способ диагностики отравления наркотическими и/или сильнодействующими веществами

Формула изобретения

Способ диагностики отравления наркотическими и/или сильнодействующими веществами путем исследования крови, отличающийся тем, что определяют рН сыворотки крови, а также исследуют сыворотку крови методом клиновидной дегидратации, для чего каплю сыворотки крови высушивают на горизонтально расположенном предметном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 ч, а затем анализируют структуру полученной дегидратированной капли в световой микроскоп и диагностируют отравление наркотическими и/или сильнодействующими веществами при значениях рН сыворотки крови ниже 6,8 и наличии штриховых трещин в центральной зоне дегидратированной капли.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к судебной медицине, и может быть использовано для предварительного установления отравления наркотическими и/или сильнодействующими веществами при исследовании сыворотки крови.

Наиболее известными средствами обнаружения наркотических и сильнодействующих веществ являются тесты, основанные на цветных реакциях растворов химических реактивов с исследуемыми объектами. В результате возникает характерное окрашивание реакционной смеси, которое используется как показатель возможного присутствия данных веществ. Одним из наиболее распространенных методов анализа является тонкослойная хроматография. Хроматограммы проявляют реактивом Драгендорфа (раствор йодистого висмута в присутствии йодистого калия BiI₃/KI KBiI ₄), дающим с наркотическими и сильнодействующими веществами оранжевое или кирпично-красное окрашивание. Применение этого реактива основано на свойстве алкалоидов как оснований образовывать простые или комплексные соли с комплексными йодидами. Отсутствие окрашивания с реактивом Драгендорфа имеет доказательное значение при судебно-химическом исследовании (Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. М: «Медицина», 1975. - 376 с.).

Однако данный способ имеет ряд недостатков. Нередко оранжевая окраска при обработке данным реактивом бывает вызвана наличием гнилостных процессов в биологических объектах, доставленных на экспертизу, так как окрашивание может быть обусловлено наличием в пробе белков, продуктов их распада, других веществ, содержащих гетероатом азота.

Кроме того, проведение реакции с реактивом Драгендорфа требует предварительной обработки биологических объектов (приготовления щелочной хлороформной вытяжки и т.д.).

Также продолжительность периода, в течение которого наркотические и сильнодействующие вещества могут быть обнаружены в организме, зависит от исследуемого материала. Анализ слюны или крови должен быть проведен в течение 24 часов после употребления препаратов. Если образцы крови или слюна для анализа были взяты по прошествии большего срока, данные вещества, а также продукты их метаболизма будет практически невозможно обнаружить. Для таких случаев более пригодным является анализ мочи, который позволяет обнаружить одноразовое употребление этих препаратов в течение 1-4-х дней после их приема. Но иногда эксперт не располагает достаточным количеством мочи для анализа. Поэтому часто необнаружение наркотических и сильнодействующих веществ при судебно-химическом исследовании не может служить гарантией того, что причиной смерти не является вызванное ими отравление (Кригер О.В., Могутов С.В., Бутовский Д.И. и др. // Суд. мед. Эксперт. - 2001. - №2. - С.9-14).

Несколько лет назад учеными Института физиологически активных веществ РАН совместно с Научно-практическим центром наркологии Департамента здравоохранения г.Москвы был разработан новый способ выявления лиц, употребляющих наркотики. Скрининговый метод ДИАНАРК (Мягкова М.А., Панченко О.Н. Патент РФ №2250467, «Способ диагностики факта потребления наркотических веществ», 2004 г.) основан на иммуноферментном определении специфических антител, образующихся в организме после приема наркотического вещества. Метод достоверно выявляет факт употребления наркотиков спустя 2-4 месяца с момента их употребления. Время анализа 2,5 часа. Объем образца: капля крови 10 мкл.

Способ включает инкубацию анализируемой пробы сыворотки крови с конъюгатом гаптен - макромолекулярный носитель, иммобилизованным на твердой фазе, последующую инкубацию образовавшегося иммунного комплекса с конъюгатом антител против иммуноглобулинов класса М и G человека, меченных ферментом, и выявление уровня специфических антител по разнице значений оптической плотности анализируемого образца с аналогичными показателями эталонных проб с наличием и без наркотиков, содержащихся в сыворотки крови, и установление факта потребления последних в случае совпадения или превышения уровня антител в анализируемой и эталонной пробе.

Однако недостатком данного метода является необходимость для его осуществления оборудования для иммуноферментного анализа, а также наличия достаточно дорогостоящих реактивов (см. выше).

В задачу предлагаемого изобретения положена разработка способа диагностики отравлений наркотическими и сильнодействующими веществами, позволяющего при минимальном количестве исследуемого материала достаточно быстро и достоверно проводить диагностику путем измерения значений рН и применения метода клиновидной дегидратации биологических жидкостей.

Поставленная задача в способе диагностики отравлений наркотическими и сильнодействующими веществами достигается тем, что определяют рН сыворотки крови, а также исследуют сыворотку крови методом клиновидной дегидратации, для чего каплю сыворотки крови высушивают на горизонтально расположенном предметном стекле при комнатной температуре в течение 18-24 часов, а затем анализируют структуру полученной дегидратированной капли в световой микроскоп и диагностируют отравление наркотическими и/или сильнодействующими веществами при значениях рН сыворотки крови ниже 6,8 и наличии штриховых трещин в центральной зоне дегидратированной капли.

Данный способ не требует дорогостоящего оборудования и реактивов, прост в исполнении, не требует большого количества исследуемого материала (сыворотки крови), что позволяет в дальнейшем проводить другие виды общепринятых лабораторных исследований. Все это позволяет в течение небольшого отрезка времени объективно подтвердить заподозренное отравление наркотическими или сильнодействующими веществами, давая возможность эксперту ответить на вопросы правоохранительных органов о возможной причине смерти.

В ходе разработки предлагаемого способа экспериментальным путем была доказана необходимость и достаточность для диагностики отравления наркотическими и/или сильнодействующими веществами одновременного применения двух диагностических критериев: рН сыворотки крови ниже 6,8 и наличие штриховых трещин в центральной зоне дегидратированной капли сыворотки крови (при исследовании методом клиновидной дегидратации). При этом были исследованы и проанализированы образцы сыворотки крови, мочи от 39 трупов, доставленных в Нижегородское Обл. Бюро СМЭ для проведения вскрытия. Из них 17 скончались от отравления наркотическими и сильнодействующими веществами (таблица), 10 - от различных заболеваний (ни алкоголя, ни наркотических веществ обнаружено не было), 10 трупов, у которых наличие наркотических веществ выявлено не было, но имело место достаточно высокое содержание этилового алкоголя (1,57-3,09 в крови и 1,07-3,55 в моче). При отнесении обнаруженных веществ к категории наркотических или сильнодействующих использовали списки наркотических, психотропных, сильнодействующих и ядовитых веществ ((Списки наркотических, психотропных, сильнодействующих и ядовитых веществ. Списки А и Б. / Библиотека журнала «Качество медицинской помощи» №1 / 2001 г./) - М.: ГРАНТЪ, 2001. - 228 с.). Также были изучены два случая отравления метиловым спиртом и угарным газом.

Распределение случаев смерти от отравления наркотическими и сильнодействующими веществами
Обнаруженные вещества	Число случаев
Морфин	8
Морфин + производные 1,4-бензодиазепина	3
Морфин + кодеин	2
Морфин + производные фенотиазина	1
Производные 1,4-бензодиазепина	1
Эфедрин	1
Производные фенотиазина	1

Исследовали кровь и мочу от трупов лиц с давностью наступления смерти 24-48 часов до момента вскрытия. Картины высохшей капли сыворотки крови, мочи и мочи с добавлением 10% раствора альбумина получали методом клиновидной дегидратации. Параллельно проводили определение рН биологических жидкостей, глюкозы и кетоновых тел в моче. Во всех изученных случаях наличие или отсутствие наркотиков, этилового алкоголя в организме подтверждалось данными судебно-химического исследования. Описание картины высохшей капли представляли в виде таблицы. Каплю подразделяли на три зоны, в каждой из них оценивали количество, расположение, форму и размер следующих признаков: трещины, конкреции, кристаллы, особенности.

Для статистического анализа полученных результатов была сформирована электронная база данных, в которую вносили качественные и количественные признаки. Взаимосвязь параметров картины высохшей капли биологической жидкости с наличием наркотических и/или сильнодействующих веществ по данным судебно-химического анализа, с наличием следов инъекций и с заключением эксперта о смерти от отравления наркотическим (сильнодействующим) веществом оценивали методом корреляционного анализа. Зависимость считалась статистически достоверной при коэффициенте корреляции, большем 0,5. Значимыми принимали те параметры высохшей капли, зависимость которых была достоверной для всех трех перечисленных показателей одновременно.

При анализе корреляций кристаллооптических показателей высохшей капли как нативной мочи, так и мочи с добавлением 10% раствора альбумина с содержанием наркотических веществ статистически достоверных признаков выявлено не было.

Статистически достоверная взаимосвязь была обнаружена между наличием характерных штриховых трещин в центре высохшей капли сыворотки крови и значений рН сыворотки крови с обнаружением наркотиков, с наличием следов инъекций на трупе и с заключением эксперта о смерти от отравления наркотическим (сильнодействующим) веществом.

Метод клиновидной дегидратации был разработан в Московском НИИ геронтологии (Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. // Урология и нефрология - 1998 г. - №1. - С.19-23). В настоящее время он применяется для диагностики различных состояний, однако возможность его использования для диагностики отравлений наркотическими и сильнодействующими веществами ранее известна не была и показана авторами данной заявки впервые.

Производим описание фигур.

На фиг.1 показано изображение центральной зоны высохшей капли сыворотки крови трупа гр-ки Е., умершей от инфаркта миокарда (ув. × 50).

На фиг.2 показано изображение центральной зоны высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на С., умершего от отравления морфином (ув. × 50).

На фиг.3 показано изображение центральной зоны высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на Д., умершего от отравления эфедрином (ув. × 50).

На фиг.4 показано изображение центральной зоны высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на С., умершего от отравления производными фенотиазина (ув. × 50).

На фиг.5 показано изображение центральной зоны высохшей капли сыворотки крови трупа гр-на П., умершего от алкогольной болезни с поражением сердца, печени, поджелудочной железы. В моче обнаружен анальгин и этиловый спирт (ув. × 50).

На фиг.2-4 обозначено:

1 - штриховые трещины.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Кровь центрифугируют в течение 10 минут при 1000 об/мин. В полученной сыворотке определяют значение рН. Затем на предметное стекло, специальным образом обработанное, расположенное строго горизонтально, наносят каплю исследуемой жидкости объемом 0,01 мл (10 мкл). При этом диаметр капли составляет около 5 мм. Делают 6 повторов для проверки достоверности и взаимной идентичности высохшей капли. Высушивание проводят при температуре 20-25°С и относительной влажности 65-70% вдали от нагревательных приборов и прямых солнечных лучей при минимальной подвижности окружающего воздуха. В процессе высыхания капля должна быть неподвижной. Продолжительность периода высыхания составляет 18-24 часов. Вид и структуру дегидратированной капли оценивали с помощью микроскопа в отраженном свете при увеличении 10×8. Штриховые трещины отличаются от обычных более темным (черным) цветом и большей шириной, а также тем, что оканчиваются по краям треугольными расширениями с несколькими ответвлениями. При обнаружении в центральной зоне высохшей капли штриховых трещин и значениях рН сыворотки ниже 6,8 можно диагностировать отравление наркотическими или сильнодействующими веществами.

Примеры использования кристаллооптических характеристик и рН сыворотки крови при установлении причины смерти.

Пример 1. В Нижегородское бюро СМЭ доставлен труп гр-ки Е., акт от 17.08.06 г. Известно, что гр-ка Е. скоропостижно умерла дома. При исследовании было установлено, что рН сыворотки крови составляет около 7,5. Штриховые трещины в центре высохшей капли сыворотки крови отсутствуют (фиг.1).

По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от ишемической болезни сердца.

Пример 2. В Нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на С., акт от 12.08.06 г. При наружном осмотре трупа обнаружены следы инъекций. При исследовании было установлено, что рН сыворотки крови составляет 6,5. В центре высохшей капли сыворотки крови выявлено большое количество штриховых трещин (фиг.2).

Судебно-химическим исследованием в моче трупа гр-на С обнаружен морфин. По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от отравления морфином.

Пример 3. В Нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на Д., акт от 27.11.06 г. При наружном осмотре трупа выявлены следы инъекций. При исследовании было установлено, что рН сыворотки крови составляет 6,5. В центре высохшей капли сыворотки крови обнаружены штриховые трещины (фиг.3).

Судебно-химическим исследованием в моче трупа гр-на Д. обнаружен эфедрин. По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от отравления эфедрином.

Пример 4. В Нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на С., акт от 20.11.06 г. При наружном осмотре трупа обнаружены следы инъекций. При исследовании было установлено, что рН сыворотки крови составляет 6,7. В центре высохшей капли сыворотки крови выявлено значительное количество штриховых трещин (фиг.4).

Судебно-химическим исследованием в моче трупа гр-на С. обнаружены производные фенотиазина. По заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от отравления производными фенотиазина.

Пример 5. В нижегородское Бюро СМЭ доставлен труп гр-на П., акт от 22.11.06 г. При исследовании установлено, что рН сыворотки крови составляет 7,0. Штриховые трещины в центре высохшей капли сыворотки крови отсутствуют (фиг.5).

Судебно-химическим исследованием в моче, крови и внутренних органах трупа гр-на П. наркотических веществ не выявлено, однако обнаружен анальгин. Содержание этилового алкоголя в крови = 2,01 , в моче = 2,27 . Согласно заключению судебно-медицинского эксперта смерть наступила от алкогольной болезни с поражением сердца, печени, поджелудочной железы.

Результаты показали, что с помощью вышеуказанного способа можно в короткие сроки объективно подтвердить заподозренное отравление наркотическими или сильнодействующими веществами, дифференцируя его от других отравлений, таким образом, давая возможность эксперту ответить на вопросы правоохранительных органов о возможной причине смерти.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. М: «Медицина», 1975. - 376 с.

2. Кригер О.В., Могутов С. В., Бутовский Д.И., Власова Н.В., Воробьева Е.В., Демьяненко Т.М., Мостман И.Г., Мурашова Л.Н., Никишцев И.Н., Самсонова В.В., Стаханова М.Ю. // Суд. мед. Эксперт. - 2001. - №2. - С.9-14.

3. Мягкова М.А., Панченко О.Н. Патент РФ №2250467 «Способ диагностики факта потребления наркотических веществ», 2004 г.

4. Списки наркотических, психотропных, сильнодействующих и ядовитых веществ. Списки А и Б./Библиотека журнала «Качество медицинской помощи» №1 /2001 г./) - М.: ГРАНТЪ, 2001. - 228 с.

5. Шатохина С.Н., Шабалин В.Н. // Урология и нефрология - 1998 г. - №1. - С.19-23.