штамм вируса гриппа а/17/калифорния/04/71 (h3n2) для производства живой гриппозной вакцины для взрослых и детей

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А/17/Калифорния/04/71(Н3N2), ГИСК №145 (Государственный Институт Стандартизации и Контроля им. Л.А.Тарасевича), используемый для получения живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в здравоохранении для профилактики гриппа, вызванного эпидемическим штаммом вируса гриппа. Профилактику осуществляют интраназальной живой гриппозной вакциной (ЖГВ) из штамма А/17/Калифорния/04/71(H3N2).

Применяемый в настоящее время в составе тривалентной ЖГВ для взрослых и детей вакцинный штамм подтипа H3N2 А/17/Сидней/97/76(Н3N2) [Патент РФ №2159812, БИ 33, 27.11.2000] обладает необходимым составом генома 6:2, однако он утратил антигенную актуальность. Вследствие этого штамм не может создавать защиту во время эпидемии, вызванной новой антигенной разновидностью вируса гриппа A(H3N2).

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение вакцинного штамма новой антигенной разновидности на основе холодоадаптированного донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2) с использованием в качестве источника поверхностных антигенов эпидемического вируса А/Калифорния/07/04(Н3N2).

Вакцинный штамм А/17/Калифорния/04/71 (H3N2) получен методом классической генетической реассортации эпидемического вируса А/Калифорния/07/04(Н3N2) с холодоадаптированным штаммом А/Ленинград/134/17/57(Н2N2) с последующей селекцией в присутствии антисыворотки к донору аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2).

Донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2) - холодоадаптированный температурочувствительный штамм вируса гриппа, разрешенный для получения безвредных интраназальных вакцин для взрослых и детей [Александрова Г.И. Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. Л., 1986. - С.66-83]. Применяемые в настоящее время вакцинные штаммы ЖГВ получают методом реассортации современных эпидемических вирусов с холодоадаптированными (ХА) донорскими штаммами, в результате чего образуются реассортанты, имеющие смешанный геном. Гены, кодирующие гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA), наследуются от антигенно актуального эпидемического штамма, а шесть генов внутренних и неструктурных белков (РВ2, РВ1, PA, NP, М, NS) - от безвредного ХА донора аттенуации.

Анализ генома полученного вакцинного штамма, выполненный при посредстве рестриктазного анализа ДНК-копий сегментов РНК, полученных с помощью полимеразно-цепной реакции (ПЦР) [Klimov A.I. J.Virol. Method. - 1995. - №55. - Р.445-446] показал, что реассортант А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) унаследовал гены НА и NA от родительского эпидемического вируса А/Калифорния/07/04(Н3N2), а 6 генов негликозилированных белков - от ХА донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2) (формула генома 6:2). Принадлежность гемагглютинина родительскому эпидемическому вирусу А/Калифорния/07/04(Н3N2) подтверждена в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с 1% взвесью человеческих эритроцитов при использовании набора иммунных крысиных антисывороток. Штамм является температурочувствительным (разность титров при 33°С и 39°С - 6,0 IgЭИД₅₀/мл) и холодоадаптированным (разность титров при 33°С и 25°С - 3,5 IgЭИД₅₀/мл).

Таким образом, представленный вакцинный штамм А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) характеризуется сочетанием полезных признаков, необходимых вакцинному штамму, - антигенной специфичностью гемагглютинина эпидемического вируса А/Калифорния/07/04(Н3N2), структурой генома, оптимальной для реассортантных вакцинных штаммов (6:2), температурочувствительностью, холодоадаптированностью, что коррелирует с безвредностью для человека, характерной для донора аттенуации. Морфология штамма - полиморфная, типичная для вируса гриппа.

Характеристика полученного штамма.

Инфекционная активность при репродукции в развивающихся куриных эмбрионах при 33°С в течение 48 часов - 8,0 IgЭИД₅₀/ 0,2 мл.

Гемагглютинирующая активность - 1:256

Штамм проявляет генетическую стабильность биологических признаков после 5 пассажей на куриных эмбрионах (при использовании больших заражающих доз).

Паспорт на вакцинный штамм А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) прилагается в качестве примера выполнения изобретения.

Штамм депонирован в коллекции Государственного института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов под №145.

Штамм А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) ареактогенен при интраназальном введении для взрослого контингента, что проверено на волонтерах.

Пример 1. При вакцинации 48 взрослых лиц интраназально рекомбинантным вакцинным штаммом А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) с инфекционной активностью 8,0 ЭИД₅₀/0,2 мл в разведении 1:2 в объеме 0,5 мл сильных температурных реакций с повышением температуры свыше 38,5°С, средних реакций с кратковременным повышением температуры в диапазоне 37,6-38,5°С и слабых температурных реакций (до 37,5°С) не наблюдалось. Показатель реактогенности составил 0%. Катаральные явления наблюдались у 2,08% привитых. В группе из 50 человек, получивших плацебо, катаральные явления наблюдались у 3,9% (Табл.1).

Таблица 1.
Препарат	Число лиц	Температурные реакции			Катаральные явления
		37,0	37,1-37,6	>=38,6
ЖГВ	48	0	0	0	1(2,08%)
Плацебо	51	0	0	0	2(3,9%)

Таким образом, вакцинный штамм А/17/Калифорния/04/71(Н3N2) удовлетворяет требованиям, предъявляемым к вакцинным штаммам ЖГВ фармакопейной статьей ФСП 42-0417, позволяющей использовать штамм для приготовления вакцины для взрослых и детей.

Паспорт штамма

1. Название штамма - А/17/Калифорния/04/71(H3N2)

2. Серия - серия 1

3. Метод получения - реассортация; характеристика родительских вирусов:

а) эпидемический вирус - А/Калифорния/07/04(Н3N2)

б) донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57(Н2N2)

4. Количество пассажей - 7 в процессе рекомбинации

5. Характеристика штамма до лиофилизации:

а) оптимальные условия репродукции - 33°, 48 часов;

б) гемагглютинирующая активность 1:256;

в) инфекционная активность 8,0 IgЭИД ₅₀/0,2 мл;

г) чувствительность к ингибиторам: ингибиторорезистентный;

д) разность в показателях инфекционной активности при 33°С и 39°С - 6,0 IgЭИД₅₀/1 мл;

е) разность в показателях инфекционной активности при 33°С и 25°С - 3,5 IgЭИД₅₀/1 мл;

ж) структура генома реассортанта:

- гены от эпидемического вируса НА, NA

- гены от донора аттенуации - PA, PB1, РВ2, NP, M, NS

6. Характеристика штамма после лиофилизации:

а) дата лиофилизации: 16.05.2005;

б) объем материала в ампуле: 1 мл;

в) количество доз в ампуле: 2;

г) инфекционная активность - 7.5 IgЭИД₅₀/ 0,2 мл

д) гемагглютинирующая активность - 1:64

7. Рекомендуемое разведение при вакцинации 1:2

8. Антигенная специфичность:

а) гемагглютинина - идентичен вирусу А/Калифорния/07/04(Н3N2) по данным РТГА с крысиной антисывороткой.

б) нейраминидазы - идентична вирусу А/Калифорния/07/04(Н3N2)по данным ПЦР-рестриктазного анализа ДНК-копий генов.

9. Безвредность для мышей при интраназальном введении - безвреден.

10. Бактериологический контроль лиофилизированного материала: дата проведения - 23.05.2005 - стерилен.

11. Контроль на отсутствие посторонних вирусов - посторонние вирусы отсутствуют.