способ получения средства, обладающего антиязвенной активностью

Формула изобретения

Способ получения средства, обладающего антиязвенной активностью, отличающийся тем, что экстрагирование растительного сырья проводят этанолом или водой, смешивание полученных сухих экстрактов осуществляют с измельченным до размера частиц 0,25-0,5 мм порошком кориандра, причем в качестве растительного сырья используют измельченные до размера частиц 0,5 мм плоды шиповника, боярышника, облепихи, 1,0-2,0 мм соцветия календулы, корни солодки, траву сушеницы, корневища девясила, 3,0 мм листья подорожника; экстракцию боярышника, солодки, сушеницы, облепихи, девясила проводят 40-45%-ным, первую и вторую экстракцию календулы - 80%-ным, третью и четвертую - 50%-ным, первую и вторую экстракцию шиповника - 96%-ным этиловым спиртом, экстракцию подорожника, третью и четвертую экстракцию шиповника - водой в соотношении сырье:экстрагент для календулы, шиповника, облепихи, сушеницы - 1:10, для солодки - 1:14-15, для боярышника, подорожника, девясила - 1:20, экстракцию подорожника, солодки, сушеницы, девясила, облепихи ведут при температуре 95°С, боярышника при 35-40°С, календулы и 1 и 2 экстракции шиповника при 18-20°С, третью и четвертую экстракцию шиповника при 30-40°С, проводят в течение 1 ч 2 экстракции для солодки и сушеницы, для облепихи - 3 экстракции по 1 ч, для календулы и шиповника - по 2 ч 4 экстракции, для боярышника - по 6 ч 2 экстракции, для подорожника - по 1,5 ч 2 экстракции, для девясила по 2 ч 2 экстракции, отфильтрованные извлечения упаривают, концентрируют, высушивают в вакуум-сушильном шкафу и смешение осуществляют при следующем соотношении ингредиентов, мас.ч:

экстракт соцветий календулы	5
экстракт плодов боярышника	1,5
экстракт плодов шиповника	1,0
экстракт листьев подорожника	1,0
экстракт корней солодки	1,0
экстракт травы сушеницы	0,5
экстракт корневищ девясила	0,5
экстракт плодов облепихи	0,5
порошок плодов кориандра	0,5

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к фармации и касается способа получения комплексного средства из растительного сбора, обладающего антиязвенной активностью.

Рынок лекарственных препаратов с доказанной противоязвенной активностью на сегодняшний день превышает 500 наименований, при этом проблема эффективной терапии далека от своего разрешения. Несмотря на использование достаточно активных профилактических мер и постоянно совершенствующихся методов лечения, даже при комплексном применении высокоэффективных противоязвенных средств возникновение рецидивов наблюдается в 30-82% случаев, осложненные формы язвенной болезни встречаются в 26-42% случаев, а у 15-25% больных существует проблема резистентности гастродуоденальных язв к самому современному терапевтическому воздействию [Щербатых А.В., Кулинский В.И., Большешапов А.А., Соколова С.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная система при язвенной болезни желудка, двенадцатиперстной кишки и постгастрорезекционных синдромах // Сибирский медицинский журнал. - 2005. - №3. - С.9-13].

В последние годы разрабатываются комплексные лекарственные средства с разноплановым действием для лечения хронических гастродуоденальных язв. Проблему системного воздействия на организм больного в виде монотерапии или как одного из составляющих комплекса лечебных мероприятий может решить фитотерапия [Крылова С.Г. Растения Сибири и Дальнего Востока в терапии язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (экспериментальное исследование): Автореф. дис.... докт. биол. наук. - Томск. - 2005. - 50 с.].

Наиболее близким к заявляемому является плантаглюцид, применяемый для лечения больных гипоацидными гастритами, а также язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, в случаях с нормальной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки, в случаях с нормальной или пониженной кислотностью, и представляющее собой извлечение из водного экстракта листьев подорожника [Машковский М.Д. Лекарственные средства. В 2 т. - 14-е изд. М.: 2000. T.1. - 539 с. Т.2. - 608 с.]. Однако плантаглюцид не влияет на протеолитическую активность желудочного сока, противопоказан при гиперацидных гастритах и язвенной болезни желудка с повышенной кислотностью [С.Я.Соколов, И.П.Замотаев. Справочник по лекарственным растениям (Фитотерапия). - М.: Медицина. - 1990. - 428 с.].

Целью данного изобретения является повышение выхода биологически активных веществ, которое обеспечивается при отдельной экстракции компонентов исходного растительного сбора, содержащего соцветия календулы лекарственной 25 ч; листья подорожника большого 10 ч; траву сушеницы топяной 5 ч; корни солодки голой 10 ч; корневища девясила высокого 5 ч; плоды боярышника 15 ч; шиповника 10 ч; облепихи 5 ч; кориандра 5 ч.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, заключается в создании комбинированного лекарственного средства, обладающего противоязвенным, антиоксидантным действием.

Для получения заявляемого антиязвенного средства (условное название «Вентрофит») в виде порошка готовят составы, содержащие следующие компоненты:

экстракт сухой из соцветий календулы лекарственной 25 ч;

экстракт сухой из плодов боярышника 15 ч;

экстракт сухой из плодов шиповника 10 ч;

экстракт сухой из листьев подорожника большого 10 ч;

экстракт сухой из корней солодки голой 10 ч;

экстракт сухой из травы сушеницы топяной 5 ч;

экстракт сухой из корневищ девясила высокого 5 ч;

экстракт сухой из плодов облепихи 5 ч;

мелкоизмельченный порошок из плодов кориандра, 5 ч.

Для приготовления 1000 г предлагаемого средства готовят составы, содержащие экстракт сухой соцветий календулы лекарственной 255 г; экстракт сухой листьев подорожника большого 102 г; экстракт сухой травы сушеницы топяной 51 г; экстракт сухой корней солодки голой 102 г; экстракт сухой корневищ девясила высокого 51 г; экстракт сухой плодов боярышника 153 г; экстракт сухой шиповника 102 г; экстракт сухой облепихи 51 г; порошок плодов кориандра 51 г. Плоды кориандра измельчают до размера частиц 0,25-0,5 мм и используют в виде порошка, так как при экстракции и температурной сушке основные действующие вещества - эфирные масла - могут улетучиться. Взвешенные количества сухих экстрактов смешивают с порошком кориандра и тщательно перемешивают. Потери экстрактов при измельчении составляют 2%.

Приведенные в тексте данные экспериментальных испытаний позволяют сделать заключение о соответствии предлагаемого средства критерию «существенные отличия», т.к. подобного состава композиции не было обнаружено в доступных источниках, а предложенные в формуле изобретения состав и соотношение ингредиентов средства позволяют получать продукт постоянного состава, обладающий антиязвенной активностью при остром и хроническом повреждении желудка подопытных животных. Технический результат, получаемый при осуществлении изобретения, выражается в расширении ассортимента высокоэффективных и безвредных лекарственных средств для профилактики и лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Для доказательства существенности предложенных признаков способа, а именно отдельной экстракции компонентов сбора были проведены серии экспериментов, данные которых представлены ниже.

При получении средства из отдельных экстрактов компонентов сборов повышается выход действующих веществ по сравнению с водным извлечением исходного сбора (табл.1).

Таблица 1. Содержание биологически активных веществ в «Вентрофите» и отваре антиязвенного сбора
Наименование	Содержание БАВ
	в «Вентрофите», %	в отваре сбора (1:10), %
Флавоноиды, в пересчете на рутин;	2,26±0,01	0,53±0,01
Антоцианы, в пересчете на цианидин-3,5-диглюкозид	0,18±0,01	0,16±0,01
Аскорбиновая кислота	1,20±0,04	0,19±0,01
Водорастворимые полисахариды	15,04±0,40	7,50±0,23
Дубильные вещества, в пересчете на таннин	1,30±0,06	1,20±0,02
Органические кислоты, в пересчете на яблочную кислоту	5,53±0,23	3,11±0,05
Тритерпеновые сапонины, в пересчете на урсоловую кислоту	0,078±0,001	0,081±0,005
Каротиноиды, в пересчете на -каротин, мг %	6,16±0,11	-
Примечание: прочерк означает, что вещества не обнаружены

При использовании отвара антиязвенного сбора в водное извлечение не экстрагируются липофильные вещества - каротиноиды. Для получения экстрактов из вышеперечисленных видов сырья разной морфологической группы (трава, листья, соцветия, корни, плоды) необходимы разные параметры экстракции, позволяющие извлечь из каждого вида сырья основные биологически активные вещества (БАВ), ответственные за антиязвенное действие.

Параметры экстракции отдельного вида сырья указаны в табл.2.

Для получения сухих экстрактов растительный материал измельчали до размера частиц, указанных конкретно для каждого вида в табл.2. Взвешивали 1,0 кг измельченного сырья, загружали в экстрактор, заливали экстрагентом в объеме, соответствующем соотношению сырье: экстрагент для каждого вида сырья. Объем экстрагента для первой экстракции составлял: для боярышника - 20,0 л 40% этилового спирта; для солодки - 15,0 л 40% этилового спирта; для сушеницы - 10.0 л 40%этилового спирта; для подорожника - 20.0 л очищенной воды; для девясила - 20,0 л 40% этилового спирта; для облепихи - 10.0 л 40% этилового спирта; для календулы - 10,0 л 80% этилового спирта; для шиповника - 10 л 96% этилового спирта (табл.3).

Экстракцию проводили при температуре, подобранной для каждого вида, при постоянном помешивании (табл.2). Извлечение фильтруют в сборник, к шроту добавляют экстрагент в объеме, равном слитому. Объем первого и последующих сливов для каждого вида сырья приведен в табл.3.

Экстракцию повторяли в условиях, указанных для каждого вида в табл.2. Извлечения фильтровали, объединяли, концентрировали до 1/10 первоначального объема, высушивали в вакуум-сушильном шкафу. Температура (в °С) и время (в часах) сушки в вакуум-сушильном шкафу для отдельных экстрактов составляют: для боярышника - 50°С и 4 ч; для солодки - 40-45°С и 6 ч; для сушеницы - 50°С и 6 ч; для подорожника - 50°С и 4 ч; для девясила - 50°С и 4 ч; для облепихи - 40°С и 4 ч; для календулы - 45-50°С и 4-5 ч; для шиповника - 40-50°С и 5 ч. Полученный сухой экстракт измельчали. Данные о выходе экстракта в % от массы исходного сырья, влажности, содержании действующих веществ в полученных экстрактах приведены в табл.4.

Для опытов использовано сырье, качество которого соответствует действующим статьям ГФ XI изд. [Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина. - 1987. - 337 с.; Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина. - 1990. - 400 с.].

Количественное определение действующих веществ в экстрактах и отваре антиязвенного сбора проведено по описанным в литературе методам: флавоноидов, дубильных веществ, антоцианов, органических кислот, водорастворимых полисахаридов по методикам ГФ XI изд.; аскорбиновой кислоты - фотоколориметрическим методом [Е.А.Приступа, Д.М.Попов. Совершенствование технологии приготовления и контроля качества витаминных чаев. / Актуальные проблемы фармацевтической технологии: Научн. труды ВНИИФ. - Т.32. - М., 1997. - С.151-159.]; каротиноидов в пересчете на -каротин - спектрофотометрическим методом [О.В.Евдокимова, И.А.Самылина, О.В.Нестерова. Определение содержания суммы фосфолипидов и каротиноидов в плодах некоторых видов боярышника. // Фармация. - 1992. - №6. - С.70-72.], тритерпеновых сапонинов - спектрофотометрическим методом [И.А.Муравьев, В.В.Шатило, В.Ф.Семенченко. Спектрофотометрический метод количественного определения урсоловой кислоты. // Химия природных соединений. - 1972. №6. - С.738-740], глицирризиновой кислоты - хроматоспектрофотометрическим методом [М.Р.Якубова, Г.Л.Генкина, Т.Т.Шакирова. УФ-спектрофотометрическое определение глицирризиновой кислоты в Glycyrrhiza glabra. // Химия природных соединений. - 1977. №6. - С.802-806.].

Методика определения содержания каротиноидов в экстракте. Около 0,5 г экстракта (точная навеска) помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл с притертой пробкой. Приливали 25 мл н-гексана, экстрагировали при постоянном помешивании в течение 2 ч. Экстракт отфильтровывали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл. Экстракцию повторяют еще раз при тех же условиях. Второе извлечение фильтруют в ту же колбу. Объем объединенного фильтрата доводят до метки н-гексаном. 1 мл Экстракта помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят до метки н-гексаном.

Определяют оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 450 нм. В качестве раствора сравнения использовали н-гексан. Параллельно определяли оптическую плотность раствора стандартного образца бихромата калия. Содержание суммы каротиноидов в пересчете на -каротин в мг % вычисляли по формуле:

,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

0,00208 - количество -каротина, мг в растворе, соответствующем по окраске раствору стандартного образца бихромата калия;

V _о - объем экстракта, мл;

V₁ - объем анализируемого раствора, мл;

D _o - оптическая плотность раствора стандартного образца бихромата калия, г;

m - навеска экстракта, г;

V ₂ - объем пробы экстракта, взятый для анализа, мл;

W - потеря в массе экстракта при высушивании, %.

Приготовление раствора стандартного образца бихромата калия. 0,36 г (точная навеска) Бихромата калия растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 л, доводят до метки водой. Раствор по окраске соответствует раствору, содержащему 0,00208 мг -каротина в 1 мл.

Методика определения тритерпеновых сапонинов. 0,50 г (точная навеска) Экстракта помещали в коническую колбу, приливали 20 мл дистиллированной воды, колбу соединяли с обратным холодильником, нагревали на водяной бане до полного растворения экстракта. После охлаждения извлечение обрабатывают хлороформом в делительной воронке 5 раз по 25 мл. Хлороформные извлечения объединяют, растворитель отгоняют на роторном испарителе, сухой остаток растворяют в 10 мл концентрированной серной кислоты в мерной пробирке вместимостью 10 мл. Затем извлечение термостатируют при 70°С в течение 1 часа. После охлаждения раствор доводили до метки серной кислотой (раствор А). Для измерения оптической плотности 1 мл раствора А помещали в мерную пробирку вместимостью 10 мл, доводили до метки серной кислотой (раствор Б). Раствор Б спектрофотометрировали при 310 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм. Раствор сравнения - концентрированная серная кислота. Содержание тритерпеновых соединений в противоязвенном сборе в пересчете на урсоловую кислоту вычисляли по формуле:

,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

V_о - объем экстрагента, мл;

V ₁ - объем аналитического раствора, мл;

Е ^1% _{1 cm} - удельный показатель поглощения урсоловой кислоты при 310 нм в концентрированной серной кислоте, который равен 331,6;

m - масса экстракта, г;

V ₂ - объем пробы, взятый для анализа, мл;

W - потеря в массе экстракта при высушивании, %.

Методика определения глицирризиновой кислоты. 0,5 г Сухого экстракта солодки растворяют в 25 мл 50% этанола. Хроматографическую пластинку размером 18×18 см с закрепленным силикагелем делили на 3 параллельные полосы. Первая полоса служила фоном (холостая проба), на вторую и третью наносили по 0,12 мл раствора экстракта солодкив виде сплошной линии. Пластинку с нанесенными веществами сушили на воздухе и хроматографировали в системе растворителей хлороформ-метанол-вода (80:35:7). После хроматографирования пластинку сушили на воздухе при комнатной температуре, затем в термостате при 90°С в течение 10 мин. Пятно на хроматограмме с R_f 0,33, соответствующее глицирризиновой кислоте, отмечали, количественно переносили в колбу со шлифом и элюировали 10 мл 50% этанола при непрерывном встряхивании в течение 1 ч. Точно также элюировали зону с чистого силикагеля с первой полосы. Далее растворы центрифугировали в течение 20 мин при 3000 об/мин, определяли оптическую плотность элюата при 252 нм на спектрофотометре. Содержание глицирризиновой кислоты (X) в % в экстракте солодки вычисляли по формуле:

,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора;

V_о - объем экстрагента, мл;

V ₁ - объем аналитического раствора, мл;

Е ^1% _{1 cm} - удельный показатель поглощения глицирризиновой кислоты при 252 нм, который равен 130;

m - масса экстракта, г;

V₂ - объем пробы, взятый для анализа, мл;

W - потеря в массе экстракта при высушивании, %.

Пример 1. По описанной выше схеме и с соблюдением условий экстрагирования, приведенных в табл.1, получают сухие экстракты. Взвешивают сухой экстракт соцветий календулы лекарственной с влажностью 2,7% и 6,80%-ным содержанием флавоноидов - 255 г; сухой экстракт листьев подорожника большого с влажностью 4,2% и 18,0%-ным содержанием полисахаридов - 102 г; сухой экстракт травы сушеницы топяной с влажностью 2,10% и 3,64%-ным содержанием флавоноидов - 51 г; сухой экстракт корней солодки голой с влажностью 2,45% и 6,99%-ным содержанием глицирризиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт корневищ девясила высокого с влажностью 4,33% и 52,30%-ным содержанием полисахаридов - 51 г; сухой экстракт плодов боярышника с влажностью 3,20% и 0,58%-ным содержанием флавоноидов - 153 г; сухой экстракт шиповника с влажностью 3,68% и 5,8%-ным содержанием аскорбиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт облепихи с влажностью 3,97% и 2,20 мг %-ным содержанием каротиноидов - 51 г; порошок плодов кориандра 51 г, смешивают, просеивают через сито №0,1 и взвешивают. Получают 1,0 кг средства. Влажность полученного суммарного экстракта - 3,92%. Содержание биологически активных веществ в полученном «Вентрофите» составляет: флавоноиды в пересчете на рутин - 2.26%; дубильные вещества в пересчете на таннин - 1,30%; аскорбиновая кислота - 1.24%; антоцианы в пересчете на цианидин-3-глюкозид - 0,18%; органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту - 5,88%; тритерпеновые сапонины в пересчете на урсоловую кислоту - 0,072%; каротиноиды в пересчете на -каротин - 6,16 мг %; полисахариды - 15,042%; глицирризиновая кислота - 2,12%.

Для оценки фармакотерапевтической эффективности использовали модель хронической ацетатной язвы по Okabe, модели «острой» экспериментальной язвы, вызываемой атофаном и резерпином. Противоязвенное действие «Вентрофита» оценивали путем подсчета на слизистой оболочке желудков белых крыс - самцов линии Wistar с массой 160-180 г числа деструкции, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений слизистой оболочки желудка высчитывали «язвенный индекс» Паулса (ИП) по формуле: среднее число деструкции на одно животное в группе, умноженное на процент поражения животных в группе, деленное на 100. Противоязвенную активность (ПА) «Вентрофита» определяли как отношение индекса Паулса в контрольной группе к индексу Паулса в опытной группе. Исследуемое средство считали активным, если ПА составляла 2 и более единицы. Для оценки кислото- и ферментообразующей функции желудка определяли кислотность желудочного сока методом Михаэлиса [Лабораторные методы исследования под ред. В.В.Меньшикова. - М., 1987. - 365 с.], содержание пепсина в желудочном соке по методу В.Н.Туголукова [Туголуков В.Н. Современные методы функциональной диагностики состояния слизистой оболочки желудка и их клиническое значение. - М., 1965. - 212 с.]. Содержание кислых гастромукополисахаридов в желудочном соке определяли по методу J. Piper [Piper J. The method of defininition of gastromucopolyglucosaes in the blood // J. Pharmacol. and Exp.Therap.- 1974. - Vol.52. - N. 3. - P.42-45].

Для оценки состояния процессов перекисного окисления липидов и активности антиоксидантной защиты в гомогенатах желудка и сыворотке крови определяли содержание малонового диальдегида (МДА) и диеновых конъюгатов (ДК) [Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - С.66-68] и уровень активности каталазы [Королюк М.А. и соавт. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. - 1988. - №6. - С.16-19]. Для морфологического исследования кусочки желудка с язвенным поражением фиксировали в формалине и заливали в парафин. Депарафинированные срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином по Ван-Гизону - на соединительную ткань [Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - М., 1969. - 422 с.]. Результаты, полученные в ходе экспериментов, статистически обработаны с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Достоверными считались различия при достигнутом уровне значимости (Р 0,05) [Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М., 2001. - 256 с.].

Изучение фармакотерапевтической эффективности «Вентрофита» при атофановой язве желудка у белых крыс (введение атофана в дозе 250 мг/кг однократно, внутрибрюшинно) показало, что испытуемое средство обладает выраженной противоязвенной активностью. В частности, при атофановой язве желудка превентивное (5 дней) интрагастральное введение «Вентрофита» в дозе 50 мг/кг значительно снижало выраженность повреждений слизистой желудка белых крыс, о чем свидетельствовало уменьшение индекса Паулса для точечных кровоизлияний в 2,3 раза, для эрозий - в 2,2 раза, а развитие полосовидных язв не отмечалось (табл.5).

Таблица 5 Влияние "Вентрофита» на выраженность деструктивных повреждений желудка при "атофановой" язве у белых крыс
Показатели	Группы животных
	Контроль (атофан)	Опытная 1 (атофан + "Вентрофит")	Опытная 2 (атофан + плантаглюцид)
Индекс Паулса для точечных кровоизлияний	8,1	3,5	4,2
Противоязвенная активность для точечных кровоизлияний	-	2,31	1,92
Индекс Паулса для эрозий	10,5	4,7	5,6
Противоязвенная активность для эрозий	-	2,23	1,88
Индекс Паулса для полосовидных язв	0,25	0	0,14
Противоязвенная активность для полосовидных язв	-	0	1,78
Темп желудочной секреции, мл/100 г	0,30±0,03	0,57±0,04 *	0,48±0,01*
Пепсин, ед.	422,1±37,3	538,3±23,0	445,8±22,1
Общая кислотность желудочного сока, ед. Михаэлиса	28,42±1,22	51,30±1,55*	42,01±1,21*
Свободная соляная кислота, ед. Михаэлиса	14,23±0,12	25,90±0,56 *	25,45±0,54*
Мукополисахариды, ед. ОП	0,54±0,05	0,74±0,02 *	0,60±0,02
Примечание*: - здесь и далее разница достоверна по сравнению с контролем при Р 0,05

Показано, что «Вентрофит» поддерживает функциональную состоятельность слизистой оболочки желудка белых крыс, повышая в особенности ее кислотообразующую функцию. Повышенная функциональная активность слизистой оболочки желудка на фоне введения указанного средства обусловлена менее выраженной деструкцией слизистой. В частности, у «Вентрофита» установлена высокая противоязвенная активность, особенно в отношении полосовидных язв. Установлено, что испытуемое средство обладает выраженной антиоксидантной активностью, на что указывало достоверное снижение в сыворотке крови животных опытной группы концентрации ТБК-активных продуктов (ТБКАП), повышение активности супероксиддисмутазы и каталазы, а также повышение концентрации восстановленного глутатиона (табл.6).

Таблица 6 Влияние «Вентрофита» на содержание продуктов ПОЛ и активность антиокислительной системы при "атофановой" язве у белых крыс
Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная (атофан)	Опытная 1 (атофан + «Вентрофит»)	Опытная 2 (атофан + плантаглюцид)
ТБКАП, мкмоль/мл	2,77±0,12	6,23±0,14	4,08±0,11 *	4,14±0,20*
СОД, мкмоль/мл	25,2±2,01	13,22±0,22	20,0±0,51*	17,6±1,60
Каталаза, мКат/л	10,10±0,11	6,55±0,42	9,19±0,65 *	8,33±0,15*
Восстановленный глутатион, мкмоль/мл	400,3±16,2	318,0±17,0	410,0±6,00*	391,4±32,91

При этом эффективность «Вентрофита» превосходила таковую у препарата сравнения - плантаглюцида. Показано, что противоязвенная активность «Вентрофита» обусловлена наличием выраженных антиоксидантных свойств, на что указывает уменьшение под его влиянием концентрации ТБКАП, повышение активности каталазы эритроцитов, а также повышение активности СОД и содержания восстановленного глутатиона в сыворотке крови животных опытной группы (табл.6).

Пример 2. По описанной выше схеме и с соблюдением условий экстрагирования, приведенных в табл.2, получают сухие экстракты. Взвешивают сухой экстракт соцветий календулы лекарственной с влажностью 2,91% и 6,20%-ным содержанием флавоноидов - 255 г; сухой экстракт листьев подорожника большого с влажностью 4,07% и 18,8%-ным содержанием полисахаридов - 102 г; сухой экстракт травы сушеницы топяной с влажностью 2,37% и 3,94%-ным содержанием флавоноидов - 51 г; сухой экстракт корней солодки голой с влажностью 2,62% и 7,25%-ным содержанием глицирризиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт корневищ девясила высокого с влажностью 4,51% и 49,64%-ным содержанием полисахаридов - 51 г; сухой экстракт плодов боярышника с влажностью 3,42% и 0,56%-ным содержанием флавоноидов - 153 г; сухой экстракт шиповника с влажностью 3,88% и 6,2%-ным содержанием аскорбиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт облепихи с влажностью 4,02% и 2,17 мг %-ным содержанием каротиноидов - 51 г; порошок плодов кориандра 51 г, смешивают, просеивают через сито №0,1 и взвешивают. Получают 1,0 кг средства. Влажность полученного «Вентрофита» - 3,45%. Содержание флавоноидов - 2,98%; каротиноидов - 6,57 мг %; дубильные вещества в пересчете на таннин - 1,33%; аскорбиновая кислота - 1,28%; антоцианы в пересчете на цианидин-3-глюкозид - 0,15%; органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту - 5,30%; тритерпеновые сапонины в пересчете на урсоловую кислоту - 0,068%; полисахариды - 16,05%; глицирризиновая кислота - 2,20%.

Оценивали фармакотерапевтическую эффективность «Вентрофита» на течение язвенного повреждения желудка у крыс по Okabe, вызванного аппликацией на серозную оболочку желудка 0,5 мл ледяной уксусной кислоты в течение 1 мин. Испытуемого фитосредство вводили внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки на протяжении всего эксперимента (21 сутки). В качестве препарата сравнения использовали плантаглюцид в дозе 300 мг/кг по аналогичной схеме. Контрольной группе животных вводили воду, очищенную в эквиобъемных количествах.

Таблица 7 Влияние «Вентрофита» на заживление хронической ацетатной язвы желудка у белых крыс
Группы животных	Площадь язвенных дефектов, мм2
	7 сутки	14 сутки	21 сутки
Контрольная	71,80±5,25	35,49±2,16	40,33±3,16
Опытная 1 («Вентрофит»)	33,15±2,1 *	18,17±1,10*	15,42±1,13*
Опытная 2 (плантаглюцид)	48,00±5,13*	26,17±2,17 *	20,16±1,17*

Как следует из данных, приведенных в табл.7, уже в ранние сроки (7 сутки после индуцирования ацетатной язвы) «Вентрофит» в дозе 50 мг/кг достоверно уменьшал площадь язвенных дефектов (в 2,1 раза по сравнению в группе нелеченных крыс). Аналогичный эффект наблюдался при использовании указанного растительного средства на 14 сутки развития язвы. Плантаглюцид проявлял менее выраженную эффективность во все сроки наблюдения.

Морфологическая картина желудка животных, которым вводили «Вентрофит», на 7 сутки отличалась от таковой контрольных животных и получавших препарат сравнения: в слизистой оболочке отмечалась более высокая митотическая активность эпителия, а процессы образования грануляционной ткани протекали активнее. У крыс, получавших «Вентрофит», явления отека и гиперемии в стенке желудка были менее выраженными, чем у контрольных животных.

На 14 сутки после введения уксусной кислоты в группе крыс, получавших «Вентрофит», отмечалась лучшая сохранность покровного эпителия и более высокое содержание слизи в цитоплазме этих клеток, происходило активное созревание грануляционной ткани, заполняющей язвенный дефект, наблюдалась лучшая сохранность эпителия фундальных желез.

На 21 сутки эксперимента степень заживления язвы в опытных группах была значительно выше, чем в контроле, а гемодинамические нарушения в стенке желудка выражены в меньшей степени. Исследование морфологической картины слизистой оболочки желудков крыс показало, что при введении «Вентрофита» в указанной дозе под слоем растущего эпителия быстрее формировалась соединительная ткань, чем у крыс контрольной группы, и у крыс, получавших плантаглюцид.

Пример 3. По описанной выше схеме и с соблюдением условий экстрагирования, приведенных в табл.2, получают сухие экстракты. Взвешивают сухой экстракт соцветий календулы лекарственной с влажностью 3,14% и 6,44%-ным содержанием флавоноидов - 255 г; сухой экстракт листьев подорожника большого с влажностью 4,35% и 18,2%-ным содержанием полисахаридов - 102 г; сухой экстракт травы сушеницы топяной с влажностью 2,56% и 3,82%-ным содержанием флавоноидов - 51 г; сухой экстракт корней солодки голой с влажностью 2,55% и 7,18%-ным содержанием глицирризиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт корневищ девясила высокого с влажностью 4,38% и 54,61%-ным содержанием полисахаридов - 51 г; сухой экстракт плодов боярышника с влажностью 3,70% и 0,61%-ным содержанием флавоноидов - 153 г; сухой экстракт шиповника с влажностью 3,75% и 6,0%-ным содержанием аскорбиновой кислоты - 102 г; сухой экстракт облепихи с влажностью 3,73% и 2,45 мг %-ным содержанием каротиноидов - 51 г; порошок плодов кориандра 51 г, смешивают, просеивают через сито №0,1 и взвешивают. Получают 1,0 кг средства. Влажность полученного суммарного экстракта - 3,87%. Содержание флавоноидов - 2,09%, каротиноидов - 5,98 мг %; дубильные вещества в пересчете на таннин - 1,25%; аскорбиновая кислота - 1,04%; антоцианы в пересчете на цианидин-3-глюкозид - 0,18%; органические кислоты в пересчете на яблочную кислоту - 5,42%; тритерпеновые сапонины в пересчете на урсоловую кислоту - 0,075%; полисахариды - 16,40%; глицирризиновая кислота - 2,32%.

При определении острой токсичности «Вентрофита» по Керберу [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - 678 с.] установлено, что DL₅₀ фитоэкстракта при внутрибрюшинном введении составляет 560,7÷59,1 мг/кг, а при внутрижелудочном введении белым крысам при максимально возможном разведении в воде очищенной не вызывает гибели лабораторных животных и относится к классу малотоксичных веществ по классификации К.К.Сидорова [Требования по доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. - М., 1984. - 49 с.].

Антиульцерогенное действие «Вентрофита» исследовали на модели резерпинового повреждения слизистой оболочки желудка белых крыс. Резерпин вводили в дозе 10 мг/кг внутрибрюшинно, однократно. «Вентрофит» вводили в дозе 50 мг/кг за 1 час до введения повреждающего агента. В качестве препарата сравнения использовали плантаглюцид в дозе 300 мг/кг. Животным контрольной группы вводили воду очищенную в соответствующем объеме по аналогичной схеме. На фоне введения растительного средства «Вентрофит» при инъекции резерпина наблюдается выраженное гастрозащитное влияние данного вещества (табл.8).

Как следует из данных табл.8, профилактическое введение крысам указанного средства приводило к уменьшению выраженности резерпинового повреждения слизистой: индекс Паулса для точечных кровоизлияний и полосовидных язв в опытной группе достоверно снижался в 1,5 и 2 раза соответственно по сравнению с контрольной группой.

При превентивном введении «Вентрофита» животным с экспериментальным резерпиновым повреждением слизистой оболочки желудка также отмечалось достоверное снижение в гомогенате желудка ТБК-активных продуктов (МДА) и повышение активности фермента антиксидантной защиты организма - каталазы. На этом фоне возрастал темп желудочной секреции на 38%, содержание свободной соляной кислоты - на 57%, мукополисахаридов - на 25% по сравнению с данными у крыс контрольной группы. Препарат сравнения несколько уступал по своей эффективности испытуемому средству. В частности, при введении «Вентрофита» животным наблюдались менее выраженные признаки структурной дезорганизации слизистой оболочки желудка.

Таким образом, комплексное растительное средство «Вентрофит» способствует увеличению толерантности слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки к агрессивным факторам ульцерогенеза. Фармакологическая коррекция «Вентрофитом» (стимуляция слизеобразования, сохранение морфофункциональной активности желез и клеток, отвечающих за выработку слизи) позволяет значительно сократить вероятность развития язвы или/и способствовать ее быстрой репарации. Также показана возможность влияния «Вентрофита» на один из компонентов «защитного барьера», которым является регенерация эпителиальных клеток желудка.

Наряду с этим «Вентрофит» оказывает позитивное воздействие на процессы нарушения кровотока и микроциркуляции в слизистой оболочке желудка.

Таким образом, «Вентрофит» обладает выраженной антиязвенной активностью при остром и хроническом повреждении желудка подопытных крыс, снижает площадь язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, обладает антиоксидантной активностью и способствует регенерации эпителиальных клеток желудка.

Таблица 2 Условия экстракции отдельных компонентов антиязвенного сбора для получения сухих экстрактов из них.
Наименование сырья	Степень измельчения сырья, мм	Тип экстрагента. концентрация	Соотношение сырье: экстрагент	Температура экстракции, °С	Кратность и время экстракции
1. Соцветия календулы	1-2 мм	Этанол - 80% (I-II экстракции), 50% (III-IV экстракции)	1:10	18-20 (I-IV экстракции)	По 2 ч четыре экстракции
2. Плоды шиповника	0.5 мм	Этанол 96% (I-II экстракции), вода (III-IV)	1:10	18-20 (I-II экстракции), 30-40 (III-IV)	По 2 ч четыре экстракции
3. Плоды боярышника	0,5 мм	Этанол I пример - 38% II пример - 40% III пример - 45%	1:20-1:21	35-40	По 6 ч две экстракции
4. Листья подорожника	3,0 мм	Вода очищенная	1:18-1:20	95±2	По 1,5 ч две экстракции
5. Корни солодки	1,0-2,0 мм	Этанол I пример - 40% II пример - 42% III пример - 45%	1:14-1:15	95±2	По 1 ч две экстракции
6. Трава сушеницы	1,0-2,0 мм	Этанол I пример - 40% II пример - 43% III пример - 45%	1:10-1:12	95±2	По 1 ч две экстракции
7. Плоды облепихи	0,5 мм	Этанол I пример - 38% II пример - 40% III пример - 45%	1:10-1:12	95±2	По 1 ч три экстракции
8. Корневища девясила	2,0 мм	Этанол I пример - 35% II пример - 40% III пример - 45%	1:20-1:22	95±2	По 2 ч две экстракции

Таблица 3 Технологические данные экстракции сырья
Наименование сырья	Масса сырья, кг	Объем экстрагента, для I экстракции	Объем I слива л	Объем II слива, л	Объем III Слива, л	Объем IV слива, л
1. Соцветия календулы
Пример 1.	1.0 кг	10,0	7,18	7,06	7,00	7,10
Пример 2.	1.0 кг	10,0	7,60	7,50	7,20	7,35
Пример 3.	1,0 кг	10,0	7.25	7,10	7,05	7,20
2. Плоды шиповника
Пример 1.	1,0 кг	10,0	8,00	8.60	8,25	8,20
Пример 2.	1,0 кг	10,0	8,40	8,20	8,10	8,10
Пример 3.	1,0 кг	10,0	8,30	8.18	8,30	8,10
3. Плоды боярышника
Пример 1.	1,0 кг	20,0	17,87	18,02	-	-
Пример 2.	1,0 кг	21,0	18,93	19,01	-	-
Пример 3.	1,0 кг	20,0	17,90	18,07	-	-
4. Лист подорожника
Пример 1.	1,0 кг	20,0	16,60	16,8	-	-
Пример 2.	1,0 кг	18,0	14,52	15,4	-	-
Пример 3.	1,0 кг	22,0	18,51	19.12	-	-
5. Корни солодки
Пример 1.	1,0 кг	15,0	13,90	13,20	-	-
Пример 2.	1,0 кг	15,0	13,85	13,10	-	-
Пример 3.	1,0 кг	15,0	13,40	12,95	-	-
6. Трава сушеницы
Пример 1.	1,0 кг	10,0	7,20	6,65	6,30	-
Пример 2.	1,0 кг	10,0	7,68	6,80	6,42	-
Пример 3.	1,0 кг	10,0	7,55	6,57	6,30	-
7. Плоды облепихи
Пример 1.	1,0 кг	10,0	8,15	7,70	7,10	-
Пример 2.	1,0 кг	11,0	9,80	9,28	8,90	-
Пример 3.	1,0 кг	12,0	10,75	10,05	9,85	-
8. Корни девясила
Пример 1.	1,0 кг	20,0	17,00	16,0	-	-
Пример 2.	1,0 кг	20,0	16,85	15,35	-	-
Пример 3.	1,0 кг	22.0	18,74	17,88	-	-
Примечание: прочерк означает отсутствие экстракции и слива

Таблица 4. Влажность, содержание действующих веществ в сухих экстрактах
Наименование экстракта	Выход экстракта, в % от массы сырья		Влага, %	Содержание действующих веществ
1. Экстракт календулы сухой	1-й пример	27,0	2,70	Флавоноиды - 6,80%
	2-й пример	28,5	2,91	Флавоноиды - 6,20%
	3-й пример	30,0	3,14	Флавоноиды - 6,44%
2. Экстракт шиповника сухой	1-й пример	27,0	3,68	Аскорбиновая кислота - 5,8%
	2-й пример	29,0	3,88	Аскорбиновая кислота - 6,2%
	3-й пример	30,0	3,75	Аскорбиновая кислота - 6,0%
3. Экстракт боярышника сухой	1-й пример	40,2	3,20	Флавоноиды - 0,58%
	2-й пример	39,8	3,42	Флавоноиды - 0,56%
	3-й пример	40,4	3,70	Флавоноиды -0,61%
4. Экстракт подорожника сухой	1-й пример	35,0	4,20	Полисахариды - 18,0%
	2-й пример	34,5	4,07	Полисахариды - 18,8%
	3-й пример	36,5	4,35	Полисахариды - 18,2%
5. Экстракт сухой солодки	1-й пример	23,0	2,45	Глицирризиновая к-та - 6,99%
	2-й пример	21,2	2,62	Глицирризиновая к-та - 7,25%
	3-й пример	22,5	2,55	Глицирризиновая к-та - 7,18%
6. Экстракт сушеницы сухой	1-й пример	18,7	2,10	Флавоноиды - 3,64%
	2-й пример	18.8	2.37	Флавоноиды - 3,94%
	3-й пример	18.0	2,56	Флавоноиды - 3,82%
7. Экстракт облепихи сухой	1-й пример	39.7	3.97	Каротиноиды - 2,20 мг %
	2-й пример	41,5	4.02	Каротиноиды - 2,17 мг %
	3-й пример	40.2	3,73	Каротиноиды - 2,45 мг %
8. Экстракт девясила сухой	1-й пример	55.4	4,33	Полисахариды - 52,30%
	2-й пример	52,3	4,51	Полисахариды - 49,64%
	3-й пример	59,8	4,38	Полисахариды - 54,61%

Таблица 8 Влияние «Вентрофита» на функциональное состояние желудка и показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты организма у белых крыс при резерпиновом повреждении слизистой оболочки желудка
Показатели	Группы животных
	Интактная	Контрольная (резерпин)	Опытная 1 (резерпин + Вентрофит)	Опытная 2 (резерпин + плантаглюцид)
Свободная HCl, ед. Михаэлиса	40,55±5,20	15,40±0,80	24,33±0,20*	23,00±1,15 *
Общая кислотность желудочного сока, ед. Михаэлиса	144,40±1,30	49,35±2,50	68,92±1,24 *	56,00±3,00*
Темп желудоч. секреции, мл/100 г	0,50±0,06	0,31±0,02	0,50±0,03*	0,45±0,01*
Пепсин, ед.	39,91±3,24	9,54±0,60	24,43±3,91 *	25,99±0,44*
Мукополисахариды, ед. ОП	0,97±0,05	0,65±0,01	0,81±0,01*	0,77±0,02 *
Индекс Паулса (точеч.кровоизл.эрозий полос.язв)	-	13,1	9,0	11,2
	-	10,1	9,3	10,0
	-	4,5	2,2	3,1
Каталаза в гомогенате желудка, IU/г ткани	36,6±1,2	18,14±1,3	43,12±0,54*	31,00±2,01 *
МДА в гомогенате желудка, мМ/г ткани	0,05±0,001	0,14±0,001	0,07±0,002 *	0,09±0,002*