питательная композиция для детоксикации и предупреждения рака

Формула изобретения

1. Кормовая композиция для домашних животных, стимулирующая активность глутатион-S-трансферазы, содержащая 0,5-30% (в пересчете на сухое вещество) экстракта цикория, включающего источник ферментируемых пищевых волокон и фитохимический агент.

2. Композиция по п.1, в которой источник ферментируемых пищевых волокон включает пребиотические волокна, выбираемые из группы, состоящей из инулина, олигосахаридов, фруктоолигосахаридов, олигосахаридов сои и их комбинаций.

3. Композиция по п.1, в которой фитохимический агент выбирается из группы, состоящей из антиоксиданта, кафестола, кавеола, катехинов и их комбинаций.

4. Композиция по п.1, дополнительно содержащая штамм Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM 1-2449), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM 1-2453) и/или Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415).

5. Композиция по п.1, стимулирующая детоксикацию в тканях домашнего животного.

6. Композиция по п.1, стимулирующая антиоксидантную защиту в тканях домашнего животного.

7. Композиция по п.1, которую выбирают из группы, состоящей из питательной добавки, сбалансированного по питательным веществам пищевого продукта, пищевого препарата, зернового продукта и корма для домашних животных.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение, в общем смысле, относится к питательным композициям, в частности настоящее изобретение относится к питательным композициям, которые включают растительный материал, например цикорий и/или его экстракты, с целью улучшения здоровья человека и животных.

Предшествующий уровень техники

Необходимость улучшения здоровья млекопитающих потребовала и продолжает требовать непрерывного осуществления научных исследований и открытий по профилактике заболеваний. Общеизвестно, что пищевые, диетические или другие питательные источники содержат ряд компонентов или агентов, способных, как предполагается, защитить человека и животных от болезней.

Сообщается, например, что олигосахариды, такие как инулин и различные фруктоолигосахариды, обладают пребиотическим эффектом, способствуя росту бифидобактерий и молочно-кислых бактерий в желудочно-кишечном тракте вместо патогенов, включая, например, Clostridium perfringens (см., например, Gibson et al., Food Microbiology, 11(6), pp.491-498 (1994). Хотя большинство экспериментов, о которых сообщается, проводилось in vitro, тем не менее имеются сообщения и о том, что указанные олигосахариды проявляют аналогичный эффект в кишечнике крыс и человека. Общеизвестно, что стимулирование роста бифидобактерий и молочнокислых бактерий за счет использования олигосахаридов может обеспечить ряд разного рода положительных воздействий на животных и человека, таких как предупреждение и/или лечение диареи, ускорение роста, улучшение способности к размножению или другие благоприятные воздействия, которые улучшают здоровье.

Кроме того, выдвинуто предположение, что первичный механизм защиты действия питательных агентов от рака состоит в индуцировании ферментативной детоксикации, предупреждающей реагирование или связывание агентов, вызывающих рак, с критическими мишенями, чувствительными к канцерогенному клеточному росту. Научные исследования показали, что биоактивные соединения, такие как кафестол и кавеол в кофе, могут индуцировать общую активность глутатион-S-трансферазы ("GST"): см. А.С.Huggett et al.; Chemoprotective Effects of Coffee and Its Components Cafestol and Kahweol: Effects on Xenobiotic Metabolising Enzymes (хемозащитный эффект кофе и его компонентов кафестола и кавеола: влияние на ферменты, катализирующие метаболизм ксенобиотиков), Asic, 16 Colloque, Kyoto, pp.65-72 (1995). Предполагается, что GST ферменты представляют собой важнейшее семейство ферментов, которые характеризуются специфическим распределением в тканях и которые способны к детоксикации и, тем самым, к предупреждению рака. Общеизвестно, что эти способные к детоксикации ферменты могут содействовать инактивации канцерогенов благодаря своей способности катализировать реакцию большого числа электрофилов с глутатионом. При этом обычно предполагается, что большинство активированных канцерогенов являются электрофилами (Wim A. Nijhoff et al.; Carcinogenesis, vol.16, no.4, pp.955-957 (1995).

Инулин или другие питательные агенты, которые, как предполагается, способствуют улучшению здоровья человека и животных, что обсуждалось выше, в большинстве случаев получают из растений или другого натурального сырья. Например, общеизвестно, что инулин в очищенном виде получают из растений, содержащих высокие концентрации инулина, таких как цикорий, топинамбур, лук-порей и спаржа. Для этого растение перед его использованием обычно очищают или обрабатывают каким-либо другим способом с тем, чтобы улучшить его аромат, например, путем устранения или, по меньшей мере, сведения к минимуму привкуса горечи, обычно ассоциируемого с цикорием (см., например, патент США №4865852). Предполагается, что горечь цикория обусловлена присутствием сесквитерпеновых лактонов, таких как лактуцин и лактукопикрин. Кроме того, предполагается, что очистка или другая обработка растения перед его использованием поможет обеспечить более точный контроль количества биоактивных агентов, таких как инулин, которое необходимо ввести в рацион человека и/или животного.

В большинстве случаев очищенный растительный продукт получают путем гидролиза кислотами или ферментами. Гидролизат собирают и сгущают до получения биоактивного агента, такого как инулин. Например, патентный документ Японии №63-309147 раскрывает способ измельчения корней цикория, частичный гидролиз их кислотами и сушку полученного гидролизата с проведением или без проведения нейтрализации. Однако очистка, например, фруктоолигосахаридов или инулина может существенно увеличить стоимость питательного продукта, из-за чего потребление таких питательных продуктов человеком и животными в большинстве случаев лимитировалось за счет продуктов специального назначения или диетических продуктов.

Таким образом, существует потребность в питательной композиции, содержащей натуральные ингредиенты, такие как цикорий и/или его экстракты, которая имеет приемлемый для человека и животных вкус, которую можно производить относительно недорогим способом и которая может улучшить здоровье человека и животных, например предупредить рак.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к питательным композициям, которые можно использовать для улучшения здоровья человека и животных, в частности для предупреждения рака. Питательные композиции согласно настоящему изобретению содержат, по меньшей мере, комбинацию ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон (например, инулин или аналогичные вещества), с фитохимическими агентами.

Авторы заявки обнаружили, что комбинацию ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, с фитохимическими агентами можно получить из традиционного источника, например растительного источника, включая цикорий. Применив in vitro модели гепатоцитов грызунов, авторы заявки показали, что экстракты корня цикория также содержат фитохимические вещества (в дополнение к ферментируемым пищевым волокнам, предпочтительно пребиотическим волокнам, таким как инулин). Фитохимические вещества способны стимулировать ферментную активность, например активность GST ферментов, которые могут способствовать детоксикации, стимулировать защитное действие антиоксидантов (антиоксидантная защита) или содействовать другим аналогичным процессам у млекопитающих, которые, как предполагается, являются ответственными за предупреждение рака. К тому же авторы заявки обнаружили, что комбинация пребиотических волокон (например, инулина), которые, как известно, обладают противоопухолевыми свойствами, с хемозащитными фитохимическими агентами может быть получена из одного и того же растительного источника, который можно использовать для снижения риска заболевания раком, в частности раком кишечника или других органов, чувствительных к росту опухолей.

С этой целью в одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предлагается питательная композиция, способная снизить риск развития рака. Питательная композиция может включать любые натуральные или очищенные ферментируемые пищевые волокна, предпочтительно пребиотические волокна, и фитохимический агент, способный индуцировать ферментную активность у млекопитающих. Содержание растительного материала в питательной композиции предпочтительно составляет, по меньшей мере, 0,5% масс. в пересчете на сухое вещество.

В одном из вариантов растительный материал может включать цикорий, топинамбур, лук-порей, спаржу, их экстракты, корни, мякоть и т.д. и их комбинации. В одном из вариантов растительным материалом является цикорий, включая, например, экстракт цикория, мякоть цикория, корень цикория и т.д. и их комбинации.

В одном из вариантов ферментная активность обеспечивается глутатион-S-трансферазой.

В одном из вариантов ферментная активность способна стимулировать детоксикацию в тканях млекопитающего. В другом варианте ферментная активность способна стимулировать антиоксидантную защиту в тканях млекопитающего.

Настоящее изобретение обеспечивает также корм для домашних животных. Корм для домашних животных включает крахмальную матрицу и биологически активное количество растительного материала, содержащего источник ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимический агент, способный индуцировать ферментную активность у млекопитающего, снижающую риск заболевания раком.

В еще одном варианте настоящего изобретения обеспечивается способ производства питательного пищевого продукта, способного снижать заболеваемость раком среди млекопитающих. Способ включает стадии обеспечения растительного материала, обработки растительного материала с получением растительного экстракта, включающего источник ферментируемых пищевых волокон и фитохимический агент, способный индуцировать ферментную активность у млекопитающих, и обработки растительного экстракта и одного или более пищевых ингредиентов с получением питательного пищевого продукта, который содержит, по меньшей мере, 0,5% масс. растительного экстракта.

В одном из вариантов настоящего изобретения растительный экстракт обрабатывается путем обезжиривания растительного материала с получением первого растительного экстракта и последующей обработки первого растительного экстракта кислотным гидролизом этилацетатом с получением растительного экстракта.

В следующем варианте настоящего изобретения обеспечивается способ снижения риска развития рака у млекопитающих группы риска. Способ включает стадии приема млекопитающим биологически эффективного количества питательной композиции, которая содержит натуральные или очищенные ферментируемые пищевые волокна, предпочтительно пребиотические волокна, и фитохимический агент, способный стимулировать ферментную активность у млекопитающих. Питательная композиция предпочтительно содержит примерно от 0,5 до 2% масс. растительного материала, выбираемого из группы, состоящей из цикория, топинамбура, лука-порея, спаржи, их экстрактов, их мякоти, их корня и т.д. и их комбинаций.

В еще одном варианте настоящего изобретения обеспечивается способ усиления детоксикации в тканях млекопитающего. Способ включает стадии приема млекопитающим сбалансированного по питательным веществам пищевого продукта, включающего растительный материал, который содержит источник ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимический агент, способный индуцировать ферментную активность у млекопитающих. Предполагается, что повышенная ферментная активность может способствовать детоксикации, благодаря чему снижается риск заболевания раком.

В следующем варианте настоящего изобретения обеспечивается способ стимуляции антиоксидантной защиты в тканях млекопитающего. Способ включает прием млекопитающим биологически эффективного количества композиции, включающей растительный материал, который содержит источник ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимический агент, способный индуцировать ферментную активность у млекопитающих. Предполагается, что повышенная ферментная активность может стимулировать антиоксидантную защиту, снижая тем самым риск заболевания раком.

Преимуществом настоящего изобретения является обеспечение улучшенной питательной композиции, которая может применяться для снижения случаев заболевания раком среди млекопитающих. В контексте этого питательная композиция способна стимулировать процессы детоксикации, антиоксидантной защиты, другие аналогичные процессы или их комбинации в организме млекопитающих, которые, как предполагается, снижают заболеваемость раком.

Другим преимуществом настоящего изобретения является обеспечение улучшенной питательной композиции, которая включает растительный материал, содержащий источник ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимический(ие) агент(ы), способный индуцировать ферментную активность, что снижает риск заболевания раком среди млекопитающих группы риска.

Еще одним преимуществом настоящего изобретения является обеспечение способов производства улучшенных питательных композиций, содержащих растительный материал, который может улучшить вкусовые свойства питательной композиции при сохранении способности растительного материала к ферментативной детоксикации.

Следующим преимуществом настоящего изобретения является обеспечение способов предупреждения рака у млекопитающих, которые включают прием улучшенной питательной композиции. Питательная композиция содержит как источник ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, так и фитохимические агенты, благодаря чему комбинированное действие указанной композиции может использоваться для снижения риска заболевания раком.

Дополнительные отличительные особенности и преимущества настоящего изобретения указаны и станут очевидными из приведенного ниже подробного описания изобретения.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к питательным композициям, которые, по меньшей мере, включают источник ферментируемых пищевых волокон и фитохимические агенты, получаемые из натуральных источников, таких, каким является растительный материал, который может использоваться для эффективного предупреждения рака у человека и животных, в частности рака кишечника, включая, например, рак толстой кишки. Авторы заявки сделали открытие, что некоторые растения и/или растительные экстракты, полученные из таких растений, как цикорий, содержат фитохимические вещества, которые могут стимулировать пути детоксикации, предупреждая тем самым заболевание раком, например, стимулировать ферменты II фазы, включая глутатион-S-трансферазу или аналогичные ферменты.

Известно, что в дополнение к фитохимическим агентам, что обсуждалось выше, растения, например цикорий, содержат ферментируемые пищевые волокна, такие как пребиотические волокна. Пребиотические волокна могут включать ряд соответствующих материалов, таких как олигосахариды, включая инулин. Ферментируемые пищевые волокна, как предполагается, снижают заболеваемость раком, в частности раком толстой кишки. Поэтому авторы заявки считают, что полезные преимущества в плане предупреждения рака у человека и животных могут быть достигнуты за счет комбинированного действия ферментируемых пищевых волокон и фитохимических веществ, которые способны стимулировать механизмы детоксикации.

Авторы заявки также доказали, что условия обработки в ходе производства питательной композиции согласно настоящему изобретению не оказывают существенного влияния на способность питательной композиции к детоксикации. Например, проводимая согласно настоящему изобретению очистка растительного материала, которая может применяться с целью снижения привкуса горечи в растительном экстракте и улучшения его вкусовых качеств для человека и животных, оказывает ничтожно малое влияние, если вообще оказывает, на способность готового очищенного продукта к детоксикации. Что касается требуемой способности предупреждать рак, то она может быть обусловлена самим, преимущественно необработанным, растительным экстрактом, например экстрактом цикория. Благодаря этому может отпасть необходимость в дорогостоящей очистке или другой аналогичной обработке растительного материала с целью получения требуемой биоактивной фракции(ий).

В контексте настоящего описания термин "биоактивный агент" или другие аналогичные термины, например "биоактивные фракции", обозначает любой компонент или компоненты, которые могут проявлять биологическую активность, химическую активность или аналогичную активность в организме млекопитающего(щих), способную улучшить здоровье млекопитающего. Примеры биоактивных агентов включают, например, ферментируемые пищевые волокна, такие как пребиотические волокна, фитохимические вещества или т.п.

В контексте настоящего описания термин "пребиотик" или другие аналогичные термины, включая "пребиотическое волокно", обозначает вещество или компонент, который может стимулировать рост полезных микроорганизмов в организме млекопитающих.

В контексте настоящего описания термин "фитохимическое вещество" или другие аналогичные термины, включая "фитохимические вещества" и "фитохимический агент", обозначает любое химическое вещество, продуцируемое растением, которое, как предполагается, способно оказывать полезное влияние на здоровье человека и/или животных, например способно предупреждать рак.

В контексте настоящего описания термин "ферментная активность" или другие аналогичные термины, такие как "активность фермента", обозначает любой пригодный для данной цели фермент, который может действовать как катализатор в ходе любого соответствующего биологического, химического или любого другого процесса, который, как предполагается, оказывает влияние на здоровье млекопитающих. Например, повышение ферментной активности, относящейся к глутатион-S-трансферазе, может способствовать детоксикации в тканях, стимулировать антиоксидантную защиту в тканях или аналогичные процессы, которые, как предполагается, являются ответственными за предупреждение рака.

Питательная композиция может включать любые пригодные для данной цели и сочетающиеся друг с другом виды и количество компонентов, которые позволяют эффективно применять питательную композицию для предупреждения рака. В одном из вариантов питательная композиция включает растительный материал, который содержит один или более видов ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимические агенты, способные индуцировать или усиливать ферментную активность, например активность фермента GST, которая, как предполагается, является ответственной за детоксикацию агентов, вызывающих рак. В дополнение к улучшению детоксикации через повышение ферментной активности фитохимический агент также способен, как предполагается, стимулировать антиоксидантную защиту или другие аналогичные процессы в организме человека и/или млекопитающих. В результате этого фитохимический агент способен, как предполагается, улучшить здоровье млекопитающих, в частности снизить заболеваемость раком. В питательную композицию можно с достаточной эффективностью вводить целый ряд растительных материалов, включая, например, цикорий, топинамбур, лук-порей, спаржу, их экстракты, их мякоть, их корни и т.д. и их комбинации. В одном из вариантов предпочтительными являются цикорий, экстракт цикория, мякоть цикория, корень цикория и т.п. и их комбинации.

В одном из вариантов растительный материал добавляют к питательной композиции в виде экстракта, например экстракта цикория. Растительный экстракт может быть получен из любой пригодной для этой цели части растительного материала, включая, например, корень, мякоть и т.п. или их комбинации. Экстракт обрабатывают таким способом, который может улучшить его вкусоароматические свойства. Например, привкус горечи, который обычно присущ растительным материалам, таким как цикорий, можно удалить путем переработки растения в экстракт. Экстракт можно получить также таким способом, который позволяет контролировать при необходимости количество биоактивного агента в готовом экстракте.

Следует отметить, что растительный материал можно перерабатывать в экстракт с помощью целого ряда различных и пригодных для данной цели способов. В большинстве случаев растительный материал, например корень цикория, измельчают, превращают в порошок или в любую другую форму. Затем растительный материал можно подвергнуть последующей обработке в несколько стадий для получения экстракта. В одном из вариантов изобретения проводится обезжиривание растительного материала с получением экстракта из жиров, удаленных из растительного материала. Процесс обезжиривания можно проводить в любых пригодных для обезжиривания условиях с применением пригодных для данной цели видов и количества растворителей, включая, например, гексан.

В одном из вариантов изобретения экстракт, полученный на стадии обезжиривания, можно подвергнуть дальнейшей обработке кислотным гидролизом с получением другого вида растительного экстракта, который можно вводить в питательную композицию согласно настоящему изобретению. Процесс кислотного гидролиза можно проводить в любых пригодных для этого условиях с применением любых пригодных для данной цели видов и количества растворителей, включая, например, этилацетат.

В одном из вариантов экстракт, полученный на стадии обезжиривания, можно подвергнуть дальнейшей обработке с применением экстракции растворителем. Экстракцию растворителем можно проводить в любых пригодных для этого условиях и в присутствии любого пригодного для данной цели количества и вида растворителя. В одном из вариантов растворитель включает раствор метилового спирта ("МеОН") и воду, смешанных в объемном соотношении 1:1. Полученный в результате смешивания раствор для проведения экстракции растворителем можно затем обработать выпариванием растворителя в пригодных для этого условиях с целью получения другого экстракта. Альтернативно: полученный в результате смешивания раствор можно обработать адсорбентом, например поливинилполипирролидоном или аналогичным агентом, с целью улавливания полифенолов. Обработку адсорбентом можно проводить в любых пригодных для этого условиях. Конкретные примеры приготовления растительных экстрактов согласно одному из вариантов настоящего изобретения подробно описаны ниже.

В одном из вариантов ферментируемые пищевые волокна и фитохимический агент (агенты) питательной композиции могут быть получены из традиционного или одного и того же растительного материала, например цикория. Как указывалось выше, авторы заявки считают, что комбинированное действие ферментируемых пищевых волокон, предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимического источника растений, например цикория, может обеспечить улучшенный хемозащитный эффект, благодаря которому возможно предупредить рак у млекопитающих. Пребиотические волокна могут включать любые пригодные для данной цели количества и вид материалов, включая, например, олигосахариды, такие как инулин и различные фруктоолигосахариды, олигосахариды сои и их комбинации.

Фитохимические агенты могут включать любой пригодный для данной цели вид и количество материалов, таких, которые способны индуцировать ферментную активность, ответственную, как предполагается, за детоксикацию канцерогенов. В одном из вариантов фитохимический агент включает антиоксиданты, кафестол, кавеол, катехин, аналогичные компоненты или их комбинации. В одном из вариантов фитохимический агент растительного материала способен индуцировать ферментную активность II фазы, например ферментную активность GST. Предполагается, что индуцируя ферментную активность, например GST активность, фитохимические агенты согласно настоящему изобретению способны улучшать детоксикацию в тканях млекопитающих (например, за счет повышения GST активности), способны стимулировать антиоксидантную защиту в тканях млекопитающих (например, за счет увеличения уровня глутатиона) или способны улучшать здоровье млекопитающих за счет других аналогичных механизмов, которые, как предполагается, ответственны, например, за предупреждение рака.

Следует отметить, что питательная композиция согласно настоящему изобретению может быть получена в различном виде с учетом требований. В одном из вариантов питательная композиция может быть в виде питательной добавки, пищевого препарата для человека и/или животных, корма для домашних животных или иметь другой аналогичный вид. Питательную композицию можно добавлять в пищевой продукт в любом пригодном для этого количестве. В одном из вариантов пищевой продукт включает растительный материал питательной композиции в количестве, по меньшей мере, 0,5% масс., предпочтительно примерно от 0,5 до 30% масс., более предпочтительно примерно от 0,5 до 2% масс.

В одном из вариантов настоящее изобретение обеспечивает корм для домашних животных, который включает крахмальную матрицу и эффективное количество растительного материала, при этом растительный материал содержит источник ферментируемых пищевых волокон, более предпочтительно пребиотических волокон, и фитохимический агент, способный индуцировать ферменты или ферментную активность, что, как предполагается, способствует улучшению здоровья млекопитающих, в частности предупреждению рака, как обсуждалось выше. Корм для домашних животных согласно настоящему изобретению может содержать любое пригодное для данной цели число, вид и количество компонентов и может обрабатываться любым пригодным для данной цели способом для получения требуемой формы продукта.

В одном из вариантов настоящее изобретение включает желированный зерновой продукт, который содержит определенное количество растительного материала. Растительный материал включает, по меньшей мере, источник ферментируемых пищевых волокон и фитохимические агенты, способные стимулировать ферментную активность в организме млекопитающих, которая, как предполагается, способна улучшить здоровье млекопитающих, о чем говорилось выше.

В одном из вариантов растение содержит инулин в количестве, достаточном для обеспечения, по меньшей мере, примерно 0,25% масс. инулина в сухом веществе. Используемый растительный материал может представлять собой любой пригодный для данной цели источник, который содержит высокий уровень инулина, такой как, например, цикорий, топинамбур, лук-порей, лук репчатый, якон (редька японская), спаржа, их экстракты, мякоть, корни или смеси этих растений. В одном из вариантов предпочтительными являются цикорий и топинамбур. В одном из вариантов растительный материал содержит, по меньшей мере, 50% масс. инулина. В целях облегчения процесса обработки растительный материал используется предпочтительно в сухом и измельченном виде или в виде порошка. Как показано ниже, в процессах используются сухой измельченный цикорий и/или его экстракты. Однако само собой разумеется, что можно использовать любой пригодный для данной цели растительный материал в любой пригодной для данной цели форме и добавлять его в зерновой продукт в любом пригодном для данной цели количестве.

Как указано ниже, остальные ингредиенты, содержащиеся в желированном зерновом продукте, могут представлять собой любые пригодные для данной цели ингредиенты, традиционно использующиеся в желированных зерновых продуктах. В большинстве случаев эти ингредиенты включают источник крахмала и источник белка. Пригодными для данной цели источниками крахмала являются, например, зерновые культуры, такие как кукуруза, рис, пшеница, овес, ячмень, а также свекла, соя или смеси перечисленных культур. Пригодные для данной цели источники белка могут выбираться из любых пригодных для данной цели источников животного или растительного белков. Примеры включают мясную муку, костную муку, рыбную муку, концентраты соевого белка, белки молока, глютен и т.п. Выбор источников крахмала и белка будет в значительной мере определяться потребностями животного или человека в питательных веществах, вкусовыми факторами, видом приготовляемого зернового продукта и другими аналогичными факторами. При необходимости в желированный зерновой продукт могут быть введены другие ингредиенты, например сахар, соль, специи, приправы, витамины, минеральные вещества, ароматизаторы, жиры и т.п.

Желированный зерновой продукт может производиться самыми различными способами с учетом требований. Однако в случае сухого зернового продукта особенно пригодным способом его производства является экструзионная варка. Она может осуществляться по хорошо известной специалистам в данной области технологии. Например, согласно одному пригодному для данной цели способу кормовая смесь подается в установку для предварительного кондиционирования. Кормовая смесь готовится, главным образом, из источника крахмала, источника белка и растительного материала, такого как цикорий. В одном из вариантов цикорий составляет, по меньшей мере, примерно 1% масс. кормовой смеси, предпочтительно - по меньшей мере, примерно 2% масс. В одном из вариантов растительный материал составляет примерно от 10 до 20% масс., предпочтительно примерно 10% масс. В установке для предварительного кондиционирования в кормовую смесь вмешивается вода или пар либо вода и пар вместе. При этом в кормовую смесь вмешивается такое количество воды или пара, которое достаточно для увлажнения смеси. При необходимости температура кормовой смеси в установке для предварительного кондиционирования может повышаться примерно до температуры от 60 до 90°С. Подходящая для данной цели установка для предварительного кондиционирования описана в патенте США №4752139. Следует отметить, что установка для предварительного кондиционирования может и не потребоваться.

Из установки для предварительного кондиционирования увлажненный корм подается в экструдер. Экструдер может быть любого пригодного для данной цели типа - одношнековый или со сдвоенным шнеком либо аппарат экструзионной варки. Такие экструдеры выпускаются фирмами Wenger Manufacturing Inc., Clextral SA, Bühler AG и др. При пропускании через экструдер увлажненный корм проходит через зону варки, в которой он подвергается механическому усилию сдвига и нагревается (в одном из вариантов увлажненный корм нагревается до максимальной температуры примерно 150°С), и зону формования. Давление в зоне формования может составлять примерно от 300 кПа до 10 МПа в зависимости от требований. При необходимости в зону варки может вводиться вода или пар или вода и пар вместе. При прохождении через экструдер источник крахмала в увлажненном корме клейстеризуется с образованием желированной матричной структуры, в основном, из крахмала, белка и растительного материала, такого как цикорий. Желированная матрица на выходе из экструдера продавливается под давлением через экструзионную головку соответствующего размера, описанную, например, в заявке на европейский патент №0665051, включенной в перечень ссылок к настоящей заявке. Из экструзионной головки выходит формованный экструдат, форма поперечного сечения которого соответствует форме отверстия головки. В зависимости от условий в экструдере и используемого источника крахмала формованный экструдат увеличивается в объеме в большей или меньшей степени. Затем формованный экструдат с помощью лезвий нарезается в виде кусочков. Отдельные кусочки при необходимости высушиваются, покрываются защитными или ароматизирующими агентами или сразу двумя указанными видами агентов. После охлаждения кусочки можно упаковать в соответствующие упаковки. Альтернативно: отдельные кусочки можно переработать в хлопья с последующей их сушкой.

В зависимости от используемых ингредиентов желированный зерновой продукт может быть в виде высушенных крупных кусков, пригодных для использования в качестве корма для домашних животных; воздушных (взорванных) кусочков, пригодных для употребления в качестве зерновых завтраков; хлопьев, пригодных для употребления в качестве зерновых завтраков, и т.п.

Производство сухого зернового продукта можно осуществлять также путем смешивания воды с ингредиентами зернового продукта, например в установке для предварительного кондиционирования. Влажной смеси можно придать затем требуемую форму, используя для этой цели, например, формующие вальцы. Формованную смесь можно затем выпекать в печи при требуемой температуре. В одном из вариантов температура колеблется примерно от 220 до 280°С в течение времени, необходимого для выпекания. В одном из вариантов время выпекания колеблется примерно от 10 минут до 1 часа. Сухой зерновой продукт по внешнему виду похож на готовое печенье.

Если требуется приготовить продукт, имитирующий мясной продукт, который может использоваться в консервированных кормах для домашних животных, то для этого можно применить любой пригодный для указанной цели способ. Например, способы, описанные в патентах США №4781939 и №5132137. Согласно этим способам источник белка, преимущественно мясной материал, подвергается эмульгированию. В качестве мясного материала можно использовать любой пригодный для данной цели источник животного белка, включая, например, мышечные или скелетные ткани млекопитающих, птицы, отходы переработки рыбы или мяса, такие как сердце, печень, почки, язык и т.п., либо мясную муку. При необходимости можно ввести также источники растительного белка. Конкретный состав продукта можно подобрать, исходя из стоимости и требуемых вкусоароматических показателей. Эмульгирование может осуществляться с помощью любого пригодного для этого оборудования.

К эмульсии добавляют сухой цикорий. При необходимости к эмульсии можно добавить дополнительный белок. Дополнительным белком может быть любой источник белка из перечисленных выше. Конкретный выбор будет зависеть от наличия резервов, стоимости и вкусовых качеств. Дополнительный белок можно добавлять в любом пригодном для данной цели количестве. В одном из вариантов дополнительный белок может добавляться в количестве примерно от 5 до 35% масс.

При необходимости к эмульсии можно добавить жиры. Обычно количество жира в эмульсии должно контролироваться с целью облегчения процесса обработки и получения приемлемого продукта. Однако сам мясной материал может содержать требуемое количество жиров и, следовательно, в этом случае контроль может и не понадобиться. Обычно на этой стадии эмульсия содержит максимальный уровень жира примерно 25% масс. В одном из вариантов количество жира в эмульсии предпочтительно колеблется примерно от 5 до 15% масс., более предпочтительно - примерно от 7 до 12% масс. Массовое отношение белка к жиру в эмульсии составляет предпочтительно примерно от 1:1 до 7:1. В качестве добавляемых жиров могут использоваться любые пригодные для данной цели животные жиры, такие как говяжий костный жир, либо это могут быть растительные жиры.

К эмульсии можно также добавить дополнительные ингредиенты, такие как сахара, соли, специи, приправы, ароматизаторы, минеральные вещества и т.п. В одном из вариантов количество добавляемых дополнительных ингредиентов колеблется примерно от 1 до 5% масс. желированного зернового продукта. Можно добавлять и воду для обеспечения влагосодержания эмульсии примерно от 45 до 80% масс. Если же мясной материал содержит достаточно влаги, то в этом случае воду можно не добавлять.

По окончании смешивания эмульсию предпочтительно пропускают через вакуум-шприц или аналогичный аппарат для деаэрации с целью деаэрации эмульсии. При этом удаляется воздух, который в противном случае может вызвать разрушение составленного по рецептуре эмульсионного продукта и ухудшить его "мясной" вид. Затем эмульсия поступает в эмульсионный измельчитель, где она подвергается быстрому воздействию механического усилия сдвига и нагрева. Для этой цели можно использовать любой пригодный эмульсионный измельчитель, включая, например, эмульсионный измельчитель, описанный в патенте США №5132137. Промышленностью выпускаются также и другие пригодные для данной цели эмульсионные измельчители под торговьм названием TRIGONAL от фирмы Seifer Maschinenfabrik GmbH & Со. KG, Bahnhofstrasse 114, Postfach 101008, Velbert 1, Germany.

Температура эмульсии в эмульсионном измельчителе может повыситься до требуемой температуры коагуляции всего за несколько секунд. В одном из вариантов температура коагуляции колеблется примерно от 100 до 120°С. В одном из вариантов температура коагуляции колеблется примерно от 45 до 75°С, как описано в патенте США №5132137. В большинстве случаев механической энергии, генерируемой в эмульсионном измельчителе, бывает достаточно для нагрева эмульсии до требуемой температуры, но эту энергию можно дополнить за счет прямой инжекции перегретого пара.

Из эмульсионного измельчителя нагретая эмульсия может подаваться в трубчатый выдерживатель. В трубчатом выдерживателе по мере медленного продвижения эмульсии через него происходит коагуляция белка эмульсии. Времени пребывания нагретой эмульсии в трубчатом выдерживателе достаточно для осуществления коагуляции с образованием плотного эмульсионного продукта на выходе из трубчатого выдерживателя.

Затем плотный эмульсионный продукт поступает из трубчатого выдерживателя в машину для нарезки его на куски, например крупные куски, размером, пригодным для использования в кормах для домашних животных. По внешнему виду и текстуре куски напоминают мясо. При необходимости куски можно переработать в хлопья. Куски можно также использовать в рецептуре продукта типа соуса (куски в подливе).

Известны и могут использоваться другие способы производства кусков, такие как экструдирование кормовой смеси, варка кормовой смеси в паровой печи и нарезка вареного экструдата кусками.

Если требуется приготовить консервированный корм для домашних животных в виде мясного хлеба, то мясной фарш можно приготовить путем эмульгирования пригодного для данной цели мясного материала с получением мясной эмульсии. Мясной материал может быть любым пригодным для данной цели источником мяса, например, как описано выше. К мясной эмульсии можно добавить пригодные для данной цели желирующие агенты, включая камеди, такие как каппа-каррагинан, камедь из бобов рожкового дерева, гуаровая камедь, ксантановая камедь или др. В одном из вариантов используется примерно не более 2% масс. камеди. Затем к мясной эмульсии добавляют сухой растительный материал, такой как цикорий.

К мясной эмульсии можно также добавить дополнительные ингредиенты, такие как сахара, соли, специи, приправы, ароматизаторы, минеральные вещества и т.п. Количество используемых дополнительных ингредиентов должно быть предпочтительно таким, чтобы они составляли примерно от 0,25 до 5% масс. мясного фарша. Можно добавить также воду к мясной эмульсии для обеспечения влагосодержания примерно от 70 до 85% масс. Если в мясном материале содержится достаточно влаги, то воду можно не добавлять.

Затем мясную эмульсию нагревают до температуры примерно выше 65°С в варочном аппарате-смесителе. При необходимости в мясной фарш может инжектироваться пар. После термообработки мясная эмульсия вновь подвергается эмульгированию для получения мясного хлеба, мясной хлеб выдерживают при температуре примерно выше 60°С перед последующей расфасовкой в консервные банки.

Следует отметить, что желированный зерновой продукт может производиться любым пригодным для данной цели способом, а не только описанными выше способами. В желированный зерновой продукт могут также вводиться другие виды олигосахаридов, такие как фруктоолигосахариды и олигосахариды сои. Олигосахариды сои могут добавляться в виде соевой муки или другого пригодного для данной цели соевого источника.

Зерновые продукты могут быть в любом виде в зависимости от требований, например сухими, полувлажными и влажными. Однако матрица, формирующая зерновой продукт, должна быть обязательно подвергнута клейстеризации, с тем, чтобы удалить или разрушить сесквитерпеновые соединения, которые могут присутствовать в растительном материале. Следует подчеркнуть, что зерновой продукт согласно настоящему изобретению может быть приготовлен для употребления человеком и/или животным.

Ниже приводятся примеры кормов для домашних животных, приготовленных в соответствии с одним из вариантов настоящего изобретения, которые, однако, не ограничивают сущности изобретения.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Пример 1

Кормовую смесь готовили из примерно 58% масс. кукурузы, примерно 6% масс. кукурузного глютена, примерно 23% масс. мяса и остальных компонентов - муки, сухого цикория, солей, витаминов и минеральных веществ. Сухой цикорий был в виде экстракта цикория, который был получен согласно одному из вариантов настоящего изобретения и добавлен в количестве примерно 5% или менее.

Приготовленную кормовую смесь направляли в установку для предварительного кондиционирования и увлажняли. Затем увлажненный корм подавали в аппарат экструзионной варки, где происходила клейстеризация. Клейстеризованную матрицу на выходе из экструдера продавливали под давлением через экструзионную головку с получением экструдата. Экструдат нарезали кусочками, пригодными для скармливания собакам, высушивали при температуре примерно 110°С в течение примерно 20 минут и охлаждали с образованием гранул. Следует заметить, что часть или все количество используемой жировой смеси или жира и масел можно добавлять на более поздней стадии, например, в качестве покрытия.

Добавленный цикорий способен улучшить здоровье млекопитающих, например предупредить развитие рака, тем, что способствует и/или стимулирует детоксикацию, антиоксидантную защиту или аналогичные процессы в тканях, что обсуждалось выше.

Пример 2

Сухой корм для домашних животных готовили способом, аналогичным способу приготовления сухого корма для домашних животных в примере 1. Он включал также дополнительный ингредиент, традиционно используемый для улучшения вкусовых качеств сухого корма, пригодного для кошек. Добавленный цикорий способен улучшить здоровье млекопитающих, например предупредить развитие рака, тем, что способствует и/или стимулирует детоксикацию, антиоксидантную защиту или аналогичные процессы в тканях, что обсуждалось выше.

Пример 3

Кормовая смесь включала примерно 58% масс. кукурузы, примерно 6% масс. кукурузного глютена, примерно 23% масс. муки из отходов переработки птицы и остальные компоненты - сухой цикорий, соли, витамины и минеральные вещества. Цикорий добавляли в количестве примерно 5% или менее. Как обсуждалось выше, добавленный цикорий может стимулировать ферментную активность, что, как предполагается, способствует улучшению здоровья животного, например предупреждению рака за счет содействия и/или стимуляции детоксикации, антиоксидантной защиты или аналогичных процессов в тканях.

Кормовую смесь подавали в установку для предварительного кондиционирования и увлажняли. Увлажненный корм поступал затем в аппарат для экструзионной варки, где происходила клейстеризация. Клейстеризованная матрица на выходе из экструдера продавливалась под давлением через экструзионную головку с получением экструдата. Экструдат нарезали кусочками, пригодными для скармливания кошкам, сушили при температуре примерно 110°С в течение примерно 20 минут и охлаждали с образованием гранул. На этой стадии на гранулы наносили полученный лиофильной сушкой сухой концентрат одного или более штаммов бактерий рода Lactobacillus, например Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) и Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Указанный сухой бактериальный концентрат наносили на гранулы в достаточном количестве, обеспечивающем потребление животным (кошкой) примерно от 1,0Е+07 до 1,0Е+9 КОЕ (колониеобразующих единиц) в сутки. При этом часть сухого бактериального концентрата смешивали с первой массой гранул, которые затем упаковывали в пакеты. Вторую порцию сухого бактериального концентрата взвешивали и смешивали с носителем липидов, полученную смесь напыляли на вторую массу гранул. Гранулы упаковывали в пакеты после достаточной просушки покрытия при 50-60°С в течение нескольких минут.

Пример 4. Консервированный корм и добавка для домашних животных

Готовили смесь из примерно 73% тушек птицы, свиных легких и говяжьей печени (в измельченном виде), примерно 16% пшеничной муки, примерно 2% красителей, витаминов и неорганических солей. Полученную смесь эмульгировали при 12°С и экструдировали в виде пудинга. К эмульсии добавляли сухой цикорий в виде экстракта, приготовленного согласно одному из вариантов настоящего изобретения, в количестве примерно 5% или менее. Как обсуждалось выше, добавленный цикорий может улучшить здоровье млекопитающего. Затем эмульсию подвергали варке при температуре 90°С, после чего охлаждали до 30°С и нарезали на куски. Примерно 45% кусков смешивали с примерно 55% соуса, приготовленного из примерно 98% воды, примерно 1% красителя и примерно 1% гуаровой камеди. Смесь кусков с соусом расфасовывали в консервные банки из белой жести и стерилизовали при 125°С в течение примерно 40 минут.

В качестве пробиотической добавки, подлежащей смешиванию с кормом для домашних животных перед приготовлением порции корма для скармливания животному, предусмотрена дополнительная упаковка в форме саше со штаммами следующих видов: Lactobacillus: Lactobacillus rhamnosus NCC2583 (CNCM I-2449), Lactobacillus acidophilus NCC2628 (CNCM I-2453) и Enterococcus faecium SF68 (NCIMB 10415). Соответствующее потребление добавки домашним животным составляет примерно от 10 ⁶ до 10¹² КОЕ/сутки в зависимости от вида домашнего животного, т.е. кошка или собака, и от физических факторов домашнего животного, таких как, например, масса тела. Добавку упаковывали таким образом, чтобы она была доступно прикреплена к консервной банке вместе с инструкцией по кормлению.

Приведенные ниже в качестве примера (не ограничивающего сущности настоящего изобретения) и подробно описанные испытания проводились с целью подтверждения эффективности настоящего изобретения.

Испытания in vitro

Авторы заявки провели ряд экспериментальных тестов для подтверждения полезности настоящего изобретения. В большинстве случаев готовили первичные культуры гепатоцитов крыс и обрабатывали их различным количеством экстрактов цикория в течение примерно 48 часов. Затем проводили эксперименты по определению цитотоксического эффекта и влияния индуцирования или стимулирования ферментной активности в организме млекопитающих, которая, как предполагается, является ответственной за улучшение здоровья млекопитающих, в частности предупреждение и/или лечение рака за счет, например, стимуляции детоксикации, антиоксидантной защиты или других аналогичных процессов в тканях, что обсуждалось выше. Методики подготовки образцов и проведения тестов и результаты тестов более подробно обсуждаются ниже.

Приготовление клеточных культур

Выделенные первичные гепатоциты получали перфузией печени крыс Sprague-Dawley (250 г) с применением раствора коллагеназы, как описано, например, у Sidhu J.S. et al.; Archive of Biochemistry & Biophysic; 301, pp.1-11, 1993. Установлено, что жизнеспособность клеток, оценку которой проводили методом исключения с трипановым синим (Trypan Blue), колебалась примерно от 90 до 95%.

Клетки высевали при плотности 10⁶ клеток/мл на пластмассовые чашки диаметром 60 мм для разводок культур тканей, содержащие 3 мл среды Вильяма с добавлением 2 мМ L-глутамина, 10 мМ Hepes с рН 7,4, ITS+, 15000 ед. пенициллина/стрептомицина, 100 нМ дексаметазона и 5% сыворотки крови эмбриона крупного рогатого скота (Hi-клон). Два часа отводили на закрепление клеток, после чего промывали их EBSS для удаления примесей и незакрепленных клеток. Добавляли свежеприготовленную, свободную от сыворотки крови среду, содержащую 25 нМ дексаметазона, а затем покрывали слоем матригеля (233 мкг/мл). Свежий матригель добавляли к культурам каждые два дня с последующей заменой среды. Для изучения действия экстрактов цикория, приготовленных согласно одному из вариантов настоящего изобретения, компоненты добавляли к культуральной среде спустя 24 часа после высевания клеток в течение 48 часов.

Приготовление экстрактов цикория

Четыре различных экстракта цикория, а именно экстракты A-D, готовили в соответствии с одним из вариантов настоящего изобретения. Сначала каждый из образцов цикория массой 40 и 10 граммов (г), измельченные в порошок, просеивали через сито с размером отверстий 0,5 мм. Затем образцы подвергали обработке с целью удаления жира путем смешивания их с гексаном в течение примерно тридцати минут при комнатной температуре. К просеянному образцу цикория массой 40 г добавляли 600 миллилитров (мл) гексана, к просеянному образцу цикория массой 10 г - 150 мл гексана. Гексан выпаривали под вакуумом примерно при 50°С с получением экстракта А.

Экстракт В получали путем предварительного обезжиривания 40 г измельченного в порошок цикория, как обсуждалось выше. Обезжиренный образец гидролизовали в 300 мл кислоты, например, HCl, на кипящей водяной бане в течение примерно 20 минут. После охлаждения и центрифугирования (8000 об/мин, 5 минут, 10°С) раствор экстрагировали 150 мл растворителя, такого как этилацетат промышленного производства, например, от фирмы MERCK. Растворитель выпаривали до сухости. После последующей сушки над безводным сульфатом натрия в условиях вакуума примерно при 50°С получали экстракт В.

Экстракты С и D получали следующим образом. Сначала образец измельченного в порошок цикория массой 10 г обезжиривали, как описано выше. Вторую часть обезжиренного порошка экстрагировали смесью из примерно 250 мл растворителя/воды, взятых, например, в объемном соотношении 1:1 МеОН и воды в растворе. Экстракцию проводили в условиях перемешивания при комнатной температуре (например, примерно при 20-25°С) в течение примерно 30 минут. После центрифугирования раствор разделяли на два равных объема. Из первой объемной части раствора выпаривали органический растворитель под вакуумом примерно при 50°С. Оставшуюся водную фазу сушили методом сублимационной сушки с получением экстракта С.

Вторую объемную часть раствора обрабатывали примерно 2 г поливинилполипирролидона в условиях перемешивания в течение примерно 30 минут с целью улавливания полифенолов. Адсорбент удаляли фильтрацией, центрифугированием или аналогичным способом. Органический растворитель выпаривали под вакуумом примерно при 50°С. Оставшуюся водную фазу сушили методом сублимационной сушки с получением экстракта D.

Цитотоксическое действие экстракта цикория

Для определения нецитотоксических доз экстракта цикория проводили экспериментальные тесты с применением МТТ-пробы. Гепатоциты крыс обрабатывали различным количеством экстракта В цикория, приготовление которого описано выше. Результаты тестов показали, что цитотоксичность экстрактов цикория наблюдалась примерно при 200 микрограммах/миллилитр или более.

Вестерн блоттинг анализ

Экстракты суммарного белка из клеточных культур, обработанные в течение 48 часов экстрактами цикория (A-D), разделяли методом электрофореза в 10% полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (SDS-PAGE) 10 или 25 мкг белка из расчета на одну полосу при анализе соответственно глутатион-S-трансферазы ("GST") и белков теплового шока ("HSP") с использованием буферной системы Лэммли (Laemmli) и электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозные мембраны. Блоты инкубировали в течение 1 часа в растворе 5% сухого молока в PBS, содержащем 0,1% Tween для блокирования неспецифического связывания. Блоты инкубировали с поликлональными антителами кроликов против GST крыс Ya, Yc, Yb1, Yb2, Yp (BIOTRIN) и GST крыс Yc2 (приготовленными д-ром Дж. Хейесом, университет г. Данди). Антитела против GST Yc2 крыс представляли собой поликлональные антитела, известные своей способностью к перекрестной реакции с другими альфа-субъединицами GST крыс. (см. Hayes J.D. et al., Biochemical J., 279, 385-398, 1991; и Cavin С. et al., Carcinoenesisg 19, 1369-1375, 1998).

При вестерн блоттинг анализе обычно были видны две полосы, причем верхняя полоса соответствовала субъединице Yd, а нижняя - субъединице Yc2. Блоты инкубировали также с поликлональными антителами крыс против гем-оксигеназы-1 (НО-1), называемой также HSP 32 (стресс-ген, AMS). Исследование блотов проводили с применением вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена. Комплекс можно было наблюдать визуально методом хемилюминесценции с использованием готового набора реактивов для детектирования результатов вестерн блоттинг анализа (от фирмы AMERSHAM LIFE SCIENCE, Англия). Концентрацию белков измеряли методом Брэдфорда (Bradford), стандартизированным с использованием BSA.

Результаты тестов показали, что экстракт В цикория, полученный с применением этилацетата, как описано выше, увеличивал экспрессию некоторых субъединиц GST (Yc2, Yb1, Yp) в гепатоцитах крыс по сравнению с контролем и клетками, обработанными экстрактами А, С и D цикория.

Ферментативные пробы

Активность GST цитозольных фракций оценивали методом, описанным Habig W.G. et al., Journal of Biological Chemistry 249, 7130-7139 (1974). 1-Хлоро-2,4-динитробензол (CDNB) использовали в качестве субстрата для измерения общей активности GST в первичных культурах крыс с различным количеством экстрактов цикория, а именно экстрактов A-D, как обсуждалось выше. Инкубацию проводили при 30°С. Кроме того, этакриновую кислоту использовали в качестве субстрата для измерения удельной ферментной активности GST-P в первичных клеточных культурах крыс, обработанных различным количеством экстрактов цикория, а именно экстрактов A-D, как обсуждалось выше.

Результаты теста показали, что экстракт В приводил к повышенному уровню активности GST в гепатоцитах крыс по сравнению с контролем и экстрактами А, С, и D.

Определение общего глутатиона

Уровень общего глутатиона в клетках измеряли путем ферментативной рециркуляции, как описано Gallagher E.P. et al.. In Methods in toxicology Vol.1B, 349-366 (1994). Глутатион (GSH) измеряли с помощью кинетической пробы, которая основана на непрерывном, катализируемом глутатион-редуктазой восстановлении сульфгидрильного реагента - 5,5'-дитиобис-2-нитробензойной кислоты (DTNB; реагент Эльмана) до хромофорного продукта - 2-нитро-5-тиобензойной кислоты. Детектирование хромофора контролировали спектрофотометрическим методом при 412 нм.

Первичные гепатоциты крыс обрабатывали в течение 48 часов различными концентрациями (50, 100 и 200 мкг/мл) экстракта А цикория (гексан), экстракта В цикория (этилацетат) и экстракта С цикория (MetOH/H20). Клетки промывали и повторно суспендировали в 125 микролитрах 20 мМ 5-SSA. Клеточный GSH высвобождали путем разрушения ультразвуком, и образцы центрифугировали при 10000 g в течение двух минут при комнатной температуре. Супернатант, содержащий свободный GSH, использовали впоследствии для определения общего глутатиона. Образец или GSH стандарт смешивали с 700 мкл 125 мМ раствора фосфата натрия, содержащего 6,3 мМ ЭДТУ (рН 7,5), 100 мкл 6 мМ DTNB и 20 мкл 20 мМ NADPH. После выравнивания температуры кювет до 25°С добавляли 10 мкл GSSG редуктазы (50 ед./мл) для измерения образования 2-нитро-5-тиобензойной кислоты при 412 нм. Слепой образец, не содержащий GSH, анализировали отдельно, и перед количественной оценкой GSH из показателя образца вычитали суммарное фоновое образование продукта.

Результаты теста показали, что экстракт В цикория приводил к повышенному уровню клеточного GSH в гепатоцитах крыс по сравнению с контролем и экстрактами цикория А и С. Кроме того, результаты теста показали, что уровень клеточного GSH повышался по мере увеличения количества экстракта В цикория.

Влияние обработки пищевого продукта

Готовили контрольные образцы для оценки влияния обработки пищевого продукта на способность компонентов растительного материала в составе готового пищевого продукта к детоксикации. Тест проводили на примере корма для домашних животных, который содержал примерно 30% масс. цикория, полученного согласно одному из вариантов настоящего изобретения. Корм для домашних животных обрабатывали экстракцией этилацетатом в соответствии с одним из вариантов настоящего изобретения. Полученный экстракт добавляли к культурам гепатоцитов крыс в разном количестве, а именно 100, 200 и 400 мкг/мл. Затем проводили вестерн блоттинг анализ с целью определения влияния экстракта цикория на активность GST в культурах гепатоцитов.

Результаты теста показали, что способ обработки продукта не снижал, а фактически улучшал способность растительного материала, в частности цикория к детоксикации. Для подтверждения этого измеряли повышенный уровень активности GST в зависимости от варьирующего количества экстракта цикория, добавляемого к культурам. Установлено, что уровень активности GST повышался по мере увеличения количества экстракта цикория.

Само собой разумеется, что специалисты в данной области могут вносить различные изменения и модификации в приведенные здесь предпочтительные варианты изобретения. Эти изменения и модификации можно вносить без нарушения духа и масштабов настоящего изобретения и без преуменьшения его предполагаемых преимуществ. То есть предполагается, что указанные изменения и модификации возможны только в рамках заявленной формулы изобретения.