способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики хронического абактериального простатита, предусматривающий клиническое обследование, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровни активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (КТ), и при снижении активности СОД от 69 до 62 усл. ед./мл и повышении активности каталазы от 66 до 74 Ед./мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 62 усл. ед./мл и ниже и повышении активности каталазы от 60 до 66 Ед./мл - ХАП невоспалительной формы.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в урологии, в частности при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита.

Хронический простатит остается в настоящее время весьма распространенным, недостаточно изученным и плохо поддающимся лечению заболеванием. Он поражает мужчин преимущественно молодого и среднего возраста, то есть наиболее сексуально активных, нередко осложняется нарушением копулятивной и генеративной функций.

Очевидным является не только медицинское, но и социальное значение проблемы повышения эффективности диагностики и лечения хронического простатита.

Современная медицина не располагает углубленными и достоверными сведениями относительно причинных факторов и механизмов развитие хронического простатита, особенно абактериального. В большинстве случаев хронического простатита его этиология, патогенез и патофизиология остаются неизвестными (Nickel J.C: Простатит: инфекционное заболевание? Infect Urol 2000a; 13: 31-38).

Наиболее распространенной на сегодняшний день в мире является предложенная Национальным Институтом Здоровья США (1995 г.) классификация, в которой особенно выделяется категория III - хронический абактериальный простатит с воспалительным компонентом и без оного (Лоран О.Б., Сегал А.С. Хронический простатит. В кн.: Х Российский сьезд урологов. Материалы: Простатит. Москва, 1-3 октября 2002 г. М.; 2004. 209-222.).

В настоящее время основными методами диагностики хронического простатита являются микроскопические, бактериологические и иммунологические методы исследования мочи, секрета предстательной железы эякулята, крови.

При изучении доступной медицинской и патентной литературы выявлены различные способы диагностики хронического простатита.

Так, в заявке №96114641/14 от 19.07.96. Бюл.№3, 1998 г. МПК G01N 33/53, 33/48 описан «Способ диагностики хронического простатита», предусматривающий определение уровня растворимого антигена лейкоцитов-2 (РАЛ-2) в сперме и при его содержании 20 мкг/мл и выше диагностируют хронический простатит.

В патенте РФ №20001133206/14 от 06.12.01. Бюл. №23, 2003 г. МПК G01N 33/92 описан «Способ диагностики активности течения хронического простатита», при котором проводят исследование секрета предстательной железы, при этом в нем определяют концентрацию диеновых коньюгатов и шиффовых оснований, рассчитывают коэффициент активности воспаления. При уменьшении его значения активность течения хронического простатита увеличивается.

Недостатками указанных способов является неточность диагностика различных форм хронического простатита.

В качестве прототипа взят способ диагностики, описанный в статье Daniel A Shoskes, Qussay Albakri, Kim Thomas and Daniel Cook «Полиморфизм цитокинов при хроническом простатите/синдроме хронической тазовой боли: связь с диагнозом и ответом на проводимую терапию» (The Journal of Urology, July, 2002, Volume 168, Number 1. с.331-335), предусматривающий изучение различных видов цитокинов в крови.

Недостатком данного способа диагностики хронического простатита является его сложность, невозможность определения различных форм хронического простатита.

Целью настоящего изобретения является дифференциальная диагностика форм хронического абактериального простатита. Эта цель достигается путем определения в сыворотке крови активности супероксиддисмутазы (СОД) по методу Mistra H.P., Fridovich I., (1972) и каталазы (КТ) по методу Korolyuk M.A. et al., 1988.

Клинические обследования добровольцев - здоровых мужчин - позволили установить, что уровень активности СОД и каталазы в сыворотке крови составляет в среднем 77 усл. ед/мл и 55 Ед/мл соответственно.

Способ определения активности СОД в сыворотке крови осуществляют следующим образом. К сыворотке крови приливают 96%-ный этиловый спирт и хлороформ в соотношении 1:0,3:0,15, перемешивают и добавляют кристаллический дигидрофосфат калия из расчета 300 мг на 1 мг сыворотки крови. Смесь энергично встряхивают и центрифугируют 20 мин при 6000 об/мин. В надосадочной жидкости определяют активность СОД. Об активности фермента судят по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии супероксидрадикала, генерируемого в реакции восстановления адреналином молекулярного кислорода в щелочной среде. В состав инкубационной смеси входят 2 мл 0,05 М Na-карбонатного буфера, рН 10,2, 0,1 мл 0,05% раствора нитросинего тетразолия, 0,02 мл супернатанта (опыт) или 0,02 мл дистиллированной воды (контроль). Реакцию запускают добавлением в опытную и контрольную пробы 0,05 мл 0,1% раствора адреналина гидрохлорида. Инкубацию осуществляют 10 мин при 30°С, затем измеряют величину оптической плотности на спектрофотометре при длине волны 540 нм. Активность СОД выражают в условных единицах на 1 мл сыворотки крови, принимая за 1 усл. ед. 50% ингибирования процесса восстановления нитросинего тетразолия, вызванного внесением биоматериала в инкубационную среду.

Принцип способа определения активности каталазы в сыворотке крови основан на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдата стойкий окрашенный комплекс и осуществляется следующим образом.

В контрольную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода, 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония, 0,1 мл сыворотки крови, без следов гемолиза. В опытную пробирку вносят 2,0 мл 0,03% раствора перекиси водорода и 0,1 мл сыворотки крови, инкубируют 10 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают добавлением 1,0 мл 4% раствора молибдата аммония. В контрольную и опытную пробирки приливают по 0,5 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин, интенсивность окраски центрифугата измеряют на спектрофотометре при длине волны 410 нм против дистиллированной воды.

Активность каталазы выражают в Ед/мл (единицах действия на мл в мин), численно равных % ингибирования реакции за счет каталазы по отношению к контрольной пробе. Расчет проводят по формуле:

А(Ед/мл)=E _K-E_O/E_K×100, где Е_K и Е_О - экстинкции соответственно контрольной и опытной проб.

При снижении активности СОД от 69 до 62 усл. ед/мл и повышении активности каталазы от 66 до 74 Ед/мл диагностируют хронический абактериальный простатит (ХАП) воспалительной формы, а при активности СОД от 62 усл. ед/мл и ниже и повышения активности каталазы от 60 до 66 Ед./мл - ХАП невоспалительной формы.

Пример №1

Больной А., 25 лет.

Жалобы: боли в надлобковой области и промежности.

Анамнез: считает себя больным в течение двух лет. Ежегодно проходил противорецидивный курс консервативной терапии с незначительным эффектом.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании - железа уплотнена, симметрична, обычной формы, умеренно болезненна.

Индекс простатических симптомов (ИПС) - 23.

Лабораторная диагностика:

Простато-специфический антиген (ПСА) - 0,04 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - порция мочи (ПМ) - 1-2 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 1-2 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Секрет простаты (СП) - лейк-ты до 50 в поле зрения. S. Epidermidis - менее 10 ³ в 1 мл.

3 - ПМ - лейк-ты до 100 в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД в сыворотке крови - 65,34 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы в сыворотке крови - 71,05 Ед/мл.

Поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит, воспалительная форма.

Пример №2

Больной Т., возраст: 30 лет.

Жалобы: на боли в промежности, учащенное болезненное мочеиспускание, ослабленную эрекцию.

Анамнез: считает себя больным около 5 лет, инфекций, передаваемых половым путем, не отмечает. Неоднократно проводил курсы консервативной терапии у уролога с незначительным, временным эффектом.

Физикальное исследование: при пальцевом ректальном исследовании: предстательная железа обычной формы, незначительно болезненная.

ИПС-31.

Лабораторная диагностика:

ПСА - 1.26 нг/мл.

Оценка мочи и секрета простаты по Meares and Stamey.

1 - ПМ - 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

2 - ПМ - 0-1 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

СП - 4 - 5 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

3 - ПМ 4-5 лейк. в поле зрения, микрофлора не обнаружена.

Уровень активности СОД в сыворотке крови - 45,64 усл. ед/мл.

Уровень активности каталазы в сыворотке крови - 64,81 Ед/мл.

На основании полученных данных поставлен диагноз: хронический абактериальный простатит, невоспалительная форма.

Преимущества предлагаемого способа по сравнению с прототипом состоят в том, что он позволяет проводить дифференциальную диагностику между формами хронического абактериального простатита и в зависимости от этого определять тактику лечения.

Супероксиддисмутаза (СОД) и каталаза (КТ) являются важнейшими компонентами ферментативной антиоксидантной системы, отвечающими за защиту организма от определенных форм активных кислородных метаболитов. Они отличаются высокой специфичностью действия, клеточной и органной локализацией и использованием в качестве катализаторов металлов. СОД катализирует реакцию дисмутации супероксидного радикала с образованием перекиси водорода и молекулярного кислорода со скоростью, превышающей на три порядка спонтанную дисмутацию.

Широкое участие супероксидных радикалов в ферментетивных реакциях синтеза простагландинов и метаболизма ксенобиотиков, а также клеточной пролиферации и экспрессии определенных генов позволяет рассматривать СОД как фермент, выполняющий не только защитную, но и регуляторную функции.

Синергистом СОД в клетке является каталаза, препятствующая накоплению перекоси водорода, образующаяся при дисмутации супероксидного анионрадикала и при аэробном окислении восстановленных флавопротеидов. Фермент катализирует двухэлектронное восстановление перекиси водорода до воды: 2Н₂O₂ КТ Н₂O₂+O ₂.

Каталаза - гемсодержащий фермент, максимальное содержание которого обнаружено в эритроцитах, а также в печени и почках; длительно сохраняет свою высокую активность, почти не требует энергии активации.

Из-за большой молекулярной массы каталаза плохо проникает внутрь клеток; уровень внутриклеточной каталазы регулируется образованием перекиси водорода.

Предлагаемый способ апробирован на 37 больных и показал высокую информативность.