препарат для повышения резистентности пчел, профилактики отравлений и способ профилактики отравлений пчел ядохимикатами

Формула изобретения

1. Препарат для повышения резистентности пчел, профилактики отравлений на основе биологически активных веществ, отличающийся тем, что в качестве биологически активных веществ он содержит 17 L-аминокислот, простейшие пептиды, микро- и макроэлементы, нуклеиновые кислоты, гексуроновые кислоты и дополнительно в качестве растворителя содержит воду, при этом компоненты, входящие в состав препарата берут в следующих соотношениях, мас.%:

L-аминокислоты:
аланин	200-560
аргинин	112-320
аспарагиновая кислота	250-690
валин	40-160
гистидин	12-20
глицин	830-1220
глутаминовая кислота	250-930
изолейцин	30-110
лейцин	23-50
лизин	110-200
метионин	6-10
пролин	300-1150
серин	160-300
тирозин	10-30
треонин	14-30
триптофан	80-150
фенилаланин	35-60
нуклеиновые кислоты	12-20
гексуроновые кислоты	80-180
фосфор	16-20
азот	950-1170
вода	остальное

2. Способ профилактики отравлений пчел ядохимикатами с помощью препарата, охарактеризованного по п.1, отличающийся тем, что препарат скармливают пчелиным семьям за 5-7 дней до обработки растений ядохимикатами однократно в дозе на семью пчел 0,5-1,5 л 4,5-5,5%-ного р-ра, а в условиях теплиц еженедельно в дозе 0,1-0,5 л в виде 4,5-5,5%-ного р-ра с сахарным сиропом из кормушки.

Описание изобретения к патенту

Предлагаемое изобретение относится к области пчеловодства, в частности к получению препаратов для повышения резистентности и профилактики отравлений пчел ядохимикатами.

В последнее время в научном мире все большее внимание уделяется изучению факторов неспецифического иммунитета у пчел с целью повышения их естественной резистентности и создания искусственной невосприимчивости медоносных пчел к заражению агентами инфекционной и инвазионной природы (И.В.Будилова, 2000; Т.Ф.Домацкая, Н.Н.Аштняк, 1999; Б.В.Зюман, А.Н.Гордиенко, 1988; Н.А.Лагуткин, О.Г.Седых, 2000; С.И.Мельников, 1928).

Установлено, что устойчивость пчелиных семей к заболеваниям зависит от силы семьи, обеспеченности кормом, погодных условий и наличия взятка в природе. За минувшие десятилетия резко сократились природные кормовые угодья, повысилась загрязненность среды гербицидами, инсектицидами, пестицидами. Наиболее опасны для пчел инсектициды, которые по токсичности относятся к 1-му и 2-му классу. Второе место занимают гербициды - они отнесены к соединениям 3-го и 4-го класса.

Пестициды с пыльцой и нектаром попадают в улей, загрязняют кормовые запасы, товарный мед. От остатков яда в кормовом меде и перге гибнут пчелы и летом, и зимой. Попавшие в мед сублетальные дозы препаратов сразу не оказывают токсического действия на пчелиную семью, поскольку в летнее время пчелы питаются свежим нектаром и пыльцой. В зимних же условиях потребление такого меда резко снижает их устойчивость к неблагоприятным факторам и предрасполагает к заболеваниям. Зимовка семей на меде с сублетальными концентрациями пестицидов к моменту выставки приводит к ослаблению семей в среднем на 2-3 улочки по сравнению с контролем. Кроме того, отмечается большая пораженность (до 40-100%) подопытных пчел нозематозом, в то время как в контроле степень поражения этим заболеванием не превышает 13%. Такие семьи выращивают меньше расплода, медленнее развиваются и собирают меда на 25% меньше, чем контрольные семьи (Л.Ф.Соловьева, С.Я.Годяцкий, 1993).

Одним из основных факторов снижения жизнеспособности пчел в неблагоприятных условиях развития является недостаток в их организме биологически активных веществ, получаемых с нектаром, пыльцой и маточным молочком, что приводит к нарушению развития во всех фазах жизни пчел: сокращается плодовитость маток, работоспособность и продуктивность рабочих пчел, медленно наращивается сила в семьях. Для восстановления силы ослабленных пчелосемей при неблагоприятных условиях разведения прежде всего нужно обеспечить нормальный уровень биологически активных веществ в их организме.

Отечественными учеными и практиками предложен ряд препаратов и средств (Апивит, биоспон, ВЭСП, полизин-Б, «Пчелка», настой и отвары лука, чеснока и т.д.), способствующих повышению жизнеспособности пчелиных семей при различных болезнях (Т.Ф.Домацкая, Н.Н.Аштняк, 1999).

С целью нормализации жизнеспособности ослабленных пчелосемей в условиях производственной пасеки известен препарат биоспон с тонизирующим действием. Он включает в себя биологически активные вещества, выделенные из медоносных растений (1).

Известен также препарат для регулирования численности насекомых и повышения их резистентноети к различным экстремальным факторам - витаминно-экдистероновый стимулятор «ВЭСП», представляющий собой таблетки весом 0,1 г, состоящие из экдистерона, витамина B₁₂ и наполнителя при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Экдистерон	0,0008-0,0012
Витамина B12	0,0008-0,0012
Наполнитель	Остальное

В качестве наполнителя используется, как правило, следующая смесь: сахар, крахмал и стеариновая кислота при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Крахмал	20-40
Стеариновая кислота	0,5-1,5
Сахар	Остальное

Кроме того, в состав наполнителя могут входить вместо сахара глюкоза, фруктоза и др., а вместо крахмала - желатин и другие сорбиды. Данный стимулятор может дополнительно содержать витамины группы В, витамин С, аминокислоты, холин и пантотенат кальция. Прототип (2).

Технической задачей предлагаемого изобретения является разработка препарата, обеспечивающего повышение резистентности пчел и профилактику отравлений пчел ядохимикатами.

Поставленная задача решается за счет того, что предложенный препарат изготовлен на основе 17 L-аминокислот, простейших пептидов, микро- и макроэлементов, нуклеиновых кислот, гексуроновых кислот и применяется для повышения резистентности пчел и профилактики отравлений ядохимикатами, при этом компоненты, входящие в состав препарата берут в следующих соотношениях (мас.%):

L-аминокислоты:
аланин -	200-560,
аргинин -	112-320,
аспарагиновая кислота -	250-690,
валин -	40-160,
гистидин -	12-20,
глицин -	830-1220,
глутаминовая кислота -	250-930,
изолейцин -	30-110,
лейцин -	23-50,
лизин -	110-200,
метионин -	6-10,
пролин -	300-1150,
серии -	160-300,
тирозин -	10-30,
треонин -	14-30,
триптофан -	80-150,
фенилаланин -	35-60,
Нуклеиновые кислоты -	12-20,
Гексуроновые кислоты -	80-180,
Фосфор -	16-20,
Азот -	950-1170,
Вода -	остальное.

Препарат применяют для повышения резистентности пчел дважды в течение года - весной до периода основного медосбора трехкратно с интервалом 7 дней, и осенью - однократно в дозе на семью пчел 0,5-1,0 л 0,5-1,5% р-ра с сахарным сиропом из кормушки.

Способ профилактики отравлений пчел ядохимикатами с помощью предложенного препарата заключается в том, что препарат скармливают пчелиным семьям за 5-7 дней до обработки растений ядохимикатами однократно в дозе на семью пчел 0,5-1,5 л в виде 4,5-5,5% р-ра, также можно применять в условиях теплиц еженедельно в дозе 0,1-0,5 л в виде 4,5-5,5% р-ра с сахарным сиропом из кормушки.

Результаты испытаний препарата отражены в таблицах 1, 2, 3, 4.

Опыты по изучению токсичности для пчел показали, что препарат хорошо забирался пчелами в терапевтических дозах и не оказывал токсического эффекта. Терапевтическая широта его относительно большая (10-2400 мкг/пчела).

Табл.1. Определение параметров токсичности препарата для пчел
	Объект исследования	Дозы, мкг/пчела
		ЛД16	ЛД 50	ЛД84	ЛД100
Препарат	пчелы	2400	3200	3800	4200

Пример 1. Лабораторные испытания по влиянию препарата на устойчивость пчел к акарицидам (в летальных дозировках) показали, что ЛД₅₀ бипина для пчел, не получавших препарат (контроль), составила 4,12 мкг/пчела, а получающих в течение 7 дней пчелодар - 5,54 мкг/пчела, актеллика, соответственно 0,06 мкг/пчела и 0,1 мкг/пчела. Скармливание получавшим в течение суток препарат пчелам бипина в концентрации превышающей ЛД₁₀₀ через 2 суток после обработки пчелодаром приводит к гибели 54-85% насекомых; через 5 суток - 28-48%; при 100% гибели в контроле (пчелы, не получавшие препарат перед отравлением) в течение 48 часов. Таким образом, скармливание пчелам пчелодара в 10% концентрации с сахарным сиропом перед дачей бипина и актеллика повышает устойчивость пчел к ядам; для развития устойчивости пчел требуется определенный промежуток времени.

Пример 2. В опытах по определению оптимальной концентрации препарата в садках пчел, за 120 ч до отравления получавших 0,5%, 1%, 5%, 10% р-ры пчелодара, через 48 ч после скармливания бипина (ЛД ₁₀₀) регистрировали 99%, 72%, 23%, 42% гибель пчел, при 100% летальности в контроле. Таким образом, максимальную сохранность пчел в опыте обеспечивает скармливание 5% р-ра пчелодара за 5-7 дней до обработки токсичными веществами. Доказано повышение резистентности пчел, получавших препарат, к возбудителям нозематоза, аскосфероза и гнильцовых заболеваний пчел, что отображено в примерах 3-10.

Пример 3. Ежедневная гибель зараженных нозематозом пчел и получавших 3 суток препарат составила соответственно 1,5+0,31 и 2,07+0,22, в контроле 1,8+0,4 и 2,25+0,25 (Р=0,5); количество спор в средней кишке опытной группы 4,57+/-0,44×10 ⁶, в контроле 7,43+/-0,62×10⁶ /мм³, различия составили 39,14% (Р>0,005). В результате было установлено, что препарат в испытуемых дозах сдерживает развитие возбудителя.

Пример 4. Пчелы, предварительно получавшие в течение 7 суток корм с 0,5% раствором препарата и которым инъецировали по 3 мкл культур Вас. laterosporus 474 и Ent. faecalis 324 в концентрации 105 КОЕ/мл, погибали в количестве 0,14+0,13 особей/сутки (в течение 7 дней наблюдения) от Вас. laterosporus, гибели от Ent. faecalis не было. В контроле (пчелы, не получавшие пчелодара) погибали соответственно от этих микроорганизмов 0,57=0,25 и 0,42+0,2 особи/сутки. Полученные данные свидетельствуют, что скармливание препарата пчелодар оказывает защитное действие при заражении пчел бактериальными возбудителями, предохраняет их от гибели.

Пример 5. Отмечено повышенное содержание белка и лизоцима в гемолимфе 1-, 2-дневных пчел, получавших препарат по сравнению с контролем, которое отмечали, начиная с 7-го дня и далее на протяжении всего опыта. Наиболее сильно это выражено у пчел, которым в течение недели скармливали сахарный сироп с 5% концентрацией пчелодара.

Табл.2. Результаты биохимических исследований влияния препарата на 1-, 2-дневных пчел
	контроль	препарат 1%	препарат 5%	препарат 10%
На 7-й день:
1) белок	2,13+/-0,13	2,12+/-0,13	3,25+/-0,25	3,10+/-0,1
2) липиды	0,66+/-0,03	1,03+/-0,01	0,76+/-0,09	1,00+/-0,05
3) лизоцим	2,33+/-0,02	2,52+/-0,13	3,08+/-0,14	2,87+/-0,08
4) степень развития жирового тела по Маурицио	II-III	III	III	III
На 14-й день:
1) белок	2,67+/-0,03	3,03+/-0,28	3,53+/-0,12	-
2) липиды	0,81+/-0,14	1,11+/-0,06	0,82+7-0,08	-
3)лизоцим	2,39+/-0,01	2,74+/-0,11	3,38+/-0,02	-
4) степень развития жирового тела по Маурицио	III-IV	III-IV	IV

Пример 6. Пасечные испытания препарата показали значительно большую сохранность пчел опытных семей по сравнению с контрольными через 48 ч после отравления. В контроле отмечали резкое ослабление силы семей (с 3 до 0,7 улочки), наличие большого количества погибших пчел на земле в радиусе 2 м и на дне улья (760 особей/семья). В семьях пчел, получавших 1% препарат, было замечено не столь сильное уменьшение силы семьи (с 2 до 0,7 улочки), множество погибших пчел на земле вокруг улья и единичные на дне улья (43 особи/семья). В семьях опытных пчел, которым был скормлен 5% р-р препарата, через 48 часов после отравления отмечали незначительное уменьшение силы семей (с 3 до 2,5 улочек), сохранение летной активности, наличие погибших пчел на земле вокруг улья и отсутствие подмора на дне улья.

Пример 7. В группе здоровых семей пчел (см. табл.3 и 4) в ходе опыта у пчел, получавших препарат, сила семей увеличилась в ходе опыта на 40% больше по сравнению с контролем. Сила семей в контроле за период наблюдения возросла по сравнению с началом опыта в 1,57 раза, в опытных семьях в 2,2 раза; количество печатного расплода увеличилось на 26,5% в контроле и на 109% в опыте, степень яйцекладки маткой - на 19% в контроле и на 35,6% в опытных пчелосемьях. Опытными семьями отстроено на 30-50% больше вощины, чем контрольными за тот же период времени. Уровень белка на момент окончания опыта в семьях, которым скармливали пчелодар, был несколько выше, чем в контрольных (на 10,3%) - 3,90 г% в контроле и 4,30 г% в опыте. Отмечали более высокий уровень лизоцима в опытных семьях по сравнению с контрольными (на 15,7%) - 3,83 мкг/мл и 4,43 мкг/мл соответственно.

Пример 8. В группе больных семей пчел со слабой и средней степенью пораженности расплода (европейский гнилец, аскосфероз) в ходе опыта сила семей увеличилась у пчел, получавших пчелодар, в 1,0 раз, т.е. на 66,7% больше по сравнению с контролем (сила семей увеличилась в 0,6 раз). Зафиксировали более высокие темпы увеличения количества печатного расплода - на 23,8% в контроле и на 77,8% в опытных семьях. Более высокую степень яйцекладки маткой - количество открытого расплода увеличилось на 35,7% в контроле и на 50,6% в опыте. Отмечали значительно большую продуктивность опытных пчелосемей по сравнению с контрольными - количество запасов корма возросло в 2,2 раза в контроле и в 8 раз в опыте. Во всех опытных семьях по сравнению с контрольными отмечали более высокий уровень лизоцима (на 15,3%) - 3,73 мкг/мл и 4,30 мкг/мл соответственно. Через три недели после первого скармливания препаратов в опытных семьях перестали регистрировать клинические признаки заболеваний.

Пример 9. Установлено, что скармливание препарата в 1-5% концентрации по 0,5 л с сахарным сиропом на семью трехкратно с интервалом 7 дней при внесении заразного начала на 1 рамке с расплодом с клиническими признаками аскосфероза не приводило к развитию заболевания в этих семьях как сразу после внесения, так и в течение активного сезона. Пчелы опытных семей в течение 7 дней вычищали пораженные личинки как из ячеек, так и со дна ульев. Клинические признаки как на внесенных рамках, так и в целом на расплоде опытных семей отсутствовали. В контрольных семьях болезнь прогрессировала и отмечали клинические признаки до конца летнего сезона. Пораженные семьи не обеспечивали себя на зиму углеводным кормом и не набрали достаточной силы для зимовки. Так, сила подопытных семей составила 6-8 улочек, а контрольных - 2-3 улочки. Таким образом, скармливание препарата в 1-5% концентрации по 0,5 л с сахарным сиропом на семью трехкратно с интервалом 7 дней обеспечивало устойчивость семей пчел к повторному заражению аскосферозом на 100%.

Пример 10. Заражение подопытных семей пчел европейским гнильцом (Бац. альвей) из 15 пчелосемей в трех сериях опытов в 6 пчелиных семьях отсутствовали клинические признаки гнильца. В 9 семьях пчел отмечали клинические признаки заболевания на внесенной рамке с пораженным расплодом, а через 3 недели в трех семьях заболевание прогрессировало и потребовало применение бактопола. Таким образом, скармливание пчелодара в 1-5% концентрации по 0,5 л с сахарным сиропом на семью трехкратно с интервалом 7 дней обеспечивало устойчивость семей пчел к заражению европейским гнильцом (Бац. альвей) на 40%.

Пример 11. Пчелы, взятые из семей через 30 дней после однократного скармливания 1% пчелодара осенью, имели II-IV степень развитости жирового тела по Маурицио; в контроле (без препарата) развитие жирового тела не превышало I-II степени. В опытных семьях пробы на наличие спор ноземы апис были отрицательными, в контрольных семьях в 50% случаев имело место поражение ноземой слабой и средней степеней (от + до ++).

Данные исследований показывают, что препарат обладает следующими качествами и преимуществами:

- нетоксичен для пчел;

- обеспечивает хорошую поедаемость корма (сахарный сироп + 0,5-5,5% препарат) пчелами;

- обеспечивает более интенсивное развитие семей, увеличение их силы и продуктивности;

- обеспечивает увеличение степени развития жирового тела и лучшую сохранность пчел в период зимовки;

- стимулирует гигиеническое поведение и действие факторов неспецифической резистентности в опытных семьях по сравнению с контролем (сахарный сироп без препарата).

Скармливание препарата в 1-5% концентрации по 0,5 л с сахарным сиропом на семью трехкратно с интервалом 7 дней обеспечивало устойчивость семей пчел к заражению:

- аскосферозом на 100%;

- нозематозом на 100%;

- европейским гнильцом (Вас. alvaei) на 40%.

Проводимые химические обработки различными препаратами не приводили к ослаблению силы опытных семей, в семьях пчел, не получавших препарат, отмечали ослабление силы семей, отставание в темпах роста, проводили вынужденное подсиливание семей расплодом из других семей.

В лабораторных опытах отмечено повышенное содержание белка и лизоцима в гемолимфе 1-, 2-дневных пчел, получавших препарат по сравнению с контролем, которое регистрировали начиная с 7-го дня и далее на протяжении всего опыта. Было установлено, что препарат в испытуемых дозах сдерживает развитие возбудителя нозематоза, повышает устойчивость пчел к ядам - скармливание пчелам препарата в 4,5-5,5% концентрации с сахарным сиропом за 5-7 дней перед дачей бипина (ЛД ₁₀₀) обеспечивает 77% сохранность пчел при отравлении.

Предложенный препарат и способ профилактики отравлений пчел ядохимикатами апробирован нами с положительным результатом в 2001-2005 гг. в условиях пасеки ВИЭВ в Торбеево, пасеки агрофирмы «Нива», пасеках фермерских хозяйств на 300 пчелосемьях.

Предложенный препарат и способ профилактики отравлений пчел ядохимикатами найдет применение на производственных пасеках и пасеках теплично-садоводческих хозяйств.

Просим предложенный нами препарат назвать «Пчелодаром», согласно утвержденной документации.

Источники информации

(1) Наставление по применению препарата Биоспон для повышения резистентности пчелосемей. Утв. ГУВ Госагропрома СССР 7.04.1988 г, с.2

(2) Патент РФ А01К 49/00 RU 2034504, 1995 г.

Табл.4 Изменение уровня содержания белка, лизоцима, липидов в гемолимфе пчел опытных и контрольных подгрупп в ходе опыта
№ семьи	наименование препарата	отбор гемолимфы для биохимических исследований 7.07.05 г (на 10-й день после 1-го скармливания препаратов)			отбор гемолимфы для биохимических исследований 14.07.05 г (на 17-й день после 1-го скармливания препаратов)			отбор гемолимфы для биохимических исследований 4.08.05 г (на 14-й день после 2-го скармливания препаратов)
		белок, г %	лизоцим, мкг/мл	липиды, мг/мл	Белок, г %	лизоцим, мкг/мл	Липиды, мг/мл	белок, г %	лизоцим, мкг/мл	липиды, мг/мл
1) Подгруппа А - здоровые семьи пчел
1	контроль	3,33+/-0,12	3,70+/-0,42	1,06+/-0,14	5,00+/-0,01	3,88+/-0,08	1,29+/-0,05	3,90+/-0,09	3,83+/-0,23	1,37+/-0,02
2	препарат	3,85+/-0,35	4,13+/-0,12	0,80+7-0,04	4,18+/-0,17	4,35+/-0,09	0,96+/-0,02	4,30+/-0,30	4,43+/-0,22	1,02+/-0,01
2) Подгруппа Б - больные семьи пчел (европейский гнилец + аскосфероз), средняя степень поражения расплода
3 (гнилец)	контроль	3,52+/-0,13	3,53+/-0,12	1,08+/-0,07	5,12+/-0,12	3,44+/-0,19	1,11+/-0,05	3,65+/-0,15	3,73+/-0,08	1,02+/-0,04
4 (гнилец + аскосфероз)	препарат	3,71+/-0,11	4,34+/-0,34	1,19+/-0,04	5,00+/-0,11	4,45+/-0,20	1,15+/-0,11	4,40+/-0,20	4,30+/-0,09	1,26+/-0,11