способ диагностики малых аномалий развития сердца у плода

Формула изобретения

Способ диагностики малых аномалий развития сердца у плода путем обследования женщины в 36-38 недель беременности, отличающийся тем, что в периферической венозной крови женщин определяют количество CD16+ лимфоцитов и коэффициент содержания антител к коллагену, при значении CD16+ лимфоцитов равном 14,0% или менее, а коэффициента содержания антител к коллагену равном 0,2 или более диагностируют малые аномалии развития сердца у плода.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, а именно к перинатологии и может быть использовано для диагностики малых аномалий развития сердца (МАРС) у плода.

Актуальность разработки способа определяется высокой частотой встречаемости МАРС у новорожденных. Среди патологии сердечно-сосудистой системы в данной группе детей МАРС составляют около 33%. Наиболее часто среди МАРС наблюдают: аномально расположенные хорды, открытое овальное окно, удлиненный Евстахиев клапан, пролапс митрального клапана, аневризмы межпредсердной и межжелудочковой перегородок [1]. Возможными осложнениями МАРС могут быть: инфекционный эндокардит, легочное сердце, тромбэмболии, нарушения ритма и проводимости сердца, а в редких случаях синдром внезапной смерти ребенка [2]. Разработка способа диагностики МАРС у плода позволит диагностировать МАРС до рождения ребенка и назначить своевременное наблюдение, адекватную терапию и профилактику осложнений данного заболевания.

Известен способ диагностики МАРС методом эхокардиографии плода (Лукьянова Е.А. Пренатальная диагностика врожденных пороков сердца методом эхокардиографии // Современные подходы и внедрение новых методик в диагностике: материалы конференции к 10-летнему юбилею Витебского диагностического центра (Витебск, 25 марта 2005 г.). - Витебск, 2005. - С.124-127). Указанный способ выбран в качестве ближайшего аналога (прототипа).

Недостатки способа:

1) проводится строго по показаниям (подозрение на врожденный порок сердца, нарушения сердечного ритма плода, водянка плода, врожденный порок сердца у беременной, сахарный диабет беременной, юный возраст матери и т.д.);

2) на поздних сроках беременности визуализация сердца затруднена из-за больших размеров, положения и ограниченной подвижности плода в полости матки;

3) гипердиагностика;

4) высокие требования к специалисту (специальная подготовка, опыт работы, четкое знание анатомии и особенностей кровообращения плода);

5) высокие требования к ультразвуковой аппаратуре - высокая разрешающая способность, режим "сердца плода" и допплеровский режим (цветной и импульсный).

Указанные недостатки предлагается устранить в заявляемом способе.

Заявляемый технический результат достигается тем, что в периферической венозной крови женщин в сроке 36-38 недель беременности определяют количество CD16+ лимфоцитов и коэффициент содержания антител к коллагену. При значении CD16+ лимфоцитов, равном 14,0% или менее, а коэффициента содержания антител к коллагену, равном 0,2 или более, диагностируют МАРС у плода в 80,65% случаев.

Новизна способа

Впервые предлагается диагностировать МАРС у плода по определению в периферической венозной крови женщин в сроке 36-38 недель беременности количества CD16+ лимфоцитов и коэффициента содержания антител к коллагену.

По результатам ранее проводимых исследований повышенное содержание антител к коллагену в крови отмечалось при ювенильной склеродермии [3], а также при бронхите у детей [4], при обострении ишемической болезни сердца [5], а снижение содержания CD16+ лимфоцитов в периферической крови наблюдалось у часто болеющих детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью [6], при аутоиммунном эндометрите [7], лимфопении, длительно текущей инфекции, злокачественном росте, аллергических заболеваниях [8].

Снижение количества CD16+ лимфоцитов на фоне повышенного содержания антител к коллагену в периферической крови беременных женщин, возможно, свидетельствует о супрессивном влиянии на пролиферацию естественных киллеров (CD16+ клеток) цитокинов (в частности, трансформирующего фактора роста ), непосредственно участвующих в процессах коллагенового обмена, а также о стимуляции гуморального звена иммунного ответа в отношении коллагеновых структур с вероятным опосредованным участием механизмов аутоиммунного повреждения, ведущих к нарушению процессов депозиции коллагена в интерстиции соединительной ткани сердца плода, что в конечном итоге приводит к формированию МАРС.

Отличительные признаки способа

Установлены прогностические параметры количества CD16+ лимфоцитов и коэффициента содержания антител к коллагену в периферической венозной крови беременной женщины, когда при значении CD16+ лимфоцитов, равном 14,0% или менее, коэффициента содержания антител к коллагену, равном 0,2 или более, диагностируют МАРС у плода.

Способ осуществляется следующим образом:

1. У женщин в сроке 36-38 недель беременности производят забор периферической венозной крови - 1 мл в сухую пробирку для определения антител к коллагену и 1 мл в пробирку с 0,5 мл разведенного гепарина (1:10) для определения количества CD16+ лимфоцитов.

2. После образования сгустка кровь центрифугируют 10 минут при 1500 об/мин и отбирают для постановки реакции 100 мкл сыворотки.

3. Определение и расчет коэффициента содержания антител к коллагену проводят в соответствии с методическими рекомендациями фирмы-производителя используемой тест-системы (ООО "Навина", Россия). Регистрацию проводят на вертикальном спектрофотометре типа "Multiskan".

4. Выделение лимфоцитов из 1 мл периферической венозной крови осуществляется стандартным методом - центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографин при 1500 об/мин в течение 30 минут.

5. В пробирку, содержащую 100 мкл лимфоцитов в концентрации 1×10⁶ кл/мл, добавляют 20 мкл моноклональных анти-СD16+ антител, меченных FITC или РЕ. Клетки инкубируют с моноклональными антителами в течение 30 минут при комнатной температуре в темноте, после чего отмывают 1 раз 1 мл физиологического раствора центрифугированием при 1500 об/мин в течение 2 минут. Клетки в пробирках ресуспендируют в 500 мкл физиологического раствора.

6. Учет реакции проводят на проточном цитометре, определяя в лимфоцитарном гейте процентное содержание CD16+ клеток. Диагноз наличия или отсутствия МАРС у плода подтверждался методом эхокардиографии, проводимой в 1-2 день жизни новорожденных детей.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Пациентка М. Беременность 36 недель, осложненная гестозом (нефропатия I степени). По заявляемому способу в периферической венозной крови женщины определялось количество CD16+ лимфоцитов, которое составило 12,1%, что ниже заявляемого уровня (14,0%), коэффициент содержания антител к коллагену был равен 0,316, что выше заявляемого уровня (0,2). Согласно заявляемому способу диагностируют МАРС. При проведении ЭХО-КГ плода были обнаружены аномально расположенная хорда в полости левого желудочка, удлиненный Евстахиев клапан, аневризма межпредсердной перегородки (МАРС). В 38 недель беременности у женщины произошли II своевременные роды путем кесарева сечения. Родилась девочка с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов, массой тела 3150 г, длиной тела 52 см. При проведении ЭХО-КГ в 1-й день жизни ребенка были диагностированы аномально расположенная (диагональная) хорда в полости левого желудочка, удлиненный Евстахиев клапан (9 мм), аневризма межпредсердной перегородки (МАРС).

Таким образом, диагноз МАРС у плода по предлагаемому способу подтвердился.

Пример 2. Пациентка Н. Беременность 38 недель. Течение беременности физиологическое. По заявляемому способу в периферической венозной крови женщины определялось количество CD16+ лимфоцитов, которое составило 15,9%, что выше заявляемого уровня (14,0%), коэффициент содержания антител к коллагену был равен 0,01, что ниже заявляемого уровня (0,2). Согласно заявляемому способу МАРС не диагностируют. Показаний для проведения ЭХО-КГ плода не было. В 39 недель беременности у женщины произошли I своевременные роды. Родился мальчик с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов, массой тела 3500 г, длиной тела 55 см. При проведении ЭХО-КГ в 1-й день жизни ребенка МАРС обнаружены не были.

Таким образом, диагноз по предлагаемому способу подтвердился.

Пример 3. Пациентка П. Беременность 37 недель, осложненная фетоплацентарной недостаточностью, хронической внутриутробной гипоксией плода, многоводием. По заявляемому способу в периферической венозной крови женщины определялось количество CD16+ лимфоцитов, которое составило 14,0%, что равно заявляемому уровню (14,0%), коэффициент содержания антител к коллагену был равен 0,475, что выше заявляемого уровня (0,2). Согласно заявляемому способу диагностируют МАРС. При проведении ЭХО-КГ плода МАРС обнаружены не были. В 40 недель у женщины произошли I своевременные роды. Родилась девочка с оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов, массой тела 3850 г, длиной тела 53 см. При проведении ЭХО-КГ на 2-й день жизни ребенка была диагностирована аномально расположенная (поперечная) хорда у верхушки левого желудочка (МАРС).

Таким образом, диагноз по предлагаемому способу подтвердился.

Пример 4. Пациентка Н. Беременность 38 недель. Течение беременности физиологическое. По заявляемому способу в периферической венозной крови женщины определялось количество CD16+ лимфоцитов, которое составило 14,0%, что равно заявляемому уровню (14,0%), коэффициент содержания антител к коллагену был равен 0,2, что равно заявляемому уровню (0,2). Согласно заявляемому способу диагностируют МАРС. При проведении ЭХО-КГ плода МАРС обнаружены не были. В 39 недель у женщины произошли II своевременные роды. Родилась девочка с оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов, массой тела 4200 г, длиной тела 54 см. При проведении ЭХО-КГ на 2-й день жизни ребенка была диагностирована аномально расположенная (диагональная) хорда в полости левого желудочка (МАРС). Таким образом, диагноз по предлагаемому способу подтвердился.

Преимущества способа:

1. Возможность скринингового обследования женщин в третьем триместре беременности с целью выявления МАРС.

2. Позволяет диагностировать МАРС независимо от размеров, положения и степени подвижности плода.

3. Заявляемый способ прост в исполнении и не требует больших временных затрат (осуществляется за 3 часа).

4. Исследование может быть проведено в любое время суток.

5. Предлагаемый способ имеет высокую точность - 80,65%.

6. Исследуется малый объем крови (2 мл).

7. Позволяет диагностировать формирование МАРС до рождения ребенка и назначить своевременное наблюдение, адекватную терапию и профилактику осложнений данной патологии.

Указанным способом обследовано 31 женщина в сроке 36-38 недель беременности.

Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1
Количество обследованных	31
Истинно положительные результаты	15
Истинно отрицательные результаты	10
Ложно положительные результаты	3
Ложно отрицательные результаты	3
Точность способа	80,65%
Чувствительность способа	83,33%
Специфичность способа	76,92%

ЛИТЕРАТУРА

1. Меньшикова Л.И., Макарова В.И., Сурова О.В., Ефимова Н.В., Кузьмина Г.К. Значение малых аномалий развития сердца в формировании патологии сердечно-сосудистой системы у детей // Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2001. - №5. - С.39-42.

2. Земцовский Э.В. Соединительно-тканные дисплазии сердца. - СПб: ТОО "Политекс-Норд-Вест", 1998. - 96 с.

3. Тугаринова Г.В., Подчерняева Н.С., Гитель Е.П., Осминина М.К. Клиническое значение определения антител к коллагенам при ювенильной склеродермии // Клиническая лабораторная диагностика. - 2005. - №9. - С.16-17.

4. Чигринцева Л.М., Григанов В.И., Силищева Н.Н., Герович Л.М., Подулясская А.Ю., Аверина Л.И. Клиническое значение определения антител к коллагену при бронхите у детей // Материалы 7 Национального конгресса по болезням органов дыхания (Москва, 2-5 июля 1997 г.). - М., 1997. - С.207.

5. Бабаева А.Р., Тарасов А.А. Возможности ранней лабораторной диагностики обострений ишемической болезни сердца с использованием лабораторной диагностики определения антител к коллагену и гиалуроновой кислоте // Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения в многопрофильном лечебном учреждении: тезисы конференции. - СПб., 2004. - С.101.

6. Кочерова О.Ю., Филькина О.М., Сотникова Н.Ю., Шанина Т.Г. Особенности иммунного статуса часто болеющих детей с синдромом дефицита внимания с гиперактивностью // Russian Journal of Immunology. - 2005. - V.9, Supp 2. - P.224.

7. Михнина Е.А., Эллиниди В.Н., Давыдова Н.И. Хохлов П.П., Комаров Е.К., Калинина Е.М., Добротворцева О.А., Аникеева Н.В. Диагностика аутоиммунного эндометрита у женщин с нарушением репродуктивной функции // Russian Journal of Immunology. - 2005. - V.9, Supp 2. - P.205.

8. Справочник по иммунотерапии. - СПб., 2002. - 480 с.