способ временного закрытия раневой поверхности аутомезотелицитами сальника

Формула изобретения

Способ закрытия раневой поверхности кожи, включающий аутотрансплантацию клеток в виде суспензии на реципиентную поверхность, отличающийся тем, что в качестве трансплантата используют мезотелиоциты, полученные из сальника реципиента, предварительно извлеченного путем эндоскопической операции.

Описание изобретения к патенту

Способ относится к медицине, а именно к трансплантологии и хирургии.

Наиболее близким техническим решением, выбранным нами в качестве прототипа, является способ аутотрансплантации клеток эпителия, основанный на пересадке на раневую поверхность суспензии некультивированных эпидермоцитов (Autologous keratinocyte suspensions accelerate epidermal wound healing in pigs / Svensjo Т., Yao F., Pomahac В., Eriksson E. // Journal of Surgical Research 99, 211-221 (2001)). Суть этого способа состоит в механической и ферментной дезинтеграции эпидермиса, с последующей пересадкой эпидермоцитов в суспензии на раневую поверхность, постоянно находящуюся под слоем стерильного изотонического водного раствора. Недостатком этого способа является невозможность при потере подавляющего количества кожного покрова быстро восстановить целостность наружного эпителиального покрова. Это связано с одной стороны с дефицитом донорских ресурсов кожи, а с другой стороны с низкой эффективностью стимуляции реэпителизации некультивированными эпидермоцитами (количество пересаживаемых клеток на единицу площади должно быть в 40 раз большим, по сравнению с культивированными эпидермоцитами). Известно, что через раневую поверхность, погруженную в раствор, постоянно теряются из организма белки и ионы (Breuing, К., Eriksson, E., Liu, P.Y., and Miller, D.R. Healing of partial thickness porcine skin wounds in a liquid environment. J. Surg. Res. 52: 50, 1992). Для выращивания in vitro эпитеального пласта или искусственной кожи требуются значительные сроки получения достаточного по площади трансплантата из аутоклеток пациента (3-4 недели), что резко повышает риск развития осложнений и ухудшает прогноз. При сверхобширных ранах у пострадавших наступают необратимые изменения обменных процессов и восстановление кожи становится невозможным в принципе.

Техническим результатом заявляемого изобретения является значительное сокращение сроков временного восстановления эпителиального покрова травмированной кожи за счет аутотрансплантации мезотелиоцитов сальника на раневую поверхность, лишенную источников регенерации эпидермиса.

Сущность заключается в том, что в заявляемом способе суспензию клеток, состоящую преимущественно из аутологичных мезотелиоцитов, полученную сразу после механической и последующей ферментативной дезагрегации тканей сальника реципиента, предварительно извлеченного из брюшной полости путем эндоскопической операции, помещают на раневую поверхность и выдерживают обнаженные ткани дна раны под слоем этой взвеси в течение 2-4 часов. За это время большинство клеток мезотелия осаждается под действием гравитации и прикрепляется к раневой поверхности за счет адгезии, после чего реципиентную поверхность изолируют от воздушной среды внутри камеры-изолятора под слоем сменяемых стерильных водных растворов с антибактериальными средствами. Распластывание, миграция и регенерация мезотелия, способствуют быстрому закрытию раневой поверхности однослойным плоским эпителием, который предотвращает значительные потери полезных веществ с раневой поверхности. Мезотелий препятствует микробной инвазии вглубь раны. За этот промежуток времени можно из собственных клеток реципиента восстановить путем тканевой инженерии утраченный кожный покров in vitro - искусственную кожу. Перед пересадкой выращенных пластов эпидермиса мезотелиоциты удаляются.

В доступной нам литературе по биологии и медицине сведения о таком способе временного закрытия раневой поверхности не обнаружены, что позволяет считать заявленное изобретение соответствующим критерию «новизна».

ПРИМЕР.

У двенадцати белых крыс-самцов линии «Вистар» массой 160 г под нембуталовым наркозом в стерильных условиях проводилось иссечение полнослойного лоскута кожи с подкожно-жировой клетчаткой до поверхностной фасции площадью 24 кв. см на боковой поверхности тела. Затем животное укладывалось на противоположный от повреждения бок и с помощью нитей-держалок поднимались и фиксировались в вертикальном положении края раны. Края раны были подняты с таким расчетом, чтобы обнаженные ткани дна раны возможно было полностью покрыть слоем жидкости (воспрепятствовать стеканию растворов и суспензии). Далее в образованную емкость с помощью шприца заливалась среда 199.

В это же время через полнослойный разрез брюшной стенки размером около 5 мм выделялся участок большого сальника размером около 2 см², который погружался в кюветку с 4 мл раствора коллагеназы (Препарат «Коллализин» производства Санкт-Петербургского НИИ вакцин и сывороток и Предприятия по производству бактериальных препаратов) в концентрации 250 ед./мл в среде 199, с температурой 36 градусов Цельсия. При постоянном встряхивании кюветки с раствором ферментативная дезагрегация продолжалась 25 минут, затем поверхность сальника подвергалась дополнительно осторожному соскабливанию, не вынимая сальника из жидкости. Обработанный таким образом сальник опускали обратно в брюшную полость, рану ушивали наглухо.

Затем на реципиентную поверхность через сетку с размерами ячеек, не пропускающими заметные на глаз частицы, производили сливание полученной суспензии клеток.

Приданное в начале эксперимента положение крысы с покрытой суспензией клеток реципиентной поверхностью поддерживали у 6 крыс в течение 2 часов, а у других 6 животных на протяжении 4 часов, во втором случае проводилось дополнительное парентеральное введение нембутала. Далее реципиентная поверхность у всех крыс погружалась в специальную камеру-изолятор, постоянно заполненную сменяемыми стерильными водными растворами с антибактериальными средствами (стрептомицина - 100 мкг/мл и пенициллина - 100 Ед/мл). Периодичность смены раствора составляла 1 раз в 6 часов круглосуточно. В конце 2 сут после трансплантации практически вся раневая поверхность была покрыта мезотелием.