способ получения препарата для лечения дефектов кожи

Формула изобретения

1. Способ получения препарата для лечения дефектов кожи, включающий получение плазмы крови и добавление к ней гепарина, отличающийся тем, что к обогащенной тромбоцитами плазме крови добавляют 15000-20000 ед./л гепарина, гепаринизированную плазму инкубируют в течение 18-24 ч при температуре 4-6°С, затем центрифугируют при 3500-4000 об/мин в течение 10-15 мин при температуре 4-6°С, полученный осадок суспендируют в 50-70 мл 7-7,5%-ного раствора натрия гидрокарбоната до образования гомогенной субстанции и целевой продукт замораживают при (-40)-(42)°С.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что для приготовления целевого продукта используется как обогащенная тромбоцитами плазма крови больного, так и обогащенная тромбоцитами плазма крови одногруппного донора.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области медицины и касается лечения длительно незаживающих трофических язв, пролежней и других дефектов кожи, существенно осложняющих течение ряда заболеваний в хирургической и терапевтической практике.

Известен способ получения препарата, содержащего факторы роста из тромбоцитов цельной крови пациента, наносимого в виде коллагеновой повязки на раневую поверхность [1].

Недостатком указанного способа является его нестандартность, низкая воспроизводимость и, как следствие, невозможность осуществлять эффективное лечение у 100% больных. Кроме того, у пролеченных больных отмечались частые рецидивы.

Известен способ получения препарата, состоящего из пептидов, выделенных из фибронектина в специальном матриксе из гиалуроновой кислоты с включением фактора роста тромбоцитов [2].

Недостатком указанного способа является его трудоемкость, а также наличие лишь косвенного свидетельства действия препарата на модели миграции фибробластов, что не позволяет судить о его эффективности при клиническом использовании.

Известен способ получения препарата из гепаринизированной аутоплазмы, подвергающейся последовательно замораживанию, центрифугированию и суспендированию полученного осадка в 5,0-50,0 мл 3,66% раствора трисамина и доведению концентрации как фибронектина, так и консистенции препарата до необходимых величин, выбираемых каждый раз в соответствии с характером кожного поражения у конкретного пациента [3].

Недостатком указанного способа является его нестандартность, что не позволяет отработать технологически удобный процесс приготовления препарата.

Еще одним недостатком указанного препарата является необходимость его длительного применения (до 20 дней), что обусловливает неоднократное взятие крови у больных.

Задача предлагаемого изобретения заключается в усовершенствовании способа приготовления препарата для лечения трофических язв, пролежней и других поражений кожи.

Техническим результатом использования изобретения является разработка стандартного способа получения препарата, который оказывает высокоэффективное действие при лечении больных с трофическими дефектами кожных покровов различной этиологии (трофические язвы на фоне тяжелого сахарного диабета либо варикозной болезни вен нижних конечностей, язвенно-некротический васкулит при криоглобулинемии, пролежни у больных с поражениями центральной нервной системы и др.).

Сущность предлагаемого способа заключается в том, что получают обогащенную тромбоцитами плазму крови, добавляют к ней 15000-20000 ед/л гепарина и гепаринизированную плазму инкубируют в течение 18-24 час при +4-6°С, затем проводят центрифугирование при 3500-4000 об/мин в течение 10-15 мин при температуре +4-6°С, полученный осадок суспендируют в 50-70 мл 7-7,5% раствора натрия гидрокарбоната до образования гомогенной субстанции и конечный продукт (гель) замораживают при -(40-42)°С. Перед применением препарат оттаивают, подогревают в водяной бане до 37°С в течение 15 мин.

Способ осуществляется следующим образом. Получают обогащенную тромбоцитами плазму крови, добавляют к ней 15000-20000 ед/л гепарина, затем гепаринизированную плазму инкубируют в течение 18-24 час при +4-6°С, после этого проводят центрифугирование при 3500-4000 об/мин в течение 10-15 мин при температуре +4-6°С и полученный осадок суспендируют в 50-70 мл 7-7,5% раствора натрия гидрокарбоната до образования гомогенной субстанции, после чего конечный продукт (гель) замораживают при -(40-42)°С. Для приготовления указанного препарата может использоваться как плазма, полученная от больного, которому проводится лечение, так и плазма от другого донора, имеющего ту же группу крови, что и больной, подвергающийся лечению длительно незаживающих кожных поражений различного генеза.

Пример 1. Больная К., 57 лет, страдает варикозной болезнью вен нижних конечностей в течение 15 лет. При обследовании выявлена тромбофилия, обусловленная мутацией гена метилентетрагидро-фолатредуктазы. На левой голени в области внутренней лодыжки имеется трофическая язва размером 1,5×2 см с подрытыми краями, покрытая серовато-желтым налетом, с отеком и выраженной воспалительной инфильтрацией окружающих тканей. Язва регистрируется на протяжении 8 месяцев. Проводившееся лечение не оказывало положительного эффекта. Было принято решение использовать препарат, разработанный по предлагаемому способу. Для этого больную подвергли двукратному прерывистому плазмаферезу с целью получения обогащенной тромбоцитами плазмы. К полученной плазме добавили гепарин из расчета 15000 ед/л и инкубировали ее при +4°С в течение 18 час. После инкубации гепаринизированную плазму центрифугировали при 3500 об/мин в течение 10 мин при температуре +4°С. Полученный осадок суспендировали в 50 мл 7% раствора натрия гидрокарбоната до образования гомогенной субстанции и заморозили при -40°С. В день использования препарат оттаяли и прогрели в течение 15 мин на водяной бане при +37°С. Перед нанесением препарата раневую поверхность обработали 3% раствором перекиси водорода, подсушили стерильной салфеткой и тонким слоем нанесли препарат на поврежденный участок кожи. После подсыхания на поверхности образовалась опалесцирующая пленка. Подобную обработку проводили 3 раза в день. В промежутках между обработками препарат хранили в холодильнике-термостате при +4°С. Перед каждой обработкой препарат подогревали на водяной бане, тщательно перемешивали для полного растворения хлопьев в случае их появления в процессе хранения.

На 2-й день применения препарата отмечалось полное очищение поверхности язвы, сглаживание ее краев, образование грануляций, стихание воспалительного процесса вокруг язвы. Полное заживление дефекта наступило на 5-й день. За время наблюдения (2,5 года) рецидивов не было.

Пример 2. Больной С., 43 лет. Перенес острое нарушение мозгового кровообращения с развитием тетрапареза и нижней параплегии. Через 3 недели пребывания в неподвижном состоянии в области крестца образовался пролежень диаметром 3 см и глубиной практически до кости. Рана покрыта фибриновым налетом с выраженным воспалительным валиком вокруг нее. После нескольких дней лечения общепринятыми методами положительного эффекта не отмечалось. Был приготовлен препарат по предлагаемому способу, как описано в примере 1, с использованием плазмы одногруппного донора. На 3-й день применения отмечалось стихание воспалительного процесса, очищение дна язвы, на 5-й день появились грануляции, сгладились края язвы, уменьшилась глубина кожного дефекта. Полное заживление отмечено к 10 дню. В дальнейшем общее состояние больного улучшилось, параплегия разрешилась, больной активизировался, рецидивов пролежней не отмечалось.

Пример 3. Больной П., 20 лет, страдает сахарным диабетом 1 типа с тяжелым течением. У больного лимфостаз в левой ноге с развитием слоновости и образованием трофической язвы диаметром 2,5 см на передней поверхности нижней трети левой голени. Имеется обильное серозное отделяемое. Подобные трофические язвы на левой голени регистрируются в течение 2-х лет. Язвы трудно поддаются лечению, долго заживают (3-5 месяцев) и быстро рецидивируют (через 1-2 месяца). В период пребывания в стационаре было начато лечение препаратом, полученным, как описано в примере 1. Через 2 дня значительно уменьшилась экссудация, через 5 дней отмечено появление грануляций, к 12-ому дню язва полностью зарубцевалась. В течение 1 года наблюдения рецидивов не отмечено.

Источники информации

1. Заявка РФ А 93000005, 1993 г.

2. Патент США 6194378, 2001 г.

3. Авторское свидетельство РФ 1801487, 1993 г.