способ стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса

Формула изобретения

Способ стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса в эксперименте путем введения аминокислоты, отличающийся тем, что животному в качестве аминокислоты вводят L-лизин парентерально в дозе 0,15, или 0,5, 1,5, 5, 15, 50, 150, 450 мкг/кг один раз в сутки на протяжении 4-х дней за 15 мин до начала стрессорного воздействия.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и физиологии, и заключается в разработке способа стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса.

Известно, что даже однократное воздействие стресса может способствовать выраженному снижению функциональной активности иммунной системы (Корнева Е.А. Гормоны и иммунная система / Е.А.Корнева, Э.К.Шхинек. - Л.: Наука, 1988. - 251 с.). В условиях стресса могут активироваться неспецифические Т-супрессоры и стресслимитирующая опиоидная система, приводящие к развитию иммуносупрессии (Кириллина Е.А., Захарова Л.А., Михайлова А.А., Василенко A.M. Т-супрессорный и опиатергический механизмы снижения иммунного ответа при стрессе // Иммунология. - 1990. - №3. - С.68-70). Одним из принципиально возможных путей коррекции стрессиндуцированного иммунодефицита является воздействие на иммунную систему через стимуляцию интраиммунных механизмов регуляции (Сухих Г.Т., Малайцев В.В., Богданова И.М. Восстановление интерлейкином-2 активности естественных киллеров при стрессе // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1986. - Т.101, №3. - С.341-343).

Наиболее близким способом стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса является применение аминокислоты L-аргинина, обладающей выраженным стресслимитирующим действием (Кирьянова Н.А. Автореф. дисс. на соискание уч. степени кандидата медицинских наук. - Курск, 2006. - С.14-19).

Недостатком данного способа является неустойчивость, разнонаправленный характер эффекта препарата (включая иммуносупрессивный) в разных дозах и его статистически значимая выраженность при применении лишь в одной из использованных доз (150 мкг/кг).

Задача изобретения - стимуляция иммунной функции при иммуносупрессии, вызванной эмоционально-болевым стрессом.

Задача изобретения достигается тем, что экспериментальным животным (крысы, мыши) парентерально (внутрибрюшинно) 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации эритроцитами барана за 15 мин до начала стрессорного воздействия вводят растворенную в изотоническом растворе хлорида натрия аминокислоту L-лизин в следующем диапазоне доз: 0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг массы тела животного.

Способ осуществляется следующим образом.

L-лизин гидрохлорид (фирма "ICN") растворяют в изотоническом растворе хлорида натрия до получения необходимых доз - 0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг массы тела животного. Вводят внутрибрюшинно экспериментальному животному в объеме, полученном из расчета 1 мл на 1 кг массы тела (0,18-0,25 мл), один раз в день с интервалом в 24 часа на протяжении 4-х дней после иммунизации эритроцитами барана, (ЭБ) за 15 мин до начала стрессорного воздействия. Контрольные животные получали эквивалентные объемы физиологического раствора (ФР).

В выбранной нами модели эмоционально-болевой стресс создавали градуально нарастающим раздражением попарно сгруппированных животных в камере с электрифицированным полом. Максимальное напряжение на решетке составляло 60 В. Проводили 2 воздействия подряд с интервалом 1 мин и общим временем действия электрического тока 2 мин в одно и то же время 1 раз в сутки на протяжении 4-х дней после иммунизации животных (Бобынцев И.И. Иммунотропные эффекты аналога гонадотропин-рилизинг гормона у крыс в условиях эмоционально-болевого стресса / И.И.Бобынцев, Л.А.Северьянова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 2002. - Т.133, №5.- С.504-506). Выбор модели стресса был продиктован доказательствами, свидетельствующими о достаточной интенсивности и длительности стрессорного воздействия, способного вызвать иммуносупрессию (Крюков А.А. Автореф. дисс. на соискание уч. степени кандидата медицинских наук. - Курск, 2006. - С.15-16).

При оценке интенсивности развития гуморального иммунного ответа (ГИО) в условиях эмоционально-болевого стресса по количеству клеток в селезенке, образующих антитела к ЭБ (АОК - антителообразующие клетки) в расчете на 10⁶ кариоцитов, установлено, что L-лизин в указанном диапазоне доз оказывает выраженное стимулирующее влияние на механизмы гуморального иммунного ответа и предотвращает развитие вызванной стрессом иммуносупрессии (таблица).

Пример конкретного выполнения.

Экспериментальные животные (крысы-самцы линии Вистар) массой 180-250 г, полученные из питомника РАМЫ "Столбовая" были разделены на группы по 10 особей в каждой (таблица). Животные содержались при температуре воздуха в помещении 22-24 С° при световом режиме: 12 часов - свет, 12 часов - темнота - и получали стандартный гранулированный корм и воду в свободном доступе. Крыс выводили из эксперимента путем передозировки эфирного наркоза.

Интенсивность развития ГИО оценивали на 5-й день после иммунизации по количеству АОК в расчете на 10⁶ кариоцитов селезенки. Количество АОК определяли методом прямого локального гемолиза в камерах Каннигэма (Мальберг К. Метод локального гемолиза / К.Мальберг, Э.Зигль // Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля; Пер. с нем. А.П.Тарасова. - М.: Мир, 1987. - С.57-72). В качестве антигена для иммунизации животных использовали стандартный Т-зависимый антиген - ЭБ, который вводили однократно внутрибрюшинно из расчета 2×10 клеток на 1 кг массы тела в виде 5%-ной взвеси.

L-лизин вводили за 15 мин до начала стрессорного воздействия в дозах 0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг 1 раз в сутки в течение 4-х дней после иммунизации крыс ЭБ.

Во всех примененных дозах отмечено стимулирующее влияние аминокислоты L-лизина на развитие ГИО, особенно выраженное при дозе 450 мкг/кг (таблица).

Таким образом, в условиях эмоционально-болевого стресса, аминокислота L-лизин, введенная экспериментальным животным (крысы, мыши) 4-кратно парентерально (внутрибрюшинно), оказывает выраженное иммуностимулирующее действие в широком диапазоне разовых доз (0,15; 0,5; 1,5; 5; 15; 50; 150 и 450 мкг/кг), характеризующееся однонаправленным характером и статистической значимостью эффекта. При таком способе введения и в указанном диапазоне доз аминокислота L-лизин устраняет вызванную эмоционально-болевым стрессом иммуносупрессию, а установленный эффект дает возможность индивидуального выбора доз препарата.