способ кормления кошек

Формула изобретения

Способ кормления кошек, включающий дополнительное введение в основной рацион селенопирана в количестве от 133 до 1200 мкг на килограмм сухого вещества основного рациона.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к кормлению домашних животных, а именно кошек.

Из уровня техники известен способ кормления кошек, включающий введение в основной рацион минеральной и витаминной добавок (И.В.Петрухин, Н.И.Петрухин. Кормление домашних и декоративных животных. Справочная книга. М., 1992, с.143-147).

Недостаток этого способа заключается в том, что он не обеспечивает достаточного количества селена в рационе.

Известен также способ кормления кошек, включающий введение в основной рацион белково-витаминной минеральной добавки, содержащей селен (см. патент RU 2070397 С1, 1996).

В соответствии с назначением изобретения в качестве ближайшего аналога может быть указан способ кормления комнатных животных (собак, кошек и т.п.), описанный в патенте RU 2163078 C1, 20.02.2001, обеспечивающий основной рацион питания.

Недостаток известного способа кормления кошек заключается в том, что использование даже полнорационных кормовых смесей в качестве основного рациона не обеспечивает высокой функциональной активности иммунной и антиоксидантно-антирадикальной систем организма кошек.

Дело в том, что, согласно уровню техники, активность глутатионпероксидаз (ГПО) в крови и тканях является надежным биохимическим тестом на функциональное состояние антиоксидантной системы и содержание селена в рационе животных, так как ГПО являются главным депо селена (по результатам исследований различных специалистов - от 30 до 60%), содержащегося в организме. Каждая из четырех известных типов глутатионпероксидаз содержит на молекулу по четыре остатка Se-цистеина и различаются они по внутриклеточной, органной и видовой специфичности. Все четыре фермента экспрессируются различными генами и все иммунологически различны. Три из них - внутриклеточные (цитоплазматические, мембраносвязанные), и одна - внеклеточная (плазматическая). Единственная внеклеточная ГПО состоит из четырех субъединиц с ММ 24 кДа и отличается функционально, иммунологически и структурно от остальных глутатионпероксидаз. Основные ткани, имеющие внеклеточную ГПО, - почки, плацента, бронхи, легкие. Эти органы находятся под наибольшим влиянием окислительного стресса и нуждаются в дополнительной защите от пероксидов и кислородных радикалов.

ГПО - мощные антиоксидантные селенсодержащие ферменты, участвующие, кроме того, и в других функциях: регулирование биосинтеза простагландинов, простациклинов, лейкотриенов и тромбоксанов. В реакциях нейтрализации глутатионпероксидазой одной молекулы перекисей окисляется две молекулы глутатиона.

Главное назначение ГПО - защита молекул и клеточных структур, в том числе и биомембран, от окислительной атаки. ГПО являются типичными адаптивными ферментами. Их активность может резко возрастать в условиях активизации окислительных стрессовых реакций, что необходимо для ликвидации очагов интенсивной липопероксидации в клетке. Принимая самое непосредственное участие в долговременной регуляции уровня перекисного окисления липидов, ГПО представляет собой важнейший компонент антиоксидантно-антирадикальной системы защиты организма. Однако, если животное находится на достаточном или повышенном уровне селенового питания, то активность ГПО выходит на плато и дополнительное введение в рацион животного селена не вызывает повышения активности ГПО. Проведенные же заявителем исследования показали, что даже при достаточном селеновом питании организм кошек не в состоянии полностью застраховать себя от стрессовых ситуаций самой разной этиологии. А любой стресс сопровождается резким выбросом свободных радикалов и развитием метаболического окислительного стресса, с которым далеко не всегда способны справиться совместными действиями ферментативное и неферментативное звенья антиоксидантной системы защиты организма.

Таким образом, достижение уровнем активности ГПО насыщения является необходимым, но недостаточным параметром, характеризующим как степень функциональной активности всех звеньев антиоксидантно-антирадикальной системы защиты организма кошек, так и необходимое содержание селена в рационе кошек.

Настоящее изобретение направлено на решение технической задачи по обеспечению эффективности воздействия на интенсивность и направленность метаболических потоков путем поддержания оптимального уровня свободнорадикальных процессов и сбалансированности функционирования иммунной, монооксигеназной, антиоксидантной и тиол-дисульфидной систем организма кошек. Достигаемый при этом технический результат заключается в обеспечении аккумуляции в организме кошек селена на уровне, достаточном для эффективного контроля активности свободнорадикальных процессов, иными словами, для эффективного подавления развития метаболических окислительных процессов, сопровождающих воздействие неблагоприятных факторов любой этиологии на организм кошек.

Поставленная задача решена тем, что в способе кормления кошек, включающем основное полнорационное питание, согласно изобретению в основной рацион дополнительно вводят селенопиран в количестве от 133 до 1200 мкг на килограмм сухого вещества основного рациона.

Преимущество предложенного способа кормления кошек перед прототипом заключается в том, что при его использовании обеспечивается более высокая «буферная емкость» антиоксидантной системы организма кошек, при этом достигаемый технический результат базируется на не известном из уровня техники влиянии количества аккумулированного в организме кошек селена на поддержание на высоком уровне свободнорадикальных процессов и сбалансированности функционирования иммунной, монооксигеназной, антиоксидантной и тиол-дисульфидной систем ее организма.

Иными словами, простое увеличение содержания селена в основном рационе кошек (по сравнению с уровнем, определенным исходя из активности ГПО) является необходимым, но недостаточным признаком, обеспечивающим достижение технического результата, поскольку, как показали исследования, только органическое селенсодержащее соединение - селенопиран, позволяет обеспечить требуемое количество аккумулированного в организме кошки селена.

Таким образом, предлагаемый способ соответствует условию патентоспособности - изобретательский уровень.

Были испытаны различные селенсодержащие средства для обогащения рационов селеном, повышения функциональной активности иммунной системы, стрессустойчивости и неспецифической резистентности кошек:

1. Селенопиран (производства ООО «МЕДБИОФАРМ», г.Обнинск, Россия, коммерческое название средства СЕЛЕКСЕН).

2. Селенизированные дрожжи (органические соединения селена, производства фирмы ALLTECH, USA, коммерческое название средства SEL-PLEX (СЕЛ-ПЛЕКС).

3. Селенит натрия (минеральная соль селена Na₂SeO₃ , НПО «ЛЮМИНОФОР», г.Ставрополь, Россия).

Селенопиран - 9-фенил-симметричный-октагидроселеноксантен - жирорастворимое, устойчивое при хранении вещество, эмпирическая формула C ₁₉H₂₂Se. Из уровня техники известно использование селенопирана в качестве пищевой добавки к основному рациону в способах выращивания поросят (патенты RU-C1 - № 2157690, 2000, RU-C1 - № 2045200, 1995), а также цыплят (патент RU-С1 - № 2004158, 1993). Селенопиран - антиоксидант широкого спектра действия, низкотоксическое органическое соединение, содержащее селен в доступной, метаболизируемой форме (см. Галочкин В.А. Новые горизонты повышения продуктивности и резистентности животных. Боровск, 2000, с.90).

Селенит натрия - вещество наиболее часто используемое как источник селена в рационах животных вследствие его невысокой стоимости. Недостатком селенита натрия является его очень высокая токсичность. Величина различия дозы физиологической потребности в селене и токсичность препарата очень невелики. Селенизированные дрожжи - препарат, в котором, по данным производителя, селен содержится, в основном, в виде селенометионина. Селенометионин обладает не меньшей токсичностью, чем селенит натрия, а сами дрожжи аллергенными свойствами.

Исследования проводились на беспородных кошках 6-8-месячного возраста, из которых были сформированы четыре группы кошек по пять голов в каждой:

- 1-я группа получала основной рацион;

- 2-я группа - основной рацион плюс селенопиран;

- 3-я группа - основной рацион плюс селенизированные дрожжи;

- 4-я группа - основной рацион плюс селенит натрия.

Все четыре группы животных находились на стандартной полнорационной кормосмеси (Whiskas pouch Kitten Chicken производства ООО «МАРС», Ступино, Россия). Содержание животных свободногрупповое в специализированных помещениях. К основному рациону три опытные группы получали указанные селенсодержащие препараты из расчета содержания в них равного количества селена (эквивалентное 100 мкг селена/кг сухого вещества корма, или около 9.9 мкг селена/голову/сутки, или около 2.46 мкг селена/кг живой массы/сутки), но не ниже 10% от общего содержания селена в рационе.

В течение эксперимента продолжительностью 108 суток за животными вели постоянные клиническое наблюдения, проводили их регулярные (еженедельные) взвешивания. До начала эксперимента, через 1 месяц, 2 и 3 месяца после начала, осуществляли взятие проб крови для проведения биохимических и гематологических анализов. За две недели до завершения эксперимента был проведен балансовый опыт с целью изучения переваримости и усвояемости основных питательных веществ рациона и селена.

Результаты исследований приведены в таблицах 1-6.

Концентрация селена в крови подопытных кошек перед началом исследований (Таблица 1) во всех четырех группах колебалась от 56 до 76 мкг на литр крови, что было оценено как недостаточная. Через месяц после начала скармливания испытуемых препаратов концентрация селена в крови животных всех групп выросла. По трем опытным группам рост составил от 92 до 127%. В контрольной группе по всем животным наблюдался столь же закономерный рост, который составил за месяц 70%. За последующие два месяца опытного периода эта тенденция сохранилась с некоторыми непринципиальными отличиями. Через 3 месяца после начала эксперимента концентрации селена в цельной крови была выше на 189, 302, 234 и 236% по сравнению с фоном, по 1-ой, 2-ой, 3-ей и 4-ой группам соответственно. К концу эксперимента концентрация селена в крови опытных групп составила: в группе с селенопираном 225, с селенизированными дрожжами 217 и с селенитом натрия 255 мкг/л.

В данном эксперименте была исследована активность ведущего фермента антиоксидантной системы защиты организма - каталазы [в микромолях восстановленной перекиси водорода за 1 минуту инкубации на 1 грамм гемоглобина] и основного фермента, характеризующего состояние неспецифической резистентности организма - лизоцима (в микрограммах кристаллического фермента за 1 минуту инкубации на 1 мл крови).

За первый месяц исследований активность каталазы во всех группах с разной интенсивностью несколько выросла (увеличение в 1-ой, 2-ой, и 3-ей группах составило в среднем около 43%, а в 4-ой группе - 23%). В конце исследований активность этого антиокислительного фермента достаточно резко снизилась и по отношению к величинам первого взятия крови и, особенно, ко второму взятию, но во всех опытных группах, а, особенно, во второй и третьей каталитическая активность каталазы была существенно выше, чем в контрольной группе и группе с селенитом натрия. Это свидетельствует о том, что в этих двух группах активнее вовлекались в борьбу с окислительным стрессом и неферментативные, и ферментативные механизмы, что наглядно проявилось в наиболее адекватном ответе на стресс животных, получавших селенопиран и селенизированные дрожжи (Таблица 5). Величина и динамика адаптивных реакций была более эффективной у животных из группы с добавками селенопирана.

В конце исследований животные были посажены в балансовые клетки, а следовательно, претерпели типично стрессовую ситуацию (иммобилизационный стресс), сопровождающуюся, как это общеизвестно, ростом пероксидации липидов и концентрации свободных радикалов. В такой метаболической ситуации необходимо повышенное функциональное состояние всех составных компонентов антиоксидантно-антирадикальной системы организма.

Измерения концентрации тироксина показали, что она не претерпела каких-либо выраженных закономерных изменений и колебалась в пределах 30-50 нмоль/литр крови. Иными словами, содержание селена было достаточным для поддержания надлежащей величины активности йодотирониндейодиназ (это также селенсодержащие ферменты) и обеспечения нормального уровня трансформации тироксина в трийодтиронин.

На протяжении 108 дней исследований лизоцимная активность [мкг кристаллического фермента за 1 минуту инкубации на 1 мл крови] стабильно улавливалась во всех четырех подопытных группах животных. Индивидуальные колебания были во все периоды опыта у различных животных весьма велики, что наглядно отражается в высоких величинах среднеквадратической ошибки. Через месяц после начала исследований активность лизоцима в группе № 2 приблизительно в полтора раза превышала таковую в остальных группах. Однако нет веских оснований относить это на счет неизвестных, специфических свойств селенопирана, его способность повышать лизоцимную активность. Такой разброс величин по животным характеризует индивидуальную вариабельность этого показателя. В целом за весь эксперимент активность лизоцима возросла практически в полтора раза, безотносительно межгрупповых различий. Это явление носило закономерный характер и может достаточно однозначно трактоваться как повышение общей неспецифической резистентности организма всех подопытных животных.

За две недели до завершения исследований на всех животных был проведен балансовый опыт с целью изучения переваримости и усвояемости основных питательных веществ и селена. На момент размещения животных в индивидуальные балансовые клетки их живая масса была - 3005, 3340, 3405, 3072 соответственно в 1-ой, 2-ой, 3-ей и 4-ой группах (Таблица 5). То есть, наибольший прирост живой массы за предшествующие 3 месяца дала группа с дрожжами, незначительно (математически недостоверно) уступила ей селенопирановая группа, столь же несущественно группа с селенитом натрия была лучше контрольной, но обе эти группы были существенно и достоверно хуже групп с добавками дрожжей и селенопирана.

За 8 суток балансового опыта контрольная группа дала отвес живой массы 62.0 грамма, группа с селенитом натрия убавила в весе на 19.6 грамма. За этот же отрезок времени лучший прирост живой массы дала группа с добавками селенопирана - 22.4 грамма, несколько хуже был прирост у группы 3 с добавками дрожжей - 20.0 граммов. Эти изменения прироста живой массы явно были следствием стрессового состояния у всех животных. Посадку в индивидуальные клетки, ограничение подвижности можно квалифицировать как иммобилизационный стресс. Иммобилизация была главным, но не единственным стресс-фактором, сюда же наслаивались резкая смена обстановки, прекращение всех контактов после группового свободного содержания. Лучше всех состояние стресса преодолела селенопирановая группа, затем, уступая ей, последовательно шли группы с дрожжами, селенитом натрия и контрольная группа.

После завершения балансового опыта животные из индивидуальных клеток были вновь переведены на свободное содержание и объединены все бывшие четыре подопытные группы в одну. Взвешивание через неделю после окончания балансового опыта и исследований (все группы уже в течение недели получали только основной рацион) показало, что перевод животных из клеток и объединение в одну большую группу после содержания в индивидуальных клетках вновь оказало сильное стрессовое воздействие. По нашему мнению, сработало два основных стресс-фактора, а именно: повторное изменение обстановки; выяснение ранговых взаимоотношений в условиях новой, более крупной группы животных. Эти два стресс-фактора на организм кошек оказали не менее сильное воздействие, чем первый (иммобилизационный) стресс при посадке животных в индивидуальные балансовые клетки. Как видно из представленного цифрового материала, животные всех без исключений групп за эту неделю дали отвесы. Наибольший отвес был в контрольной группе, а наименьший - в селенопирановой. Таким образом, лучшими антистрессовыми свойствами обладает селенопиран. В качестве особо примечательного факта следует отметить, что эта выявленная ранее закономерность подтвердилась и через неделю после прекращения скармливания препарата.

За весь период опыта наибольший прирост живой массы был у группы № 3, затем шли, соответственно, вторая, четвертая и контрольная группы. Однако незначительно больший прирост живой массы в третьей группе по сравнению со второй связан с тем, что в случае скармливания дрожжей в рацион вносится некоторое неидентифицированное количество витаминов, минеральных и других биологически активных веществ из культуральной среды, что нарушает их баланс при добавлении к тщательно сбалансированной кормосмеси.

Результаты анализа баланса селена (Таблица 6) показали, что в органах и тканях животных контрольной группы за учетный период в среднем на 1 голову откладывалось 1.29 мкг селена, в группе с селенитом натрия - 0.48, в группе с селенизированными дрожжами - 0.38, а в группе с добавкой селенопирана усвояемость селена была наивысшей - 2.04 мкг. То есть из испытывавшихся двух органических и одной минеральной форм селена селенопиран был наиболее эффективным источником этого элемента, в органах и тканях животных при добавке селенопирана откладывалось селена существенно и достоверно больше, чем в контрольной группе и в группах с дрожжами и селенитом натрия. Эти данные свидетельствуют о том, что селенопиран может рассматриваться в организме и как прекрасный источник доступного селена, и как метаболически активное депо селена с самостоятельно проявляемыми им специфическими биологическими функциями. Иными словами, только увеличение содержания селена в основном рационе, сопровождающееся наибольшей аккумуляцией его в организме кошек, обеспечивает благоприятное преодоление ими стрессовых ситуаций.

Выбор верхнего и нижнего пределов содержания селенопирана в основном рационе кошек (от 133 до 1200 мкг на килограмм сухого вещества основного рациона) был определен на основании дополнительных исследований на кошках, которые также проводились в Центре по питанию домашних животных (ВНИИФБиП с.-х. животных г.Боровск). Продолжительность исследований - 3 месяца. Под опытом находились 4 группы взрослых беспородных животных по 8 голов в каждой. Живая масса кошек - 3500 г. Группы сформированы по принципу аналогов и содержались при стандартных условиях кормления и содержания:

- 1 группа - контрольная. Типовой рацион для данного вида, породы и возраста (Canned Kitekat Rabbit).

- 2 группа - опытная. Типовой рацион плюс 133 мкг селенопирана, что эквивалентно 33 мкг селена на 1 кг сухого вещества корма, или около 3.3 мкг селена на голову в сутки, или около 0.82 мкг на 1 кг живой массы в сутки.

- 3 группа - опытная. Типовой рацион плюс 400 мкг селенопирана, что эквивалентно 100 мкг селена/кг сухого вещества корма, или около 9.9 мкг селена/голову/сутки, или около 2.46 мкг селена/кг живой массы/сутки.

- 4 группа - опытная. Типовой рацион плюс 1200 мкг селенопирана, что эквивалентно 300 мкг селена на 1 кг сухого вещества корма, или около 29.7 мкг/голову/сутки, или около 7.43 мкг селена/кг/сутки.

Количество селена в кормах и добавках определено по сертификату фирмы-производителя и уточнено по данным самостоятельного лабораторного анализа. Все добавки селенопирана скармливали однократно в сутки индивидуально каждому животному в виде масляного раствора. Животные контрольной группы получали плацебо (0.5 мл растительного масла без селенопирана).

В процессе проведения данного опыта на животных фиксировалось влияние введения различных доз селенопирана в полнорационные комбикорма для кошек на следующие показатели:

- учет поедаемости кормов (групповой учет поедаемости кормов велся на протяжении всего эксперимента, в конце эксперимента на животных был проведен балансовый опыт продолжительностью две недели, во время которого все зоотехнические показатели определялись индивидуально на каждом животном);

- учет переваримости и усвояемости питательных веществ корма и селена;

- динамика живой массы животных (еженедельные индивидуальные взвешивания);

- состояние кожного и шерстного покровов;

- все возможные визуальные признаки поведения (угнетенность, агрессивность, доброжелательность, контактабельность), состояния здоровья (общие клинические признаки, количество заболевших, диагноз, продолжительность и тяжесть перенесенных заболеваний, курс и стоимость лечения традиционными методами терапии).

В ходе исследований осуществлено 3-кратное взятие крови (в начале эксперимента, в середине - через 1,5 месяца после начала и в конце эксперимента). В крови определялись следующие показатели:

- активность селенсодержащей глутатионпероксидазы (ЕС 1.11.1.9);

- активность селеннесодержащей глутатионтрансферазы (ЕС 2.5.1.18);

- гемоглобин;

- малоновый диальдегид;

- восстановленный глутатион внутриклеточный (низкомолекулярные сульфгидрильные группы);

- восстановленный глутатион внеклеточный;

- окисленный глутатион внеклеточный;

- по двум последним показателям было рассчитано тиолдисульфидное соотношение.

Элементный и спектральный анализ селенопирана, определение концентрации селена в корме, крови, кале и моче проделано в НПО Медбиофарм и во ВНИИФБи П с.-х. животных.

Произведенные в конце исследования результаты анализа избранных для изучения биохимических показателей суммированы в таблице 7, в которой используются следующие обозначения показателей и их размерность:

ГПО-1 - глутатионпероксидаза селенсодержащая, мкм НАДФ окисленного/мин/г гемоглобина, субстрат - перекись водорода;

ГПО-2 - глутатионпероксидаза селеннесодержащая (глутатионтрансфераза), мкм НАДФ окисленного/мин/г гемоглобина, субстрат - гидроперекись терт-бутила;

МДА - малоновый диальдегид, мкм/мл плазмы крови;

Гемоглобин - грамм/литр крови;

SH - низкомолекулярные сульфгидрильные группы (глутатион восстановленный + цистеин), мкм/мл;

SS - низкомолекулярные дисульфидные группы (глутатион окисленный + цистин), мкм/мл;

ТДС - тиол-дисульфидное соотношение (SH/SS).

Как явствует из цифрового материала, представленного в таблице 7, за три месяца эксперимента на четырех группах подопытных кошек, которые получали трехкратно отличающиеся количества селена в составе селенопирана (3, 10 и 30 мкг/голову/сутки), никаких существенных и достоверных изменений активности ГПО-1 и ГПО-2 выявлено не было. Иными словами, фоновое содержание селена в испытывавшемся типовом рационе и, следовательно, стартовая концентрация селена в организме животных были достаточно высоки. В такой ситуации активность фермента, как уже отмечалось выше, достигла своего максимума, и дополнительное введение селена не влечет ее повышения. Иными словами, можно утверждать, что концентрация селена в цельной крови кошек, достигшая 200 мкг/литр, выводит активность глутатионпироксидаз на плато.

Концентрация малонового диальдегида в крови является простым и надежным интегративным критерием соотношения антиоксидантно-прооксидантных процессов в любой клетке организма. Рост его содержания характеризует неспособность защитных систем организма успешно справляться с процессами липопероксидации и окислением кислорода по одноэлектронному пути, в процессе которого и образуется основная масса сверхреакционноспособных свободных радикалов - недоокисленных кислородных продуктов.

Как видим из таблицы 7, концентрация малонового диальдегида прогрессивно и последовательно снижалась в процессе исследований, подтверждая полную дееспособность антиоксидантных систем организма подопытных кошек и подчеркивая преимущества групп кошек с включением возрастающих количеств селенопирана. Это подтверждается закономерным и последовательным снижением концентрации малонового диальдегида в группах животных с возрастающими количествами селенопирана. Таким образом, продемонстрирована строгая обратно пропорциональная зависимость между количеством введенного селенопирана в рацион и содержанием в крови малонового диальдегида.

Объективная оценка адаптационных резервов организма, состояние антиоксидантной защиты, механизмы неспецифических реакций на любые неблагоприятные воздействия внешней среды могут быть весьма успешно оценены также и характеристикой тиол-дисульфидной системы. Тиол-дисульфидное соотношение, т.е. отношение сульфгидрильных групп к дисульфидным, служит важным интегрирующим регуляторным параметром и, одновременно, мобильным, реакционноспособным диагностическим тестом оценки неспецифической резистентности организма.

Оно может наиболее информативно характеризовать «буферную емкость» антиоксидантной системы, как в норме, так и при патологии, поскольку тиоловые соединения (как низко-, так и высокомолекулярные) благодаря своей способности быстро, но обратимо окисляться оказываются наиболее чувствительными к неблагоприятным воздействиям самой различной природы и интенсивности. При большинстве патологий инфекционной и неинфекционной природы, в том числе и аллергических состояниях, и радиационном поражении, одним словом, в состоянии окислительного стресса любой этиологии, однозначно отмечается снижение содержания SH-групп и повышение концентрации SS-групп.

Глутатион представляет собой трипептид со свободной сульфгидрильной группой - гамма-глутамил-цистеинил-глицин. В продуктах гидролиза белков он никогда не обнаруживается, следовательно, глутатион синтезируется организмом в специальной последовательности реакций. Этот трипептид имеет чрезвычайно разнообразные и ответственные биохимические функции.

Восстановленная форма глутатиона служит во внутриклеточном пространстве в качестве главного сульфгидрильного буфера с задачей поддерживать в восстановленном состоянии все цистеиновые остатки во всех белках от гемоглобина, сохраняя его в ферроформе, до остальных ферментов и гормонов.

По химическим свойствам глутатион способен самостоятельно участвовать в процессах детоксикации, реагируя как с перекисью водорода, так и с органическими перекисями. Иными словами, глутатион является в организме важнейшим тиоловым антиоксидантом. Глутатион формирует основную детоксицирующую систему организма. При проникновении в организм практически любых ксенобиотиков, включая широкую гамму микотоксинов, глутатион конъюгирует с ними, образует нетоксичные, легковыводимые из организма комплексы. Именно так обезвреживаются токсические органические вещества практически всех химических классов - цитостатики, канцерогены, мутагены и др. Патологическое состояние развивается тогда, когда в организме недостаточно глутатиона.

Таким образом, токсичность ксенобиотика - величина обратно пропорциональная концентрации глутатиона, а резистентность организма - величина прямо пропорциональная концентрации глутатиона. Такая элементарная вещь, как несбалансированное питание и дефицит протеина, существенно снижает содержание глутатиона в организме.

Восстановленный глутатион также необходим для поддержания нормальной структуры эритроцитов. Клетки с пониженным содержанием восстановленного глутатиона обладают повышенной чувствительностью к гемолизу.

Сказанного вполне достаточно, чтобы признать за глутатионом ключевую роль внутриклеточного метаболита в регуляции обмена веществ в норме и патологии. Он относится к специальной группе тиоловых антиоксидантов, обладает выраженными противоопухолевыми и радиопротекторными свойствами. Причем главная его специфика заключается в том, что никакое скармливание глутатиона, никакие внутримышечные или внутривенные инъекции абсолютно не помогают. Он очень плохо транспортируется через все мембраны, начиная от кишечной и кончая клеточной и внутриклеточными. И, таким образом, работает только тот восстановленный глутатион, который образовался непосредственно во внутриклеточном пространстве каждой клетки. Следовательно, инициируя и поддерживая реакции, ведущие к сохранению восстановленных тиоловых эквивалентов, мы повышаем адаптабельность организма и его устойчивость к воздействию комплекса неблагоприятных факторов.

Тяжесть заболевания, периоды его обострения, воздействие неблагоприятных факторов внешней среды, стрессовые ситуации у здоровых людей и животных коррелируют со степенью снижения тиол-дисульфидного отношения. Динамика и величина изменений тиол-дисульфидного отношения (тиол-дисульфидной системы) являются отражением развития адаптивной реакции и позволяют непосредственно оценить уровень неспецифической резистентности организма. Повышение содержания SH-групп и снижение SS-групп связывают с активным извлечением резерва низкомолекулярных тиолов из печени в ответ на истощение редокс-системы крови и мобилизацией резервов организма на восстановление окисленных тиолов.

В ряде заболеваний выявлено снижение SH/SS-коэффициента. Что связано с разбадансированностью окислительно-восстановительного процесса тиолов. Причиной этому являются снижения ферментативной активности глутатионредуктазы, дегидрогеназ гликолиза, цикла Кребса, пентозо-фосфатного пути окисления углеводов и -окисления липидов. Причем, как правило, увеличение активности названных дегидрогеназ не в состоянии обеспечить нормализацию редокс-потенциала тиолов, поскольку лимитирующим ферментом в процессе восстановления окисленной формы глугатиона является глутатионредуктаза. При летальном исходе отмечается характерный сбой работы ферментной системы, ответственной за поддержание тиолдисульфидного гомеостаза.

Среди тканевых антиоксид антов тиолы занимают особое место:

- Высокая реакционная способность сульфгидрильных групп, благодаря которой тиолы окисляются с очень высокой скоростью.

- Обратимость реакции окисления сульфгидрильных групп в дисульфидные, что предполагает возможность энергетически выгодного поддержания гомеостаза тиоловых антиоксидантов в клетке без активации их биосинтеза.

- Способность тиолов проявлять как антирадикальное, так и антиперекисное действие.

- Гидрофильными свойствами тиолов обусловлены их высокое содержание в водной фазе клетки и возможность защиты от окислительного повреждения биологически важных молекул, в т. ч. гемоглобина. Вместе с тем присутствие в тиолах неполярных группировок обеспечивает им возможность проявления антиоксидантной активности в липидной фазе клетки.

Все сказанное выше убедительно свидетельствует о неспецифическом и универсальном характере изменений тиолов при действии на организм любых экстремальных факторов. Метаболический стресс характеризуется низким содержанием тиоловых групп (и повышением дисульфидов), которые рассматриваются в качестве значимого критерия уровня неспецифической резистентности организма.

Полученные результаты (см. Таблицу 7) свидетельствуют о прогрессивном, существенном и достоверном росте концентрации внутриклеточных сульфгидрильных групп по всем опытным группам, особенно в третьей и четвертой, соответственно на 22 и 26%.

Динамика изменений соотношения низкомолекулярных сульфгидрильных и дисульфидных групп во внеклеточном пространстве (плазме крови) также свидетельствует о положительном влиянии селенопирана как глутатионсберегающего соединения. Хотя абсолютные величины концентрации дисульфидных групп в течение эксперимента несколько возросли (на 4,2-10,5%), но рост абсолютных величин содержания сульфгидрильных групп шел значительно более опережающими темпами. В итоге, тиол-дисульфидное соотношение в плазме крови подопытных кошек было выше такового у контрольных кошек. У кошек 4 группы этот индекс через три месяца скармливания 1200 мкг селенопирана/кг сухого вещества корма был на 54,9% выше исходного уровня.

За две недели до завершения исследований на всех животных был проведен балансовый опыт. После группового содержания животные были переведены в индивидуальные клетки, для сбора мочи и кала, что, естественно, вызвало у них стрессовую реакцию. Наступивший стресс можно характеризовать двоякой ответной реакцией: на резкое изменение привычных условий содержания и на фактор иммобилизации животных. За 14 суток балансового опыта контрольная группа вместо прироста живой массы стала стабильно давать отвес живой массы по 3.000 грамма в среднем на одну голову в сутки (Таблица 8). Группа № 2, получавшая по 120 мкг селенопирана/кг сухого вещества корма, отреагировала менее болезненно. Среднесуточная убыль живой массы была хотя почти в два раза меньше (1.565 граммов), но все-таки она была. Совершенно иная динамика живой массы отмечена у животных третьей группы (400 мкг селенопирана/кг сухого вещества корма). Здесь был не отвес, а весьма приличный, для взрослых животных, прирост живой массы - 3.696 грамма в среднем на 1 голову в сутки. У группы №4 (1200 мкг селенопирана/кг сухого вещества корма) динамика живой массы вновь была отрицательной, но ежесуточное уменьшение веса животных было 0.696 граммов, то есть эта величина была в два с лишним раза меньше, чем у животных второй опытной группы и в четыре с лишним раза меньше, чем в контрольной.

В полном соответствии с динамикой изменений живой массы и степенью нервозности разных групп животных была и индивидуальная потребляемость корма. Потребление корма во всех опытных группах было выше, чем в контрольной, соответственно по 2-ой, 3-ей и 4-ой опытным группам, на 20, 25 и 20%.

Групповые проявления специфики биохимических процессов весьма наглядно иллюстрируют данные по динамике изменения живой массы кошек и потребления ими корма в периоды наибольшего воздействия стресс-факторов (период балансового опыта). За весь трехмесячный период опыта, по динамике среднесуточного прироста живой массы, животные всех трех опытных групп превосходили контрольную группу, находившуюся на стандартном рационе (Canned Kitekat Rabbit, производства ООО «МАРС», Ступино, Россия). Лучшей была опытная группа № 3, получавшая ежесуточно по 400 мкг селенопирана/кг сухого вещества корма.

Изобретение промышленно применимо, так как при его осуществлении используется препарат, освоенный медицинской промышленностью.

Таблица 1
Концентрация селена в крови кошек, мг/литр
	Взятие крови, месяцы.
	0		1	2	3
1 группа, контроль
В среднем по группе	0.063		0.107	0.140	0.182
	±012		±0.013	±0.011	±0.011
% к фону			170	229	289
2 группа, селенопиран (предлагаемое селенсодержащее средство)
В среднем по группе	0.056		0.127	0.143	0.225
	±0.014		±0.016	±0.011	±0.013
% к фону			227	255	402
% к контролю	89		119	102	124
3 группа, селенизированные дрожжи
В среднем по группе	0.065		0.125	0.125	0.217
	±0.015		±0.021	±0.009	±0.008
% к фону			192	192	334
% к контролю	104		117	89	119
4 группа, селенит натрия
В среднем по группе		0.076	0.159	0.144	0.255
		±0.012	±0.022	±0.010	±0.010
% к фону			209	189	336
% к контролю		121	149	103	140

Таблица 2
Биохимические показатели (первое взятие крови)
Группы животных		Активность лизоцима	Активность каталазы
1-я группа контроль	В среднем по группе	70.20±7.64	5.64±0.78
	% к фону	100.00	100.00
2-ая группа	В среднем	73.6±7.51	5.25±1.28
селенопиран	по группе
(рекомендуемое	% к фону	100.00	100.00
средство)	% к контр.	104.84	93.02
3 группа	В среднем	82.20±8.18	5.05±1.20
дрожжи	по группе
	% к фону	100.00	100.00
	% к контр.	117.09	89.54
4 группа	В среднем	66.20±7.11	6.12±0.93
селенит	по группе
натрия	% к фону	100.00	100.00
	% к контр.	94.30	108.51

Таблица 3
Биохимические показатели (первое взятие крови)
Группы животных		Активность лизоцима	Активность каталазы
1 группа контроль	В среднем по группе	97.0±19.3	7.98±0.81
	% к фону	138.18	141.49
2 группа	В среднем	141.0±14.0	7.64±0.26
селенопиран	по группе
(рекомендуемое	% к фону	191.58	145.52
средство)	% к	145.36	95.74
	контролю
3 группа	В среднем	87.0±21.6	7.41±0.28
дрожжи	по группе
	% к фону	105.84	146.73
	% к контр.	89.69	92.86
4 группа	В среднем	89.0±12.1	7.52±0.54
селенит	по группе
натрия	% к фону	143.44	122.88
	% к контр.	91.75	94.24

Таблица 4
Биохимические показатели (первое взятие крови)
Групп животных		Активность лизоцима	Активность каталазы
1 группа	В среднем	126.0±4.46	2.52±0.33
контроль	по группе
	% к фону	179.49	44.68
2 группа	В среднем	123±6.92	3.99±1.26
селенопиран	по группе
(рекомендуемое	% к фону	167.12	76.00
средство)	% к контр.	97.62	158.33
3 группа	В среднем	103.0±6.71	4.35±1.01
дрожжи	по группе
	% к фону	125.30	86.14
	% к контр.	81.75	172.62
4 группа	В среднем	122.0±9.38	2.91±0.59
селенит	по группе
натрия	% к фону	184.29	47.55
	% к контр.	96.83	115.48

Таблица 5
Интенсивность роста кошек
Показатели, периоды и даты взвешивания	Группы
	1 (контрольная)	Опытные
		2 (селенопиран)		3 (дрожжи)	4 (селенит)
Живая масса животных	2517	2620		2532	2518
на начало исследований, г
(08.10.02.)
Живая масса, г (12.11.02)	2614.4	2878.8		2782.4	2752.8
Валовой прирост живой массы, г	97.4	258.8		250.4	232.8
% к фону (по живой массе)	104	110		110	109
% к контролю		265.8		257,4	239.2
Живая масса, г (10.12.02)	2852.4	3152.2		3166.6	3060.5
Валовой прирост живой массы, г	238	274.4		384.2	309.3
% к фону	113	120		125	120
% к контролю		116.0		161,41	130.0
Живая масса, г (10.01.03)	3005.2	3339.6		3404.8	3071.5
Валовой прирост живой массы, г	152.8	186.4		238.2	11.0
% к фону	119	128		135	122
% к контролю		122		156	7.3
За 8 суток балансового опыта (16.01.03-24.01.03)
Валовой прирост живой массы, г	-62	22.4	-19.6		20.0
Изменения живой массы за первую неделю после завершения исследований
(прекращения скармливания препаратов), г
	-143	-37	-46		-102
За весь опыт (108 суток)
Живая масса животных на конец
опыта, (24.01.03)	3006	3364	3494		3201
Валовой прирост живой массы, г	489	744	1271		683
% к фону	119	128	138		127
% к контролю		152	260		140

Таблица 6
Баланс селена в организме кошек
Показатели	Группы
	Контроль	Селенопиран	Селенизиро ванные дрожжи	Селенит натрия
Потреблено с кормом, мкг	7.36±0.94	10.94±1.57	12.49±1.95	11.40±0.98
% к контролю		148.64	169.70	154.89
Выделено с калом, мкг	3.53±0.83	4.28±0.39	4.30±0.29	3.63±0.74
% к контролю		121.25	121.81	102.83
Поступило из кишечника, мкг	3.83±0.64	6.66±0.95	8.19±1.33	7.76±0.54
% к контролю		173.89	213.84	202.61
Поступило из кишечника (всосалось),%	53.85±8,65	60.69±1,14	64.46±1,39	68.74±1,7
% к контролю		112.70	119.70	127.65
Выделено с мочой, всего мкг	2.53±0.62	4.63±1.31	7.81±1.84	7.28±0.64
% к контролю		183.00	308.70	287.75
Выделено с мочой от потребленного с кормом, %	34.18	41.98	61.80	64.67
% к контролю		122.86	180.86	189.26
Выделено всего, мкг	6.06±0.49	8.91±1.23	12.11±1.4	10.91±0.4
% к контролю		147.27	200.17	180.33
Всего выделено от потребленного, %	82,20	81.44	96.96	95.70
% к контролю		99.08	117.96	116.42
Выделено с калом от всего выделенного, %	56.33	48.14	36.33	32.75
% к контролю		85.46	64.50	58.14
Выделено с мочой от всего выделенного, %	43.84	51.87	63.67	67.25
% к контролю		118.32	145.23	153.40
Отложено в организме, мкг	1.29±0.27	2.04±0.22	0.38±0.23	0.48±0.14
% к контролю		158.14	61.29	77.42
Отложено в организме от потребленного с кормом, %	19.69	18.72	2.67	4.06
% к контролю		95.07	13.56	20.62

Таблица 7
Биохимические показатели крови кошек в конце исследований
Изучаемые показатели
М±м, %, %	ГПО-1	ГПО-2	МДА	Гемоглобин	Низкомолекулярные SH и SS группы
					Внеклеточные			Внутриклеточные
					SH	SS	ТДС	SH
ПЕРВАЯ ГРУППА, КОНТРОЛЬНАЯ
М±м	479±50	565±72	2.79±0.45	154.5±7.5	0.450±0.05	0.209±0.06	2.15	2.98±0.89
% к фону	98.2	98.4	104.1	99.0	97.6	103.0	94.7	96.4
ВТОРАЯ ГРУППА, ОПЫТНАЯ
М±м	483±61	573±87	2.58±0.39	159.9±6.8	0.527±0.06	0.229±0.08	2.30	3.03±1.01
%к контролю	100.8	101.4	92.5	103.5	117.3	109.6	107.0	101.7
% к фону	98.2	98.1	92.5	101.3	111.0	105.5	105.5	102.7
ТРЕТЬЯ ГРУППА, ОПЫТНАЯ
М±м	507±98	591±75	2.47±0.28	154.1±4.9	0.525±0.07	0.231±0.07	2.27	3.64±1.23
%к контролю	105.9	104.6	88.5	99.7	116.7	110.5	105.6	122.1
% к фону	99.4	98.3	89.5	98.9	111.2	110.0	108.1	114.8
ЧЕТВЕРТАЯ ГРУППА, ОПЫТНАЯ
М±м	490±89	570±77	2.28±0.31	156.3±5.7	0.733±0.09	0.222±0.05	3.30	3.76±1.19
%к контролю	102.3	100.9	81.7	101.2	162.9	106.9	153.5	126.2
% к фону	99.0	99.8	81.1	101.0	161.5	104.2	154.9	126.6

Таблица 8
Динамика изменений живой массы кошек и потребление корма за период опыта
	Среднесуточный прирост живой массы за период исследования до балансового опыта		Среднесуточное изменение живой массы за период балансового опыта	Среднесуточное потребление корма за 2 недели балансового опыта
Группы
	Граммов	%	Граммов	Граммов	%
Контроль	0.570	100	-3.000	284	100
2 группа	2.844	499,0	-1.565	339	120
3 группа	3.659	641,9	+3.696	356	125
4 группа	2.810	493,0	-0.696	340	120