способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови

Формула изобретения

Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови путем спектрофлуориметрического исследования мембран клеток, отличающийся тем, что до и после курса лечения лазерным излучением из цельной гепаринизированной венозной крови выделяют эритроциты, полученную суспензию эритроцитов разводят физиологическим раствором до необходимой концентрации, добавляют флуоресцирующий зонд диметиламинохалкона (ДМХ), проводят измерение флуоресценции зонда ДМХ и о степени изменения состояния мембран эритроцитов крови судят по оценочной шкале: при изменении величины флуоресценции менее 10 ед. фл. определяют низкую степень, при 10-50 ед. фл. - среднюю (оптимальную) степень, выше 50 ед. фл. - повышенную степень изменения состояния мембран эритроцитов при воздействии лазерного излучения.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследования, и может быть использовано для характеристики состояния клеточных мембран при внешних воздействиях на организм.

Известен способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов [1], сущность которого заключается в том, что из крови выделяют эритроциты и помещают в кювету агрегометра. В качестве индуктора агрегации используют пикриновую кислоту, которую добавляют до конечной концентрации 3-5 мМ. Об изменении состояния мембран эритроцитов судят по степени их агрегации в сравнении с контрольными.

Известный способ не является физиологичным, поскольку при оценке изменения состояния эритроцитарных мембран используется пикриновая кислота, приводящая к повреждению мембран. Между тем, в медицинской практике, например, при проведении физиолечения возникает необходимость в оценке изменений в мембранах эритроцитов у больных, подвергающихся терапевтическому воздействию излучения, например лазерного. Известный метод не позволяет сделать это физиологично и информативно, что ограничивает область его применения.

Задача изобретения - создание физиологичного и информативного способа оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови.

Задача решается тем, что способ, согласно изобретению, заключается в спектрофлуориметрическом исследовании мембран эритроцитов крови. Оценка изменения состояния мембран эритроцитов производится по изменению флуоресценции зонда диметиламинохалкона (ДМХ), определенной до и после терапевтического воздействия на организм. Для этого из цельной гепаринизированной венозной крови выделяют эритроциты, разводят их физиологическим раствором до необходимой концентрации, и после добавления к эритроцитам флуоресцирующего зонда диметиламинохалкона (ДМХ) проводят измерение флуоресценции зонда. О степени изменения состояния мембран эритроцитов судят по оценочной шкале. При изменении величины флуоресценции менее 10 ед.фл. определяют низкую степень, при 10-50 ед.фл. - среднюю (оптимальную) степень, выше 50 ед.фл. - повышенную степень изменении состояния мембран эритроцитов.

Установлено, что физиотерапевтическое воздействие на организм оказывает благоприятное действие на клеточные мембраны [2], поэтому изменение состояния мембран, определенное заявленным методом, отражает степень лечебного эффекта на уровне биомембран клеток крови и является его количественным выражением. Применяемый флуоресцирующий зонд ДМХ, соединяясь с мембранами эритроцитов, отражает биофизическое состояние мембран, а именно степень их гидрофобности [3].

Способ осуществляется следующим образом.

В две пробирки (1-я и 2-я пробы) набирают по 1 мл венозной крови больного. В 1-ю пробирку (1-я проба) кровь набирают до предполагаемого изменения мембран клеток крови, например, до проводимого физиолечения. Во 2-ю пробирку (2-я проба) - после возможного изменения состояния мембран (например, после курса физиолечения). Эритроциты выделяют из цельной гепаринизированной венозной крови на градиенте фиколл-верографин. Суспензию эритроцитов на физиологическом растворе разводят до оптической плотности 0,700 ед. в 0,5 см кювете при длине волны поглощения 650 нм. Для оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови используют зонд диметиламинохалкона (ДМХ) в концентрации 5 мкМ: 50 мкМ суспензии. После добавления зонда ДМХ к эритроцитам на спектрофлуориметре определяют флуоресценцию зонда. Определение проводят при следующих параметрах: длина волны возбуждения 427 нм, длина волны флуоресценции 548 нм. Результаты выражают в единицах флуоресценции (ед.фл.). Значения флуоресценции зонда ДМХ в 1-ой и 2-ой пробах сравнивают и по вычисленному изменению с использованием разработанной оценочной шкалы определяют степень изменения состояния мембран эритроцитов (см. таблицу).

Оценочная шкала
Изменение величины флуоресценции зонда ДМХ (ед.фл.)	Степень изменения состояния мембран
Менее 10	Низкая
10-50	Средняя (оптимальная)
Более 50	Повышенная

Способ апробирован в физиоотделении клиники Красноярского Института медицинских проблем Севера.

Пример 1. Больной А. Проходил курс лечения лазерным излучением. Диагноз: Атопический дерматит. После 6 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре до начала лечения (1 проба) и после лечения (2 проба): 1 проба - 43,3 ед.фл., 2 проба - 56,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 13,1 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует средней (оптимальной) степени изменения состояния мембран эритроцитов на воздействие лазерного излучения. Следовательно, проведенный курс лечения следует считать достаточным.

Пример 2. Больной Б. Диагноз: Хронический гастрит. Проходил курс лечения лазерным излучением. После 10 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре до начала лечения (1 проба) и после лечения (2 проба): 1 проба - 56,4 ед.фл., 2 проба - 60,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 4 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует низкой степени изменения состояния мембран эритроцитов к воздействию лазерного излучения. Следовательно, проводимый курс лазеротерапии следует отменить вследствие неэффективности его для данного больного.

Пример 3. Больной С. Диагноз: Трофическая язва голени. Проходил курс лечения лазеротерапией. После 6 лечебных процедур проведена оценка степени изменения состояния мембран эритроцитов по предлагаемому способу. Результаты измерения флуоресценции зонда ДМХ на спектрофлуориметре: 1 проба (до начала лечения) - 35,4 ед.фл.; 2 проба (после лечения) - 96,4 ед.фл. Изменение величины флуоресценции составляет 61 ед.фл. Согласно оценочной шкале, это соответствует повышенной степени изменения состояния мембран эритроцитов. Следовательно, дозу воздействия лазером следует снизить.

Таким образом, предложенный физиологичный способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов крови обеспечивает высокую чувствительность и информативность при внешнем воздействии на организм и может быть использован в медицинской практике, например, при физиолечении.

Источники информации

1. Шереметьев Ю.А. и др. Способ оценки изменения состояния мембран эритроцитов. RU 2238556 С2. Дата публ. 20.10.004.

2. Боголюбов В.М., Пономаренко Г.Н. Общая физиотерапия. - Учебник. - 2-е издание. - М., СПб., 1997 - С.214.

3. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980 - С.111-113.