способ детолерантного воздействия на антигенные субстанции

Формула изобретения

Способ усиления иммуногенных свойств антигенных субстанций, заключающийся в электрофорезе антигенов, отличающийся тем, что электрофорез антигенов производят в дистиллированной воде с последующим забором их катодной фракции.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для усиления свойств антигенов, вводимых в организм с лечебной и профилактической целью.

Применяемые в настоящее время методы усиления свойств антигенных препаратов с целью уменьшения толерантного эффекта по отношению к ним со стороны иммунной системы основаны на количественном увеличении дозы вводимых антигенов. Предлагаемый нами способ детолерантного воздействия на антигенные субстанции основан на методе препаративного электрофореза. Результаты опытов по изучению вирулентности катодных и анодных фракций S.Typhimurium после препаративного электрофореза показали, что анодная фракция S.Typhimurium обладает в 25 раз менее выраженными вирулентными свойствами, чем S.Typhimurium, не подвергнутая электрофорезу. При этом был сделан вывод, что данный метод позволяет получать клетки с различными значениями дзета-потенциала и отличающиеся по вирулентности [Голубев О.А. «Дзета-потенциал в изучении некоторых свойств энтеробактерий», автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Москва, 1972 г. С.20-21]. Так же было показано, что отдельные субстанции анодной фракции диагностикума паратифа А, подвергнутого электрофорезу, обладают выраженными иммунодепрессивными свойствами. При этом авторами был сделан вывод, что в анодной фракции диагностикума паратифа А в процессе электрофореза концентрируются в силу электростатических свойств субстанции микробного антигена с функциями блокатора антигенных и иммуногенных свойств микробных клеток [Бучин П.И., Павлов Д.Ф., К характеристике агглютиногенных и иммуногенных свойств диагностикума паратифа А, подвергнутиго электрофорезу. Вопросы иммунологии и микробиологии, Куйбышев, 1971 г., с. 5-7]. Под воздействием электрического тока происходит изменение физико-химических свойств и биологической активности воды. Поступление электронов из катода в воду, также как и удаление электронов из воды в анод сопровождается целой серией электрохимических реакций на поверхности катода и анода. В результате реакций образуются новые вещества, изменяется вся система межмолекулярных взаимодействий, в том числе изменяется и структура воды, как растворителя. При этом наибольшие отклонения от равновесного состояния без химических превращений достигаются при обработке воды с минеральзацией менее 0,3 г/л, т.е. максимально изменяется нестабильная структура воды. В исследованиях по препаративному электрофорезу влияние электроактивации воды не учитывалось и снижение вирулентности анодной фракции S.Typhimurium было связано только с дзета-потенциалом микробных клеток. Так же электроактивация не была учтена и в опытах по электрофорезу диагностикума паратифа А, а иммуносупрессивный эффект был связан с концентрацией у анода особых субстанций. Изменение свойств антигенных субстанций объясняется их физико-информационной реструктуризацией под действием измененной нестабильной структуры воды. Применение предлагаемого способа для детолерантного воздействия на корпускулярные антигенные неклеточные субстанции показало усиление их антигенных свойств и наличие более интенсивного иммунного ответа при их введении [Материалы второго съезда общества биотехнологов России. C.114]. Данный факт можно связать только с положительной коррекцией свойств антигенов посредством изменения биологических свойств самой воды катодной фракции, поскольку данные антигенные субстанции обладают одинаковыми электростатическими свойствами. Технический результат предлагаемого способа заключается в усилении антигенных свойств субстанций с целью более выраженного, количественно и качественно, иммунного ответа организма в ответ на их введение.

Предлагаемый способ детолерантного воздействия на антигенные субстанции осуществляется с помощью устройства (см.чертеж), составными частями которого являются: 1 - П-образная трубка, 2 - канюля, 3 - стакан, 4 - покровная крышка, 5 - анод, 6 - катод, 7 - выпрямитель. Через канюлю в центре стеклянной трубки, заполненной дистиллированной водой, имеющей П-образную форму с концами, опущенными в стаканы с электродами, занимающими всю площадь дна, помещают антигенную субстанцию. Затем к электродам подают постоянный электрический ток до 100 В, чем обеспечивают оптимально минимальное время кинеза в отсутствие выраженных химических реакций. По достижении антигенами катода ток отключают. В канюлю вводят воздух так, чтобы произошло разобщение жидкости по стаканам. В стакане с католитом будет находиться катодная фракция антигенной субстанции. Таким образом, детолерантное воздействие на антигенные субстанции осуществляется путем электрофореза этой антигенной субстанции с забором катодной ее фракции.

Пример. В качестве антигенной субстанции нами предлагается использовать анатоксин стафилококковый жидкий, адсорбированный на геле гидроокиси алюминия. Проводился опыт, целью которого была иммунизация белых мышей промышленным стафилококковым анатоксином, подвергнутому детолерантному воздействию, с определением в последующем степени защиты. В эксперименте использовался госпитальный штамм S.aureus плазмокоогулаза положительный, лецитиназообразующий, с выраженными гемолитическими свойствами. После культивирования и последующего центрифугирования забиралась надосадочная жидкость, проверенная на стерильность (токсическая субстанция). LD ₅₀ составила 0,3 мл токсической субстанции. При введении 0,3 мл бульонной среды этой серии контрольной группе мышей выпадения животных не было.

В опыте было взято 3 группы белых мышей. Одна группа являлась контрольной, остальные две - опытными. Контрольная группа животных была проиммунизирована анатоксином, а опытные - электрокинетизированным. Через 20 дней после иммунизации определялась LD₅₀ токсической субстанции в контрольной группе, где она составила 0,4 мл. В первой опытной группе после введения 0,4 мл токсической субстанции смертность составила 10%, а во второй по введении 0,8 мл токсической субстанции - 20%.

Из результатов следует, что уменьшение показателя смертности в опытной группе мышей при сравнении с контрольной, которым была введена LD₅₀ токсической субстанции контрольной группы, составило 5 раз, а в опытной группе животных, которым было введено 2*LD₅₀ токсической субстанции контрольной группы, составило 2,5 раза. Кроме того, LD ₅₀ токсической субстанции опытных групп составила 2 мл против 0,4 мл в контрольной, что в 5 раз больше, и против 0,3 мл в интактной группе, что в 6,7 раза больше. Таким образом, защитный эффект анатоксина, подвергнутого детолерантному воздействию, возрос в 5 раз по сравнению с интактным, в то время как последний увеличивает иммунный ответ лишь в 1,3 раза.

Данные результаты свидетельствуют о более сильном иммунном ответе организмов животных, которым проводилась иммунизация стафилококковым анатоксином, подвергнутому детолерантному воздействию, что связано с повышением иммуногенных свойств данного антигенного препарата. В качестве антигенной субстанции нами так же предлагается использовать убитую культуру S.Ту24446. Иммунизация мышей данной культурой, подвергнутой детолерантному воздействию, обеспечила 250-кратное усиление защиты организмов животных по сравнению с мышами, которым вводилась обычная культура.