способ коррекции эндотелиальной дисфункции комбинацией амлодипина и l-аргинина при l-name-индуцированном дефиците оксида азота
Классы МПК: | A61K31/4422 1,4-дигидропиридины, например нифедипин, никардипин A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота A61P9/12 антигипертензивные средства |
Автор(ы): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Кочкаров Владимир Исхакович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Гладченко Михаил Петрович (RU), Артюшкова Елена Борисовна (RU), Новиков Олег Олегович (RU), Афанасьев Юрий Иванович (RU), Жилякова Елена Теодоровна (RU), Пашин Евгений Николаевич (RU), Тихова Любовь Ивановна (RU), Даниленко Людмила Михайловна (RU), Рыкова Нина Ивановна (RU), Корокина Лилия Викторовна (RU), Гуреева Елена Геннадьевна (RU), Маяков Александр Игоревич (RU), Микаелян Павел Керопович (RU), Муляр Александр Георгиевич (RU), Метельская Виктория Алексеевна (RU), Гуманова Надежда Георгиевна (RU), Филиппенко Николай Григорьевич (RU) |
Патентообладатель(и): | Покровский Михаил Владимирович (RU), Кочкаров Владимир Исхакович (RU), Покровская Татьяна Григорьевна (RU), Артюшкова Елена Борисовна (RU) |
Приоритеты: |
подача заявки:
2005-12-28 публикация патента:
10.04.2007 |
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции. Для этого в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам в дозе 25 мг/кг и на фоне этого вводят амлодипин внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и L-аргинин внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг однократно в сутки. Способ обеспечивает эффективную коррекцию в определенных условиях моделирования. 2 табл.
(56) (продолжение):
CLASS="b560m"стенокардией напряжения. Тер. архив, 2000, т.72, № 8, с.24-27. HIGASHI Y. et al. Angiotensin-converting enzyme inhibition, but not calcium antagonism, improves a response of the renal vasculature to L-arginine in patients with essential hypertension. Hypertension. 1998 Jul; 32 (1):16-24. Найдено 20.02.2006. Найдено в Интернет.../query fogi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=9674632&&query.
Формула изобретения
Способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий введение амлодипина, отличающийся тем, что в эксперименте моделируют дисфункцию ежедневным в течение 7 сут внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам в дозе 25 мг/кг и на фоне этого вводят амлодипин внутрижелудочно в дозе 0,5 мг/кг и L-аргинин внутрибрюшинно в дозе 200 мг/кг однократно в сутки.
Описание изобретения к патенту
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии.
Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью амлодипина, относящегося к антагонистам кальция дигидропиридинового ряда. Согласно описанию В.С.Зодионченко, Т.В.Адашевой, А.П.Сандомирской в статье «Дисфункция эндотелия и артериальная гипертензия: терапевтические возможности», Русский медицинский журнал, том 10, 2002, с.11-16, который заключается в пероральном приеме препаратов этой группы у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.
Основным недостатком способа является опосредованный механизм действия амлодипина при эндотелиальной дисфункции, связанный с его антиоксидантными свойствами, увеличением активности супероксиддисмутазы и за счет уменьшения разрушения NO в стенке сосуда, как следствие, повышением биодоступности оксида азота (NO). Однако одним из главных факторов развития данного патофизиологического состояния, особенно при эссенциальной артериальной гипертензии, является повреждение в системе L-аргинин-NO, приводящее к нарушению базального освобождения оксида азота (NO), которое не корригируется при применении только одного амлодипина, так как при наличии ингибитора NO-синтазы он не оказывает достаточного эффекта. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при повреждении в системе L-аргинин-NO, которое связано в основном с недостаточностью эндотелиальной NO-синтазы, с помощью амлодипина неудовлетворительны.
Техническим результатом изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование амлодипина, относящегося к антагонистам кальция дигидропиридинового ряда и донатора NO - L-аргинина.
Технический результат достигается тем, что на фоне моделирования эндотелиальной дисфункции в эксперименте внутрибрюшинным введением лабораторному животному в течение 7 суток блокатора синтеза NO L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится ее коррекция внутрижелудочным введением амлодипина в дозе 0,5 мг/кг однократно в сутки и внутрибрюшинным введением донатора NO L-аргинина в дозе 200 мг/кг также однократно в сутки, которая приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как L-аргинин является основным субстратом для синтеза NO и одновременно активатором его ферментативного пути образования в сосудистом эндотелии.
Способ осуществляется следующим образом
Опыты проводят на белых крысах самцах линии Wistar массой 250-300 г. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут. На 7 день от начала эксперимента под наркозом (этаминал-натрия 50 мг/кг) вводят катетер в левую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Показатели гемодинамики: систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) измеряют непрерывно посредством датчика и компьютерной программы "Bioshell". Функциональные пробы: эндотелий зависимая вазодилатация (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, эндотелий независимая вазодилатация (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг.
При статистической обработке данных рассчитывали среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считали достоверными при p<0,05.
Пример конкретного выполнения.
Болюсное внутривенное введение АХ в течение 3-5 сек приводило к резкому падению артериального давления, достигающего пика у интактных животных для систолического давления (САД) 84,3±4,4, для диастолического давления (ДАД) - 38,7±2,8 и для среднего артериального давления (СрАД) 53,9±2,7 мм рт.ст., при этом в течение первых 2-3 сек развивалась резкая брадикардия до 130-150 ударов в минуту. Восстановление АД происходило в среднем за 42,2±0,8 сек после нормализации сердечного ритма. ЭНЗВ также характеризовалась снижением САД до 83,0±3,7, ДАД до 42,1±4,4 и СрАД до 55,7±3,5 мм рт.ст. с последующим полным восстановлением в среднем в течение 45,1±1,0 сек. Блокада NO-синтазы с помощью длительного, ежедневного, в течение 7-суток внутрибрюшинного введения L-NAME (N-нитро-L-аргинин метиловый эфир в дозе 25 мг/кг) вызывало артериальную гипертензию (САД - 190,3±6,7, ДАД - 145,0±3,9, СрАД - 160,1±4,6 мм рт.ст.) и приводила к меньшему снижению показателей АД после введения АХ (САД до 110,6±5,2, ДАД до 82,8±6,6, СрАД до 92,1±6,1 мм рт.ст.) и НП (САД до 88,7±4,7, ДАД до 50,8±4,2 и СрАД до 63,4±4,1 мм рт.ст.) по сравнению с интактными животными.
Одновременное введение L-NAME и амлодипина (0,5 мг/кг внутрижелудочно) не приводило к снижению показателей исходных значений АД (САД - 186,3±15,2, ДАД - 131,1±7,0 мм рт.ст.), в экспериментах, где еще дополнительно вводился L-аргинин (200 мг/кг внутрибрюшинно) отмечалось потенциирование гипотензивного действия: САД - 144,8±7,6 ДАД - 71,6±9,0 мм рт.ст. (таблица 1.).
Таблица 1 | ||||
Динамика показателей АД и ЧСС при моделировании дефицита оксида азота и коррекции эндотелиальной дисфункции амлодипином с использованием L-аргинина | ||||
Группы животных | Функциональные пробы | САД, мм рт.ст. | ДАД, мм рт.ст. | ЧСС, уд. в мин. |
Интактные | Исходные | 137,7±3,7 | 101,9±4,3 | 420,0±9,0 |
ЭЗВ с АХ | 84,3±4,5 | 38,7±2,8 | 416,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 83,0±3,7 | 42,1±4,4 | 415,0±10,0 | |
Получавшие L-NAME (25 мг/кг) | Исходные | 190,3±6,7 * | 145,0±3,9* | 428,0±11 |
ЭЗВ с АХ | 110,6±5,2* | 82,8±6,6* | 426,0±14,0 | |
ЭНЗВ с НП | 88,7±4,7 | 50,8±4,2 | 426,0±13,0 | |
L-NAME (25 мг/кг)+Амлодипин (0,5 мг/кг) | Исходные | 186,3±15,2 | 131,1±7,0 | 410,0±10,0 |
ЭЗВ с АХ | 93,1±6,0 * | 71,6±9,0* | 390,0±7,7 | |
ЭНЗВ с НП | 80,2±7,7 | 44,1±6,6 | 420,0±11,0 | |
L-NAME (25 мг/кг)+амлодипин (0,5 мг/кг)+L-аргинин (200 мг/кг) | Исходные | 144,8±7,6** | 111,8±7,6 ** | 390,0±9,7 |
ЭЗВ с АХ | 77,0±5,3** | 47,1±5,7** | 379,0±5,7 | |
ЭНЗВ с НП | 74,4±8,0 | 42,8±5,1 | 393,0±6,7 | |
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных | ||||
** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+амлодипин |
Принципиальная разница в ЭЗВ и ЭНЗВ у интактных животных и животных с введением ингибитора NO-синтазы L-NAME закономерно привело нас к необходимости выведения специального показателя, характеризующего степень эндотелиальной дисфункции, являющегося отношением площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение НП к площади треугольника над трендом реакции восстановления АД в ответ на введение АХ.
Мы рассчитывали это отношение у каждого животного интактной группы и крыс после моделирования блокады NO-синтазы и получили разницу данного показателя в 5 раз - соответственно 1,1 у интактных и 5,4 у животных, получавших L-NAME.
Таким образом, для дальнейшей оценки влияния АХ и НП при ЭЗВ и ЭНЗВ нами использовано это отношение как показатель коррекции эндотелиальной дисфункции. Так, в группе, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только амлодипин, это отношение соответствовало значению 2,1±0,3, а в группе с дополнительным введением к амлодипину донатора NO L-аргинина - 1,5±0,1 (таблица 2).
Таблица 2 | |||||
Показатели, отражающие коррекцию эндотелиальной дисфункции на фоне введения L-NAME амлодипином и амлодипином в сочетании с L-аргинином. | |||||
Группы животных | Функциональные пробы | Прирост падения сосудистой реакции по СрАД (мм рт.ст.) | Время сосудистой реакции (сек) | Площадь сосудистой реакции (усл. ед) | Отношение площадей сосудистой реакции АХ к НП |
L-NAME+амлодипин | АХ | 81,7±5,6 | 39,3±2,3 | 1350,4±216,9 | 2,1±0,3 |
НП | 87,0±6,0 | 68,1±4,6 | 2771,0±174,3 | ||
L-NAME+амлодипин+L-аргинин | АХ | 82,3±3,5 | 35,4±1,9 | 1525,2±218,4 | 1,5±0,1* |
НП | 73,0±6,0 | 59,0±9,5 | 2274,1±105,1 | ||
* - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME+амлодипин |
Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции амлодипина при сочетанием его применении с L-аргинином.
Класс A61K31/4422 1,4-дигидропиридины, например нифедипин, никардипин
Класс A61K31/197 амино- и карбоксильная группы присоединены к одной и той же ациклической углеродной цепи, например гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), бета-аланин, эпсилон-аминокапроновая кислота, пантотеновая кислота
Класс A61P9/12 антигипертензивные средства