способ коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией индапамида и резвератрола при l-name-индуцированном дефиците оксида азота
Классы МПК: | A61K31/4045 индолалкиламины; их амиды, например серотонин, мелатонин A61K31/05 фенолы A61K9/12 аэрозоли; пены |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Кочкаров Владимир Исхакович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Гладченко Михаил Петрович (RU), Артюшкова Елена Борисовна (RU), Новиков Олег Олегович (RU), Васильев Георгий Владимирович (RU), Афанасьев Юрий Иванович (RU), Жилякова Елена Теодоровна (RU), Прохода Евгений Федорович (RU), Пашин Евгений Николаевич (RU), Татаренкова Ирина Александровна (RU), Новикова Виктория Александровна (RU), Носов Александр Михайлович (RU), Корокин Михаил Викторович (RU), Понарьин Алексей Николаевич (RU), Смирнова Оксана Юрьевна (RU), Станкович Милена (RU) |
Патентообладатель(и): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Кочкаров Владимир Исхакович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Артюшкова Елена Борисовна (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2005-12-28 публикация патента:
10.07.2007 |
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого моделируют эндотелиальную дисфункцию ежедневным, в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) крысам в дозе 25 мг/кг. На фоне моделирования дисфункции осуществляют ее коррекцию одновременным введением индапамида внутрижелудочно в дозе 2 мг/кг и резвератрола внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает эффективную коррекцию эндотелиальной дисфункции, обусловленной ингибированием NO синтазы, за счет сочетанного введения индапамида и резвератрола. 2 табл.
(56) (продолжение):
CLASS="b560m"новых фармакологических веществ. - М., 2000, с.105. CAIMI G. et al. "Chronic renal oxidative stress, endothelial dysfunction and wine".. Clin Nephrol. 2004 Nov; 62(5): 331-5., реферат, найдено 01.03.2006 в Интернет: <URLhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=puzmed&dopt=Abstract&list_uids=15571176&qery_hl=14&itool=pubmed_docsum.
Формула изобретения
Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование индапамида, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным в течение 7 сут внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам в дозе 25 мг/кг и на фоне этого вводят индапамин внутрижелудочно в дозе 2 мг/кг и резвератрол внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг однократно в сутки.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью индапамида, относящегося к тиазидоподобным диуретикам с умеренно выраженным продолжительным действием, производным бензамидов, описанный В.С.Зодионченко, Т.В.Адашевой, А.П.Сандомирской в статье "Дисфункция эндотелия и артериальная гипертензия: терапевтические возможности", Русский медицинский журнал, том 10, 2002, с.11-16, который заключается в пероральном приеме препаратов этой группы у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.
Основным недостатком способа является опосредованный механизм действия индапамида при эндотелиальной дисфункции, связанный с его антиоксидантными свойствами и, как следствие, повышением биодоступности оксида азота (NO) вследствие уменьшения его разрушения, а также повышением синтеза простагландина Е2 и простациклина I2, в то время как одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин-NO, приводящее к нарушению базального освобождения оксида азота (NO), которое не корригируется при применении только одного индапамида. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью индапамида неудовлетворительны.
Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование индапамида, относящегося к тиазидоподобным диуретикам с умеренно выраженным продолжительным действием, производным бензамидов и активатора NO-синтазы резвератрола.
Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится ее коррекция внутрижелудочным введением индапамида в дозе 2 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением активатора NO-синтазы резвератрола в дозе 2 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как резвератрол активирует фермент NO-синтазу, которая приводит к увеличению образования NO в сосудистом эндотелии.
СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелийзависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелийнезависимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
Пример конкретного выполнения.
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7 суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и индапамида (2 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 191,4±10,0, ДАД - 140,4±2,4 мм рт.ст.), в экспериментах, где еще дополнительно вводился резвератрол (2 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия: САД - 166,5±7,5, ДАД - 128,5±7,5 мм рт.ст. (таблица 1.).
Таблица 1. Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции индапамидом с использованием резвератрола | ||||
Группы животных | Функциональные пробы | САД, мм рт.ст. | ДАД, мм рт.ст. | ЧСС, уд. в мин. |
Интактные | Исходные | 137,7±3,7 | 101,9±4,3 | 420,0±9,0 |
ЭЗВ с АХ | 84,3±4,5 | 38,7±2,8 | 416,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 83,0±3,7 | 42,1±4,4 | 415,0±10,0 | |
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) | Исходные | 190,3±6,7* | 145,0±3,9* | 428,0±11 |
ЭЗВ с АХ | 110,6±5,2* | 82,8±6,6* | 426,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 88,7±4,7 | 50,8±4,2 | 426,0±13,0 | |
L-NAME(25 мг/кг) + Индапамид (2 мг/кг) | Исходные | 191,4±10,0 | 140,4±2,4 | 405,0±10,0 |
ЭЗВ с АХ | 94,9±5,4* | 60,6±4,5* | 380,0±7,7 | |
ЭНЗВ с НП | 85,2±3,3 | 43,8±4,9 | 420,0±11,0 | |
L-NAME(25 мг/кг) + Индапамид (2 мг/кг) + резвератрол (2 мг/кг) | Исходные | 166,5±7,5** | 128,5±7,5** | 380,0±7,7 |
ЭЗВ с АХ | 90,9±4,0** | 50,0±3,0** | 365,0±6,5 | |
ЭНЗВ с НП | 85,0±2,9 | 49,9±3,5 | 398,0±8,7 | |
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME + индапамид |
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только индапамид, это отношение соответствовало значению 3,3±0,4, а в группе с дополнительным введением к индапамиду активатора NO-синтазы резвератрола - 2,2±0,1 (таблица 2).
Таблица 2 Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME индапамидом и индапамидом в сочетании с резвератролом. | |||||
Группы животных | Функциональные пробы | Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) | Время сосудистой реакции (сек.) | Площадь сосудистой реакции (усл. ед) | Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП |
L-NAME | АХ | 77,7±7,1 | 34,2±4,5 | 1442,7±94,1 | 3,3±0,4 |
+ индапамид | НП | 100,2±7,0 | 75,7±3,4 | 4360,0±316,5 | |
L-NAME + индапамид + | АХ | 74,4±6,2 | 37,3±3,5 | 1781,1±137,4 | 2,2±0,1* |
L-аргинин | НП | 114,6±4,0 | 77,8±6,2 | 3961,4±380,0 | |
* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME + индапамид |
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции индапамида при сочетанном его применении с резвератролом.
Класс A61K31/4045 индолалкиламины; их амиды, например серотонин, мелатонин