способ определения степени развития жирового тела пчел

Формула изобретения

Способ определения степени развития жирового тела пчел, включающий препарирование жирового тела с дальнейшей фиксацией в смеси Карнуа с последующей заливкой в парафин и в 10%-ном формалине, получение гистологических срезов, измерение ширины, длины клеток жирового тела и оценку его развития, отличающийся тем, что для получения изолированных клеток из состава жирового тела используют следующую последовательность: брюшко пчелы помещают на сутки в 10%-ный раствор формалина, забуференного до рН 7,6 при помощи 0,1М фосфатного буфера при температуре 2-4°С; с помощью микроскопа препарируют жировое тело и переносят его в свежий фиксирующий раствор 10%-ного формалина, рН 7,6 на 10-16 сут при температуре 2-4°С; переносят на 16-24 ч в 50%-ный раствор КОН при температуре 2-4°С; промывают в 100-200 мл дистиллированной воды в течение 2 сут при температуре 2-4°С; сливают воду и доливают 10 мл свежей дистиллированной воды, встряхивают до распада клеток жирового тела; из взвеси клеток готовят мазки, которые высушивают при комнатной температуре; мазки окрашивают 1%-ной метиленовой синью и гематоксилин-эозином, а для определения степени развития жирового тела измеряют с помощью микроскопа ширину, длину ядра, клетки, вычисляют отношение площади клетки к площади ядра и оценивают степень развития жирового тела пчелы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к зоотехнии, и может быть использовано для оценки общего показателя физиологического состояния пчелы, так как она определяет потенциальные возможности продолжительности жизни особей, их успешной зимовки, восковыделения, воспитания расплода, кормодобывающей деятельности, устойчивости к заболеваниям и др.

Прототипом изобретения является способ определения степени развития жирового тела пчел, включающий препарирование жирового тела с дальнейшей фиксацией в смеси Карнуа с последующей заливкой в парафин и в 10%-ном формалине, получения гистологических срезов, измерение ширины, длины клеток жирового тела и оценку его развития (Голикова Н.А., Белявский В.И., Морфология и гистохимия жирового тела осенне-зимних пчел. / Лечение и профилактика незаразных болезней в промышленных животноводческих комплексах, Казань, 1984, с.105-112).

Недостатком прототипа является погрешность в измерении ширины и длины клеток жирового тела, т.к. в срезе форма клеток не идентична, вследствие получения клеток жирового тела на гистологических срезах различной конфигурации.

Изобретение позволяет получить новый технический эффект - определить более точные количественные морфометрические характеристики клеток, выделенных из состава органа, и повысить научную сторону изучения морфофункциональной характеристики клеток жирового тела. Данный метод обеспечивает широкие возможности научного материала исследования, например, при проведении исследований по изучению и сравнении характера изменений развития жирового тела пчел разного возраста, летней и осенней генерации, влияния кормления семей пчел различными видами биостимуляторов, по количественным показателям исследования органа.

Этот технический эффект достигается тем, что для получения изолированных клеток из состава жирового тела используют следующую последовательность: брюшко пчелы помещают на сутки в 10% раствор формалина, забуференного до рН 7,6 при помощи 0,1 М фосфатного буфера, при температуре 2-4°С; с помощью микроскопа препарируют жировое тело и переносят его в свежий фиксирующий раствор 10% формалина, рН 7,6 на 10-16 суток при температуре 2-4°С; переносят на 16-24 часа в 50% раствор КОН при температуре 2-4°С; промывают в дистиллированной воде (100-200 мл) в течение 2 суток при температуре 2-4°С; сливают воду и доливают 10 мл свежей дистиллированной воды, встряхивают до распада клеток жирового тела; из взвеси клеток готовят мазки, которые высушивают при комнатной температуре; мазки окрашивают 1% метиленовой синью и гематоксилин-эозином, а для определения степени развития жирового тела измеряют с помощью микроскопа ширину, длину ядра, клетки, вычисляют отношение площади клетки к площади ядра и оценивают степень развития жирового тела пчелы.

На фиг.1 показан общий вид морфологического состояния жирового тела пчелы по прототипу (степень развития - три балла); на фиг.2 - изолированные клетки, выделенные из состава жирового тела.

Изобретение иллюстрируется на следующем примере.

Пример. Для изучения и сравнения характера изменения развития жирового тела пчел разного возраста летней и осенней генерации, влияния кормления сахарным сиропом с помощью предложенного изобретения изучили морфометрическую характеристику клеток: измеряли площадь клеток (S_кл), площадь ядра (S _я) и определяли ядерно-цитоплазматическое отношение. Изучая морфометрические показатели жирового тела осенних пчел, установили зависимость изменения размеров жирового тела пчел от степени развития и сезона года. Результаты проведенных исследований приведены в таблице.

Морфофункциональная характеристика жирового тела осенних пчел в зависимости от степени развития жирового тела
Месяцы	Показатели
	Жировое тело, баллы, M±m	Площадь жировых клеток,мкм2, M±m	Площадь ядра,мкм2, M±m	Ядерно-цитоплазматическое отношение, M±m
Август	2,82±2,15	1296,4±8,93	131,1±0,86	9,8±5,81
Сентябрь	2,86±0,05	1382,9±0,05	129,8±9,23	10,6±8,33
Октябрь	3,15±0,06	1586,4±8,57	85,8±3,71	18,8±2,31
Ноябрь	3,20±0,03	1894,3±7,03	91,4±4,31	20,7±5,16
Декабрь	3,75±0,50	2343,5±6,15	96,7±5,11	24,2±1,56
Январь	3,50±0,04	981,9±11,33	62,7±2,87	15,6±3,95
Февраль	3,04±0,62	856,7±8,61	71,6±6,10	11,9±4,18
Март	2,94±0,53	712,1±9,86	76,4±4,12	9,31±2,39

Из таблицы видно, что зимующие пчелы наименьшие размеры изолированных клеток жирового тела имеют в августе S _кл=1296,4±8,93 мкм², S _я=131,1±0,86 мкм², и с ядерно-цитоплазматическим отношением - 9,8±5,81 и в марте S_кл =712,1±9,86 мкм², S _я=76,4±4,12 мкм², и с ядерно-цитоплазматическим отношением - 9,31±2,39. Наибольшие размеры изолированных клеток жирового тела наблюдаются в декабре S_кл =2343,5±6,15 мкм²; S _я=96,7+5,11 мкм², ядерно-цитоплазматическое отношение - 24,2±1,56.

Установлено, что благодаря данному изобретению, можно проследить динамику развития жирового тела пчел разного возраста летней и осенней генерации, влияние кормления сахарным сиропом, и дать характеристику физиологическому состоянию пчел в разные периоды их жизнедеятельности в течение года.