или обеих лодыжек) спустя от 12 до 14 дней после первой иммунизации. Крыс равным образом распределяют по трем группам обработки при первых сигналах артрита и лечение начинают для каждой крысы, которой вводят дозированное количество два раза в день в течение 14 дней.

Группа 1:	Наполнитель (1% Na-карбоксиметилцеллюлозы+0,25% Твина 80), 1 мл, РО, два раза в день × 14 дней.
Группа 2:	Испытуемое соединение, 5 мг/кг, 1 мл, РО, два раза в день × 14.
Группа 3:	Испытуемое соединение, 15 мг/кг, 1 мл, РО, два раза в день × 14.
Группа 4:	Испытуемое соединение, 30 мг/кг, 1 мл, РО, два раза в день × 14.
Группа 5:	Преднизолон, 10 мг/кг, 1 мл, РО, два раза в день × 14.

Диаметр лодыжки измеряют штангенциркулем 5 дней в неделю и регистрируют. Данные выражают как площадь под кривой (AUS), построенной по оценке в баллах суммарного воспаления, и проводят статистический анализ. Соединение примера 104 испытывали по существу так же, как описано выше, и было показано, что оно имеет TMED₅₀ = 1,5 мг/кг (два раза в день).

Пероральное введение соединений настоящего изобретения является предпочтительным. Однако пероральное введение не является единственным путем или даже единственным предпочтительным путем. Например, чрескожное введение может быть очень желательным для пациентов, которые забывают о применении пероральной терапии или у которых оно вызывает раздражение, и внутривенный путь может быть предпочтительным вследствие удобства или для избежания потенциальных осложнений, связанных с пероральным введением. Соединения формулы I можно также вводить чрескожным, внутримышечным, интраназальным или интраректальным путем в определенных случаях. Путь введения можно изменять любым образом, ограниченном физическими свойствами лекарственных средств, пригодностью для пациента и обслуживающего его лица и другими, относящимися к данному случаю обстоятельствами (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Edition, Mack Publishing Co. (1990)).

Фармацевтические композиции получают способом, хорошо известным в фармацевтической области. Носитель или эксципиент может быть твердым, полутвердым или жидким веществом, который может служит в качестве наполнителя или среды для активного ингредиента. Подходящие носители или эксципиенты являются хорошо известными в данной области. Фармацевтическую композицию можно адаптировать для перорального, ингаляционного, парентерального или местного применения и можно ввести пациенту в форме таблеток, капсул, аэрозолей, формах для ингаляции, суппозиториев, растворов, суспензий или тому подобное.

Соединения настоящего изобретения можно вводить перорально, например, с инертным разбавителем или в капсулах или можно прессовать в таблетки. Для цели перорального терапевтического введения соединения можно смешивать с эксципиентами и применять в форме таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток, жевательных резинок и тому подобное. Эти препараты должны содержать, по меньшей мере, 4% соединения настоящего изобретения, активного ингредиента, но количество может варьировать в зависимости от определенной формы и может подходящим образом составлять от 4 мас.% до приблизительно 70 мас.% единицы препарата. Количество соединения, присутствующего в композициях, является таким, что может быть получена подходящая доза. Предпочтительные композиции и препараты настоящего изобретения можно определить методами, хорошо известным квалифицированному специалисту в данной области.

Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и тому подобное могут содержать также один или несколько следующих вспомогательных средств: связывающие вещества, такие как повидон, гидроксипропилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза или желатин; эксципиенты или разбавители, такие как крахмал, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или дикальцийфосфат; дезинтегрирующие агенты, такие как кроскармеллоза, кросповидон, натриевая соль гликолята крахмала, кукурузный крахмал и тому подобное; смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, тальк или гидрогенизированное растительное масло; вещества, придающие скольжение, такие как коллоидальный диоксид кремния; увлажняющие агенты, такие как лаурилсульфат натрия и полисорбат 80, и могут быть добавлены подслащивающие агенты, такие как сахароза, аспартам или сахарин, или корригент, такой как мята перечная, метилсалицилат или апельсиновый корригент. Когда унифицированной лекарственной формой является капсула, она может содержать помимо веществ указанного выше типа жидкий носитель, такой как полиэтиленгликоль или жирное масло. Другие унифицированные лекарственные формы могут содержать другие различные вещества, которые модифицируют физическую форму дозированной единицы, например, в виде покрытий. Так, таблетки или пилюли могут быть покрыты сахаром, гидроксипропилметилцеллюлозой, полиметакрилатами или другими покрывающими агентами. Сиропы могут содержать помимо настоящих соединений сахарозу в качестве подслащивающего агента и определенные консерванты, красители и красящие вещества и корригенты. Вещества, применяемые при получении этих различных композиций, должны быть фармацевтически чистыми и нетоксичными в применяемых количествах.

Соединения формулы I являются обычно эффективными на протяжении широкого диапазона доз. Например, дозы на день обычно находятся в диапазоне от приблизительно 0,0001 до приблизительно 30 мг/кг массы тела. В некоторых случаях уровни доз, ниже самого низкого предела вышеуказанного предела, могут быть более, чем адекватными, тогда как в других случаях еще более высокие дозы можно применять без какого-либо вредного побочного действия, и, следовательно, указанный выше диапазон доз никоим образом не предназначен для ограничения объема изобретения. Будет понятно, что количество соединения, фактически вводимого, будет определяться врачом в свете относящихся к данному случаю обстоятельств, включая подвергаемое лечению состояние, выбранный путь введения, реальное вводимое соединение или соединения, возраст, массу и восприимчивость отдельного пациента и серьезность симптомов пациента.