безболезненные инъецируемые композиции, содержащие соли 2-арилпропионовых кислот

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция, подходящая для парентерального введения, обладающая противовоспалительным и аналгезирующим свойством, отличающаяся тем, что она содержит соль L-лизина с кетопрофеном в водном растворе при рН в диапазоне от 8 до 9, при этом указанный раствор не содержит консервантов, сорастворителей и поддерживающих веществ.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, содержащая бикарбонат натрия и гидроксид натрия при рН 8,5.

Описание изобретения к патенту

Область техники

Настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, подходящим для парентерального введения, которые содержат алкиламмониевые соли 2-арилпропионовых кислот и которые не вызывают боли после инъекции. В частности, композиции содержат кетопрофен, ибупрофен или напроксен в щелочных водных растворах.

Предшествующий уровень техники

Общим ограничением для введения парентеральных продуктов является возникновение боли в месте инъекции, которая может быть результатом действия активного лекарственного средства, компонентов препарата или препарата в целом. При разработке парентерального продукта, главным образом, внимание фокусируют на химической, физической и микробиологической стабильности и на общей безопасности препарата, с учетом пути введения, в то время как боли, возникающей в месте инъекции, которая является негативной особенностью инъецируемых лекарственных препаратов, не уделяется должного внимания. Последнее, в основном, обусловлено недостатком в числе и типе моделей, которые можно было использовать для исследования физиологии и механизмов возникновения боли, трудностью, изменчивостью и стоимостью, связанными с использованием животных моделей для оценки боли, и необходимостью принять меры по разграничению субъективных и объективных факторов (которые часто включают экстенсивные экспериментальные исследования), чтобы оценить интенсивность боли либо у животных, либо у людей.

Можно предположить, что данный препарат может вызывать повреждение ткани, что приводит к боли в месте инъекции; в этом случае методы скрининга по токсичности, подобно гемолизу эритроцитов, или метод клеточной линии L6 миобласта, или in vivo модель мышцы у грызунов, могут помочь найти рациональный подход для разработки и выбора оптимальных лекарственных препаратов с точки зрения желательных физико-химических характеристик и переносимости ткани (Brazeau G.A. et al., "Current perspectives on pain upon injection of drug". Journal of Farm. Sciences, 87, 6, June 1998).

Если, в противоположность этому, нет никаких показаний относительно какого-либо типа повреждения ткани в месте инъекции, то перед испытанием любых инъецируемых препаратов на людях целесообразно иметь способы, позволяющие скринировать составы в начале разработки на их потенциальную способность вызывать боль.

Одним из таких методов является модель облизывания лапы у крыс, используемая в качестве быстрого in vivo метода отбора для парентеральных продуктов, однако при этом не всегда получают результаты, которые впоследствии подтверждаются клиническими данными.

Краткое описание сущности изобретения

Во время экспериментов на животных авторами было обнаружено, что растворы, содержащие кетопрофен при различных pH и составе, при закапывании в глаз крысы вызывают у животных реакцию, заключающуюся в увеличении числа морганий, по сравнению с закапыванием только воды для инъекции. Полагая, что моргания так или иначе связаны с болью после инъекции, тест моргания у крыс можно использовать в качестве альтернативной животной модели для оценки степени интенсивности боли, вызванной инъецируемыми фармацевтическими композициями.

У людей в общеизвестном клиническом методе оценки болезненности инъецируемых растворов в качестве показателя используют значение VAS (визуальная аналоговая шкала, Visual Analogue Scale) (Scott and Huskinsson, Pain, 2:175-184, 1976). У людей числовое значение VAS представляет собой оценку интенсивности боли в месте инъекции непосредственно сразу после введения инъекции и спустя некоторое время после инъекции; результат выражают, используя 100 мм Visual Analogue Scale.

В соответствии с этим были выполнены клинические испытания с использованием двух содержащих кетопрофен инъецируемых композиций при оптимальном pH, которые вызывали меньшую по интенсивности боль в тесте моргания у крыс. Оценка боли после инъекции была проведена в сравнении с классическим препаратом кетопрофена в фосфатном буфере при pH 6,5 и с коммерческим препаратом "Artrosilene® fiale", ампулы для инъекции (Dompe farmaceutici S.p.A.), содержащие соль лизина кетопрофена в водном растворе при pH, доведенном до 7-7,5 лимонной кислотой и гидроксидом натрия, и не содержащие сорастворителей, таких как бензиловый спирт, которые обычно используют в инъецируемых препаратах для уменьшения боли после инъекции (WO 97/24114).

Известно, что препарат "Artrosilene® fiale" вызывает меньшую по интенсивности боль после инъекции, чем классические препараты кетопрофена.

В данном случае было обнаружено, что композиции для парентерального введения, содержащие алкиламмониевые соли 2-арилпропионовых кислот, как, например, кетопрофен, ибупрофен, напроксен или тиапрофеновая кислота, в щелочных водных растворах не вызывают боли после инъекции.

Таким образом, настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, подходящей для парентерального введения, обладающей противовоспалительным и аналгезирующим свойством, отличающейся тем, что она содержит алкиламмониевую соль 2-арилпропионовой кислоты, выбранной из кетопрофена, ибупрофена, напроксена или тиапрофеновой кислоты, в рацемической или энантиомерной форме, в водном растворе при pH в диапазоне от 8 до 9, при этом указанный раствор не содержит консервантов, сорастворителей и поддерживающих веществ.

Предпочтительные композиции содержат кетопрофен в виде соли L-лизина.

Более предпочтительные композиции содержат соль L-лизина кетопрофена, бикарбонат натрия и гидроксид натрия при pH 8,5.

Детальное описание изобретения

Были получены различные композиции соли L-лизина кетопрофена в водном растворе при различных pH и испытаны в тесте моргания у крыс, определенном выше. Исходя из этого испытания, были отобраны подходящие композиции, и эти композиции были подвергнуты сравнению с классическими композициями кетопрофена при pH 6,5 и с коммерческим препаратом кетопрофена "Artrosilene® fiale". Растворы в диапазоне pH от 8 до 9 не вызвали никакой боли после инъекции и, как было показано, в этом отношении оказались значительно лучшими, чем Artrosilene®.

Также была установлена корреляция между результатами теста крысиного моргания и клинического испытания, основанного на оценке по шкале VAS.

В таблице 1 представлены вещества, используемые в указанных экспериментах:

Таблица 1
	Поставщик
Соль лизина кетопрофена	Dompé
1N NaOH	Riedel-de Haen
35% HCl	Carlo Erba
NaHCO3	G. Faravelli
0,9% раствор NaCl	Bieffe Medital
Artrosilene® fiale	Dompé farmaceutici S.p.A.
Вода для инъецируемых препаратов	Bieffe Medital

Все испытуемые составы представляют собой 8% водные растворы соли L-лизина кетопрофена. Были получены растворы с различным pH, используя для доведения pH 1N раствор NaOH или 35% раствор HCl. В некоторых препаратах был также добавлен NAHCO ₃ при концентрации 4 мг/мл.

Artrosilene® и 0,9% раствор NaCl извлекали из их первоначальных ампул и флаконов и упаковывали в пробирки из темного стекла, снабженные полимерной крышкой и алюминиевым ободком. В таблицах 2 и 3 представлены конкретная композиция, pH и осмоляльность испытуемых составов в двух различных экспериментах.

Таблица 2 - Первый эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)
PG054/34/SU01	KSL + HCl	7,0	308
PG054/35/SU01	KSL	7,2	267
PG054/36/SU01	KSL + NaOH	8,0	289
PG054/37/SU01	KSL + NaOH	9,0	333
PG054/38/SU01	KSL + NaOH	9,5	403
PG054/53/SU01	KSL + NaOH	8,5	382
PG054/45/SU01	KSL + NaHCO3	7,0	359
PG054/46/SU01	KSL + NaHCO3 + NaOH	7,5	351
PG054/47/SU01	KSL + NaHCO 3 + NaOH	8,0	358
PG054/48/SU01	KSL + NaHCO3 + NaOH	8,5	382
PG054/49/SU01	KSL + NaHCO3 + NaOH	9,0	395
PG054/50/SU01	KSL + NaHCO 3 + NaOH	9,5	455

Таблица 3 - Второй эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)
PG054/62/SU01	KSL + NaHCO 3 + HCl	7,0	356
PG054/63/SU01	KSL + HCl	7,0	276
PG054/64/SU01	KSL + NaHCO3 +NaOH	8,0	362
PG054/65/SU01	KSL+NaOH	8,0	282
PG054/66/SU01	KSL+NaHCO3 + NaOH	9,0	399
PG054/67/SU01	KSL + NaOH	9,0	336
PG054/70/SU01	KSL + NaOH	7,5	268
PG054/71/SU01	KSL + NaOH	8,5	301
PG054/72/SU01	KSL + NaOH	9,5	405
PG054/75/SU01	KSL + NaHCO3 + NaOH	7,5	354
PG054/76/SU01	KSL + NaHCO3 + NaOH	8,5	384
PG054/77/SU01	KSL + NaHCO 3 + NaOH	9,5	463

Животные

Ниже представлены используемые в экспериментах животные:

Вид:	крыса
Линия:	Sprague-Dawley
Поставщик:	Charles-River (Calco, LC, Italy)
Пол:	самец
Возраст:	5-7 недель
Масса тела при поступлении:	176-200 г

По поступлении животных размещали по пять особей в клетку (Makrolon® 3G type, Tecniplast Gazzada S.r.l., Buguggiate, VA, Italy) и подвергали акклиматизации в помещении для животных в течение по меньшей мере 6 дней.

Для подстилки использовали стружки древесины тополя и ели, термообработанные для удаления смолы и без пыли.

Предполагалось, что загрязняющие примеси, которые могли бы помешать цели исследования, в дереве отсутствуют.

Температура помещения для животных была 20±2°C и относительная влажность составляла 55±10%.

Освещение помещения: 12 часов искусственного света (7,00 до полудня-7,00 после полудня), 12 часов темноты (7,00 после полудня-7,00 до полудня).

Животных кормили гранулами, поставляемыми Laboratorio Dottori Piccioni, Gessate, Milano, Italy. Согласно аналитическим сертификатам, предоставляемым поставщиком, содержание загрязняющих примесей находилось в пределах, предполагаемых EPA-TSCA (44 Fed. Reg. 44053-44093 July 26, 1979).

Предполагалось, что загрязняющие примеси, которые могли бы помешать цели исследования, отсутствуют как в корме, так и воде, предназначенных для животных.

Корм и вода предоставлялись животным во время акклиматизации по желанию.

Различные препараты кетопрофена вводили в глаз каждого животного и в каждом случае в установленное время определяли число морганий. Во всех экспериментах в глаз крысы закапывали 25 мкл каждого препарата, используя пипетку Gilson.

Препарат

соль L-лизина кетопрофена	160 мг
бикарбонат натрия	8 мг
гидроксид натрия	3 мг
вода для инъекции, дост. количество	2 мл

Способ получения

160 мг соли L-лизина кетопрофена и 3 мг гидроксида натрия добавляли к 1,6 мл воды для инъекции. Затем к раствору добавляли бикарбонат натрия (8 мг), затем добавляли воду для инъекции до 2 мл.

Пример 1

Тест моргания у крыс

В первом сеансе каждого эксперимента в левый глаз крыс закапывали 25 мкл каждого препарата. Во втором сеансе в правый глаз тех же самых крыс закапывали 25 мкл каждого препарата.

В каждом сеансе подсчитывали количество морганий крыс в пределах 15 секунд с момента закапывания (время определяли посредством хронометра).

Промежуток времени между двумя экспериментами составлял 8 дней.

Результаты первого эксперимента представлены в Таблицах 4 и 5. На фиг.1 изображен профиль pH-ответа, наблюдаемый в первом эксперименте.

Результаты второго эксперимента представлены в Таблицах 6 и 7. На фиг.2 изображен профиль pH-ответа, наблюдаемый во втором эксперименте.

Таблица 4 - Первый сеанс - Первый эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)	Среднее число морганий после 15" от момента закапывания	Стандартное отклонение
PG054/34	KSL+HCl	7,0	308	7,75	1,4
PG054/35	KSL	7,2	267	7,25	1,6
PG054/36	KSL+NaOH	8,0	289	1,71	0,4
PG054/37	KSL+NaOH	9,0	333	1,14	0,3
PG054/38	KSL+NaOH	9,5	403	4,13	1,1
PG054/53	KSL+NaOH	8,5	301	0,2	0,2
PG054/40	Artrosilene® fiale	7,3	308	9,25	1,9
PG054/41	NaCl	-	-	0,83	0,4

Таблица 5 - Второй сеанс - Первый эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)	Среднее число морганий после 15" от момента закапывания	Стандартное отклонение
PG054/45	KSL+NaHCO3	7,0	359	5,1	1,0
PG054/46	KSL+NaHCO3+NaOH	7,5	351	3,0	0,8
PG054/47	KSL+NaHCO3+NaOH	8,0	358	1,5	0,3
PG054/48	KSL+NaHCO3+NaOH	8,5	382	2,1	0,8
PG054/49	KSL+NaHCO3+NaOH	9,0	395	3,1	0,7
PG054/50	KSL+NaHCO3+NaOH	9,5	455	6,1	1,4
PG054/51	Artrosilene® fiale	7,4	307	9,6	2,5
PG054/52	NaCl	-	-	1,2	0,6

Таблица 6 - Первый сеанс - Второй эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)	Среднее число морганий после 15" от момента закапывания	Стандартное отклонение
PG054/62	KSL+NaHCO3+HCl	7,0	356	5,9	0,8
PG054/63	KSL+HCl	7,0	276	6,8	1,0
PG054/64	KSL+NaHCO3 +NaOH	8,0	362	2,0	0,4
PG054/65	KSL+NaOH	8,0	282	4,1	1,3
PG054/66	KSL+NaHCO 3+NaOH	9,0	399	3,0	0,5
PG054/67	KSL+NaOH	9,0	336	1,9	0,6
PG054/68	Artrosilene® fiale	7,3	-	10,3	1,7
PG054/69	NaCl	-	-	0,4	0,2

Таблица 7 - Второй сеанс - Второй эксперимент
Партия	Композиция	pH	Осмоляльность (мОсмоль/кг)	Среднее число морганий после 15" от момента закапывания	Стандартное отклонение
PG054/70	KSL+NaOH	7,5	268	7,8	1,3
PG054/71	KSL+NaOH	8,5	301	1,9	0,5
PG054/72	KSL+NaOH	9,5	405	3,5	0,8
PG054/73	Artrosilene® fiale	7,3	282	8,8	1,7
PG054/74	NaCl	-	308	0,6	0,2
PG054/75	KSL+NaHCO3+NaOH	7,5	354	2,5	0,6
PG054/76	KSL+NaHCO3+NaOH	8,5	384	3,0	0,4
PG054/77	KSL+NaHCO3+NaOH	9,5	463	9,6	2,2

Пример 2

Оценка по VAS

Все клинические испытания проводили LCG (Bourn Hall Clinic, Cambridge, UK), за исключением клинического испытания KLS 0497, проведенного Aster Clinical Research Center (Париж, Франция), и клинического испытания KLS 0101, проведенного I.P.A.S. S.A.(Ligometto, Швейцария).

Каждая обработка заключалась в глубокой внутримышечной инъекции одной ампулы испытуемых препаратов в верхнюю наружную часть ягодичной области (gluteus maximus). Каждую инъекцию выполняли в пределах 10 минут после приготовления шприца и на протяжении 3-5 секунд. Интенсивность боли в месте инъекции оценивали субъекты и затем ее регистрировали по соответствующей форме в истории болезни, используя 100 мм Visual Analogue Scale.

Статистическую обработку результатов проводили с помощью программы STAT100 релиз 1.26 для Windows 95.

Данные вводили в статистическую программу из Microsoft Excel посредством функции копирования/вставки, печатали и вручную проверяли перед началом обработки.

Все переменные представлены в виде N, среднего, стандартного отклонения, стандартной ошибки среднего.

Для подтверждения эффективности испытания, был выполнен 't-тест', чтобы сравнить действие эталонного соединения (Artrosilene®) относительно физиологического раствора.

Чтобы сравнить профиль pH-ответа для кетопрофена, был проведен ANOVA (One Way replicated measures). Был применен тест Даннета.

Результаты представлены в Таблице 8, где приведено сравнение числовых значений VAS с количеством морганий крыс.

В представленных выше экспериментах фактически подтверждается корреляция между количеством морганий у крыс и числовым значением VAS (Visual Analogue Scale) у людей.

В Таблице 8 приведена сводка результатов, полученных с различными препаратами (соответствующие рецептуры препаратов приведены в Таблице 9). Числовое значение VAS определяли непосредственно сразу после инъекции, в то время как количество морганий крыс подсчитывали через 15 секунд после закапывания в глаз крысы.

Таблица 8
Препарат*	Клинич. N°	N° пациентов	Среднее значение ±С.О.	N° пациентов с VAS 50	N° пациентов с VAS 75	Среднее число морганий
KSL+Фосфатный буфер pH 6,5	KSL0199	48	47,3±26,3	22 (45,83%)	7 (14,58%)	24,6
Artrosilene® fiale pH 7,0	KSL0196	18	46,9±25,6	9 (50%)	4 (22,22%)	9,49
Artrosilene® fiale pH 7,0	KSL0396	17	45,3±23,5	7 (41,18%)	3 (17,65%)
Artrosilene® fiale pH 7,0	KSL0497	31	42,9±21,2	12 (38,71%)	3 (9,68%)
Artrosilene® fiale pH 7,0	KSL0199	44	40,0±27,0	15 (34,09%)	6 (13,64%)
KSL+NaHCO3 pH 8,0	KSL0100	12	35,0±25,3	4 (33,33%)	1 (8,33%)	2,45
KSL +NaHCO 3 pH 8,5	KSL0101	32	20,4±16,2	2 (6,25%)	0	1,9

Таблица 9 - Рецептура препаратов
KSL+Фосфатный буфер pH 6,5	Arlrosilene ® fiale pH 7,0	KSL +NaHCO 3 pH 8,0	KSL +NaHCO3 pH 8,5
KSL 160 mg	KSL 160 mg	KSL 160 mg	KSL 160 мг
NaH2 PO4 H2O 35,88 мг	Безводная лимонная кислота 5 мг	NaHCO 3 4 мг	NaHCO3 8 мг
NaOH дост. колич. до pH 6,5	NaOH дост. колич. до pH 7,0	NaOH дост. колич. до pH 8,0	NaOH дост. колич. до pH 8,5
Вода для инъекции, дост. колич. до 2 мл	Вода для инъекции, дост. колич. до 2 мл	Вода для инъекции, дост. колич. до 2 мл	Вода для инъекции, дост. колич. до 2 мл

Связь между VAS и числом морганий у крыс после введения тех же самых препаратов изображена на фиг.3.

Исследовали водные составы соли лизина кетопрофена (KSL) (80 мг/мл) и составы KSL (80 мг/мл), содержащие бикарбонат натрия (4 мг/мл) при pH в диапазоне от 7,0 до 9,5. В качестве сравнительного стандарта использовали "Artrosilene® fiale" и 0,9% раствор хлорида натрия (физиологический раствор). Результаты в тесте моргания крыс показали, что число морганий оказалось больше для составов с pH, находящимся в экстремальном пределе исследуемого диапазона.

Кривая вогнутой формы, полученная исходя из данных приведенных выше экспериментов, показала, что составы с промежуточным pH являются более толерантными (т.е. число морганий ближе к значению, полученному с солевым изотоническим раствором).

Водный раствор KSL показал минимальное действие, оцененное по числу морганий, при pH 8,5, с меньшими числами морганий в диапазоне от 8,0 до 9,5.

Водный раствор KSL + бикарбонат натрия показал минимальное действие, оцененное по числу морганий, при pH 8,0, с меньшими числами при pH в диапазоне от 7,5 до 9,0.

Эксперимент повторяли дважды, испытывая препараты с одними и теми же композициями, но различных партий, при этом получая одинаковые результаты в двух экспериментальных рядах.

Исходя из анализа экспериментальных данных, было отмечено, что число морганий, вызванное составами с pH в диапазоне от 8,0 до 9,0 (растворы KSL и растворы KSL + бикарбонат), было сопоставимо меньше. В этом диапазоне pH эффект уменьшения числа морганий был значительным. С другой стороны, осмоляльность, по-видимому, не оказывает влияния на число морганий.

Во второй части исследования число морганий, вызванных составами KSL, связывали с числовым значением VAS, полученным при испытании тех же самых составов на людях. Была установлена корреляция с R=0,778 и было замечено, что составы с более высоким pH являются для людей более толерантными (допустимыми), демонстрируя более низкие значения VAS. На самом деле, фокусируя внимание на составе при pH 8,5, было установлено, как это показано в Таблице 8, что среднее числовое значение VAS (20,4) для указанного состава значительно ниже, чем для состава "Artrosilene® fiale" (среднее: 43,8). Кроме того, 6,25% пациентов, лечимых составом с pH 8,5, показали значение VAS 50, и ни один из пациентов не показал значение VAS 75, в то время как 41% пациентов, которым инъецировали "Artrosilene® fiale", показали значение VAS 50 и 15,8% показали VAS 75.

Как видно из Таблицы 8, значения VAS (оценки действия Artrosilene согласно шкале VAS) Artrosilene, полученные в различных клинических испытаниях и проведенные в разных клинических центрах, являются сопоставимыми.

Этот результат подтверждается тестом моргания. На самом деле для "Artrosilene® fiale" было установлено количество морганий 9,49, которое оказалось значительно выше, чем значение 1,9, обнаруженное для состава при pH 8,5.

Принимая во внимание результаты, полученные при использовании теста моргания крыс, и корреляцию между оценкой согласно шкале VAS и количеством морганий, авторы приходят к заключению, что препараты с pH в диапазоне от 8,0 до 9,0 являются менее болезненными. Предпочтительный препарат, который не вызывает боли после инъекции, представляет собой водный состав, имеющий pH около 8,5.