киназы sgk 2 и sgk 3 в качестве мишеней для диагностических и терапевтических целей

Формула изобретения

1. Применение антител для выявления экспрессии и/или функции киназы sgk3 в эукариотических клетках в целях диагностики заболеваний, связанных с нарушением активности ионных каналов.

2. Применение по п.1, отличающееся тем, что ионный канал представляет собой натриевый канал и/или калиевый канал.

3. Применение по п.1 или 2, отличающееся тем, что ионный канал означает натриевый канал подтипа ENaC.

4. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что ионный канал означает калиевый канал подтипа Kv1.3.

5. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что заболевание означает артериальную гипертонию или характеризуется клинической картиной, соответствующей синдрому Линдля.

6. Применение по любому из предыдущих пунктов, отличающееся тем, что заболевание означает эпилепсию, нейродегенерацию, аутоиммунные заболевания или иммунодефицит.

7. Применение по любому из предыдущих пунктов в диагностическом наборе.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к применению некоторой субстанции для выявления sgk2 и sgk3 (зависящие от сыворотки и глюкокортикоида киназы 2 и 3) в диагностических целях, а также к применению некоторого действующего вещества с целью воздействия на sgk2 и/или sgk3 для терапевтического лечения заболеваний, связанных с нарушением активности ионных каналов, прежде всего натриевых и/или калиевых каналов. Киназы sgk представляют собой семейство серин-/треонинпротеинкиназ, регуляция которых возможна и в ходе, и по завершении транскрипции.

Большое число внешних сигналов, воздействующих на клетку извне, активизируют внутриклеточные каскады фосфорилирования/дефосфорилирования с целью быстрой и обратимой передачи этих сигналов от плазматической мембраны и расположенных на ней рецепторов в цитоплазму и ядро клетки. Регуляция отдельных протеинов, участвующих в указанных каскадах, обеспечивает прежде всего высокую специфичность и приспособляемость клеток, что позволяет клеткам исключительно быстро реагировать на внеклеточные сигналы. В подобных процессах регуляции участвуют прежде всего киназы. Зависящая от сыворотки и глюкокортикоида киназа sgk первоначально была клонирована из раковых клеток карциномы молочной железы крыс (Webster и др., 1993, а, б). Человеческая киназа hsgk была клонирована в виде гена-регулятора объема клетки из клеток печени (Waldegger et al., 1997). Было установлено, что крысиная киназа (Chen et al., 1999, Náray-Feyes-Toth et al., 1999) стимулирует эпителиальный Na⁺ - канал (ENaC). Помимо этого было установлено, что повышенная активность ENaC определенным образом связана с гипертонией (Warnock, 1998).

Киназа hsgk экспрессируется также в головном мозге (Waldegger et al., 1997). В этом случае решающую роль в регуляции возбудимости нейронов играют зависящие от напряжения K ⁺ - каналы Kvl.3 (Pongs 1992). Помимо этого канал Kvl.3 играет важную роль в регуляции клеточной пролиферации (Cahalan и Chandy, 1997) и апоптоза (Szabo et al., 1996, Lang et al., 1999). Канал Kvl.3 играет далее важную роль в регуляции пролиферации и функции лимфоцитов (Cahalan и Chandy, 1997). Сравнительно недавно были клонированы два других представителя семейства sgk-киназ, а именно, sgk2 и sgk3 (Kobayashi et al., 1999). Аналогично киназе sgk1 киназы sgk2 и sgk3 активируются инсулином и IGF1 (инсулиноподобный фактор роста) посредством киназы PI3. Однако другие характеристики и функциональные особенности обеих этих новых киназ до настоящее время не исследованы.

Исходя из вышеизложенного в основу настоящего изобретения была положена задача найти возможность применения обеих киназ sgk2 и sgk3 в диагностических и терапевтических целях.

По результатам экспериментов, проводившихся методом фиксации потенциала с использованием двух электродов, неожиданно было установлено, что коэкспрессия с киназой hsgk2 или hsgk3 приводит к значительному повышению активности эпителиального Na⁺ - канала (ENaC). ENaC играет решающую роль в выделении Na⁺ в почках, которое в свою очередь влияет на кровяное давление. Киназа sgk3 экспрессируется также в головном мозге. По результатам экспериментов, проводившихся методом фиксации потенциала с использованием двух электродов, удалось также установить, что коэкспрессия с киназой hsgk2 или hsgk3 приводит к повышению активности K⁺ - канала Kv1.3. Поскольку активация K⁺ - каналов приводит к снижению возбудимости нейронов, полученные данные о функциональных характеристиках свидетельствуют о том, что оказываемые киназой sgk3 воздействия позволяют уменьшить возбудимость нейронов. Тем самым нарушение экспрессии или функции киназы sgk3 может служить причиной возникновения эпилептических припадков. И наоборот, очевидным является вывод о том, что при эпилептических припадках можно успешно применять стимуляторы экспрессии или активности киназы sgk3, позволяющие преодолевать гематоэнцефалический барьер. Помимо этого было установлено далее, что киназы sgk1, sgk2, sgk3 активируют экспрессируемый в сердце K⁺ - канал minK. Тем самым указанные киназы участвуют в регуляции возбудимости сердца.

В соответствии с этим поставленная в изобретении задача решается с помощью объектов, представленных в независимых п.п.1, 2, 13 и 17. Предпочтительные варианты осуществления изобретения указаны в соответствующих зависимых п.п.3-12, 14-16 и 18-23. Признаки всех этих пунктов в полном объеме являются частью настоящего описания.

Согласно изобретению для выявления экспрессии и/или функции киназы sgk2 или sgk3 в эукариотических клетках можно использовать по меньшей мере одну субстанцию. В соответствии с этим появляется также возможность диагностировать прежде всего те заболевания, которые связаны с нарушением активности ионных каналов, таких, например, как натриевые и калиевые каналы. Указанная субстанция может представлять собой, например, антитело к киназе sgk2 или sgk3, которое может использоваться в известных специалистам методах выявления экспрессии и/или функции указанных киназ, таких, например, как ELISA-анализ (твердофазный иммуноферментный анализ). При проведении таких иммунологических анализов специфическое антитело к выявляемому антигену (sgk2 или sgk3) (соответственно гомологичный тестируемый антиген, если речь идет о выявлении антитела) связывают с носителем (например, целлюлозой, полистиролом), на котором после инкубации совместно с образцом образуются иммунные комплексы. На следующей стадии к этим иммунным комплексам добавляют меченое антитело. Добавление к реакционной смеси хромогенного субстрата позволяет визуализировать связанные с иммунным комплексом комплексы фермент-субстрат, соответственно определять концентрацию антигена в образце путем фотометрического определения содержания связанного с иммунным комплексом фермента-маркера за счет сравнения со стандартами с известной ферментативной активностью. Другими субстанциями, пригодными для выявления экспрессии и/или функции указанных киназ в диагностических целях, являются так называемые олигонуклеотиды, которые с помощью так называемой полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно применять для количественного выявления киназ sgk2 и sgk3 с использованием метода молекулярной генетики, основанного на амплификации селективно отобранных фрагментов ДНК. Специалистам известны и другие методы количественного выявления известного целевого протеина.

Согласно изобретению для лечения заболеваний, связанных с нарушением активности ионных каналов, прежде всего натриевых и/или калиевых каналов, предлагается также применять некоторое действующее вещество с целью воздействия, прежде всего ингибирующего или активирующего воздействия, на экспрессию или функцию киназ sgk2 и sgk3, в эукариотических клетках. Поскольку sgk2 и sgk3 являются киназами, в качестве ингибиторов киназ могут рассматриваться известные субстанции, такие как стауроспорин, хелеритрин и т.д., а также иные субстанции. Такие ингибиторы известны специалистам и некоторые из них являются коммерчески доступными продуктами, поставляемыми такими фирмами, как, например, Sigma или Merck. В качестве активаторов можно использовать, например, модифицированные методами генной инженерии мутанты киназы sgk2 и/или киназы sgk3.

Согласно изобретению ионный канал может представлять собой натриевый канал ENaC-подтипа. При этом ингибирование, соответственно активация киназы sgk2 и/или киназы sgk3, позволяет преимущественно влиять на транспорт Na⁺ через этот канал, что в свою очередь влияет на кровяное давление. Сверхэкспрессия или повышенная активность киназы sgk2 и/или sgk3 приводят к задержке Na⁺ в почках и тем самым к развитию гипертонии. Поэтому активация, соответственно инактивация соответствующих, киназ позволяет регулировать кровяное давление.

Согласно одному из предпочтительных вариантов ионный канал представляет собой калиевый канал Kv1.3-подтипа. При этом воздействие, прежде всего ингибирующее или активирующее воздействие, на киназу sgk2 и/или sgk3 преимущественно влияет на транспорт K⁺ через канал Кv1.3-подтипа. В другом предпочтительном варианте ионный канал представляет собой калиевый канал minK-подтипа и поэтому в данном случае воздействие на киназу sgk1, sgk2 и/или sgk3 влияет на транспорт K ⁺ через калиевый канал minK-подтипа.

Согласно одному из предпочтительных вариантов осуществления изобретения воздействие действующего вещества направлено непосредственно на киназу sgk2 и/или sgk3. В этом случае действующие вещества могут представлять собой антисмысловые последовательности, так называемые мутанты с дефицитом киназы, или же ингибиторы киназ, такие как стауроспорин и/или хелеритрин, соответственно их аналоги. Помимо этого можно также применять так называемые низкомолекулярные соединения, соответственно полинуклеотиды, кодирующие пептид, влияющий на экспрессию киназы sgk2 и/или sgk3.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения воздействие действующего вещества направлено на активаторы, ингибиторы, регуляторы и/или биологические предшественники киназы sgk2 и/или sgk3. Подобные активаторы, ингибиторы, регуляторы и/или биологические предшественники могут представлять собой расположенные против хода транскрипции и по ходу транскрипции фрагменты, участвующие в каскаде трансдукции сигнала, факторы транскрипции, ответственные за уровень экспрессии киназы sgk2 и/или sgk3, а также еще не известные в настоящее время молекулы, на которые влияет действующее вещество и которые участвуют в экспрессии и/или функции киназы sgk2 и/или sgk3.

Согласно изобретению существует возможность использовать и известные и еще не изученные действующие вещества. В наиболее предпочтительном вариант действующее вещество представляет собой так называемое низкомолекулярное соединение, прежде всего соединение с молекулярной массой (ММ) менее 1000. Подобные низкомолекулярные соединения могут представлять собой ингибиторы киназ, такие как имидазольные производные SB 203580 (MM 377,4) или SB 202190 (MM 331,3), при этом оба указанных действующих вещества являются известными ингибиторами экспрессии киназ и поставляются фирмой Calbiochem, Сан-Диего, штат Калифорния, США.

Предлагаемое в изобретении решение можно применять для лечения всех форм заболеваний, связанных с нарушением активности натриевых и/или калиевых каналов. К таким заболеваниям относятся прежде всего артериальная гипертония, а также так называемый синдром Лиддля, для которого характерна редко встречающаяся обусловленная генетическими факторами сверхактивность ENaC и связанное с этим заболевание, клиническая картина которого характеризуется значительным повышением кровяного давления.

К заболеваниям, которые связаны с нарушением активности калиевых каналов, прежде всего Kv1.3-, соответственно minK-подтипа, и которые можно лечить за счет предлагаемого в изобретении применения, согласно имеющимся на сегодняшний день знаниям относятся такие заболевания, как эпилепсия, нейродегенерация, аутоиммунные заболевания, а также иммунодефицит. Нарушения minK-канала являются основной причиной нарушений сердечного ритма.

Настоящее изобретение относится также к диагностическому набору. В состав такого набора входит по меньшей мере одна субстанция, пригодная для выявления экспрессии и/или функции киназы sgk2 и/или sgk3 и предназначенная для диагностики заболеваний, связанных с нарушением активности ионных каналов, прежде всего натриевых и/или калиевых каналов. Помимо этого с помощью такого набора можно диагностировать заболевания, которые связаны с повышенной или пониженной экспрессией, соответственно функцией киназы sgk2 и/или sgk3. В состав такого диагностического набора можно специально включат диагностикумы, которые позволяют выявлять такие заболевания, как артериальная гипертония, синдром Лиддля, эпилепсия, нейродегенерация, аутоиммунные заболевания и иммунодефицит. В этом случае подобные заболевания также диагностируют, выявляя нарушение экспрессии и/или функции киназы sgk2 и/или sgk3.

Настоящее изобретение относится далее к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно действующее вещество, которое оказывает воздействие прежде всего ингибирующее или активирующее воздействие, на экспрессию и/или функцию киназы sgk2 и/или sgk3, и предпочтительно при необходимости фармацевтический носитель. При этом в качестве такого действующего вещества можно использовать ингибитор киназ, в частности один из указанных выше ингибиторов, к которым относятся стауроспорин, хелеритрин, SB 203580 или SB 202190, соответственно их аналоги, а также иные вещества. Помимо этого действующим веществом может также служить полинуклеотид, кодирующий пептид, предпочтительно полипептид, который способен влиять на экспрессию киназы sgk2 и/или sgk3 предпочтительно ингибировать или активировать эту экспрессию. Такой полипептид может представлять собой, например, так называемый мутант с дефицитом киназы. Кроме того, действующее вещество может представлять собой так называемое низкомолекулярное соединение, предпочтительно низкомолекулярное соединение с молекулярной массой (ММ) менее 1000. Действующее вещество может представлять собой и так называемую антисмысловую последовательность, т.е. последовательность, которая обладает способностью образовывать двухцепочечный дуплекс с мРНК и тем самым препятствовать трансляции, приводящей к образованию полипептида. Помимо этого можно также использовать последовательность самих киназ sgk2 и/или sgk3 с целью обеспечить сверхэкспрессию этих киназ, например за счет встраивания векторов с сильными промоторами. В отношении других особенностей предлагаемой в изобретении композиции справедливо все сказанное выше в соответствующих разделах настоящего описания.

Помимо этого в настоящем изобретении предлагается фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного действующего вещества, оказывающего воздействие, прежде всего ингибирующее или активирующее воздействие, на экспрессию и/или функцию активаторов, ингибиторов, регуляторов и/или биологических предшественников киназ sgk2 и/или sgk3. В предпочтительном варианте в состав такой фармацевтической композиции при необходимости может также входить фармацевтический носитель. Указанные выше активаторы, ингибиторы, регуляторы и/или биологические предшественники киназы sgk2 и/или sgk3 могут представлять собой, например, другие киназы, участвующие в регуляции активности киназы sgk2 и/или sgk3, факторы транскрипции, ответственные за уровень экспрессии киназы sgk2 и/или sgk3, а также другие известные или еще не известные в настоящее время компоненты, участвующие в каскаде трансдукции сигнала sgk2 и/или sgk3. В состав таких фармацевтических композиций могут также входить полинуклеотиды, кодирующие пептид, который способен влиять на экспрессию активаторов, ингибиторов, регуляторов и/или биологических предшественников киназы sgk2 и/или sgk3, предпочтительно ингибировать или активировать такую экспрессию. Помимо этого можно также применять так называемые низкомолекулярные соединения, молекулярная масса (ММ) которых предпочтительно составляет менее 1000 и действие которых направлено на активаторы, ингибиторы, регуляторы и/или биологические предшественники киназы sgk2 и/или sgk3 и которые тем самым ингибируют или активируют экспрессию, соответственно функцию этих киназ.

Описанные выше, а также другие отличительные особенности изобретения более подробно рассмотрены в приведенном ниже описании предпочтительных вариантов его осуществления, в зависимых пунктах формулы изобретения и на чертежах. При этом реализация отдельных отличительных признаков изобретения возможна по отдельности либо в любых их сочетаниих.

На прилагаемых к описанию чертежах показано:

на фиг.1 - диаграмма, иллюстрирующая стимуляцию Na⁺ -канала rENaC киназами hsgk2 и hsgk3,

на фиг.2 - диаграмма, иллюстрирующая стимуляцию K⁺ -канала K.v1.3 киназами hsgk2 и hsgk3,

на фиг.3 - диаграмма, иллюстрирующая влияние, оказываемое ингибированием K⁺ -канала K.v1.3 на выживаемость НЕК-клеток (от англ. "human embryonic kidney", клетки почки человеческого эмбриона).

Материалы и методы

Методика рассечения шпорцевой лягушки (Xenopus laevis), выделения и обработки ооцитов подробно описана в литературе (Busch и др., 1992). В ооциты инъецировали каждый раз по 1 нг кРНК из канала -, -, - ENaC и канала K.vl.3, соответственно minK с одновременной инъекцией киназ hsgk1, hsgk2 и hsgk3 или без такой инъекции. Эксперименты с фиксацией потенциала и тока с использованием двух электродов можно проводить через 2-4 дня после инъекции. Величины потока Na⁺ (ENaC) и потока K ⁺ (Kv1.3, minK) подвергали фильтрации при частоте среза 10 Гц и регистрировали с помощью самописца. Обычно эксперименты проводили на второй день после инъекции кРНК. Электролит имел следующий состав: 96 мМ NaCl, 2 мМ KCl, 1,8 мМ CaCl ₂, 1 мМ MgCl₂ и 5 мМ HEPES (N-2-гидроксиэтилпиперазин-N'-2-этансульфоновая кислота) при рН 7,5 и фиксирующем потенциале, равном -80 мВ. Во всех экспериментах значение рН регулировали путем титрования с помощью HCl или NaOH. Расход электролита устанавливали на 20 мл/мин, благодаря чему полная смена раствора в измерительной камере происходила за 10-15 с. Все полученные данные выражали в виде арифметического среднего ± среднеквадратичное отклонение (СКО).

Результаты

Для исследования активности киназ hsgk1, hsgk2 или hsgk3 мРНК соответствующей киназы вместе с мРНК эпителиального Na⁺ -канала , , - ENaC-подтипа или зависящего от напряжения K ⁺ -канала Kv1.3, соответственно minK-канала инъецировали в ооциты лягушки, после чего определяли чувствительный к амилориду поток Na⁺ (I_Na) и активируемый напряжением поток K⁺ (I _K). Данные, представленные в приведенной ниже таблице 1, а также на фиг.1 и 2, свидетельствуют о том, что и киназа hsgk2, и киназа hsgk3 стимулируют активность и канала ENaC, и канала Kv1.3. Киназа hsgkl стимулирует активность канала minK (таблица 1). Стимулирующее действие полностью подавляется ингибиторами киназ стауроспорином и хелеритрином.

Таблица 1
	Без киназы	hsgkl	hsgk2	hsgk3	n
INa в -, -, - EnaC	2,5±0,3	5,9±1,0	9,4±1,7	4,5±0,8	7
IK в Kv1.3	3,1±0,6	8,4±1,8	6,5±0,6	8,2±0,7	7
IK в mink	0,67±0,07	1,16±0,11	0,97±0,1	1,1±0,11	7

В таблице 1 представлены данные о Na ⁺ - потоке (I_Na) и K ⁺ - потоке (I_K) (мкА) в ооцитах, в которые инъецировали воду (n.i), мРНК канала -, -, - ENaC, Kv1.3 или minK в сочетании с киназой hsgkl, hsgk2 или hsgk3 или без нее.

Эксперимент 1

По результатам, полученным после инъекции мРНК киназ hsgk2 и hsgk3, было установлено (см. фиг.1), что коэкспрессия с киназами hsgk2 и hsgk3 приводит к существенному увеличению ингибируемого амилоридом потока через Na⁺ -канал rENaC (I_амил ). Ингибиторы киназ стауроспорин и хелеритрин ингибируют активацию Na⁺ -канала (фиг.1). Поскольку ингибиторы киназ стауроспорин и хелеритрин могут подавлять стимулирующее действие киназ hsgk2 и hsgk3 на ENaC-канал, а) диагностическое выявление нарушения экспрессии или функции киназы hsgk2 или hsgk3 может рассматриваться как важная мера, позволяющая, например, установить причину имеющейся гипертонии, и б) появляется возможность использовать ингибиторы киназ hsgk2 и hsgk3, такие как стауроспорин, хелеритрин или иные ингибиторы киназ, при терапии вышеуказанного заболевания.

Эксперимент 2

Результаты, полученные после инъекции мРНК киназы hsgk1, hsgk2 или hsgk3 совместно с мРНК K⁺ -канала Kv1.3 или minK, свидетельствуют о возможности увеличивать поток (I) через оба указанных канала (таблица 1). На фиг.2 представлены результаты этого эксперимента, полученные после инъекции мРНК киназы hsgk2 и hsgk3 совместно с мРНК канала Kv1.3 в первый день (d1, левые столбцы) и на пятый день (d5, правые столбцы). Поскольку активация K ⁺ -каналов приводит к понижению возбудимости нейронов, эти характеризующие функциональную активность данные свидетельствуют о том, что экспрессируемая в головном мозге киназа hsgk3 способна уменьшать возбудимость нейронов. Таким образом, нарушение экспрессии или функции киназы sgk3 может являться причиной наступления эпилептического припадка. И наоборот, стимуляторы экспрессии или активности киназы sgk3, позволяющие преодолевать гематоэнцефалический барьер, можно применять при эпилептических припадках. Аналогичные выводы можно сделать и в отношении стимуляции, соответственно ингибирования киназ, прежде всего киназы hsgk1, с целью воздействия на нарушение возбудимости сердца.

Эксперимент 3

Как следует из приведенной на фиг.3 диаграммы, в отсутствие фетальной телячьей сыворотки (ФТС) количество НЕК-клеток (от англ. "human embryonic kidney", клетки почки человеческого эмбриона; Lewis M.L. и др., 1984, Phillips S.G. и др., 1982) уменьшается вследствие их гибели (закрашенные черным цветом столбцы в сравнении со столбцами, выделенными точками), при этом на диаграмме представлены данные, полученные через 24 и 48 ч. В присутствии инсулиноподобного фактора роста (IGF1) указанное уменьшение количества клеток происходит в меньшей степени (незакрашенные столбцы). Действие IGF1 ослабляется в результате одновременного ингибирования K⁺ -каналов с помощью маргатоксина (МТ) (обозначенные штриховыми линиями столбцы). Эти данные свидетельствуют о том, что инсулиноподобный фактор роста (IGF1) теряет свою способность ингибировать гибель клеток в том случае, если одновременно происходит ингибирование K⁺ -канала. В соответствии с этим опосредуемая киназой sgk2 и/или киназой sgk3 активация Kv1.3-канала обладает антиапоптозным действием и поэтому недостаточно высокая активность киназы sgk2 и/или киназы sgk3 привела бы к повышенной гибели клеток, что характерно, например, для нейродегенерации. И наоборот, активаторы киназы sgk2 и/или киназы sgk3 можно применять для уменьшения гибели клеток вследствие апоптоза при нейродегенерации. Поскольку канал Kv1.3, кроме того, играет важную роль в регуляции пролиферации и функции лимфоцитов, ингибиторы, соответственно активаторы киназ, можно использовать для воздействия на иммунную систему, например при аутоиммунном заболевании, соответственно при иммунодефиците.

Литература

Busch A.E., Kavanaugh M.P, Varnum M.D., Adelman J.P., North R.A., Regulation by second messengers of the slowly activating, voltage-dependent potassium current expressed in Xenopus oocytes, J. Physiol. Lond., 450 (1992), р.491-502.

Cahalan M.D., Chandy K.G., Ion channels in the immune system as targets for immunosuppression. Cur. Opin. Biotech., 8(6) (1997), р.749-756.

Chen S.Y., Bhargava A., Mastroberardino L., Meijer O.C., Wang J., Buse P., Firestone G.L., Verrey F., Pearce D., Epithelial sodium channels regulated by aldosterone-induced protein sgk, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96 (1999), р.2514-2519.

Kobayashi Т., Deak M., Morrice N., Cohen P., Characterization of the structure and regulation of two novel isoforms of serum- and glucocorticoid-induced protein kinase, Biochem. J., 344 (1999), р.189-197.

Lang F., Szabo I., Lepple-Wienhues A., Siemen D., Gulbins E., Physiology of receptor mediated lymphocyte apoptosis, News Physiol. Sci., 14 (1999), р.194-200.

Lewis M.L., Morrison D.R., Mieszkuc B.J., Fessler D.L., Problems in the bioassay of products from cultured HEK cells: plasminogen activator, Adv. Exp. Med. BioL, 172 (1984), р.241-267.

Naray-Fejes-Toth A., Canessa С., Cleaveland E.S., Aldrich G., Fejes-Toth G., Sgk is an aldosterone-induced kinase in the renal collecting duct. Effects on epithelial Na ⁺ channels, J. Biol. Chem., 274 (1999), р.16973-16978.

Phillips S.G., Lui S.L., Fillips D.M., Binding of epithelial cells to lectin-coated surfaces, In Vitro, 18 (1982), р.727-738.

Pongs O., Molecular biology of voltage-dependent potassium channels, Physiol. Rev., 72 (1992), р.69-88.

Szabo I., Gulbins E., Apfel H., Zhan X., Barth P., Busch A.E., Schlottmann K., Pongs O., Lang F., Tyrosine phosphorylation-deprndent suppression of a voltage-gated К channel in Т lymphocytes upon Fas stimulation, J. Biol. Chem., 271 (1996), р.20465-20469.

Waldegger S., Barth P., Raber G., Lang F., Cloning and charaterization of a putative human serine/threonine protein kinase transcriptionally modified during anisotonic and isotonic alterations of cell volume, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94 (1997), р.4440-4445.

Warnock D.G., Liddle syndrome: An autosomal dominant form of human hypertension. Kidney Ind., 53 (1) (1998), р.18-24.

Webster M.K., Goya L., Firestone G.L., Immediate-early transcriptional regulation and rapid mRNA turnover of a putative serine/threonine protein kinase, J. Biol. Chem., 268 (16) (1993), р.11482-11485 (а).

Webster M.K., Goya L., Ge Y., Maiyar A.C., Firestone G.L., Characterization of sgk, a novel member of the serine/threonine protein kinase gene family which is a transcriptionally induced by glucocorticoids and serum, Mol. Cell. Biol., 13(4) 1993, р.2031-2040 (б).