способ моделирования воспалительного поражения суставов в эксперименте
| Классы МПК: | G09B23/28 в медицине |
| Автор(ы): | Евсеева Светлана Николаевна (RU), Гринзайд Юрий Моисеевич (RU), Демешко Наталия Ивановна (RU), Скворцова Жанна Александровна (RU), Мельникова Валентина Ивановна (RU), Пигунова Людмила Александровна (RU) |
| Патентообладатель(и): | Федеральное государственное учреждение "Пятигорский государственный научно-исследовательский институт курортологии Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ФГУ "Пятигорский ГНИИК Росздрава") (RU) |
| Приоритеты: |
подача заявки:
2007-07-23 публикация патента:
27.01.2009 |
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной ревматологии, и может быть использовано для моделирования воспалительного поражения суставов. Для этого вначале осуществляют предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 минут ежедневно в течение 1-3 дней. Затем через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели. 1 табл.
(56) (продолжение):
CLASS="b560m"моделировании адъювантного артрита. - Патол. физиология и эксперим. терапия, 1998, №2, с.20-23. ВАЙТКЕНЕ Д.И. Моделирование иерсиниозного реактивного артрита на фоне введения десферала и препарата Ferram Lek у Lewis крыс. - Иммунопатология, аллергология и инфектология, 2001, №2, с.22-33. RATKAY L.G. et al. Complete Freund
s adjuvant induces an earlier and more severe arthritis in MRL-lpr mice. J Immunol. 1993 Nov 1; 151(9):5081-7. IWATA K. et al. Medullary dorsal horn neuronal activity in rats with persistent temporomandibular joint and perioral inflammation. J Neurophysiol. 1999 Sep; 82(3):1244-53.
Формула изобретения
Способ моделирования воспалительного поражения суставов в эксперименте путем подкожного введения в область суставов нижних конечностей адъюванта, отличающийся тем, что вначале осуществляют предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 мин, ежедневно в течение 1-3 дней, затем через 1-2 ч после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап, а через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты.
Описание изобретения к патенту
Известен способ моделирования воспалительного поражения суставов в эксперименте (источник) путем инъецирования подопытным животным под кожу в области этих суставов адъюванта, например - вакцины БЦЖ, в составе вазелиново-ланолиновой эмульсии (Гринзайд Ю.М., Кривобоков Н.Г., Тер-Габриэльянц Г.Г. «Первичный профилактический эффект пелоидов при адъювантном артрите у крыс и его иммунологические механизмы. // Иммунологические концепции в курортологии: Сборник научных трудов. - Пятигорск, 1987. - С.8-14). Данный способ не достаточно адекватен основным сторонам патогенеза воспалительной суставной патологии (ВСП). В частности, не учитывается такой элемент патогенеза, как переохлаждение. Это не позволяет считать данную модель достаточно соответствующей клинической ситуации.
Предлагаемый способ лишен указанного недостатка. Сущность его заключается в том, что инициацию адъювантного артрита производят на фоне предварительного переохлаждения суставов. Вначале подопытных животных, например крыс, помещают в лоток, наполненный водой со льдом, сроком на 13-15 минут, ежедневно в течение 3 дней. Через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить требуемые исследования.
Таким образом, технологическая последовательность способа включает предварительное охлаждение конечностей в лотке со смесью льда и воды при температуре 2-6°С в течение 13-15 минут, ежедневно в течение 3 дней. Через 1-2 часа после последнего охлаждения проводят инъекции адъюванта в подушечки задних лап. Через 35-40 дней после введения адъюванта на фоне хронизации процесса начинают производить необходимые эксперименты.
Для изучения адекватности и тяжести предлагаемой модели изучено 60 крыс-самцов линии Вистар массой тела 200-250 г, разделенные на 5 групп. Первую группу представляли 11 интактных животных. 11 крысам (группа 2) в течение 3 дней производили охлаждение конечностей при температуре 2-6°С и экспозиции 13-15 минут. 12 крысам третьей группы инициировался адъювантный артрит по способу прототипа. 12 крыс 4 группы подвергались разовому однодневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии, после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. 14 крыс 5 группы подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. На 35 день производилось исследование прижизненных лабораторных тестов, после чего животные иммунизировались внутрибрюшинно 2,5 мл 10% взвеси эритроцитов барана, на 40-вой день забивались с исследованием внутренних органов. Данные исследований приведены в таблице.
| Таблица | ||||||||
| Влияние охлаждения в комбинации с адъювантным артритом на реакции иммунокомпетентных органов | ||||||||
| Показатель | N | группа | n | M | м | Р | ||
| Масса тимуса Мг | 1 | Интактная | 11 | 314,7 | 22,4 | 1-2>0,2 | 2-3>0,2 | 4-5>0,4 |
| 2 | 3 охл | 11 | 271,2 | 29,8 | 1-3<0,01 | 2-4>0,2 | - | |
| 3 | БЦЖ | 12 | 225,2 | 22,1 | 1-4<0,01 | 2-5>0,05 | - | |
| 4 | 1 охл + БЦЖ | 12 | 228,1 | 19,3 | 1-5<0,001 | 3-4>0,9 | - | |
| 5 | 3 охл + БЦЖ | 14 | 206,3 | 17,8 | - | 3-5>0,5 | - | |
| К селезенки *10 6 л/100 мг | 1 | Интактная | 11 | 854 | 8,89 | 1-2<0,01 | 2-3>0,5 | 4-50,05 |
| 2 | 3 охл | 11 | 49,2 | 5,96 | 1-3<0,05 | 2-4>0,05 | - | |
| 3 | БЦЖ | 12 | 55,1 | 8,05 | 1-4>0,7 | 2-5>0,8 | - | |
| 4 | 1 охл + БЦЖ | 12 | 78,6 | 15,3 | 1-5<0,001 | 3-4>0,1 | - | |
| 5 | 3 охл + БЦЖ | 14 | 47,2 | 5,18 | - | 3-5>0,4 | - | |
| ФИЛ Ед. | 1 | Интактная | 11 | 2,00 | 0,12 | 1-2<0,001 | 2-3 1,0 | 4-5>0,6 |
| 2 | 3 охл | 11 | 1,11 | 0,04 | 1-3<0,001 | 2-4>0,1 | ||
| 3 | БЦЖ | 12 | 1,11 | 0,10 | 1-4<0,001 | 2-5<0,05 | ||
| 4 | 1 охл + БЦЖ | 12 | 1,23 | 0,06 | 1-5<0,001 | 3-4>0,3 | ||
| 5 | 3 охл + БЦЖ | 14 | 1,27 | 0,07 | 3-5>0,1 | |||
Примечание:
3 охл - 3 сеанса охлаждения
1 охл - 1 сеанс охлаждения
БЦЖ - инициация адъювантной болезни
3 охл + БЦЖ - 3 сеанса охлаждения с последующей инициацией адъюванта
1 охл + БЦЖ - 1 сеанс охлаждения с последующей инициацией адъюванта
Для адекватной оценки полученных моделей изучены параметры - масса тимуса, клеточность селезенки и фагоцитарный индекс лейкоцитов. Именно эти параметры свидетельствовали как о генеральной реакции имунокомпетентных органов на воспаление, так и о фагоцитарном эффекте.
Полученные результаты свидетельствуют о четкой общеорганизменной реакции как на повреждающие факторы - переохлаждение и воспалительный процесс в суставах, так и о взаимно потенцирующем патогенетическом действии указанных факторов.
Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.
1. Интактная крыса-самец линии Вистар №32, масса тела - 222 г. Дополнительных воздействий не получала. Исследование животного осуществлено одновременно с животными опытной группы (на 39-40 день после инициации адъювантного артрита). Масса тимуса - 300 мг, клеточность селезенки - 107,4·106 л/100 мг, ФИЛ - 2,16 бед.
2. Крыса-самец линии Вистар №2, масса тела - 220 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено на 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 189 мг, клеточность селезенки - 61,0·106 л/100 мг, ФИЛ - 1,02 ед.
3. Крыса-самец линии Вистар №5, масса тела - 190 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено на 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 181 мг, клеточность селезенки - 44,0·106 л/100 мг, ФИЛ - 1,36 ед.
4. Крыса-самец линии Вистар №1, масса тела - 170 г подвергались разовому трехдневному переохлаждению конечностей по описанной выше технологии (см. гр.2), после завершения которого через 1-2 часа производилась инициация адъювантного артрита. Исследование животного осуществлено но 39-40 день после инициации адъювантного артрита. Масса тимуса - 256 мг, клеточность селезенки - 93,0·10 6 л/100 мг, ФИЛ - 1,02 ед.