способ биологической борьбы с плесневением сена

Формула изобретения

Способ биологической борьбы с плесневением сена путем обработки микробами-антагонистами рода Bacillus, отличающийся тем, что для снижения пораженности сена плесневыми грибами рода Penicillium, Aspergillus и Stachybotrus используют препарат "Сахабактисубтил", состоящий из равных частей штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и санитарии, в частности к защите коров от поражения токсикообразующими плесневыми грибами и может быть использовано для профилактики алиментарных микотоксикозов животных.

Известен способ борьбы с плесневением кормов (СССР. №751382, кл. А 23 К 1/00, опублик. 30.07.80 г., бюл. №28).

Однако штамм Bac.subtilis №3, используемый в способе, проявляет антагонистические свойства по отношению к Stachylobotrus alternans и Dendrodochium toxicum, но не обладает свойствами задерживать рост и развитие токсинообразующих видов грибов, таких как Aspergillus flavus, Aspergillus niqer, Aspergillus fumiqatus, Penicillium cibtrinum, Penicillium Viridicatum, наиболее распространенных и причиняющих значительный экономический ущерб в условиях Крайнего Севера.

Известен способ профилактики диарейных болезней новорожденных телят и поросят путем использования суспензии штаммов "Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП", обладающих антагонистической активностью в отношении патогенных бактерий (патент Российской Федерации "Способ профилактики диарейных болезней новорожденных телят и поросят" №2218924 от 20.12.2003 г.).

Препарат "Сахабактисубтил" состоит из суспензии штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в разных соотношениях. Препарат задерживает рост и развитие наиболее опасных токсикообразующих плесневых грибов рода Asperqillus, Penicillium, Stachylobotrus.

Препарат "Сахабактисубтил" изготовляют из штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях, депонированных в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ) (справки о депонировании штаммов от 6 февраля 2001 г. №180/15 и №181/15).

Штаммы могут быть получены в лаборатории по разработке микробных препаратов ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства СО РАСХН и ВГНКИ.

Изготовление, контроль и испытание препарата "Сахабактисубтил" проводят согласно Техническим условиям "Препарата "Сахабактисубтил" для профилактики и лечения диареи новорожденных телят" №9383-003-00670203-01 от 12 марта 2001 г. и патенту Российской Федерации №2218924, А 61 D 1/00, опублик. 20.12.2003 г., бюл. №35).

Технический результат изобретения - борьба с плесневением сена, снижающая пораженность его токсинами грибов Aspergillus flavus, Aspergillus niqer, Aspergillus fumiqatus, Stachylobotrus alternan, Penicillium cibtrinum и Penicillium Viridicatum и исключающая тем самым отравление животных микотоксинами. Для биологической борьбы с поражением с токсикообразующими плесневыми грибами сено, собранное в валки, обрабатывают препаратом "Сахабактисубтил" из расчета 500 млрд. микробных клеток на 1 тонну корма.

Техническая задача изобретения решается тем, что штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП выращивают в мясопептонном агаре рН 7,0-7,2 в течение 5-7 суток при 37°С, затем суспензируют в физиологическом растворе хлористого натрия в концентрации 5 млрд. микробных клеток в 1 мл.

Антогонистическую активность штаммов бактерий Вас.subtilis в отношении токсикообразующих плесневых грибов определяют методом диффузии в агар на средах Чапека и МПА. Для этого штаммы бактерий высевают сплошным газоном на поверхность среды в чашках. В качестве тест-культур используют плесневые грибы Penicillium cibtrinum, Asperqillus fumiqatus и Stachylobotrus alternans. Микологической иглой осторожно захватывают кусочек мицелия (инокулят) и помещают на поверхность среды. Посевы культивируют при температуре 22-25°С, через 10-15 дней ведут учет по зоне задержки роста вокруг инокулята. Для контроля используют среды без штаммов бактерий. Штаммы бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП проявляют выраженную антогонистическую (фунгицидную) активность по отношению к плесневым грибам рода Penicillium, Aspergillus и Stachylobotrus.

Результаты в таблице.

Для предупреждения контаминации кормов токсикообразующими плесневыми грибами используют препарат "Сахабактисубтил", состоящий из суспензий штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП в равных соотношениях. Одну дозу препарата в количестве 10 мл, содержащего 50 млрд. микробных клеток, растворяют в 200 мл воды. Препарат вносят из расчета 500 млн. микробных клеток на 1 кг сена. На обработку 1 т сена расходуют 10 доз препарата, содержащего 500 млрд. микробных клеток или 2 л раствора.

Обработку сена, собранного в валки, препаратом "Сахабактисубтил" проводят аэрозольным способом при помощи серийно выпускаемой техники. Обработанный корм после экспозиции 1 ч подвергают рулонированию. Через 3 месяца проводят биохимические, микологические и бактериологические исследования рулонов сена, обработанного препаратом "Сахабактисубтилом" и необработанного.

Микологические исследования показывают, что в случае обработки сена выделяются 10,16±1,14 КОЕ плесневых грибов в 1 г. При этом грибы рода Penicillium не обнаруживаются. В пробах сена без обработки отмечен значительный рост плесневых грибов - 96,1±6,14 КОЕ в 1 г. Следовательно число колоний плесневых грибов после обработки препаратом "Сахабактисубтил" снижается в 9-10 раз.

В сене, обработанном препаратом "Сахабактисубтил", биохимическими исследованиями установлено повышение содержания протеина, клетчатки, фосфора и углеводов по сравнению с контролем (необработанное сено).

Бактериологические исследования показали снижение содержания стафилококков в 34 раза, а эшерихий - 3 раза.

Для изучения влияния кормов, обработанных препаратом "Сахабактисубтил", на организм молодняка крупного рогатого скота отбирают 10 голов молодняка в возрасте 6-8 месяцев. Первой группе (5 голов) дают сено, обработанное препаратом "Сахабактисубтил". Контрольная группа (5 голов) получает необработанное сено. Опыт проводят в течение 30 дней. Применение в рационе молодняка корма, обработанного препаратом "Сахабактисубтил" обеспечивает повышение прироста живой массы на 29,5%, показателей иммунобиологической реактивности и способствует нормализации кишечного микробиоценоза.

Таким образом, обработка сена в период заготовки препаратом "Сахабактисубтил" подавляет рост и развитие токсинообразующих плесневых грибов рода Penicillium, Aspergillus и Stachylobotrus, и тем самым снижает пораженность микотоксинами, а также способствует сохранению питательных качеств корма животных. Препарат "Сахабактисубтил" может быть использован в защите сена в период уборки от поражения токсинообразующими плесневыми грибами и профилактике алиментарных микотоксикозов животных.

Таблица Результаты изучения антагонистических свойств штаммов бактерий Bacillus subtilis ТНП-3-ДЕП и Bacillus subtilis ТНП-5-ДЕП
Сроки наблюдений (ДНИ)	Штаммы бактерий	Тест-культуры
		Penicillium	Stachylobotrus	Aspergillus
2	Вас.subtilis ТНП-3	-	-	-
	Вас.subtilis ТНП-5	О	-	-
5	Вас.subtilis ТНП-3	-	-	-
	Вас.subtilis ТНП-5	О	О	-
8	Вас.subtilis ТНП-3	-	-	-
	Вас.subtilis ТНП-5	О	О	-
10	Вас.subtilis ТНП-3	+	-	-
	Вас.subtilis ТНП-5	±	+	-
Примечание: О - начало роста грибов ± - размер колоний 3 мм + - размер колоний 5 мм - - отсутствие колонии