применение тиазольных производных для получения лекарственного средства, предназначенного для защиты митохондрий

Формула изобретения

1. Применение соединения общей формулы (I)

в форме рацемической смеси, энантиомера или любого сочетания этих форм, в которой

А означает радикал (А1)

в котором R⁵ означает атом водорода или алкил;

R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил;

R⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и

R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил,

или же А означает радикал (А2)

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

R¹¹ означает атом водорода или алкил; и

R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода или алкил;

n означает целое число от 0 до 5;

R ¹ и R² означают, независимо, атом водорода или алкил или циклоалкил;

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R³ и R ⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 5-7 членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR¹³-, -NR ¹⁴-, -О- и -S-, причем R¹³ означает атом водорода, группу -ОН или алкил или алкоксил, и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил, -COR ¹⁵, -COOR¹⁵ или -CONR ¹⁶R¹⁷, где R¹⁵ означает алкил и R¹⁶ и R ¹⁷ означают, независимо, атом водорода или алкил,

при условии, что алкил или алкоксил, если не дано других указаний, является линейным или разветвленным и включает 1-6 атомов углерода, и циклоалкил, если не дано других указаний, включает 3-7 атомов углерода, или фармацевтически приемлемой соли соединения общей формулы (I), для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: миопатии, амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатомегалия, гепатический цитолиз, гипертрофическая кардиомиопатия, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

2. Применение по п.1, отличающееся, тем что

А означает радикал (А1)

в котором R⁵ означает атом водорода или метил;

R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил;

R⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и

R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил,

или же А означает радикал (А2)

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

R¹¹ означает атом водорода или метил; и

R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода, или метил, или этил;

n означает целое число от 0 до 3;

R¹ и R² означают, независимо, атом водорода или алкил;

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R³ и R ⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 5-7 членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR¹³-, -NR ¹⁴-, -О- и -S-, причем R¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил или метоксигруппу, и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил, -COR ¹⁵, -COOR¹⁵ или -CONR ¹⁶R¹⁷, где R¹⁵ означает алкил и R¹⁶ и R ¹⁷ означают, независимо, атом водорода или алкил.

3. Применение по п.1, отличающееся тем, что

А означает радикал (А1)

в котором R⁵ означает атом водорода;

R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил;

R ⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и

R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил,

или же А означает радикал (А2)

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

R¹¹ означает атом водорода; и

R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода или метил;

n означает целое число от 0 до 2;

один из R¹ и R² означает атом водорода, другой означает атом водорода или алкил или циклоалкил;

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 6-членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR ¹³-, -NR¹⁴-, -О- и -S-, причем R ¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил.

4. Применение по п.1, отличающееся тем, что

А означает радикал (А1)

в котором R⁵ означает атом водорода;

R⁶ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил;

R⁷ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил; и

R⁸ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил,

или же А означает радикал (А2)

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, метил, этил, метоксигруппу или этоксигруппу;

R ¹¹ означает атом водорода; и

R¹² означает атом водорода или гидроксил, метил, этил, метоксигруппу или этоксигруппу;

В означает атом водорода;

n означает целое число от 0 до 1;

один из R¹ и R² означает атом водорода, другой означает атом водорода или алкил (и предпочтительно линейный или разветвленный алкил с 1-3 атомами углерода, в особенности метил или этил);

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 6-членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR ¹³-, -NR¹⁴-, -О- и -S-, причем R ¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил.

5. Применение по п.1, отличающееся тем, что n означает 0.

6. Применение по п.1, отличающееся тем, что А означает радикал (А1).

7. Применение по п.1, отличающееся тем, что применяют одно из следующих соединений:

-4-[3,5-бис(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-N-метил-2-тиазолметанамин;

-N-метил[4-(10Н-фенотиазин-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]метанамин;

-2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1,3-тиазол-4-ил}фенол;

-4-[2-(аминометил)-1,3-тиазол-4-ил]-2,6-ди(трет-бутил)фенол;

-2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[1-(метиламино)этил]-1,3-тиазол-4-ил}фенол;

или фармацевтически приемлемую соль одного из этих соединений.

8. Применение по любому из пп.1-7, отличающееся тем, что получаемое лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатический цитолиз, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

9. Применение по п.8, отличающееся тем, что получаемое лекарственное средство предназначено для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатический цитолиз, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

10. Применение по п.9, отличающееся тем, что получаемое лекарственное средство предназначено для лечения цирроза печени.

Описание изобретения к патенту

Объектом настоящего изобретения является применение тиазольных производных нижеприводимой общей формулы (I) для получения лекарственного средства, предназначенного для защиты митохондрий, и, в частности, лекарственного средства, предназначенного для предотвращения или лечения цирроза печени.

В заявке на патент РСТ WO 01/26656 заявитель уже описал тиазольные, оксазольные и имидазольные производные, ингибирующие липидное перокисление, и/или моноаминоксидазы, и/или модулирующие натриевые каналы. Эти свойства делают возможным использовать эти соединения в терапевтических целях, в частности для лечения нейродегенеративных заболеваний или болей.

Заявитель неожиданно обнаружил, что некоторые отдельные представители тех соединений, которые описаны в заявке на патент РСТ WO 01/26656, обладают, кроме того, способностью защищать митохондрии, что открывает для них новые области терапевтического применения, как, например, предотвращение или лечение цирроза печени.

В самом деле, эти соединения противодействуют набуханию митохондрий, когда его вызывают агенты, способные уменьшать потенциал митохондриальной мембраны. В настоящее время уже установлено, что набухание митохондрий вызывается модификацией проницаемости внутренней мембраны митохондрий небольших молекул с молекулярной массой выше 1500 дальтон. Это явление, называемое транзиторной проницаемостью, являющееся результатом уменьшения потенциала мембраны, связано с необратимым раскрытием поры с высокой проводимостью, при этом осмотическое набухание матрицы и высвобождение митохондриальных факторов способны индуцировать начальные стадии апоптоза (цитохром с, индуцирующий апоптоз фактор): см. T.E. Gunter и D.R. Pfeiffer "Mechanismus by which mitochondria transport calcium", Am. J. Physiol., 258, C.755-C.786 (1990); D.R. Hunter и R.A. Haword "The Ca²⁺ -induced membrane transition in mitochondria. Transitional Ca ²⁺release", Arch. Biochem. Biophys., 195, 468-477 (1979); S.B. Bratton и G.M. Cohen "Apoptotic death sensor: an organelle's alter ego", TRENDS, 22, 306-315 (2001).

Поэтому становится особенно целесообразным нахождение соединений, которые предотвращают или уменьшают набухание митохондрий, противодействуя раскрытию этой поры с высокой проводимостью. Это свойство, которое может быть показано на выделенных митохондриях, может быть успешно применено в клинике при терапевтических показаниях, отличающихся от тех, которые описаны в заявке на патент РСТ WO 01/26656, и которые состоят в генетических или функциональных нарушениях митохондрий.

Взаимосвязь между набуханием митохондрий и некоторыми патологиями описана, в частности, в следующих ссылках:

- митохондриальные заболевания генетического происхождения: Clostre "Mitochondries: decouvertes physiopathologiques recentes et nouvelles perspectives therapeutiques", Ann. Pharm. Fr., 59, 3-21 (2001);

- сепсис (септический шок): Fink "Cytopathic hypoxia. Mitochondrial dysfunction as mechanism contributing to organ dysfunction in sepsis", Crit. Care Clin., 17, 219-237 (2001);

- цирроз печени: Tsukamoto и др. "Current concept in the pathogenesis of alcoholic liver injury", FASEB J., 15 (8), 1335-1349 (2001);

- сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызванная медикаментозными агентами: Lewis и др. "Mitochondrial toxicity of antiviral drugs", Nat. Med., 1 (5), 417-422.

Поскольку соединения нижеприводимой общей формулы (I) препятствуют набуханию митохондрий, то их можно использовать в качестве активного агента для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: миопатии, амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатомегалия, гепатический цитолиз, гипертрофическая кардиомиопатия, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, сепсис, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

Предпочтительно, соединения нижеприводимой общей формулы (I) могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатический цитолиз, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, сепсис, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

Более предпочтительно, соединения нижеприводимой общей формулы (I) могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания или нарушения, выбираемого из следующих заболеваний или нарушений: амиопатии, птозы, глазная атрофия, пигментный ретинит, глухота, гепатический цитолиз, хроническая прогрессирующая наружная офтальмоплегия, синдром Кирнса-Сейра, болезнь Лея, синдром Лебера, синдром Narp, синдромы MELA, синдром Пирсона, цирроз печени и сердечная, почечная или гепатическая токсикация, вызываемая медикаментозными агентами.

Еще более предпочтительно, соединения нижеприводимой общей формулы (I) могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для лечения цирроза печени.

Согласно изобретению соединения общей формулы (I):

в которой

А означает радикал (А1):

в котором R⁵ означает атом водорода или алкил; R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; R ⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил;

или же А означает радикал (А2):

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил; R¹¹ означает атом водорода или алкил и R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода или алкил;

n означает целое число от 0 до 5;

R ¹ и R² означают, независимо, атом водорода или алкил или циклоалкил;

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R³ и R ⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 5-7-членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR¹³-, -NR ¹⁴-, -O- и -S-, причем R¹³ означает атом водорода, группу -ОН или алкил или алкоксил и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил, -COR ¹⁵, -COOR¹⁵ или -CONR ¹⁶R¹⁷, где R¹⁵ означает алкил и R¹⁶ и R ¹⁷ означают, независимо, атом водорода или алкил; или фармацевтически приемлемые соли соединений общей формулы (I), могут быть использованы для получения лекарственного средства, предназначенного для защиты митохондрий.

Под алкилом или алкоксилом, если не дано других указаний, понимают линейный или разветвленный алкил или алкоксил с 1-6 атомами углерода. Под циклоалкилом, если не дано других указаний, понимают моноциклическую углеродную структуру с 3-7 атомами углерода. Наконец, под галогеном понимают атомы фтора, хлора, брома или иода.

Кроме того, если не дано других указаний, под возможно замещенным радикалом понимают радикал, включающий заместитель или заместители, выбираемые, независимо, из группы, состоящей из атома галогена и алкила и алкоксила.

Под гетероциклом понимают, в частности, пиперидиновый, пиперазиновый, морфолиновый и тиоморфолиновый радикалы. Под линейным или разветвленным алкилом с 1-6 атомами углерода понимают, в частности, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил, пентил, неопентил, изопентил, гексил, изогексил.

Под фармацевтически приемлемой солью понимают, в частности, аддитивные соли с неорганическими кислотами, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, сульфат, фосфат, дифосфат и нитрат, или с органическими кислотами, такие как ацетат, малеат, фумарат, тартрат, сукцинат, цитрат, лактат, метансульфонат, п-толуолсульфонат, памоат и стеарат. В объем настоящего изобретения также входят, если их используют, соли, образованные с основаниями, такими как гидроксид натрия или гидроксид калия. В отношении других примеров фармацевтически приемлемых солей можно сослаться на "Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm., 33, 201-217 (1986).

Кроме того, некоторые из соединений общей формулы (I) могут находиться в форме энантиомеров. Настоящее изобретение включает две энантиомерные формы и любые сочетания этих форм, включая рацемические смеси "R, S". Для простоты изложения, когда специфическая конфигурация в структурных формулах не указана, нужно понимать, что представлены две энантиомерные формы и их смеси.

Предпочтительно, соединения согласно изобретению представляют собой такие, которые обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик:

А означает радикал (А1):

в котором R⁵ означает атом водорода или метил; R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; R ⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; или же А означает радикал (А2):

радикал (А2):

в котором R⁹ и R¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил; R¹¹ означает атом водорода или метил и R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода или метил или этил;

n означает целое число от 0 до 3;

R¹ и R ² означают, независимо, атом водорода или алкил;

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 5-7 членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR ¹³-, -NR¹⁴-, -O- и -S-, причем R ¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил или метоксигруппу и R¹⁴ означает атом водорода или алкил, -COR¹⁵, -COOR¹⁵ или -CONR¹⁶R¹⁷, где R ¹⁵ означает алкил и R¹⁶ и R ¹⁷ означают, независимо, атом водорода или алкил.

Более предпочтительно, соединения согласно изобретению представляют собой такие, которые обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик:

А означает радикал (А1):

в котором R⁵ означает атом водорода; R⁶ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; R⁷ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил; и R⁸ означает атом водорода или алкил, циклоалкил, гидроксил или алкоксил;

или же А означает радикал (А2):

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил; R¹¹ означает атом водорода и R¹² означает атом водорода или гидроксил, алкил или алкоксил;

В означает атом водорода или метил;

n означает целое число от 0 до 2;

один из R ¹ и R² означает атом водорода, другой означает атом водорода, или алкил, или циклоалкил;

R ³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R³ и R ⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 6-членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR¹³-, -NR ¹⁴-, -O- и -S-, причем R¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил и R¹⁴ означает атом водорода или алкил.

Еще более предпочтительно, соединения согласно изобретению представляют собой такие, которые обладают по меньшей мере одной из следующих характеристик:

А означает радикал (А1):

в котором R⁵ означает атом водорода; R⁶ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил; R⁷ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил; и R ⁸ означает атом водорода или алкил, гидроксил или алкоксил;

или же А означает радикал (А2):

в котором R⁹ и R ¹⁰ означают, независимо, атом водорода или гидроксил, метил, этил, метоксигруппу или этоксигруппу; R¹¹ означает атом водорода и R¹² означает атом водорода или гидроксил, метил, этил, метоксигруппу или этоксигруппу;

В означает атом водорода;

n означает целое число от 0 до 1;

один из R¹ и R ² означает атом водорода, другой означает атом водорода или алкил (и предпочтительно линейный или разветвленный алкил с 1-3 атомами углерода, в особенности метил или этил);

R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, или же R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют 6-членный гетероцикл, включающий в целом 1-2 гетероатома, недостающие звенья которого выбирают из -CHR ¹³-, -NR¹⁴-, -O- и -S-, причем R ¹³ означает атом водорода, группу -ОН или метил и R ¹⁴ означает атом водорода или алкил.

Особенно предпочтительно, радикал (А1) представляет собой радикал:

в котором R⁵ означает атом водорода или алкил (и в особенности атом водорода); R ⁶ означает алкил (в частности, изопропил или трет-бутил и в особенности трет-бутил) и R⁷ означает алкил (в частности, изопропил или трет-бутил и в особенности трет-бутил).

Точно так же, особенно предпочтительно, радикал (А2) означает радикал:

в котором R⁹ означает атом водорода или метил или метоксигруппу (и в особенности атом водорода), R¹¹ означает атом водорода или метил (и в особенности атом водорода) и R¹² означает атом водорода, или метил, или метоксигруппу (и в особенности атом водорода).

Кроме того:

- особенно предпочтительны случаи, где n означает 0;

- вариант изобретения, согласно которому А означает радикал (А1), обычно является предпочтительным по сравнению с таковым, согласно которому А означает радикал (А2);

- предпочтительны случаи, где R³ и R⁴ означают, независимо, атом водорода или алкил, по сравнению с таковыми, в которых R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл;

- когда R ³ и R⁴ означают алкил, речь идет предпочтительно об алкиле с 1-3 атомами углерода и, в частности, о метиле или этиле (в особенности о метиле);

- когда R ³ и R⁴ вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют гетероцикл, этим гетероциклом является предпочтительно пиперазинил, морфолинил или тиоморфолинил (и более предпочтительно пиперазинил) или же пиперидинил, замещенный (предпочтительно в положении 3 или 4) гидроксилом;

- когда R⁶, R⁷ или R ⁸ означают алкил, речь идет предпочтительно об алкиле с 3-6 атомами углерода и в особенности о трет-бутиле или изопропиле.

В частности, согласно изобретению могут быть использованы следующие соединения:

- 4-[3,5-бис(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-N-метил-2-тиазолметанамин;

-N-метил[4-(10Н-фенотиазин-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]метанамин;

-2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[(4-метилпиперазин-1-ил)метил]-1,3-тиазол-4-ил}фенол;

-4-[2-(аминометил)-1,3-тиазол-4-ил]-2,6-ди(трет-бутил)фенол;

-2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[1-(метиламино)этил]-1,3-тиазол-4-ил}фенол;

или их фармацевтически приемлемые соли.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно изобретению, могут находиться в твердой форме, как, например, порошки, гранулы, таблетки, желатиновые капсулы, липосомы или суппозитории. Соответствующими твердыми носителями могут быть, например, фосфат кальция, стеарат магния, тальк, сахара, лактоза, декстрин, крахмал, желатина, целлюлоза, метилцеллюлоза, натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, поливинилпирролидин и воск.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно изобретению, могут находиться также в жидкой форме, как, например, растворы, эмульсии, суспензии или сиропы. Соответствующими жидкими носителями могут быть, например, вода, органические растворители, такие как глицерин или гликоли, так же, как их смеси, в различных пропорциях, в воде.

Введение лекарственного средства согласно изобретению можно осуществлять локально, перорально, парентерально, путем внутримышечной инъекции и т.д.

Доза продукта согласно настоящему изобретению, предусматриваемая для лечения вышеуказанных заболеваний или нарушений, изменяется в зависимости от способа введения, возраста и массы тела подвергаемого лечению пациента, а также состояния этого последнего, и ее определяет лечащий врач или ветеринар. Такое количество, определенное лечащим врачом или ветеринаром, в настоящем контексте называют как "терапевтически эффективное количество".

Для сведения, предусматриваемая для лекарственного средства согласно изобретению вводимая доза составляет от 0,1 мг до 10 г в зависимости от типа используемого активного соединения.

Получение соединений общей формулы (I) согласно настоящему изобретению описано в заявке на патент РСТ WO 01/26656.

Если только не указано ничего другого, все технические и научные термины, используемые в настоящем контексте, имеют то же самое значение, которое обычно понятно рядовому специалисту в области, к которой относится настоящее изобретение. Точно так же, все публикации, заявки на патенты, все патенты и все другие ссылки, указанные в настоящем контексте, включены путем ссылки.

Следующие примеры даны для пояснения вышеуказанных процедур и ни в коем случае не должны рассматриваться как ограничивающие объем охраны изобретения.

Примеры

Следующие соединения:

- гидрохлорид 4-[3,5-бис(1,1-диметилэтил)-4-гидроксифенил]-N-метил-2-тиазолметанамина (соединение 1);

- гидрохлорид N-метил[4-(10Н-фенотиазин-2-ил)-1,3-тиазол-2-ил]метанамина (соединение 2);

- гидрохлорид 2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[(4-метилпиперазин-1-ил)-метил]-1,3-тиазол-4-ил}фенола (соединение 3);

- гидрохлорид 4-[2-(аминометил)-1,3-тиазол-4-ил]-2,6-ди(трет-бутил)фенола (соединение 4); и

- гидрохлорид 2,6-ди-трет-бутил-4-{2-[1-(метиламино)этил]-1,3-тиазол-4-ил}фенола (соединение 5);

были подвергнуты тесту в отношении исследования набухания митохондрий, выделенных из печени крысы, как описано ниже.

Все вышеуказанные соединения описаны в заявке РСТ WO 01/26656 или доступны за счет использования способов синтеза, аналогичных таковым, описанным в этом документе.

Принцип теста

Тест состоит в измерении воздействия соединений на набухание выделенных из печени крысы митохондрий, осуществляемом с помощью спектрофотометрического коэффициента поглощения. Набухание выделенных из печени митохондрий использовали в качестве индикатора модификации транзиторной проницаемости, при этом набухание индуцировали различными агентами: трет-бутилгидропероксидом (t-BH), метилфенилпиридиниевым ионом (МРР⁺) и дигидрофосфатом калия (Pi) в присутствии кальция (Са²⁺).

трет-Бутилгидропероксид метаболизировали с помощью снижающей восстановительную способность митохондрии системы глутатион-пероксидаза, представляемой NAD(P)H и глутатионом (GSH) и приводящей к окислению групп SH.

МРР⁺ представляет собой ингибитор комплекса I цепи переноса электронов митохондрии, провоцирующий генерацию свободных радикалов, уменьшение потенциала мембраны, облегчающий раскрытие транзиторной поры и выделение цитохрома с.

Pi вызывает транзиторную проницаемость, уменьшая концентрацию аденозиндифосфата (АДФ) матрицы, стимулируя липидное перокисление и продуцирование свободных митохондриальных радикалов.

Получение митохондрий печени крысы

Печень крысы вида Sprague-Dawley массой 240-260 г, содержавшейся натощак в бодрствующем состоянии (Charles River, Франция), извлекали, взвешивали, измельчали в 50 мл буфера для экстракции (225 ммоль маннита; 75 ммоль сахарозы; 0,2 ммоль этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТУ); 5 ммоль ТРИС-HCl, рН 7,4 при температуре 4°С) и гомогенизировали согласно протоколу, описанному Johnson и Lardy ("Isolation of liver and kidney mitochondria", Methods Enzymol., 10, 94-96 (1967)) и Holtzmann и др. ("Effects of osmolar changes on isolated mitochondria of brain and liver", J. Neurochem., 30, 1409-1419 (1978)), с помощью стеклянного гомогенизатора (5 возвратно-поступательных движений). Гомогенат центрифугировали в течение 5 минут при ускорении 1085 g. Полученный в результате супернатант центрифугировали при ускорении 17000 g в течение 10 минут. Затем осадок обрабатывали с помощью 12,5 мл буфера для экстракции при умеренном перемешивании с помощью стеклянной мешалки, затем суспензию центрифугировали при ускорении 17000 g в течение 10 минут. Полученный осадок после центрифугирования снова суспендировали в 1 мл буфера для экстракции при температуре 4°С. Концентрацию митохондриальных протеинов (68,48±1,17 мг/мл) определяли методом Lowry ("Protein measurement with the folin phenol reagent", J. Biol. Chem., 93, 265-275 (1951)). Митохондриальную суспензию хранили во льду и использовали в течение 3 часов.

Определение набухания митохондрий печени крысы

Количественное определение набухания митохондрий осуществляли путем измерения с помощью спектрофотометра (Shimadzu UV-2401PC) светорассеяния при 540 нм. Митохондрии (конечная концентрация 0,5 мг протеинов/мл при индуцировании набухания с помощью Pi или 1 мг/мл при индуцировании набухания с помощью t-BH и МРР ⁺) инкубировали в 3,6 мл буфера, содержащего:

- когда агентом индуцирования набухания является t-BH: 225 ммоль маннита, 75 ммоль сахарозы, 3 ммоль ГЕПЕСа, 5 ммоль сукцината и 0,5 нмоль ротенона на мг протеинов, рН 7,4, при температуре 25°С;

- когда агентом индуцирования является МРР+: 225 ммоль маннита, 75 ммоль сахарозы, 5 ммоль ГЕПЕСа, 5 ммоль/0,5 ммоль глутамата/малата, рН 7,4, при температуре 25°С;

- когда агентом индуцирования является Pi: 150 ммоль сахарозы, 65 ммоль KCl, 2,5 ммоль сукцината, 5 мкмоль ротенона и 10 ммоль ГЕПЕС-КОН, рН 7,4, при температуре 30°С.

Объем 1,8 мл соответствующей суспензии вводили в измерительную кювету спектрофотометра, а также в так называемую эталонную кювету в присутствии тестируемых соединений. Определение изменения коэффициента поглощения в случае двух кювет осуществляли параллельно.

Индуцирование набухания митохондрий печени крысы

Когда агентом индуцирования является t-BH, то после инкубации в течение 2 минут при температуре 25°С добавляли 70 ммоль CaCl₂ и спустя 2 минуты в измерительную кювету вводили 200 мкмоль t-BH [модифицированный способ Broekemeier и Pfeiffer ("Cyclosporin A is a potent inhibitor of the inner membrane permeability transition in liver mitochondria", J. Biol. Chem., 264, 7826-7830 (1989))].

Когда агентом индуцирования является МРР+, то после инкубации в течение 5 минут при температуре 25°С в измерительную кювету вводили 1 ммоль МРР+ и 50 мкмоль Са²⁺, затем спустя 2 минуты - 300 мкмоль Pi [модифицированный способ Cassarino и др. ("The parkinsonian neurotoxin MPP+opens the mitochondrial permeability transition pore and releases cytochrome c in isolated mitochondria via an oxidative mechanism", Biochim. Biophys. Acta, 1453, 49-62 (1999))].

Когда агентом индуцирования является Pi, то после инкубации в течение 1 минуты при температуре 30°С в две кюветы вводили 10 мкмоль CaCl ₂. Спустя 5 минут вызывали набухание за счет введения только в измерительную кювету 4 ммоль дигидрофосфата калия [модифицированный способ Kowaltowski и др. ("Effect of inorganic phosphate concentration on the nature of inner mitochondrial membrane alterations mediated by Ca²⁺ions. A proposed model for phosphate-stimulated lipid peroxidation", J. Biol. Chem., 271, 2929-2934 (1996)) и Elimadi и др. ("Trimetazidine counteracts the hepatic injury associated with ischemia - reperfusion by preserving mitochondrial function", J. Pharmacol. Exp.Ther., 286, 23-28 (1998))].

Анализ данных

Скорость уменьшения коэффициента поглощения А₅₄₀ пропорциональна скорости рекрутинга митохондрий в фазе модификации транзиторной проницаемости. Эту скорость выражали в виде А₅₄₀/мин/мг протеина, рассчитываемую исходя из тангенса наиболее наклонной части коэффициента поглощения в зависимости от времени (UV-2101/3101PC, программа обеспечения Optional Kinetics). Эффективность продуктов, воздействия которых исследовались два-три раза, оценивали по их способности значительным образом уменьшать скорость рекрутинга митохондрий в фазе модификации проницаемости. Сравнения осуществляли при использовании дисперсионного анализа. Величину р<0,05 рассматривали как статистически показательную.

Результаты

Соединения 1-5, указанные выше, в концентрации, равной или ниже 25 мкмоль, значительно снижали скорость рекрутинга митохондрий в фазе модификации проницаемости, индуцированной либо tBH, либо МРР+, либо Pi.