способ коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией эналаприла и резвератрола при l-name-индуцированном дефиците оксида азота

Формула изобретения

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение эналаприла, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным, в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам линии Wistar в дозе 25 мг/кг, оценивая степень развития дисфункции по соотношению эндотелийнезависимой и эндотелийзависимой вазодилатации, и на фоне этого вводят эналаприл внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и резвератрол внутрибрюшинно в дозе 2 мг/кг однократно в сутки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью эналаприла, относящегося к ингибиторам АПФ, описанный Агеевым Ф.Т., Овчинниковым А.Г. "Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. (Квинаприл и эндотелиальная дисфункция)", Глава II. Дисфункция эндотелия, Часть V. ИАПФ при эндотелиальной дисфункции: экспериментальные данные. М., 2001 г. Изд-во компании "Пфайзер", http://www.viagra.nnov.ru/info/10911-ingibitors4.html|, который заключается в пероральном приёме этих препаратов у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком способа является узкая патогенетическая направленность и опосредованность действия эналаприла при эндотелиальной дисфункции, связанная с его низкой афинностью (сродством) к тканевой (эндотелиальной) ренинангиотензинальдостероновой системе (РААС), в то время как основная причина развития данного патофизиологического состояния - снижение активности клеток сосудистого эндотелия в образовании оксида азота (NO), остаётся некомпенсированной. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при недостаточности NO-синтаз с помощью эналаприла неудовлетворительны.

Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование эналаприла, относящегося к ингибиторам АПФ, и активатора NO-синтазы - резвератрола.

Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг, проводится её коррекция внутрижелудочным введением эналаприла в дозе 0,5 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением активатора NO-синтазы резвератрола в дозе 2 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как резвератрол является активатором фермента NO-синтазы, посредством которого образуется NO, в сосудистом эндотелии.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ.

Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.

При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ.

Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.

Одновременное введение L-NAME и эналаприла (0,5 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к оптимальному снижению показателей исходных значений АД (САД - 183,9±11,4, ДАД - 138,9±7,0 мм рт.ст.), а в экспериментах, где ещё дополнительно вводился резвератрол (2 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия, так как исходные цифры АД были существенно ниже: САД - 175,9±13,2, ДАД - 132,6±10,6 мм рт.ст. (таблица 1).

Таблица 1
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции эналаприлом с использованием резвератрола
Группы животных	Функциональные пробы	САД, мм рт.ст.	ДАД, мм рт. ст.	ЧСС, уд. в мин
Интактные	Исходные	137,7±3,7	101,9±4,3	420,0±9,0
	ЭЗВ с АХ	84,3±4,5	38,7±2,8	416,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	83,0±3,7	42,1±4,4	415,0±10,0
Получавшие L-NAME (25 мг/кг)	Исходные	190,3±6,7*	145,0±3,9*	428,0±11
	ЭЗВ с АХ	110,6±5,2*	82,8±6,6*	426,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	88,7±4,7	50,8±4,2	426,0±13,0
L-NAME(25 мг/кг)+Эналаприл (0,5 мг/кг)	Исходные	183,9±11,4*	138,9±7,0*	377,0±9,0
	ЭЗВ с АХ	98,0±3,3*	61,6±4,7*	381,0±11,0
	ЭНЗВ с НП	88,7±4.0	42,7±3,3	381,0±11,0
L-NAME+Эналаприл (0,5 мг/кг) +резвератрол (2 мг/кг)	Исходные	175,9±13,2**	132,6±10,6**	374,0±12,0
	ЭЗВ с АХ	85,0±7,5**	53,0±5,7**	326,0±14,0
	ЭНЗВ с НП	84,8±7,8	46,7±3,0	378,0±11,0
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных
** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+эналаприл

Также отмечалось потенциирование снижения показателей артериального давления в ответ на введение АХ. Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.

Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.

Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение, как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только эналаприл, это отношение соответствовало значению 3,2±0,1, а в группе с дополнительным введением к эналаприлу резвератрола - 1,5±0,1 (таблица 2).

Таблица 2
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME эналаприлом и эналаприлом в сочетании с резвератролом
Группы животных	Функциональные пробы	Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.)	Время сосудистой реакции (сек)	Площадь сосудистой реакции (усл.ед)	Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП
L-NAME +эналаприл	АХ	80,1±5,5	35,0±1,7	1405,5±97,5	3,2±0,1
	НП	109,0±8,0	98,7±5,6	5123,9±121,8
L-NAME+эналаприл+резвератрол	АХ	76,0±8,6	46,3±4,5	1742,2±165,2	1,5±0,1*
	НП	79,0±6,0	71,5±7,6	2329,1±185,3
* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+эналаприл

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции эналаприла при сочетанном его применении с резвератролом.