способ отбора и подготовки лабораторного материала из селезеночной ткани для последующего исследования

Формула изобретения

Способ отбора и подготовки лабораторного материала из ткани внутренних органов животного для последующего исследования, включающий извлечение из животного исследуемого органа и отмывание извлеченного органа от крови перфузией физиологическим раствором и приготовление препарата по общепринятой методике, отличающийся тем, что в качестве исследуемого органа используют селезенку, при этом извлечение селезенки производят после выполнения на животном прижизненного одномоментного массивного наружного кровопускания путем рассечения магистрального сосуда, а перфузию извлеченной селезенки физиологическим раствором осуществляют через селезеночную артерию под давлением не выше 120 мм рт. ст. в сочетании с отжиманием ее в ходе перфузии в режиме щадящего и периодического бимануального сдавливания в пределах от 0 до 30 мм рт. ст.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к биологии, а именно к физиологии, и может быть использовано при отборе и подготовке лабораторного материала из селезеночной ткани для последующего исследования, например, на гемокоагулирующую и фибринолититческую активность.

Известны способы отбора и подготовки лабораторных материалов из ткани легкого, сердечной мышцы, печени, матки, лимфатических узлов путем тщательного отмывания кусочков ткани от крови физиологическим раствором [1, 2,3]. Однако в силу особенностей строения селезенки, ее паренхимы, структуры фолликулов, синусов и ретикулоэндотелия, капиллярной системы обычное отмывание кусочков ткани селезенки от крови приводит к разрушению ее структуры.

Известен способ отбора и подготовки лабораторных материалов из ткани внутреннего органа, почки, который включает в себя перфузию извлеченной почки через артерию 10 л физиологического раствора NaCl. После перфузии такого объема физиологического раствора ткань почки становится почти бесцветной [4]. Однако известный способ не применим при подготовке лабораторного материала из селезеночной ткани для последующего исследования на гемокоагулирующую и фибринолититческую активность, так как перфузия большого объема физиологического раствора через артерию селезенки приводит к разрушению структуры и вымыванию клеток фолликулов, синусов и ретикулоэндотелия. После перфузии в препаратах большей частью сохраняется лишь строма селезенки, представляющая собой волокнистую соединительную ткань.

Изобретение решает задачу создания способа отбора лабораторного материала из селезеночной ткани и подготовки его для последующего исследования, например, на гемокоагулирующую и фибринолититческую активность.

Техническим результатом является сохранение в исследуемом материале особенностей строения паренхимы селезенки, клеток фолликулов, синусов и ретикулоэндотелия.

Это достигается тем, что в известном способе отбора и подготовки лабораторных материалов из тканей внутренних органов животного для последующего исследования, включающем извлечение исследуемого органа из животного и отмывание его от крови перфузией физиологическим раствором, извлечение селезенки производят после прижизненного выполнения на животном острого одномоментного массивного наружного кровопускания путем рассечения магистрального сосуда, а перфузию извлеченной селезенки физиологическим раствором осуществляют через селезеночную артерию под давлением не выше 120 мм ртутного столба в сочетании с лабильным отжиманием ее в ходе перфузии в режиме щадящего, дозированного и периодического бимануального сдавливания в пределах от 0 до 30 мм ртутного столба.

Способ осуществляется следующим образом. Лабораторному живому животному (баран) проводят острое одномоментное массивное наружное кровопускание рассекая магистральный сосуд. Эксфузию крови проводят в течение 5 минут вплоть до выведения животного из эксперимента. Затем вскрывают брюшную полость. Проводят ревизию органов. После кровопускания селезенка значительно обескровлена. Она сокращена, бледно-синюшного цвета и плотноватая на ощупь. Захватывают на зажимах, рассекают и лигируют желудочно-селезеночную связку, мобилизуют селезенку на сосудистой ножке. Рассекают селезеночные артерию и одноименную вену. Селезенку извлекают, катетеризуют в дистальном направлении и лигируют на катетере селезеночную артерию. В катетер через одноразовую пластиковую систему для инфузии струйно вводят физиологический раствор. Емкость с физиологическим раствором (0,9% раствор NaCl) располагают выше уровня селезенки на 165 см, что обеспечивает вливание перфузата под давлением не выше 120 мм рт.ст. Для беспрепятственного оттока перфузата селезенку укладывают на наклонную поверхность. Перфузию проводят до чистого возврата, пока оттекающая по селезеночной вене жидкость не станет почти бесцветной. При этом в ходе перфузии проводят периодическое бимануальное воздействие на селезенку путем постепенного, плавного и щадящего отжимания ее между ладонями с постепенньм нарастанием давления на поверхность селезенки от 0 до 30 мм рт.ст. в течение 10-15 сек в лабильном режиме. При этом ладони располагают по длиннику селезенки на ее краях, оставляя зазор до 2 см со стороны ворот в месте расположения селезеночной артерии и одноименной вены для беспрепятственного поступления перфузата в артерию и оттоку его по селезеночной вене. После опорожнения венозного русла от перфузата отжимание прекращают и возобновляют после наполнения селезеночного русла селезенки перфузируемой жидкостью. Необходимое усилие и режим нарастания давления при щадящем отжимании селезенки определяют по манометру путем сдавливания слегка раздутой манжетки обычного тонометра для непрямого определения артериального давления по Короткову. После острого массивного кровопускания для полного отмывания селезенки от крови обычно используют около 3 л физиологического раствора. В дальнейшем экстракт ткани из отмытой от крови селезенки готовится по общепринятой методике.

На чертеже приведена гистологическая картина ткани селезенки: а - до перфузии; б - после перфузии вышеописанньм способ. Лимфатические фолликулы без отличий, красная пульпа представлена запустевшими синусоидами, выстланными эндотелием и ретикулярной стромой. В исследованных полях зрения эритроциты не просматриваются. Окраска гематоксилин-эозином (увеличение × 800).

Таким образом, заявляемый способ позволяет произвести отбор лабораторного материала из селезеночной ткани и подготовить его для последующего исследования, например, на гемокоагулирующую и фибринолитическую активность с сохранением в исследуемом материале особенностей строения паренхимы селезенки, клеток фолликулов, синусов и ретикулоэндотелия.

Источники информации

1. Скипетров В.П. Тромбиноподобные свойства тканей // Пробл. гемат. и пер. крови - 1968. - №1. - С.29-32.

2. Русейкин Н.С. Гемокоагулирующие и фибринолитические соединения легочной ткани и их роль в физиологии и патологии свертывания крови. - Автореф. дисс... канд. мед. наук. - Курск, 1974. - 22 с.

3. Русейкин Н.С., Гурьянов В.Н. Патогенез и профилактика коагулопатий у больных во время операций по поводу фиброзно-кавернозного туберкулеза легких // Проблемы туберкулеза. - 1987. - №9. - С.51-55.

4. Скипетров В.П. Роль тканевых факторов в локальном гемостазе // Пробл. гемат. и пер. крови. - 1968. - №6. - С.27-31.