противоинфекционный липосомный препарат и фармацевтическая композиция на его основе

Формула изобретения

1. Средство с противоинфекционной и противотрихомонадной активностью, состоящее из липосомной оболочки и заключенного в нее активного вещества, отличающееся тем, что в качестве активного вещества содержит 2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон и/или экстракт из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.) или их смеси, в котором массовое соотношение между активным веществом и липосомной оболочкой составляет от 1:0,5 до 1:50.

2. Средство по п.1, отличающееся тем, что липосомная оболочка содержит один или несколько фосфолипидов, выбранных из группы: соевые лецитины, яичный лецитин, фосфолипиды из бычьего или свиного мозга или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин.

3. Средство по п.2, отличающееся тем, что в качестве дополнительного компонента липосомной оболочки может содержать холестерол.

4. Фармацевтическая композиция с противоинфекционной и противотрихомонадной активностью, характеризующаяся тем, что содержит средство по пп.1-3 и суммарно до 5,0% витаминов и до 1,0% микроэлементов в отношении к общей массе липосомного препарата.

5. Фармацевтическая композиция по п.4, отличающаяся тем, что дополнительно содержит фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, пригодные для парэнтерального и энтерального введения.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области биофармакологии природных соединений, в частности к лекарственным средствам, обладающим противоинфекционной активностью.

Изобретение касается нового липосомного препарата, обладающего противоинфекционной активностью широкого спектра действия, при этом в качестве активного вещества, заключенного в оболочку из соединений липидного происхождения, используют препараты из растения манго или облепихи, или их смесь.

Известен препарат алпизарин, получаемый из травы копеечника альпийского (Hedysarum alpinum L.) и копеечника желтеющего (Н. flavescens), обладающий противовирусной активностью в отношении ДНК-содержащих вирусов: простого герпеса, вируса опоясывающего лишая и ветряной оспы, цитомегаловируса (Машковский М.Д., Лекарственные средства, т.2, 1993 г.). Алпизарин также применяется в качестве средства, обладающего противоинфекционным действием (Пат. РФ №2092177). Однако недостатком препарата является узкий спектр противоинфекционного действия.

Известно также средство на основе растительного сырья гипорамин, представляющее собой сухой очищенный экстракт из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.), содержащий полифенольный комплекс галлоэллаготанинов, биологически активными компонентами которого являются гидролизуемые танины (Пат. РФ №1805967 и №2118163). Гипорамин обладает высокой противовирусной активностью в отношении различных штаммов вируса гриппа А и В, аденовируса, парамиксовируса, респираторно-синцитиального вируса, вирусов простого герпеса, опоясывающего лишая и ветряной оспы, цитомегаловируса.

Перечисленные препараты выпускаются в виде мазей для наружного применения или таблеток. Основным недостатком данных препаратов является их низкая растворимость и вследствие этого пониженная биодоступность. Использование препаратов из манго и облепихи в виде липосомных форм может значительно увеличить эффективность их действия за счет снижения скорости их выведения из организма и адресной доставки к пораженным вирусом клеткам и кроме того добавляет им новую активность, а именно: против анаэробных микроорганизмов и некоторых простейших.

Известно противовирусное липосомное лекарственное средство для перорального применения (заявка на изобретение РФ №96108008). В качестве активного компонента средство содержит рекомбинантный интерферон-альфа-2, а дополнительно витамин С и сахарозу. Недостатком предлагаемого лекарственного средства является высокая стоимость и низкая технологичность вследствие применения в качестве активного вещества рекомбинантного белка.

Задачей изобретения является создание липосомного противоинфекционного препарата с широким спектром действия, охватывающим воздействие на неклостридиальные анаэробные инфекции, а также Trichomonas vaginalis, отличающегося простотой и технологичностью получения, с низкой биодеградабельностью и способностью избирательно доставляться к пораженным органам-мишеням. Техническая задача изобретения - расширение спектра действия активных начал, заключенных в липосомную оболочку, за счет усиления противоинфекционной активности и выявления новых свойств, в частности активности в отношении неклостридиальных анаэробов, а также Tr.vaginalis.

Поставленная задача решается тем, что предложен новый липосомный препарат, обладающий противоинфекционной активностью, отличающийся тем, что в качестве активного вещества, заключенного в оболочку из фосфолипидов, используют препарат или смесь препаратов, получаемых из растительного сырья, в частности 2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон из листьев манго (Mangifera indica L.) или экстракт из листьев облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.). В предлагаемом препарате фосфолипиды, образующие оболочку липосомы, выбраны из группы: соевые лецитины, яичный лецитин, фосфолипиды из бычьего или свиного мозга или кожи, фосфатидилхолин, фосфатидилсерин, фосфатидилэтаноламин. В качестве дополнительного компонента оболочки липосом предлагается использовать холестерол. Массовое соотношение между активным веществом, заключенным в липосомную оболочку, и суммой фосфолипидов может составлять от 1:0,5 до 1:50. Липосомы, содержащие активное вещество, заключенное в фосфолипидную оболочку, могут быть получены известными методами, такими, как метод инжекции, интрузии, ультразвуковая обработка и др.

Предлагаемый препарат может представлять собой твердый продукт, полученный путем лиофилизации или распылительной сушки.

В рамках настоящего изобретения предлагается также фармацевтическая композиция на основе липосомного препарата, которая дополнительно содержит витамины и микроэлементы и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Фармацевтическая композиция может быть выполнена в форме твердых или мягких желатиновых капсул, таблеток, растворов для инъекций или инфузий, кремов и мазей.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение липосомного препарата.

Липосомный препарат получали методом инжекции растворов активного вещества в водный раствор фосфолипидов, дополнительно содержащий подходящий криопротектор. Примеры получения препарата приведены в табл.1. Инкубировали при перемешивании, затем замораживали и подвергали лиофильной сушке.

Таблица 1
№ №	Активное вещество	Растворитель для активного вещества	Фосфолипид	Масс. соотношение [активное вещество: фосфолипид]	Холестерол (+ да, - нет)	Криопротектор
1	2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон из листьев манго (вещество А)	Смесь ацетонитрил-вода 4:1	Фосфатидилхолин	1:50	+	Сахароза
2	-,,-	Смесь ацетон-вода	Фосфатидилсерин	1:20	-	Глюкоза
3	Экстракт из листьев облепихи (вещество Б)	Этанол 70%	Фосфолипиды из бычьего мозга	1:0,5	-	Маннит
4	-,,-	Ацетон	Фосфатидил-этаноламин	1:1	+	Сорбитол
5	Вещество А+ вещество Б	Этанол 50%	Яичный лецитин	1:10	+	Сахароза
6	Вещество А+ вещество Б	Смесь ацетонитрил-вода 5:2	Фосфолипиды из свиной кожи	1:30	-	Манноза
7	Вещество А+ вещество Б	Метанол водный	Соевый лецитин	1:40	+	Мальтоза

Пример 2. Изучение терапевтической активности предлагаемого препарата in vivo на модели экспериментальной гриппозной пневмонии белых мышей.

Исследование проводили на белых нелинейных мышах с массой тела 14-16 г. Для заражения использовали вирус гриппа В (Сингапур) 222/79 (10 LD₅₀ ), адаптированный к мышам. Заражение проводили интраназально под эфирным наркозом. Заражающую дозу вируса вводили в объеме 0,05 мл. Лечение проводили по схеме, включающей 5-дневное введение предлагаемого препарата по 1 разу в день: за 24 часа и 1 час до заражения и через 24, 48 и 72 часа после заражения. Преимущества подобной схемы заключаются в том, что она позволяет выявить как профилактическое, так и лечебное действие исследуемого препарата. Липосомные препараты вводили внутривенно, в качестве препаратов сравнения использовали нелипосомные формы активных веществ, вводимые перорально в крахмальном клейстере в соответствующих дозах. Оценку терапевтической эффективности соединений проводили, используя следующие критерии: увеличение средней продолжительности жизни животных (УСПЖ) и степень патологического изменения легких (оценивается по 4-х балльной системе, где 4 - полное поражение легких, 1 - поражение одной доли легкого). Результаты исследования приведены в табл.2. Как видно из таблицы, терапевтическая эффективность предлагаемого липосомного препарата существенно превышает таковую от применения нелипосомных форм.

Таблица 2
Группа животных/препарат	УСПЖ, %	Степень поражения легких
В отсутствие лечения	-	4
2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон из листьев манго	15,4	3-4
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 1)	21,7	2-3

Липосомный препарат по примеру 1 (состав 2)	23,6	2
Экстракт из листьев облепихи	12,9	3-4
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 3)	20,1	2
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 4)	18,3	2
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 5)	29,3	1-2
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 6)	32,5	1
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 7)	30,4	1-2

Пример 3. Изучение эффективности действия предлагаемого препарата в отношении различных штаммов Trichomonas vaginalis.

Исследования проводились на 10 штаммах Tr.vaginalis, выделенных от женщин, по методу серийных разведений на жидкой питательной среде. К экспериментальным культурам добавляли исследуемые липосомные препараты. Контролем служили те же штаммы, не обработанные препаратом. В качестве препаратов сравнения использовали нелипосомные формы активных веществ. Культуры инкубировались 72 часа при температуре 37°С, образцы культур оценивались визуально через 48 и 72 часа. Критерием гибели трихомонад являлось прекращение их подвижности (подвижность оценивали по шкале от «+++» до «-», где «+++» - максимальная подвижность, наблюдаемая в контрольной культуре, «-» - полное отсутствие подвижности. Результаты эксперимента приведены в табл.3. Как показали результаты исследования, применение липосомного препарата эффективно подавляет жизнеспособность Tr.vaginalis в культуре, в отличие от нелипосомных форм активных веществ.

Таблица 3
Препарат	Жизнеспособность культуры
	через 48 часов	через 72 часа
Контроль без обработки препаратом	+++	+++
2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон из листьев манго	++	++
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 1)	-	-
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 2)	+	-
Экстракт из листьев облепихи	+++	++
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 3)	+	-
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 4)	-	-
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 5}	-	-
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 6)	-	-
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 7)	-	-

Пример 4. Исследование эффективности липосомного препарата на модели экспериментального перитонита белых мышей.

Экспериментальный каловый перитонит вызывается неклостридиальными анаэробными бактериями и является эффективной моделью для исследования воздействия соединений с анаэробной активностью. Исследования проводили на беспородных белых мышах с массой тела 20-22 г. Заражение проводили путем внутрибрюшинного введения 5-10% каловой взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия. Эффективность противоинфекционного действия препаратов оценивали по уровню средней продолжительности жизни (СПЖ) экспериментальных животных по сравнению с нелеченными животными (контроль). Результаты исследования приведены в табл.4. Как видно из приведенных данных, применение препаратов из листьев манго и экстракта листьев облепихи в липосомной форме значительно повышает эффективность их действия в отношении инфекционного перитонита по сравнению с нелипосомными формами.

Таблица 4
Группа животных/препарат	СПЖ, дни	УСПЖ, %
Контроль без обработки препаратом	4,2±0,7	-
2-С-В-D(глюкопиранозид)-1,3,6,7-тетраоксиксантон из листьев манго	7,0±1,2	66,7
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 1)	10,2±1,9	142,9
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 2)	10,7±1,8	153,7
Экстракт из листьев облепихи	5,3±0,9	26,2
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 3)	9,6±1,4	128,6
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 4)	9,8±1,6	132,8
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 5)	12,9±1,8	207,1
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 6)	12,5±1,3	198,6
Липосомный препарат по примеру 1 (состав 7)	13,1±2,0	213,0
р<0,05

Другим объектом изобретения является фармацевтическая композиция на основе предлагаемого препарата. Технической задачей является создание композиции с расширенной противоинфекционной активностью, а именно противоанаэробной и противотрихомонадной.

Поставленная задача решается тем, что разработана композиция на основе нового липосомного препарата, подробно охарактеризованного выше, отличающаяся тем, что может содержать суммарно до 5,0% витаминов и суммарно до 1,0% микроэлементов в отношении к общей массе липосомного препарата. Композиция может быть представлена в форме твердых или мягких желатиновых капсул, таблеток, растворов для инъекций или инфузий, кремов и мазей.

Изобретение поясняется следующими примерами.

Пример 5. Композиции для заполнения желатиновых капсул.

Состав композиции на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 5):

Липосомный препарат	70% вес.
Витамин Е	2% вес.
Витамин А	3% вес.
Селен	0,8% вес.
Мальтодекстрин	до 100%

Состав композиции на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 1):

Липосомный препарат	30% вес.
Витамин С	5% вес.
Никотинамид	4% вес.
Целлюлоза микрокристаллическая	до 100%

Состав композиции на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 4):

Липосомный препарат	60% вес.
Витамин D	4% вес.
Крахмал картофельный	до 100%

Пример 6. Композиции, выполненные в форме таблеток.

Состав композиции на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 6):

Липосомный препарат	50% вес.
Магния стеарат	0,4% вес.
Крахмал картофельный	до 100%

Состав композиции на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 3):

Липосомный препарат	40% вес.
Витамин С	5% вес.
Декстрин	до 100%

Пример 7. Композиция для инъекций или инфузий на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 2).

Для приготовления инъекционной или инфузионной формы липосомного препарата его растворяют в изотоническом растворе натрия хлорида. Содержание липосомного препарата в инъекционых формах может составлять от 0,1 до 10%.

Пример 8. Композиция на основе липосомного препарата по примеру 1 (состав 7), выполненная в форме мази.

Состав композиции:

Липосомный препарат	20%
Мазевая основа (вазелин)	до 100%

Таким образом, применение липосомных форм новых противоинфекционных веществ расширенного спектра действия (препарата и композиции), предлагаемое настоящим изобретением, приводит к значительному усилению их терапевтической активности за счет увеличения растворимости и биодоступности, которая возрастает на 25-30% в сравнении с нелипосомными формами.