способ индивидуального подбора и коррекции лечебной дозы интерферона у больных раком почки

Формула изобретения

Способ индивидуального подбора и коррекции лечебной дозы интерферона у больных раком почки путем хемилюминесцентного анализа функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и клеточной чувствительности к интерферону при исследовании крови пациента in vitro с определением индекса чувствительности (ИЧ), представляющего собой отношение индекса активации нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона (ИА_IFN) исследуемой дозы к индексу активации нейтрофильных гранулоцитов без интерферона (ИА), отличающийся тем, что до начала лечения и перед началом следующего курса интерферонотерапии ИЧ определяют для каждой из трех доз интерферона - 3 млн ME, 6 млн ME, 15 млн ME, и при значении ИЧ выше 1,0 для всех трех доз интерферона больному рекомендуют минимальную дозу, при значении ИЧ выше 1,0 для двух из трех доз интерферона больному рекомендуют минимальную из этих двух доз, при значении ИЧ выше 1,0 только для одной из трех доз интерферона больному рекомендуют именно эту дозу, а при значении ИЧ меньшем или равном 1,0 для всех трех доз интерферонотерапию не рекомендуют.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к урологической онкологии. Может быть использовано при лечении больных раком почки.

В настоящее время дозы и схемы введения интерферона больным раком почки определяются по протоколам Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН [1], в основе которых совокупность клинико-лабораторных данных, характеризующих общее состояние пациента. Способа индивидуального подбора оптимальной дозы интерферона, а также ее коррекции в процессе терапии с учетом клеточной чувствительности к данному препарату не существует,

Известен способ хемилюминесцентной оценки чувствительности к интерферону у больных раком почки [2], в котором при исследовании крови in vitro о чувствительности к интерферону судят по отклонению индекса чувствительности (ИЧ) от 1,0. ИЧ представляет собой отношение индекса активации нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона (ИА_IFN ) к индексу активации нейтрофильных гранулоцитов без интерферона (ИА). ИЧ, превышающий 1,0, свидетельствует о чувствительности к определенной дозе интерферона, а ИЧ, меньший или равный 1,0 свидетельствует об отсутствии чувствительности к интерферону. Недостатком способа является невозможность индивидуального подбора и коррекции лечебной дозы интерферона.

Задачей изобретения является повышение эффективности интерферонотерапии у больных раком почки.

Задача решается тем, что согласно изобретению подбор дозы интерферона для каждого пациента осуществляют дважды - до начала лечения и перед началом следующего курса интерферонотерапии. Подбор проводят из трех лечебных доз интерферона - 3 млн ME; 6 млн ME и 15 млн МЕ - путем хемилюминесцентного исследования крови in vitro. Для каждой исследуемой дозы определяют индекс чувствительности (ИЧ), представляющий собой отношение индекса активации нейтрофильных гранулоцитов при воздействии исследуемых доз интерферона (ИА_IFN) к индексу активации нейтрофильных гранулоцитов без интерферона (ИА). Т.е. ИЧ=ИА _IFN/ИА. О чувствительности к различным дозам интерферона судят по отклонению ИЧ от 1,0. Курс лечения выбирают в зависимости от показателей ИЧ. При значении ИЧ выше 1,0 для всех трех доз интерферона больному рекомендуют минимальную из трех доз; при значении ИЧ выше 1,0 для двух из трех доз интерферона больному рекомендуют минимальную из этих двух доз; при значении ИЧ выше 1,0 только для одной из трех доз интерферона больному рекомендуют именно эту дозу; а при значении ИЧ, меньшем или равном 1,0 для всех трех доз, интерферонотерапию не рекомендуют.

Индекс активации нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона (ИА_IFN) представляет собой отношение площади под кривой хемилюминесценции зимозан-индуцированных нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона (S_INFинд ) и площади под кривой спонтанной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов при воздействии интерферона (S_IFNспон ). Индекс активации нейтрофильных гранулоцитов без интерферона (ИА) представляет собой отношение площади под кривой хемилюминесценции зимозан-индуцированных нейтрофильных гранулоцитов (S _инд) и площади под кривой спонтанной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов (S_спон).

Т.е. ИА_IFN=S_IFNинд /S_IFNспон; ИА=S_инд /S_спон.

Высокая реактивность нейтрофильных гранулоцитов, их способность к быстрой функциональной перестройке в ответ на воздействие агентов различной природы позволяет рассматривать эти клетки как индикатор нарушений иммунного гомеостаза. Кроме того, после активации нейтрофильные гранулоциты сами становятся мощными эффекторами каскадных реакций, определяя развитие воспаления и проявление цитотоксической активности данной клеточной популяции, в частности, к опухолевым клеткам. Помимо этого нейтрофильные гранулоциты несут на своей поверхности специфические рецепторы к интерферону, что делает возможным оценивать влияние интерферона на эти клетки в экспериментах in vitro.

Индекс активации является показателем соотношения интегральных характеристик синтеза активных форм кислорода нейтрофильными гранулоцитами в измеряемом диапазоне времени, полученных от стимулированных клеток и клеток, находящихся в состоянии относительного покоя.

Индекс чувствительности выше 1,0, характеризует положительную функциональную реакцию нейтрофильных гранулоцитов на соответствующую дозу интерферона. Индекс чувствительности равен 1,0 в тех случаях, когда реакция клеток на дозу интерферона отсутствует. Индекс чувствительности ниже 1,0 определяется ингибирующим воздействием дозы интерферона на клетку и сопровождается развитием отрицательной функциональной реакции.

Способ осуществляют следующим образом. До начала лечения пациента и перед началом следующего курса интерферонотерапии рассчитывают ИЧ для каждой из трех исследуемых доз интерферона - 3 млн ME; 6 млн ME; 15 млн ME. Для этого из венозной крови обследуемого больного выделяют нейтрофильные гранулоциты, подсчитывают их число в камере Горяева, проводят хемилюминесцентный анализ взвеси [3], рассчитывают ИЧ для каждой дозы интерферона и выбирают курс лечения интерфероном в зависимости от показателей ИЧ.

Для выделения нейтрофильных гранулоцитов из венозной крови обследуемого больного к 5 мл крови с гепарином добавляют 1 мл полиглюкина. Смесь инкубируют в течение 30 мин при 37°С для ускорения осаждения эритроцитов. Полученный клеточный супернатант дважды отмывают в растворе Хенкса без фенолового красного по 10 мин при 400 g. Супернатант сливают, оставшиеся нейтрофильные гранулоциты разводят в 1 мл раствора Хенкса. Подсчитывают количество нейтрофильных гранулоцитов в камере Горяева. Концентрацию гранулоцитов доводят до уровня 2 млн/мл. Проводят хемилюминесцентный анализ взвеси. Для этого готовят контрольную и опытные пробы. Контрольная проба для регистрации спонтанной хемилюминесценции имеет следующий состав: 200 мкл взвеси нейтрофильных гранулоцитов, 20 мкл донорской сыворотки (группа крови АВ, резус-фактор отрицательный), 240 мкл раствора Хенкса (без фенолового красного) и 50 мкл люминола в концентрации 100 мкг/мл. Опытная проба №1 содержит 200 мкл взвеси нейтрофильных гранулоцитов, 20 мкл донорской сыворотки, 220 мкл раствора Хенкса, 20 мкл реаферона в концентрации 1 млн МЕ/мл (соответствует лечебной дозе 3 млн ME) и 50 мкл люминола. Опытная проба №2 содержит 200 мкл взвеси нейтрофильных гранулоцитов, 20 мкл донорской сыворотки, 200 мкл раствора Хенкса, 40 мкл реаферона (соответствует лечебной дозе 6 млн ME) и 50 мкл люминола. Опытная проба №3 содержит 200 мкл взвеси нейтрофильных гранулоцитов, 20 мкл донорской сыворотки, 140 мкл раствора Хенкса, 100 мкл реаферона (соответствует лечебной дозе 15 млн ME) и 50 мкл люминола.

Спонтанную хемилюминесценцию регистрируют в течение 45 мин. Затем добавляют в пробы 40 мкл зимозана (неспецифический стимулятор выработки активных форм кислорода) в концентрации 2 мг/мл и регистрируют зимозан-индуцированную хемилюминесценцию нейтрофильных гранулоцитов. Регистрацию хемилюминесценции проводят на хемилюминесцентном анализаторе, например "CL3606M". Управление хемилюминесцентным анализатором и регистрацию результатов ведут через компьютер. Получают кривые хемилюминесценции опытных (с реафероном) и контрольной (без реаферона) проб, каждая из которых имеет по два пика. Первый пик на каждой из кривых соответствует максимальному уровню спонтанной хемилюминесценции, второй - индуцированной.

Определяют величины площади под первым (S_спон) и вторым (S_инд) пиком хемилюминесцентной кривой в контрольной пробе. Рассчитывают индекс активации нейтрофильных гранулоцитов в контрольной пробе:

ИА=S_инд /S_спон

Определяют величины площади под первым (S_IFNспон) и вторым (S _IFNинд) пиком хемилюминесцентной кривой в опытных пробах. Рассчитывают индекс активации нейтрофильных гранулоцитов в опытной пробе:

ИА_IFN=S_IFNинд /S_IFNспон

Рассчитывают индекс чувствительности для каждой опытной пробы:

ИЧ=ИА_IFN /ИА

ИЧ, превышающий 1,0, свидетельствует о чувствительности нейтрофильных гранулоцитов к определенной дозе интерферона. В этом случае больному рекомендуют минимальную дозу из исследуемых, на которые выявлена клеточная чувствительность. Так, при значении ИЧ выше 1,0 для всех трех доз интерферона больному назначают минимальную из этих трех доз; при значении ИЧ выше 1,0 для двух из трех доз интерферона больному рекомендуют минимальную из этих двух доз, а при значении ИЧ выше 1,0 только для одной из трех доз интерферона больному рекомендуют именно эту дозу.

ИЧ, равный или меньший 1,0, свидетельствует об отсутствии чувствительности к конкретной дозе. При значении ИЧ, меньшем или равном 1,0 для всех трех доз, интерферонотерапию не рекомендуют.

Способ индивидуального подбора и коррекции лечебной дозы интерферона у больных раком почки прошел клинические испытания на базе Красноярского краевого онкологического диспансера.

Пример 1. Больной Т., 44 лет. История болезни №1496/125. Находился на стационарном лечении в урологическом отделении Красноярского краевого онкологического диспансера с 02.03.04. по 26.03.04. с диагнозом: рак правой почки, Т₃N₀М ₀. Операция 16.03.04., проведена лапаротомия, радикальная нефрэктомия справа, дренирование забрюшинного пространства. Гистологическое исследование №11760-77 в препарате картина светлоклеточного варианта почечноклеточного рака. Течение послеоперационного периода гладкое. Проведен хемилюминесцентный анализ функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и клеточной чувствительности (ИЧ) к различным дозам реаферона in vitro до начала лечения и перед следующим курсом интерферонотерапии.

До начала лечения
Дозы реаферона	3 млн МЕ	6 млн ME	15 млн МЕ
ИЧ	11,63/6,73=1,73	11,55/6,73=1,72	12,03/6,73=1,79

ИЧ для всех трех доз>1. В соответствии с предложенным способом для лечения выбрана меньшая доза. Проведен курс реаферонотерапии дозой 3 млн ME.

Перед началом следующего курса интерферонотерапии
Дозы реаферона	3 млн МЕ	6 млн ME	15 млн МЕ
ИЧ	5,04/5,71=0,88	6,17/5,71=1,19	5,92/5,71=0,93

ИЧ двух доз<1. ИЧ>1 только для одной дозы - 6 млн МЕ. Рекомендовано увеличение дозы до 6 млн ME.

Пример 2. Больная X., 47 лет. История болезни №1624/436. Находилась на стационарном лечении в урологическом отделении Красноярского краевого онкологического диспансера с 03.03.04. по 30.03.04. с диагнозом: рак правой почки, T ₃N₀M₀. Операция 23.03.04., проведена лапаротомия, радикальная нефрэктомия справа, дренирование забрюшинного пространства. Гистологическое исследование №12459-77 в препарате картина почечноклеточного рака, светлоклеточный вариант, инвазия в капсулу. Течение послеоперационного периода гладкое. Проведен хемилюминесцентный анализ функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и клеточной чувствительности к реаферону in vitro до начала лечения и перед следующим курсом интерферонотерапии.

До начала лечения
Дозы реаферона	3 млн ME	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	0,70/0,78=0,90	1,00/0,78=1,28	0,54/0,78=0,69

ИЧ>1 только для одной дозы. Проведен курс лечения с дозой 6 млн.

Перед началом следующего курса интерферонотерапии
Дозы реаферона	3 млн ME	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	8,14/2,74=2,97	5,28/2,74=1,93	7,82/2,74=2,85

ИЧ для всех трех доз>1. В соответствии с предложенным способом для лечения выбрана меньшая доза. Рекомендовано снижение дозы на следующий курс до 3 млн ME.

Пример 3. Больная Ш., 67 лет. История болезни №1451/119. Находилась на стационарном лечении в урологическом отделении Красноярского краевого онкологического диспансера с 01.03.04. по 25.03.04. с диагнозом: рак левой почки, T₃ N₀M₀. Операция 10.03.04., проведена лапаротомия, радикальная нефрэктомия слева, спленэктомия, дренирование забрюшинного пространства. Гистологическое исследование №10868-92 в препарате картина почечноклеточного рака, светлоклеточный вариант. Вялое течение раневого процесса, заживление ран частично вторичным натяжением. Проведен хемилюминесцентный анализ функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и клеточной чувствительности к реаферону in vitro до начала лечения и перед следующим курсом.

До начала терапии
Дозы реаферона	3 млн ME	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	3,03/2,37=1,28	2,17/2,37=0,92	3,84/2,37=1,62

ИЧ двух доз>1. В соответствии с предложенным способом для лечения выбрана меньшая доза. Первый курс реаферонотерапии проведен с дозой 3 млн ME.

Перед следующим курсом интерферонотерапии
Дозы реаферона	3 млн МБ	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	4,79/0,70=6,73	5,55/0,70=7,93	2,94/0,70=4,20

ИЧ для всех трех доз>1. В соответствии с предложенным способом для лечения выбрана меньшая доза. Рекомендуемая доза реаферона на 2-й курс составила 3 млн ME.

Пример 4. Больная Ж., 55 лет. История болезни №2425/204. Находилась на стационарном лечении в урологическом отделении Красноярского краевого онкологического диспансера с 09.04.04. по 05.05.04 с диагнозом: рак левой почки, T₃ N₀M₀. Операция 22.04.04.: проведена лапаротомия, радикальная нефрэктомия слева, дренирование забрюшинного пространства. Гистологическое исследование №18755-75: в препарате картина почечноклеточного рака, смешанный вариант. В послеоперационном периоде наблюдалось вялое течение раневого процесса. Проведен хемилюминесцентный анализ функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и клеточной чувствительности к реаферону in vitro до начала лечения и перед следующим курсом.

До начала лечения
Дозы реаферона	3 млн МБ	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	1,59/1,39=1,14	1,97/1,39=1,43	1,97/1,39=1,42

ИЧ для всех трех доз>1. В соответствии с предложенным способом для лечения выбрана меньшая доза. Проведен курс реаферонотерапии с дозой 3 млн МЕ.

Перед следующим курсом интерферонотерапии
Дозы реаферона	3 млн ME	6 млн ME	15 млн ME
ИЧ	1,28/1,99=0,64	0,94/1,99-0,47	1,15/1,99=0,58

Клеточная чувствительность снижена ко всем исследуемым дозам. Реаферонотерапия указанными дозами не рекомендована.

Предлагаемым способом обследовано 75 человек.

Способ позволяет повысить эффективность интерферонотерапии у больных раком почки за счет индивидуальной оценки клеточной чувствительности к различным дозам интерферона и коррекции дозы в процессе терапии.

Источники информации

1. Протоколы Российского онкологического научного центра им. Н.Н.Блохина РАМН, 2002.

2. Куртасова Л.М., Шкапова Е.А., Савченко А.А. и др. Способ оценки чувствительности к интерферону у больных раком почки. RU 2005100610 А, опубл. 10.09.2005.

3. Шкапова Е.А., Куртасова Л.М., Савченко А.А., Зуков Р.А., Крылов Г.Н. Сравнительный анализ функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов крови больных почечноклеточным раком до и после оперативного лечения // Клиническая лабораторная диагностика. - 2004. - №1. - С.39-41.