способ получения зернового мицелия высших грибов

Формула изобретения

Способ приготовления зернового мицелия высших грибов, включающий подготовку субстрата путем смешивания зерна с водой в емкости с последующей выдержкой, удаление избытка воды, внесение добавок, инкубацию и стерилизацию, инокуляцию маточным мицелием, отличающийся тем, что в зерно вносят ассоциацию маточного мицелия высшего культивируемого гриба и гриба Geotrichum candidum, препятствующего развитию низших грибов, но не конкурирующего с развивающимся в зерне мицелием высшего гриба.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам приготовления зернового мицелия грибов для последующего использования при выращивании плодовых тел данных грибов.

Известно, что для получения зернового мицелия высших грибов повсеместно используется посев маточного мицелия культивируемого высшего гриба в стерилизованное зерно (Stamets P. Growing gourmet medical mushrooms. // Hong Kong: ten Speed Press, 1993, p.130-131, 141).

Общеизвестен способ низкотемпературной стерилизации при 100°С без повышения давления, т.е. текучим паром, для подготовки субстратов при выращивании мицелия грибов и их плодовых тел в термостойких емкостях (Przybylowicz P., Donoghue J. Shiitake Growers Handbook. The art and science of mushroom cultivation // Kendall/Hunt Publishing Company, Dubeque, Iowa, 1988, 217 p.).

Наиболее близким к заявляемому является способ приготовления зернового мицелия съедобных грибов (Кузнецов О.Ю. Способ выращивания мицелия высших грибов. Патент РФ №2192119. Бюл. изоб. №31 от 10.11.2002), где это реализуется поэтапно следующим образом:

1. Сухое зерно затаривается в гибкие незамкнутые емкости.

2. Данные емкости с зерном заполняют водой таким образом, чтобы вода покрывала зерно и была выше его края приблизительно на 8-10 см, поскольку при набухании сухого зерна последнее увеличивает свой объем примерно в полтора раза.

3. Емкости с зерном оставляются на 24 часа заполненными водой для замачивания зерна и инициации прорастания спор низших грибов, т.е. перевода из покоящегося состояния в вегетативную фазу развития.

По истечении данного времени или позднее (возможна задержка в 6-8 часов) - вода сливается из емкостей, а зерно оставляют влажным в емкостях еще в течение суток. На данном этапе при необходимости туда могут быть добавлены различные композитные добавки, например, мел и гипс. После внесения данных добавок каждую емкость встряхивают и добавки равномерно распределяют по всему объему емкости.

4. Затем гибкая незамкнутая с одной стороны емкость пропускается этой стороной через геометрически неизменяемую систему (Советский Энциклопедический Словарь, 1986, с.291) таким образом, что материал незамкнутой гибкой емкости оказывается между используемыми компонентами геометрически неизменяемой системы. При этом с внутренней стороны термостойкой гибкой незамкнутой емкости используется уплотнительный компонент геометрически неизменяемой системы, отделяющий внутренний объем емкости от окружающей среды и позволяющий сохранить стерильность находящегося в емкости зерна, а также обеспечить свободный газообмен между внутренним объемом и окружающей средой.

5. Емкости с геометрически неизменяемой системы помещают в автоклав и стерилизуют в режиме, который определяется опытным путем, в зависимости от объема стерилизуемого зерна в емкостях.

6. Емкости с ГНС с содержащимся внутри зерном охлаждают до комнатной температуры и после этого проводят инокуляцию маточным мицелием на плотной агаризованной питательной среде из "сахарных" пробирок или чашек Петри через ГНС с соблюдением правил асептики.

7. После инокуляции емкостей с ГНС с соблюдением правил асептики отрезают ГНС от емкости, а образовавшуюся вновь гибкую незамкнутую с одной стороны емкость наглухо запаковывают и делают в нескольких местах проколы (стерильной иглой малого диаметра) для сохранения газообмена внутренней емкости пакета, где находится растущий мицелий на зерновках, с окружающей средой.

8. После посева емкости инкубируют в термостате при температуре 24-26 градусов Цельсия или при комнатной температуре в специальных комнатах на стеллажах.

9. Через 7-10 дней емкости с проросшим мицелием встряхивают для предотвращения склеивания зерна и активизации роста мицелия.

10. Пакеты после этого помещают в рефрижератор с температурой 2-4 градуса Цельсия. В результате развития мицелия на зерне идет саморазогрев в массе мицелия до 24-26°С и поэтому условия рефрижератора не оказывают ингибирующего действия на растущий мицелий и он постепенно охватывает все зерновки в своем пакете. Этому способствует тот факт, что внутри пакета образуется конденсат, создавая необходимую влажность. Окончательная готовность мицелия определяется визуально - мицелий разрастается и соединяет зерновки между собой в единый цельный брикет белого цвета. До высева в массу подготовленного субстрата мицелий продолжают хранить в условиях рефрижератора при той же температуре - 2-4°С.

Недостатками данного способа является использование цельнотянутых емкостей и ГНС, препятствующих проникновению пара внутрь емкости, что может привести к сохранению локальных нестерильных участков зерна, особенно в случае использования емкостей больших объемов.

Предлагаемый способ приготовления зернового мицелия съедобных грибов реализуется также поэтапно следующим способом:

1. Сухое зерно затаривается в гибкие перфорированные незамкнутые с одной стороны емкости большого объема (до 50 л), например мешок из полипропилена.

2. Данные емкости с зерном помещают в заполненные водой емкости таким образом, чтобы вода покрывала зерно и была выше его края приблизительно на 8-10 см, поскольку при набухании сухого зерна последнее увеличивает свой объем примерно в полтора раза.

3. Емкости с зерном оставляются на 24 часа в воде для замачивания зерна и инициации прорастания спор низших грибов, т.е. перевода из покоящегося состояния в вегетативную фазу развития.

По истечении данного времени или позднее (возможна задержка в 6-8 часов) - вода сливается из емкостей (зерно можно оставить во влажном состоянии в емкостях еще в течение суток). На данном этапе при необходимости туда могут быть добавлены различные композитные добавки, например мел и гипс. После внесения данных добавок каждую емкость встряхивают, а добавки равномерно распределяют по всему объему емкости.

4. Гибкую перфорированную по всей площади незамкнутую с одной стороны емкость с влажным зерном помещают в автоклав и стерилизуют при давлении 1÷1,5 атм и времени стерилизации от 30 минут до 1 часа, в зависимости от объема стерилизуемого зерна в емкостях (определяется опытным путем).

5. Зерно после автоклавирования в горячем виде расфасовывается из гибкой перфорированной по всей площади незамкнутой с одной стороны емкости в другие емкости, например пакеты, банки.

6. Емкости с зерном закрывают и зерно охлаждают до температуры, которая не повреждает посевной маточный мицелий.

7. Затем в зерно вносится ассоциация маточного мицелия высшего культивируемого гриба и гриба-антагониста низших плесневых грибов (Geotrichum candidum), препятствующего их развитию и распространению, но не конкурирующего с развивающимся в зерне мицелием высшего гриба.

8. После посева вышеуказанной ассоциации емкости инкубируют в термостате при температуре 24-26°С или при комнатной температуре в специальных комнатах на стеллажах.

9. Через 3-5 дней емкости с проросшим мицелием встряхивают для предотвращения склеивания зерна и активизации роста мицелия.

10. Емкости (пакеты, банки) после этого помещают в рефрижератор с температурой 2-4°С. В результате развития мицелия на зерне идет саморазогрев в массе мицелия до 24-26°С и, поэтому условия рефрижератора не оказывают ингибирующего действия на растущий мицелий, и он постепенно охватывает все зерновки в своем пакете. Этому способствует тот факт, что внутри пакета образуется конденсат, создавая необходимую влажность. Окончательная готовность мицелия определяется визуально - мицелий разрастается и соединяет зерновки между собой в единый цельный брикет белого цвета.

11. До высева в массу подготовленного субстрата мицелий продолжают хранить в условиях рефрижератора при той же температуре - 2-4°С.

Таким образом, технический результат предлагаемого способа заключается в использовании ассоциации высшего культивируемого гриба и гриба-антагониста низших грибов, что способствует получению качественного зернового мицелия высшего культивируемого гриба, путем подавления грибов-конкурентов.