способ разделения изомеров урокановой кислоты

Формула изобретения

Способ разделения изомеров урокановой кислоты путем электрофореза, отличающийся тем, что электрофорез осуществляют на бумаге в ацетатном буфере при рН 5,5 в течение 15-20 мин.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к физическому анализу биоорганических материалов, а именно к методам разделения изомеров урокановой кислоты (метаболит, образующийся на коже человека), и может найти практическое применение в области медицины, а также косметологии, экологии.

Разделение и идентификация структурных и особенно пространственных изомеров органических соединений в силу незначительных различий в структуре и свойствах создает существенные методические трудности в современной аналитической химии.

Известен способ разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [1]. Недостатком этого способа является его дорогостоящее аппаратурное оформление.

Известен способ разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты с помощью высокоэффективного капиллярного электрофореза [2]. Однако для проведения этой аналитической процедуры требуется эксклюзивная дорогостоящая аппаратура, отсутствующая в отечественных химических лабораториях.

Технический результат заключается в разработке простого, доступного любой аналитической лаборатории способа разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты.

Сущность способа заключается в том, что цис- и транс-изомеры урокановой кислоты разделяются путем электрофореза на бумаге в ацетатном буфере при рН 5,5 в течение 15-20 минут. В основе способа лежат различия в значениях изоэлектрической точки (pI) этих двух изомеров. цис-Урокановая кислота имеет pI - 4,85, транс - 4,65. Исследования показали, что этого различия оказалось достаточно для того, чтобы эти два изомера имели разную скорость движения к аноду при электрофорезе на бумаге при рН 5,5.

Способ осуществляется следующим образом. Образец, содержащий смесь изомеров цис- и транс-урокановой кислоты (смывы с кожи человека), подвергается электрофорезу на бумаге в 0,01-0,05 М ацетатном буфере при рН 5,5 в течение 15-20 минут. Затем электрофореграмма извлекается, сушится и обрабатывается реактивами для цветной реакции Паули (сульфаниловая кислота, нитрит натрия, карбонат натрия), проявляются красно-оранжевые пятна: более подвижное (11 мм) - транс-урокановая кислота, более медленное (6 мм) - цис-урокановая кислота (их положение видно на электрофореграмме относительно анода, см. чертеж).

С помощью предложенной процедуры удалось показать, что в смывах с кожи содержатся оба изомера, причем доля цис-урокановой кислоты увеличивается под действием ультрафиолетового облучения. Выявлено, что сам стандартный реагент урокановой кислоты существует в транс-форме, но при растворении в воде, особенно при хранении на свету постепенно частично переходит в цис-форму.

Предложенный способ может быть использован в практике биохимических медицинских лабораторий, изучающих азотный обмен у человека и животных, а также процессы перспирации метаболитов через кожу человека, например, при исследовании ферментов гистидазы уроканазы и других связанных с обменом гистидина и урокановой кислоты.