6,7-дигидро-5h-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-оны, регулирующие воспалительные цитокины (варианты), и фармацевтическая композиция

Формула изобретения

1. Соединение формулы

и его фармацевтически приемлемые соли,

в которой R¹ обозначает:

а) замещенный или незамещенный фенил, где заместители выбираются из атомов галогена или галоидС _1-6алкила;

R^4b является замещенным или незамещенным 1-3 заместителями арилом, выбранным из фенила, нафтила, где заместители выбираются из атомов галогена, C_1-6 алкила, галоид С_1-6алкила, C_1-6алкоксила, циано, амино, C_1-6ациламино, C_1-6алкансульфонила, или два соседних заместителя в бензольном кольце образуют диоксольную группу; или незамещенным или замещенным 6-членным азотсодержащим гетероарилом с 1-3-атомами азота в кольце, где заместители выбираются из атомов галогена.

2. Соединение по п.1, в котором R ¹ обозначает 4-фторфенил, 3-фторфенил, 2,4-дифторфенил, 4-хлорфенил, 3-хлорфенил, 2,4-дихлорфенил или 3-трифторфенил.

3. Соединение по п.2, в котором R¹ является 4-фторфенилом.

4. Соединение по п.1, в котором R^4b обозначает арил или галогензамещенный арил, выбранный из группы, состоящей из фенила, 2-фторфенила, 3-фторфенила, 4-фторфенила, 2,4-дифторфенила, 2,6-дифторфенила, 3,5-дифторфенила, 2,4,6-трифторфенила, 2-хлорфенила, 3-хлорфенила, 4-хлорфенила, 2,4-дихлорфенила, 2,6-дихлорфенила, 3,5-дихлорфенила, 2,4,6-трихлорфенила, нафтилен-1-ила и нафтилен-2-ила.

5. Соединение по п.1, в котором R^4b обозначает замещенный арил, выбранный из группы, состоящей из 2-аминофенила, 3-аминофенила, 4-аминофенила, 2-метилфенила, 3-метилфенила, 4-метилфенила, 2,4-диметилфенила, 2-метоксифенила, 3-метоксифенила, 4-метоксифенила, 2-цианофенила, 3-цианофенила и 4-цианофенила.

6. Соединение по п.1, в котором R^4b обозначает замещенный арил, выбранный из группы, состоящей из 4-(метансульфонил)фенила, 4-(этансульфонил)фенила, 4-(пропансульфонил)фенила, 2-(N-ациламино)фенила, 3-(N-ациламино)фенила, 4-(N-ациламино)фенила и 3-бензо[1,3]диоксол-5-ила.

7. Соединение по п.1, в котором R^4b обозначает арил, выбранный из группы, состоящей из 2-трифторметилфенила, 3-трифторметилфенила, 4-трифторметилфенила и 3,5-бис(трифторметил)фенила.

8. Соединение по п.1, в котором R^4b обозначает гетероарил или замещенный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридин-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила, пиримидин-2-ила, пиримидин-4-ила, пиримидин-5-ила, 4,6-дихлорпиримидин-5-ила и s-триазинила.

9. Соединение формулы

в которой R^4b является незамещенным или замещенным 1-3 заместителями арилом, выбранным из фенила, нафтила, где заместители выбираются из атомов галогена, C _1-6алкила, галоидС_1-6алкила, C_1-6 алкоксила, циано, амино, C_1-6ациламино, C_1-6 алкансульфонила, или два соседних заместителя в бензольном кольце образуют диоксольную группу; или

незамещенным или замещенным 6-членным азотсодержащим гетероарилом с 1-3-атомами азота в кольце, где заместители выбираются из атомов галогена,

и их фармацевтически приемлемые соли.

10. Соединение по п.9, в котором указанный арил или замещенный арил обозначает фенил или нафтил.

11. Соединение по п.10, в котором указанный арил или замещенный арил выбран из группы, состоящей из фенила, 2-фторфенила, 3-фторфенила, 4-фторфенила, 2,6-дифторфенила, 2,6-дихлорфенила, 3-цианофенила, 2,4-диметилфенила, 3-трифторметилфенила, 4-трифторметилфенила,4-метилфенила,4-метоксифенила и 3-бензо[1,3]диоксол-5-ила.

12. Соединение по п.10, в котором гетероарил или замещенный гетероарил обозначает пиридил,пиримидинил или триазинил.

13. Соединение по п.12, в котором указанный гетероарил или замещенный гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридин-2-ила, пиридин-3-ила, пиридин-4-ила, пиримидин-2-ила, пиримидин-4-ила, пиримидин-5-ила и 4,6-дихлорпиримидин-5-ила.

14. Соединение по п.9, в котором R^4b обозначает фенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 4-фторфенил, 2,6-дифторфенил, 2,6-дихлорфенил, 3-цианофенил, 2,4-диметилфенил, 3-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил, 4-метилфенил, 4-метоксифенил, 3-(N-ациламино)фенил, 4,6-дихлорпиримидин-5-ил и 3-бензо[1,3]-диоксол-5-ил.

15. Соединение и его фармацевтически приемлемые соли выбранные из группы, состоящей из

2-(4-фторфенил)-3-(2-фениламинопиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а] пиразол-1-она,

3-[2-(2,6-дифторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-она,

3-[2-(2,6-дихлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-она,

2-(4-фторфенил)-3-[2-(пиридин-2-иламино)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-она, и

3-[2-(4,6-дихлорпиримидин-5-иламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-она.

16. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами фактора некроза опухоли (TNF- ), содержащая

а) эффективное количество одного или нескольких бициклических пиразолонов или их фармацевтически приемлемой соли, причем указанное соединение имеет формулу

в которой R¹ обозначает:

а) замещенный или незамещенный фенил, где заместители выбираются из атомов галогена или галоид С_1-6алкила;

R ^4b является замещенным или незамещенным 1-3 заместителями арилом, выбранным из фенила, нафтила, где заместители выбираются из атомов галогена, C_1-6алкила, галоидС_1-6 алкила, C_1-6алкоксила, циано, амино, C_1-6 ациламино, C_1-6алкансульфонила, или два соседних заместителя в бензольном кольце образуют диоксольную группу; или незамещенным или замещенным 6-членным азотсодержащим гетероарилом с 1-3-атомами азота в кольце, где заместители выбираются из атомов галогена,

б) один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Описание изобретения к патенту

Настоящее изобретение относится к 6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-онам, которые ингибируют внеклеточное выделение воспалительных цитокинов; указанные цитокины ответственны за одно и более болезненных состояний человека или высших млекопитающих. Настоящее изобретение относится также к композиции, содержащей упомянутые 6,7-дигидро-5Н- пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оны, и способу предупреждения, снижения или иного типа регуляции ферментов, которые считаются активными компонентами, ответственными за указанные болезненные состояния.

Интерлейкин-1 (IL-1) и фактор- некроза опухоли (TNF- ) являются важными биологическими веществами, известными под общим названием "цитокины". Эти молекулы выполняют роль посредников в формировании воспалительного ответа, ассоциированного с иммунологическим распознаванием инфекционных агентов.

Эти провоспалительные цитокины играют роль главных медиаторов во многих болезненных состояниях и синдромах, среди которых ревматоидный артрит, остеоартрит, синдром раздраженной толстой кишки (IBS), септический шок, сердечно-легочная дисфункция, острое респираторное заболевание, кахексия, и потому ответственны за развитие и проявление болезненных симптомов человека.

Именно поэтому существует серьезная потребность в соединениях и фармацевтических композициях, содержащих соединения, которые способны блокировать, снижать, регулировать, уменьшать или предупреждать выделение цитокинов из клеток, которые продуцируют их.

Настоящее изобретение удовлетворяет указанную потребность тем, что было неожиданно обнаружено, что некоторые бициклические пиразолоны и их производные являются эффективными ингибиторами выделения воспалительных цитокинов, среди которых интерлейкин-1 (IL-1) и фактор некроза опухоли (TNF), из клеток, и таким образом предупреждают, снижают или иным образом регулируют ферменты, которые являются активными компонентами, ответственными за описанные болезненные состояния.

Первым аспектом настоящего изобретения являются соединения, в том числе и их энантиомерные и диастереоизомерные формы, и фармацевтически приемлемые соли этих соединений, имеющие формулу:

в которой R¹ обозначает:

а) замещенный или незамещенный арил; или

b) замещенный или незамещенный гетероарил;

каждый из R² выбирают независимо из группы, состоящей из:

а) водорода;

b) -(CH₂)_jO(CH₂)_n R⁸;

c) -(CH₂)_jNR^9a R^9b;

d) -(CH₂)_jCO ₂R¹⁰;

e) -(CH₂)_j OCO₂R¹⁰;

f) -(CH₂) _jCON(R¹⁰)₂;

g) -(CH₂ )_jOCON(R¹⁰)₂;

h) двух из R², которые могут образовывать вместе карбонильную группу;

i) и их комбинации;

R⁸, R ^9a, R^9b и R¹⁰, каждый, независимо обозначает водород, С₁-С₄ алкил и их комбинации; R^9a и R^9b, взятые вместе, могут образовывать 3-7-членное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо; два R¹⁰, взятые вместе, могут образовывать 3-7-членное карбоциклическое или гетероциклическое кольцо; j обозначает число от 0 до 5, n обозначает число от 0 до 5; Z обозначает O, S, NR¹¹ или NOR¹¹; причем R¹¹ обозначает водород или С₁-С₄алкил;

R^4b обозначает замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил.

Другим аспектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, которые способны доставлять соединения согласно изобретению в организм человека или высшего млекопитающего, причем указанные композиции содержат:

а) эффективное количество одного или нескольких соединений согласно настоящему изобретению и

b) один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Другим аспектом настоящего изобретения является способ регулирования одного или нескольких воспалительных цитокинов, являющихся посредниками или модуляторами болезней или болезненных состояний у млекопитающих, причем названный способ включает стадию введения человеку или высшему млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей одно или более соединений согласно настоящему изобретению.

Другим аспектом настоящего изобретения являются формы соединений согласно изобретению, которые при нормальных физиологических условиях высвобождают соединения, описанные выше.

Этот и другие объекты изобретения, характеристики и преимущества будут более понятны специалисту в данной области при чтении дальнейшего подробного описания и приложенной формулы изобретения. Все указанные в описании проценты, отношения и доли являются весовыми, если не оговорено иначе. Все значения температур выражены в градусах Цельсия (°C), если не оговорено иначе. Все цитированные документы, имеющие релевантные части, включены в описание в виде ссылок; цитирование любого документа не должно рассматриваться как признание того факта, что он является близким уровнем техники по отношению к настоящему изобретению.

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые способны быть посредниками, регуляторами или иными ингибиторами внеклеточного выделения некоторых цитокинов, более конкретно - воспалительных цитокинов, причем указанные цитокины играют роль в стимуляции, причинах возникновения и проявления многообразных заболеваний, болезненных состояний или синдромов.

В контексте настоящего изобретения термин "углеводород" обозначает в данном описании любую органическую группу или звено, которые содержат атомы углерода и атомы водорода. В данном описании термин "углеводород" включает гетероциклы, описанные ниже. Примерами различных негетероциклических незамещенных углеводородных групп могут быть пентил, 3-этилоктанил, 1,3-диметилфенил, циклогексил, цис-3-гексил, 7,7-диметилбицикло[2.2.1]-гептан-1-ил и нафт-2-ил.

В данном описании определение "углеводород" включает ароматические (арильные) и неароматические кольца, неограничивающими примерами которых являются циклопропил, циклобутанил, циклопентанил, циклогексанил, циклогексенил, циклогептанил, бицикло[0.1.1]бутанил, бицикло[0.1.2]пентанил, бицикло[0.1.3]гексанил (туянил), бицикло[0.2.2]гексанил, бицикло[0.1.4]гептанил (каранил), бицикло[2.2.1]гептанил (норборанил), бицикло[0.2.4]октанил (кариофилленил), спиропентанил, дициклопентанспиранил, декалинил, фенил, бензил, нафтил, инденил, 2Н-инденил, азуленил, фенантрил, антрил, флуоренил, аценафтиленил, 1,2,3,4-тетрагидронафталенил и другие.

Термин "гетероцикл" включает как ароматические (гетероарильные), так и неароматические гетероциклические кольца, примерами которых могут являться, без ограничения: пирролил, 2Н-пирролил, 3Н-пирролил, пиразолил, 2Н-имидазолил, 1,2,3-триазолил, 1,2,4-триазолил, изоксазолил, оксазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 2Н-пиранил, 4Н-пиранил, 2Н-пиран-2-он-ил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил, s-триазинил, 4Н-1,2-оксазинил, 2Н-1,3-оксазинил, 1,4-оксазинил, морфолинил, азепинил, оксепинил, 4Н-1,2-диазепинил, инденил, 2Н-инденил, бензофуранил, изобензофуранил, индолил, 3Н-индолил, 1Н-индолил, бензоксазолил, 2Н-1-бензопиранил, хинолинил, изохинолинил, хиназолинил, 2Н-1,4-бензоксазинил, пирролидинил, пирролинил, хиноксалинил, фуранил, тиофенил, бензимидазолил и другие, каждый из которых может быть замещен или не замещен.

Примером группы, определяемой термином "алкиленарил", является бензил, имеющий формулу:

а примером группы, определяемой термином "алкиленгетероарил", является 2-пиколил, имеющий формулу:

Термин "замещенный" использован по всему тексту описания. В данном описании термин "замещенный" означает "включающий звенья или группы, которые могут заменять один атом водорода, два атома водорода или три атома водорода в углеводородном звене. Определение замещенный включает также замену атомов водорода при двух смежных атомах углерода с образованием нового звена или новой группы". Например, замещенная группа, у которой может быть заменен только один атом водорода, включает галоген, гидроксил и другие. Группы, замещающие два атома водорода, включают карбонил, оксимино и другие. Группы, замещающие два атома водорода, находящиеся на смежных атомах углерода, включают эпоксигруппу и другие. Группы, замещающие три атома водорода, включают цианогруппу и другие. Эпоксидная группа представляет собой пример замещенной группы, в которой требуется замена атома водорода, находящегося на смежных атомах углерода. Термин "замещенный", используемый в данном описании, указывает, что углеводородное звено, содержащее ароматическое кольцо, алкильную цепь, может иметь один или несколько атомов водорода, замещенных заместителем. Если группа описана как "замещенная", то в ней любое количество атомов водорода может быть заменено. Например, 4-гидроксифенил является "замещенным ароматическим карбоциклическим кольцом", (N,N-диметил-5-амино)-октанил является "замещенной С₈-алкильной группой", 3-гуанидинопропил является "замещенной С₃-алкильной группой" и 2-карбоксипиридинил является "замещенной гетероарильной группой". Примеры, приведенные ниже и не являющиеся ограничительными, представляют собой группы, на которые могут быть заменены атомы водорода, если углеводородная группа определяется как "замещенная":

i) -[C(R¹² )₂]_p(CH=CH)_qR¹², где р обозначает число от 0 до 12; q обозначает число от 0 до 12;

ii) -C(Z)R¹²;

iii) -C(Z)₂ R¹²;

iv) -C(Z)CH=CH₂;

v) -C(Z)N(R ¹²)₂;

vi) -C(Z)NR¹²N(R ¹²)₂;

vii) -CN;

viii) -CNO;

ix) -CF₃, -CCl₃, -CBr₃;

x) -N(R¹²)₂;

xi) -NR¹² CN;

xii) -NR¹²C(Z)R¹²;

xiii) -NR¹²C(Z)N(R¹²)₂;

xiv) -NHN(R¹²)₂;

xv) -NHOR¹² ;

xvi) -NCS;

xvii) -NO₂;

xviii) -OR¹²;

xix) -OCN;

xx) -OCF₃ , -OCCl₃; -OCBr₃;

xxi) -F, -Cl, -Br, -I и их комбинации;

xxii) -SCN;

xxiii) -SO₃ M;

xxiv) -OSO₃M;

xxv) -SO₂N(R ¹²)₂;

xxvi) -SO₂R¹² ;

xxvii) -P(O)H₂;

xxviii) -PO₂ ;

xxix) -P(O)(OH)₂;

ххх) и их комбинации,

где R¹² обозначает водород, замещенный или незамещенный линейный, разветвленный С₁-С₂₀-алкил, или циклический алкил, С₆-С₂₀-арил, С₇ -С₂₀-алкиленарил и их комбинации; М обозначает водород или солеобразующий катион; Z обозначает =О, =S, =NR¹¹ и их комбинации. Подходящими солеобразующими катионами могут быть катион натрия, лития, калия, кальция, магния, аммония и другие.

Первый аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы:

которые представляют собой 2-R^1-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оны.

Второй аспект настоящего изобретения относится к соединениям формулы:

которые представляют собой 2-R¹-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-тионы.

Третий аспект изобретения относится к соединениям формулы:

которые представляют собой 2-R¹-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-илиденамины и их производные.

R является заместителем в положении 2 кольца пиримидин-4-ила в общей формуле; R обозначает:

(a) группу простого эфира формулы -O[CH₂]_kR³; или

(b) группу первичного или вторичного амина формулы -NR^4a R^4b;

где R³ обозначает замещенный или незамещенный С₁-С₄-алкил, замещенную или незамещенную углеводородную циклическую группу, замещенный или незамещенный гетероцикл, замещенный или незамещенный арил или алкиленарил, замещенный или незамещенный гетероарил или алкиленгетероарил; k обозначает число от 0 до 5.

Ниже описаны различные аспекты радикала R настоящего изобретения в случае, когда R является простым эфиром формулы

-O[CH₂]_kR ³. Однако специалист не должен ограничиваться приведенными примерами.

А) R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ (k равен 0) и R³ обозначает замещенный или незамещенный арил.

i) Согласно одному варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является замещенным или незамещенным арилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры R: фенокси, 2-фторфенокси, 3-фторфенокси, 4-фторфенокси, 2,4-дифторфенкоси, 3-трифторметилфенокси, 4-трифторметилфенокси, 2,4-трифторметилфенокси и другие.

ii) Согласно другому варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является замещенным или незамещенным арилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: 2-метилфенокси, 3-метилфенокси, 4-метилфенокси, 2,4-диметилфенокси, 2-цианофенокси, 3-цианофенокси, 4-цианофенокси, 4-этилфенокси и другие.

iii) Согласно следующему варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является замещенным или незамещенным арилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: (2-метокси)фенокси, (3-метокси)фенокси, (4-метокси)фенокси, 3-[(N-ацетил)амино]-фенкоси, 3-бензо[1,3]диоксол-5-ил и другие.

В) R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ (k равен 0) и R³ является замещенным или незамещенным гетероарилом.

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является незамещенным гетероарилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: пиримидин-2-ил, пиримидин-4-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил и другие.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR ³ и R³ является замещенным гетероарилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: 2-аминопиримидин-4-ил и другие.

С) R представляет собой группу простого эфира формулы

-ORH₂R³ (k равен 1) и R ³ является замещенным или незамещенным арилом.

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OCH₂R³ и R³ является замещенным или незамещенным гетероарилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: пиримидин-2-ил, пиримидин-4-ил, 2-аминопиримидин-4-ил, 4-аминопиримидин-6-ил, пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил и другие.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OCH₂R³ и R³ является замещенным или незамещенным алкиленгетероариларилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры: пиридин-3-илэтил, (2-метил-2-пиридин-3-ил)этил и другие.

D) R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ (k равен 0) и R³ является замещенным или незамещенным С ₁-С₄алкилом.

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является незамещенным линейным, разветвленным С₁-С₄алкилом или циклическим алкилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются следующие группы: метил, этил, изопропил, (S)-1-метилпропил и другие.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³ и R³ является замещенным линейным, разветвленным С₁-С ₄алкилом или циклическим алкилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются следующие группы: 2-метоксиэтил, (S)-1-метил-3-метилоксипропил и другие.

Ниже описаны различные аспекты R согласно настоящему изобретению, когда R обозначает амин формулы -NR^4a R^4b, где R^4a и R^4b, каждый, независимо друг от друга обозначают:

a) водород или

b) -[C(R^5aR^5b)]_mR⁶ ;

причем каждый из R^5a и R^5b независимо друг от друга обозначает водород или С₁-С₄ алкил, линейный или разветвленный, группу -OR⁷, -N(R ⁷)₂, -CO₂R⁷, -CON(R ⁷)₂; циклический алкил или их комбинацию; R ⁶ обозначает водород, замещенный или незамещенный С ₁-С₄алкил, замещенный или незамещенный гетероцикл, замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил; группу -OR⁷, -N(R⁷)₂ , -CO₂R⁷, -CON(R⁷)₂ , где R⁷ обозначает водород, водорастворимый катион, С₁-С₄алкил или замещенный или незамещенный арил; m обозначает число от 0 до 5. Однако специалист не должен ограничиваться иллюстрированными в данном описании значениями и примерами.

А) R представляет собой хиральную аминогруппу, в которой R^4a является водородом, R^5a является водородом и R^5b является метилом, причем указанная группа имеет следующую формулу:

и указанную стереохимию.

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным фенилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются: (S)-1-метил-1-фенилметиламино, (S)-1-метил-1-(4-фторфенил)метиламино, (S)-1-метил-1-(4-метилфенил)метиламино, (S)-1-метил-1-(4-метоксифенил)метиламино, (S)-1-метил-1-(2-аминофенил)метиламино, (S)-1-метил-1-(4-аминофенил)метиламино и другие.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным гетероарилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются: (S)-1-метил-1-(пиридин-2-ил)метиламино, (S)-1-метил-1-(пиридин-3-ил)метиламино, (S)-1-метил-1-(пиридин-4-ил)метиламино, (S)-1-метил-1-(фуран-2-ил)метиламино, (S)-1-метил-1-(3-бензо[1,3]диоксол-5-ил)метиламино и другие.

iii) Согласно третьему варианту этого аспекта изобретения R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным C₁-C₄ -алкилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются: (S)-1-метилпропиламино, (S)-1-метил-2-(метокси)этиламино.

В) R представляет собой хиральную аминогруппу, в которой R ^4a обозначает водород, а каждый из R^5a и R ^5b является С₁-С₄алкилом, причем указанная группа имеет формулу:

и указанную стереохимию, когда R^5a , R^5b и R⁶ не являются одинаковыми.

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, не содержащую хиральный центр, неограничивающими примерами этого варианта являются 1,1-диметилэтиламин, 1,1-диметилбензиламин и другие.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным С₁-С₄ алкилом. Неограничивающими примерами этого варианта являются: (S)-1-метил-2-гидрокси-2-метилпропиламин, (S)-1-метил-2-гидрокси-2-метилбутиламин и другие.

С) R представляет собой алкиленариламновую группу, в которой R^4a обозначает водород, и оба радикала R ^5a и R^5b в группе R^4b обозначают водород, R⁶ является замещенным или незамещенным арилом, причем указанная группа имеет формулу:

в которой R¹¹ является водородом или "замещенной группой", определенной выше.

i) Первый вариант этого аспекта включает следующие неограничивающие примеры значений R: бензиламино, (2-аминофенил)метиламино; (4-фторфенил)метиламино, (4-метоксифенил)метиламино; (4-пропансульфонилфенил)метиламино и другие.

ii) Второй вариант этого аспекта включает следующие неограничивающие примеры значений R: (2-метилфенил)метиламино; (3-метилфенил)метиламино; (4-метилфенил)метиламино и другие.

D) R представляет собой аминогруппу, в которой R^4a является водородом, R^4b содержит R^5a, эквивалентный водороду, и R^5b, эквивалентный -CO ₂R⁷ или -CON(R⁷)₂, причем указанная группа имеет формулу:

i) Согласно первому варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным фенилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры групп:

в которых R¹¹ обозначает водород или "заместитель", определенный выше.

ii) Согласно второму варианту этого аспекта R представляет собой аминогруппу, содержащую R⁶, который является замещенным или незамещенным алкилом. Этот вариант включает следующие неограничивающие примеры групп:

R¹ выбирают из:

а) замещенного или незамещенного арила, или

b) замещенного или незамещенного гетероарила.

Согласно первому аспекту R¹ представляет собой фенил, замещенный галогеном, неограничивающими примерами которого являются 4-фторфенил, 2,4-дифторфенил, 4-хлорфенил и другие.

Каждый из R² выбирают независимо из группы, состоящей из:

a) водорода,

b) -(CH₂ )_jO(CH₂)_nR⁸,

c) -(CH₂)_jNR^9aR^9b ,

d) -(CH₂)_jCO₂R¹⁰ ,

e) -(CH₂)_jOCO₂R ¹⁰,

f) -(CH₂)_jCON(R¹⁰ )₂,

g) -(CH₂)_jOCON(R ¹⁰)₂,

h) двух из R², взятых вместе, которые могут образовывать карбонильную группу,

i) и их комбинации;

причем каждый из R⁸, R ^9a, R^9b и R¹⁰ независимо представляет собой водород, С₁-С₄алкил и их комбинацию; R^9a и R^9b, взятые вместе, могут образовывать карбоциклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее 3-7 атомов углерода; два из R¹⁰, взятые вместе, могут образовывать карбоциклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее 3-7 атомов углерода; j обозначает число от 0 до 5, n обозначает число от 0 до 5.

Первый аспект настоящего изобретения, относящийся к R², включает соединения формулы:

в которой каждый из R² является водородом.

Второй аспект изобретения относится к соединениям формулы:

в которой R⁸ является водородом или С₁-С₄алкилом.

Третий аспект изобретения относится к соединениям формулы:

в которой каждый из R^9a и R^9b независимо обозначает водород, метил, или R^9a и R^9b, взятые вместе, образуют пиперидиновое или морфолиновое кольцо.

Четвертый аспект изобретения относится к соединениям формулы:

в которой один из R² обозначает -CO ₂R¹⁰, а другой R² обозначает водород; один R¹⁰ обозначает водород или метил.

Z обозначает O, S, NR¹¹ или NOR¹¹; R¹¹ является водородом или С₁-С₄алкилом. Первый аспект настоящего изобретения относится к случаю, когда Z обозначает атом кислорода, и предусматривает 2-R¹-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-оны, второй аспект настоящего изобретения относится к случаю, когда Z обозначает атом серы, и предусматривает 2-R¹-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-тионы, третий аспект настоящего изобретения относится к случаю, когда Z обозначает группу NR ¹¹, и предусматривает 2-R¹-замещенные-3-(2-R-замещенные-пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-илиденамины и их производные.

Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии, что соединения, которые входят в Категорию IV настоящего изобретения, обладают высокой ингибирующей активностью в отношении цитокинов. Соединения, которые входят в Категорию IV, имеют следующую формулу:

в которой R¹ представляет собой:

a) замещенный или незамещенный арил, или

b) замещенный или незамещенный гетероарил,

причем каждый из R² выбирают независимо из группы, состоящей из:

а) водорода,

b) -(CH₂)_jO(CH₂)_n R⁸,

c) -(CH₂)_jNR^9a R^9b,

d) -(CH₂)_jCO ₂R¹⁰,

e) -(CH₂)_j OCO₂R¹⁰,

f) -(CH₂) _jCON(R¹⁰)₂,

g) -(CH₂ )_jOCON(R¹⁰)₂,

h) двух из R², взятых вместе, которые могут образовывать карбонильную группу,

i) и их комбинации;

причем каждый из R ⁸, R^9a, R^9b и R¹⁰ независимо представляет собой водород, С₁-С₄алкил и их комбинацию;

R^9a и R^9b, взятые вместе, могут образовывать карбоциклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее 3-7 атомов углерода;

два из R¹⁰ , взятых вместе, могут образовывать карбоциклическое или гетероциклическое кольцо, содержащее 3-7 атомов углерода; j обозначает число от 0 до 5, n обозначает число от 0 до 5;

Z обозначает O, S, NR¹¹ или NOR¹¹; R¹¹ является водородом или С₁-С₄алкилом;

R ^4b обозначает замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил.

Первый и второй аспекты соединений Категории IV относятся к соединениям формулы

Согласно первому аспекту R¹ представляет собой замещенный арил, выбранный из 4-фторфенила, 3-фторфенила, 2,4-дифторфенила, 4-хлорфенила, 3-хлорфенила, 2,4-дихлорфенила или 3-трифторфенила. Два конкретных значения R¹, которые придают соединениям способность противостоять более эффективно выделению цитокина, включают 4-фторфенил и 3-трифторметилфенил, особенно 4-фторфенил.

Согласно первому аспекту R⁴ представляет собой замещенную и незамещенную арильную группу.

Первый вариант этого аспекта относится к арильной группе или галогензамещенной арильной группе, выбранной из группы, содержащей фенил, 2-фторфенил, 3-фторфенил, 4-фторфенил, 2,4-дифторфенил, 2,6-дифторфенил, 3,5-дифторфенил, 2,4,6-трифторфенил, 2-хлорфенил, 3-хлорфенил, 4-хлорфенил, 2,4-дихлорфенил, 2,6-дихлорфенил, 3,5-дихлорфенил, 2,4,6-трихлорфенил, нафтилен-1-ил и нафтилен-2-ил.

Второй вариант этого аспекта относится к замещенной арильной группе, выбранной из группы, содержащей 2-аминофенил, 3-аминофенил, 4-аминофенил, 2-метилфенил, 3-метилфенил, 4-метилфенил, 2,4-диметилфенил, 2-метоксифенил, 3-метоксифенил, 4-метоксифенил, 2-цианофенил, 3-цианофенил и 4-цианофенил.

Третий вариант этого аспекта относится к замещенной арильной группе, выбранной из группы, содержащей 4-(метансульфонил)фенил, 4-(этансульфонил)фенил, 4-(пропансульфонил)фенил, 2-(N-ациламино)фенил, 3-(N-ацилоамино)фенил, 4-(N-ациламино)фенил и 3-бензо[1,3]диоксол-5-ил.

Четвертый вариант этого аспекта относится к арильной группе, выбранной из группы, содержащей 2-трифторметилфенил, 3-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил и 3,5-бис(трифторметил)фенил.

Второй аспект значений R⁴ относится к замещенной и незамещенной арильной группе.

Первый вариант этого аспекта относится к арильной группе, выбранной из группы, содержащей 2-трифторметилфенил, 3-трифторметилфенил, 4-трифторметилфенил и 3,5-бис(трифторметил)фенил.

Второй вариант этого аспекта относится к гетероарильной или замещенной гетероарильной группе, выбранной из группы, содержащей пиридин-2-ил, пиридин-3-ил, пиридин-4-ил, пиримидин-2-ил, пиримидин-4-ил, пиримидин-5-ил, 4,6-дихлорпиримидин-5-ил и s-триазинил.

Неограничивающие примеры соединений Категории IV, имеющие сходную структуру формулы:

включают следующие соединения:

2-(4-фторфенил)-3-(2-фениламинопиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2-фторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3-фторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(4-фторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(4-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2-метилфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3-метилфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(4-метилфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2-цианофениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3-цианофениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(4-цианофениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(4-хлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2,4-дифторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(3,5-дифторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2,6-дифторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

3-[2-(2,6-дихлорфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он,

2-(4-фторфенил)-3-[2-(пиридин-2-иламино)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он и

3-[2-(4,6-дихлорпиримидин-5-иламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он.

Первая категория соединений, ингибирующих выделение воспалительного цитокина в соответствии с настоящим изобретением, отвечает следующей общей формуле:

в которой R представляет собой группу простого эфира формулы -OR³, в которой R¹ и R ³ имеют значения, приведенные в нижеследующей таблице I.

Таблица I
№	R1	R
1	4-фторфенил	Фенокси
2	4-фторфенил	2-фторфенокси
3	4-фторфенил	3-фторфенокси
4	4-фторфенил	4-фторфенокси
5	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси
6	4-фторфенил	2-цианофенокси
7	4-фторфенил	3-цианофенокси
8	4-фторфенил	2-трифторметилфенокси
9	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси
10	4-фторфенил	N-метилпиперидин-4-ил
11	4-фторфенил	4-метилфенокси
12	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси
13	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси
14	4-фторфенил	пиран-4-илокси
15	4-фторфенил	4-метоксифенокси
16	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
17	2,4-дифторфенил	Фенокси
18	2,4-дифторфенил	2-фторфенокси
19	2,4-дифторфенил	3-фторфенокси
20	2,4-дифторфенил	4-фторфенокси
21	2,4-дифторфенил	2,6-трифторфенокси
22	2,4-дифторфенил	2-цианофенокси
23	2,4-дифторфенил	3-цианофенокси
24	2,4-дифторфенил	2-трифторметилфенокси
25	2,4-дифторфенил	4-трифторметилфенокси
26	2,4-дифторфенил	N-метилпиперидин-4-ил
27	2,4-дифторфенил	4-метилфенокси
28	2,4-дифторфенил	2,4-диметилфенокси
29	2,4-дифторфенил	3-N-ацетиламинофенокси
30	2,4-дифторфенил	пиран-4-илокси
31	2,4-дифторфенил	4-метоксифенокси
32	2,4-дифторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
33	3-трифторметилфенил	Фенокси
34	3-трифторметилфенил	2-фторфенокси
35	3-трифторметилфенил	3-фторфенокси
36	3-трифторметилфенил	4-фторфенокси
37	3-трифторметилфенил	2,6-дифторфенокси
38	3-трифторметилфенил	2-цианофенокси
39	3-трифторметилфенил	3-цианофенокси
40	3-трифторметилфенил	2-трифторметилфенокси
41	3-трифторметилфенил	4-трифторметилфенокси
42	3-трифторметилфенил	N-метилпиперидин-4-ил
43	3-трифторметилфенил	4-метилфенокси
44	3-трифторметилфенил	2,4-диметилфенокси
45	3-трифторметилфенил	3-N-ацетиламинофенокси
46	3-трифторметилфенил	пиран-4-илокси
47	3-трифторметилфенил	4-метоксифенокси
48	3-трифторметилфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил

Соединения 1-48 и другие аналогичные им соединения, включенные в данную категорию, могут быть получены способом, описанным ниже. В представленном ниже примере R¹ обозначает 4-фторфенил, однако специалист может использовать любое другое исходное вещество, совместимое с данным методом получения, такое, как, например, метилфенилацетат, метил-4-хлорфенилацетат и метил-3-(трифторметил)фенилацетат.

Общая схема получения промежуточного соединения Типа I

ПРИМЕР 1

Метиловый эфир 2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-3-оксопропионовой кислоты (3)

Следующий ниже текст является описанием метода получения 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбальдегида 1, адаптированного в соответствии с методом H. Bredereck et al., Chem.Ber., 97, pp 3407-3417 (1964), включенным в описание в качестве ссылки.

В 3-горлую колбу емкостью 12 л в инертной атмосфере вводят диметилацетил-N,N-диметилформамид (801 г) и диметилацеталь пирувинового альдегида (779 г). Смесь нагревают с обратным холодильником в течение 18 часов, при котором температура снижается от примерно 109°С до примерно 80°С. Раствор охлаждают и добавляют метанол (4 л) для растворения сырого остатка. Раствор затем охлаждают до 20°С и добавляют тиомочевину (892 г, 11,7 моль). Смесь оставляют перемешиваться в течение приблизительно 15 минут и затем вводят метоксид натрия (741 г, 13,7 моль) путем 4 эквивалентных порций в течение 1 часа при поддерживании температуры реакции в интервале 18-28°С. Смесь перемешивают в течение 5 часов при комнатной температуре, охлаждают до 20°С, затем вводят иодидметил (2 кг) в течение 1,25 часа при поддерживании температуры реакции в интервале 17-29°С. Перемешивание продолжают в течение 18 часов при комнатной температуре. Метанол и непрореагировавший иодидметил удаляют путем нагревания раствора при температуре 35°С и давлении 40 торр до получения приблизительно 4,46 кг темного остатка, который распределяют между 14 л воды и 5 л этилацетата. Водную фракцию экстрагируют дважды этилацетатом, органические слои объединяют и концентрируют в вакууме до получения 685 г масла, которое очищают на диоксиде кремния и получают 522 г 4-диметоксиметил-2-метилсульфанилпиримидина.

Полученный выше диметилацеталь затем гидролизуют, чтобы получить свободный альдегид, путем нагревания до 60°С в течение 3 часов в 1М растворе HCl. Доводят среду до нейтральной реакции, используя этилацетат, и экстрагируют продукт с получением 347 г сырого продукта, который очищают на диоксиде кремния и получают 401 г 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбальдегида 1.

Получение метилового эфира 2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-3-гидроксипропионовой кислоты (2)

К охлажденному (-78°С) раствору литийдиизопропиламида (21,4 мл 2М раствора в ТГФ, 42,8 ммоль) в ТГФ (70 мл) добавляют по каплям раствор метил-4-фторфенилацетата (6,0 г, 35,7 ммоль) в ТГФ (30 мл). Раствор перемешивают в течение 1 часа при -78°С, после чего к реакционной смеси прикапывают раствор 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбальдегида 1, (6,0 г, 39,3 ммоль) в ТГФ (30 мл). Перемешивание продолжают в течение 45 минут при -78°С, затем реакцию гасят путем вливания реакционного раствора в насыщенный водный раствор NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют этилацетатом. Органические фазы объединяют, сушат (MgSO₄), фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой остаток очищают на диоксиде кремния (33% EtOAc/гексан) и получают 8,7 г (76%) требуемого продукта в виде смеси (1:1) диастереоизомеров.

Получение метилового эфира 2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-3-оксопропионовой кислоты (3).

В суспензию CrO₃ в CH ₂Cl₂ (300 мл) вводят пиридин. Смесь интенсивно перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре. Раствор неочищенного метилового эфира 2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-3-гидроксипропионовой кислоты 2, полученного выше, в CH₂Cl₂ (50 мл) прикапывают к суспензии, содержащей хром. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов, разбавляют эфиром (1 л) и фильтруют через слой целита . Фильтрат концентрируют в вакууме и полученный остаток очищают на диоксиде кремния (25% ETOAc/гексан) и получают 3,7 г (выход 43%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета.

Следующие примеры относятся к получению 6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оновой циклической системы с использованием пиразолидина, однако специалист может использовать замещенные циклические гидразиновые реагенты для получения других структур, имеющих циклические группы R ², не являющиеся водородом, среди которых 3-метилпиразолидин.

Общая схема получения промежуточного продукта Типа II

ПРИМЕР 2

2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (5)

Получение 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (4): К раствору пиразолидина (7,8 г, 54,16 ммоль) в пиридине (100 мл) добавляют метиловый эфир 2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-3-оксопропионовой кислоты 3, (11,5 г, 36,1 ммоль). Реакционную смесь нагревают при 90°С в течение 16 часов. Растворитель удаляют в вакууме и полученный остаток очищают на диоксиде кремния (100% ETOAc, затем 10% MeOH/ETOAc) и получают 3,9 г (выход 37%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета.

Получение 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (5): К раствору 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 4, (1,3 г, 3,8 ммоль) в смеси ТГФ:метанол (56 мл смеси 1:1) прикапывают раствор Oxone ^® (пероксимоносульфат калия) (9,34 г, 15,2 ммоль) в воде (42 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 часа при комнатной температуре, разбавляют водным раствором NaHCO ₃ и трижды экстрагируют этилацетатом. Органические слои объединяют, сушат и концентрируют в вакууме до получения неочищенного требуемого продукта, который используют далее без очистки.

В следующем ниже тексте представлен метод, в котором промежуточные соединения Типа II могут быть использованы для получения соединений Категории I, являющихся ингибиторами выделения воспалительных цитокинов.

ПРИМЕР 3

2-(4-Фторфенил)-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (6)

Получение 2-(4-фторфенил)-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (6): К раствору фенола (0,66 г, 7,08 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляют NaH (0,24 г, 5,91 ммоль) с последующим добавлением раствора неочищенного 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 5, полученного, как указано выше (0,25 г, 0,67 ммоль), в ТГФ (2 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 часов при комнатной температуре, разбавляют водным раствором NaHCO₃ и экстрагируют дважды этилацетатом. Органические слои объединяют, сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме до получения неочищенного продукта, который очищают на диоксиде кремния (100% EtOAc, затем 10% MeOH/EtOAc) и получают 0,35 г (выход 38%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,47 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,49 (дд, J=7,8, 7,8 Гц, 2H), 7,40 (ддд, J=5,4, 5,4 Гц, 2H), 7,35-7,22 (м, 3H), 7,10 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2H), 6,90 (д, J=6,8 Гц, 1H), 4,05 (т, J=7,2 Гц, 2H), 3,86 (т, J=7,2 Гц, 2H), 2,59 (дт, J=7,2, 7,2 Гц, 2H); HRMS для C₂₂H₁₈FN₄O₂ (M+H)⁺ рассчитано 389,1414; найдено 389,1407. Это соединение соответствует соединению 1 в таблице I.

Следующие ниже соединения, относящиеся в первому аспекту соединений Категории I, могут быть получены согласно процедуре, описанной выше.

N-(3-{4-[2-(4-Фторфенил)-3-оксо-6,7-дигидро-3Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-ил]-пиримидин-2-илокси}-фенил)-ацетамид; ¹H ЯМР (300 МГц, d₆-DMSO) 10,11 (с, 1H), 8,66 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,64 (м, 1H), 7,41-7,34 (м, 4H), 7,17 (т, J=9,0 Гц, 2H), 7,02 (д, J=5,1 Гц, 6,92-6,80 (м, 1 H), 3,84 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,81 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,46 (м, 2H), 2,06 (с, 3H); HRMS для C₂₄H₂₀ FN₅O₃ (M+H)⁺ рассчитано 446,1628; найдено 446,1606.

2-(4-Фторфенил)-3-[2-(2,4-диметилфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,44 (дд, J=5,4, 1,5 Гц, 1H), 7,43-7,38 (м, 2H), 7,14-7,00 (м, 5H), 6,88 (дд, J=5,1, 1,5 Гц, 1H), 4,02 (т, J=7,2 Гц, 2H), 3,86 (т, J=7,2 Гц, 2H), 2,59 (дт, J=7,2, 7,2 Гц, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,19 (с, 3H); HRMS для C₂₄H₂₁ FN₄O₂ (M+H)⁺ рассчитано 417,1727; найдено 417,1727.

2-(2,4-Дифторфенил)-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,52 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,60-7,46 (м, 3H), 7,33 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,23 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,01 (т, J=8,1 Гц, 1H), 6,91-6,83 (м, 2H), 4,09 (т, J=6,6 Гц, 2H), 3,92 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,59 (т, J=6,9 Гц, 2H): MS (M+H)⁺ 407,2.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(4-фторфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло-[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,51 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,39 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,21-7,10 (м, 5H), 6,91 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,42-4,35 (м, 2H), 4,10-4,04 (т, J=7,2 Гц, 2H), 2,71 (дт, J=7,2, 7,2 Гц, 2H); MS (M+H)⁺ 406,9.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(2,6-дифторфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло-[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,52 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,41 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,15-7,07 (м, 5H), 6,98 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,31 (т, J=8,2 Гц, 2H), 4,09 (т, J=8,2 Гц, 2H), 2,70 (дт, J=8,2, 8,2 Гц, 2H); MS (M+H)⁺ 425,2.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(2-фторфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло-[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,51 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,41-7,23 (м, 6H), 7,11 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,94 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,27 (т, J=8,2 Гц, 2H), 4,00 (т, J=8,2 Гц, 2H), 2,66 (дт, J=8,2, 8,2 Гц, 2H); MS (M+H) ⁺ 407,2.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(3-фторфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло-[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,49 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,49-7,38 (м, 3H), 7,11 (т, J=8,7 Гц, 2H), 7,04-6,98 (м, 3H), 6,94 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,13 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,97 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,66 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H); MS (M+H)⁺ 406,9.

Согласно второму аспекту соединения Категории I, являющиеся ингибиторами выделения воспалительного цитокина, согласно данному изобретению имеют следующую общую формулу:

в которой R является аминогруппой формулы -NR ^4a[CHR^5b]R⁶, и R¹, R ^4a, R^5b и R⁶ имеют значение, приведенные ниже в таблице II. Стереохимия R^5b имеет указанную конфигурацию, когда R^5b и R⁶ не являются атомами водорода.

Таблица II
№	R1	R4a	R 5b	R6
49	4-фторфенил	H	H	Фенил
50	4-фторфенил	H	H	4-фторфенил
51	4-фторфенил	H	H	2-аминофенил
52	4-фторфенил	H	H	2-метилфенил
53	4-фторфенил	H	H	4-метилфенил
54	4-фторфенил	H	H	4-метоксифенил
55	4-фторфенил	H	H	4-(пропансульфонил)фенил
56	4-фторфенил	H	H	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
57	4-фторфенил	H	H	Пиридин-2-ил
58	4-фторфенил	H	H	Пиридин-3-ил
59	4-фторфенил	H	Метил	Фенил
60	4-фторфенил	H	Метил	4-фторфенил
61	4-фторфенил	H	Метил	2-аминофенил
62	4-фторфенил	H	Метил	2-метилфенил
63	4-фторфенил	H	Метил	4-метилфенил
64	4-фторфенил	H	Метил	4-метоксифенил
65	4-фторфенил	H	Метил	4-(пропансульфонил)фенил
66	4-фторфенил	H	Метил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
67	4-фторфенил	H	Метил	Пиридин-2-ил
68	4-фторфенил	H	Метил	пиридин-3-ил
69	4-фторфенил	H	H	H
70	4-фторфенил	H	H	Метил
71	4-фторфенил	H	H	Этил
72	4-фторфенил	H	H	Винил
73	4-фторфенил	H	H	Циклопропил
74	4-фторфенил	H	H	Циклогексил
75	4-фторфенил	H	H	Метоксиметил
76	4-фторфенил	H	H	Метоксиэтил
77	4-фторфенил	H	H	1-гидрокси-1-метилэтил
78	4-фторфенил	H	H	-CO 2H
79	4-фторфенил	H	Метил	H
80	4-фторфенил	H	Метил	Метил
81	4-фторфенил	H	Метил	Этил
82	4-фторфенил	H	Метил	Винил
83	4-фторфенил	H	Метил	Циклопропил
84	4-фторфенил	H	Метил	Циклогексил
85	4-фторфенил	H	Метил	Метоксиметил
86	4-фторфенил	H	Метил	Метоксиэтил
87	4-фторфенил	H	Метил	1-гидрокси-1-метилэтил
88	4-фторфенил	H	Метил	-CO 2H
89	3-трифторметилфенил	H	Метил	Фенил
90	3-трифторметилфенил	H	Метил	4-фторфенил
91	3-трифторметилфенил	H	Метил	2-аминофенил
92	3-трифторметилфенил	H	Метил	2-метилфенил
93	3-трифторметилфенил	H	Метил	4-метилфенил
94	3-трифторметилфенил	H	Метил	4-метоксифенил
95	3-трифторметилфенил	H	Метил	4-(пропансульфонил)фенил
96	3-трифторметилфенил	H	Метил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
97	3-трифторметилфенил	H	Метил	Пиридин-2-ил
98	3-трифторметилфенил	H	Метил	Пиридин-3-ил
99	3-трифторметилфенил	H	Метил	H
100	3-трифторметилфенил	H	Метил	Метил
101	3-трифторметилфенил	H	Метил	Этил
102	3-трифторметилфенил	H	Метил	Винил
103	3-трифторметилфенил	H	Метил	Циклопропил
104	3-трифторметилфенил	H	Метил	Циклогексил
105	3-трифторметилфенил	H	Метил	Метоксиметил
106	3-трифторметилфенил	H	Метил	Метоксиэтил
107	3-трифторметилфенил	H	Метил	1-гидрокси-1-метилэтил
108	3-трифторметилфенил	H	Метил	-CO2H

Используя промежуточные соединения, такие как соединение 5, как соответствующие исходные вещества, соединения 49-108 и другие соединения этой же категории, охарактеризованные в данном описании, могут быть получены с помощью процедур, описанных ниже. В следующем ниже примере R¹ обозначает 4-фторфенил, однако специалист может использовать любой другой исходный материал, совместимый с данным методом, такой как, например, метилфенилацетат, метил-4-хлорфенилацетат и 3-(трифторметил)фенилацетат.

ПРИМЕР 4

2-(4-фторфенил)-3-[2-(S)-(1-фенилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (7)

Получение 2-(4-фторфенил)-3-[2-(S)-(1-фенилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (7): Раствор неочищенного 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5 Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 5, полученного, как указано выше (0,86 г,2,3 ммоль), и (S)-(-)- -метилбензиламин (10,5 мл, 81,6 ммоль) растворяют в толуоле (18 мл). Полученную смесь нагревают до 140°С в течение 12 часов, охлаждают до комнатной температуры и растворитель удаляют под вакуумом. Образующийся остаток очищают на диоксиде кремния (1:1 ETOAc/гексан) и получают требуемый продукт, который соответствует соединению 59 таблицы II.

¹H ЯМР (300 МГц, CDCl ₃) 8,18 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,42-7,34 (м, 7H), 7,04 (ддд, J=9,0, 6,9, 2,1 Гц, 2H), 6,39 (д,J=5,1 Гц, 1H), 5,68 (ушир. с, 1H), 5,10 (м, 1H), 3,97 (дт, J=7,5, 7,5, 7,5 Гц, 2H), 2,45 (ушир. с, 2H), 1,67 (м, 2H), 1,60 (д, J=7,5 Гц, 3H); HRMS для С ₂₄Н₂₂FN₅O (М+Н)⁺ рассчитано 416,1887; найдено 416,1897.

Нижеследующие соединения, относящиеся ко второму аспекту соединений Категории I, могут быть получены согласно способу, описанному выше.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(N'-метил-N'-фенилгидразин)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,29 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,40 (дд, J=8,4, 5,4 Гц, 2H), 7,29-7,25 (м, 2H), 7,06 (дд, J=8,4, 8,4 Гц, 2H), 6,91 (д, J=9,0 Гц, 2H), 6,85 (т, 7,8 Гц, 1H), 6,57 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,00 (т, J=6,9 Гц, 4H), 3,39 (с, 3H), 2,48-2,33 (м, 2H); MS (M+H) ⁺ 417,2.

Метиловый эфир (R)-{4-[2-(4-фторфенил)-3-оксо-6,7-дигидро-3Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-ил]-пиримидин-2-иламино}-фенилуксусной кислоты; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,26 (д, J=8,4 Гц, 7,54-7,24 (м, 7H), 7,04 (т, J=8,4 Гц, 2H), 6,47 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,65-5,58 (м, 2H), 4,05-4,00 (м, 2H), 3,79 (с, 3H), 3,78-3,68 (м, 2H), 1,67 (м, 2H); MS (M+H) ⁺ 460,0.

2-(4-фторфенил)-3-(2-бензиламинопиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,21 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,45-7,29 (м, 9H), 7,06 (дд, J=9,0, 8,4 Гц, 2H), 6,47 (д, J=5,4 Гц, 1H), 4,70 (д, J=6,0 Гц, 2H), 4,04 (т, J=7,2 Гц, 2H), 3,80-3,65 (м, 2H), 2,65-2,52 (м, 2H); МС (М+H)⁺ 402,1.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(1-(S)-метилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,17 (д, J=4,8 Гц, 7,46-7,40 (м, 2H), 7,05 (дт, J=8,7, 2,4 Гц, 2H), 6,38 (дд, J=4,8, 3,0 Гц, 1H), 5,11 (ушир. с, 1H), 4,13-3,96 (м, 5H), 2,73 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H), 1,66-1,55 (м, 2H), 1,24 (д, J=6,3 Гц, 3H), 0,99 (т, J=7,2 Гц, 3H); HRMS для С₂₀Н₂₂FN₅O (М+Н)⁺ рассчитано 368,1886; найдено 386,1880.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(аллиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,20 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,43 (дд, J=9,0, 5,4 Гц, 2H), 7,05 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,43 (д, J=5,1 Гц, 1H), 6,00 (дддд, J=7,2, 7,2, 7,2, 5,1 Гц, 1H), 5,45 (ушир. с, 1H), 5,28 (дд, J =17,1, 1,5 Гц, 1H), 5,20 (дд, J=10,2, 1,5 Гц, 1H), 4,13-4,04 (м, 6H), 2,71 (дт, J=7,2, 7,2 Гц, 2H); HRMS для С₁₉Н ₁₈FN₅O (М+Н)⁺ рассчитано 352,1573; найдено 352,1582.

2-(4-фторфенил)-3-{2-[1-(S)-(4-метилфенил)этиламино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,15 (д, J=5,4 Гц, 1H), 7,40 (дд, J=8,7, 5,7 Гц, 2H), 7,28-7,27 (м, 2H), 7,17 (д, J=7,8 Гц, 2H), 7,04 (т, J=9,0 Гц, 2H), 6,41 (д, J =5,4 Гц, 1H), 5,20 (м, 1H), 4,02-3,96 (м, 4H), 2,52-2,45 (м, 2H), 2,36 (с, 3H), 1,60 (д, J=6,9 Гц, 3H); HRMS для С₂₅Н₂₄FN₅O (М+Н)⁺ рассчитано 430,2043; найдено 430,2057.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(1-(S)-циклогексилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,16 (д, J=4,8 Гц, 1H), 7,44 (дд, J=9,0, 5,7 Гц, 2H), 7,05 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,37 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,12 (ушир. с, 1H), 4,14-4,02 (м, 4H), 3,99-3,92 (м, 1H), 2,73 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H), 1,88-1,63 (м, 4H), 1,54-1,40 (м, 1H), 1,28-1,03 (м, 6H), 1,20 (д, J=6,9 Гц, 3H); HRMS для С₂₄Н₂₈ FN₅O (М+Н)⁺ рассчитано 421,2279; найдено 421,2264.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(1-(R)-фенилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,11 (д, J=5,4 Гц, 1H), 7,43-7,23 (м, 7H), 7,05 (т, J=8,4 Гц, 2H), 6,43 (д, J=5,4 Гц, 1H), 5,13 (м, 1H), 4,16-3,94 (м, 2H), 2,58-2,38 (м, 2H), 1,63 (д, J=6,9 Гц, 3H); MS (M+H) ⁺ 416,0.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(трет-бутиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,11 (д, J=5,4 Гц, 1H), 7,43 (дд, J=6,9, 3,3 Гц, 2H), 7,08 (т, J=6,6 Гц, 2H), 6,45 (д, J=5,7 Гц, 1H), 4,12-4,02 (м, 4H), 2,77 (дт, J=7,2, 7,2 Гц, 2H), 1,52 (с, 9H); MS (M+H) ⁺ 368,1.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(2-гидрокси-1,2-диметилпропиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 7,99 (м, 1H), 7,40 (дд, J=9,0, 5,7 Гц, 2H), 7,10 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,55 (д, J=5,4 Гц, 1H), 4,24-4,10 (м, 5H), 2,83 (дт, J=8,4, 8,4 Гц, 2H), 1,51-1,36 (м,9H); MS (M+H)⁺ 398,1.

2-(4-фторфенил)-3-[(2-циклопропиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,17 (м, 1H), 7,42 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,12 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,52 (д, J=5,4 Гц, 1H), 4,27 (м, 2H), 4,15 (т, J=8,4 Гц, 2H), 2,88-2,81 (м, 1H), 2,77 (дт, J=8,4, 8,4 Гц, 2H), 0,93-0,87 (м, 2H), 0,71-0,66 (м, 2H); MS (М+H)⁺ 352,0.

2-(4-фторфенил)-3-[(2-циклопропилметил)аминопиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,17 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,41 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,07 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,41 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,55 (ушир. с, 1H), 4,15-4,05 (м, 4H), 3,31 (т, J=5,4 Гц, 2H), 2,78 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H), 1,18 (м, 1H), 0,60 (м, 2H), 0,30 (м, 2H); MS (М+H) ⁺ 366,0.

2-(4-фторфенил)-3-[(2-метоксиэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,18 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,42 (дд, J=8,7, 5,7 Гц, 2H), 7,06 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,42 (д, J=5,4 Гц, 1H), 4,20-4,03 (м, 4H), 3,68-3,41 (м, 4H), 3,42 (с, 3H), 2,74 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H); MS (M+H)⁺ 370,0.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(2-метокси-1-(S)-метилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,18 (д, J=4,8 Гц, 1H), 7,42 (дд, J=8,1, 5,4 Гц, 2H), 7,04 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,39 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,49 (д, J=7,8 Гц, 1H), 4,26 (м, 1H), 4,13 (т, J=6,9 Гц, 2H), 4,06 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,46 (д, J=4,8 Гц, 2H), 3,41 (с, 3H), 2,72 (дт, J=6,9, 6,9 Гц, 2H), 1,30 (с, 3H); MS (M+H)⁺ 384,0.

2-(4-фторфенил)-3-{2-[1-(S)-(4-фторфенил)этиламино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,10 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,39 (дд, J=7,8, 5,1 Гц, 2H), 7,07 (т, J=7,8 Гц, 2H), 6,48 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,12 (м, 1H), 4,18-3,98 (м, 2H), 2,61-2,45 (м, 2H), 1,64 (д, J=6,9 Гц, 3H); MS (M+H)⁺ 433,9.

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(пиридин-3-илметил)амино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; ¹H ЯМР (300 МГц, d₆-DMSO) 8,69-8,51 (м, 2H), 8,22 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,73-7,68 (м, 1H), 7,42 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,33-7,26 (м, 1H), 7,04 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,48 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,77 (ушир. с, 1H), 4,69 (д, J=6,3 Гц, 2H), 4,02 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,80 (м, 2H), 2,62 (дт, J=8,7, 8,7 Гц, 2H); MS (M+H)⁺ 403,1.

Вторая категория соединений, являющихся ингибиторами выделения воспалительного цитокина, согласно изобретению имеет следующую общую формулу:

в которой R является группой простого эфира формулы -OR³ и R^9a и R^9b, взятые вместе, образуют кольцо, описанное ниже в таблице III.

Таблица III
№	R1	R3	Кольцо R 9a/R9b
109	4-фторфенил	Фенокси	Морфолинил
110	4-фторфенил	2-фторфенокси	Морфолинил
111	4-фторфенил	3-фторфенокси	Морфолинил
112	4-фторфенил	4-фторфенокси	Морфолинил
113	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси	Морфолинил
114	4-фторфенил	2-цианофенокси	Морфолинил
115	4-фторфенил	3-цианофенокси	Морфолинил
116	4-фторфенил	2-трифторметилфенокси	Морфолинил
117	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси	Морфолинил
118	4-фторфенил	2-метилфенокси	Морфолинил
119	4-фторфенил	4-метилфенокси	Морфолинил
120	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси	Морфолинил
121	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси	Морфолинил
122	4-фторфенил	2-метоксифенокси	Морфолинил
123	4-фторфенил	4-метоксифенокси	Морфолинил
124	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Морфолинил
125	4-фторфенил	Фенокси	Пиперидин-1-ил
126	4-фторфенил	2-фторфенокси	Пиперидин-1-ил
127	4-фторфенил	3-трифторфенокси	Пиперидин-1-ил
128	4-фторфенил	4-фторфенокси	Пиперидин-1-ил
129	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси	Пиперидин-1-ил
130	4-фторфенил	2-цианофенокси	Пиперидин-1-ил
131	4-фторфенил	3-цианофенокси	Пиперидин-1-ил
132	4-фторфенил	2-трифторметилметокси	Пиперидин-1-ил
133	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси	Пиперидин-1-ил
134	4-фторфенил	2-метилфенокси	Пиперидин-1-ил
135	4-фторфенил	4-метилфенокси	Пиперидин-1-ил
136	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси	Пиперидин-1-ил
137	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси	Пиперидин-1-ил
138	4-фторфенил	2-метоксифенокси	Пиперидин-1-ил
139	4-фторфенил	4-метоксифенокси	Пиперидин-1-ил
140	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Пиперидин-1-ил
141	4-фторфенил	Фенокси	Пиперазин-1-ил
142	4-фторфенил	2-фторфенокси	Пиперазин-1-ил
143	4-фторфенил	3-фторфенокси	Пиперазин-1-ил
144	4-фторфенил	4-фторфенокси	Пиперазин-1-ил
145	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси	Пиперазин-1-ил
146	4-фторфенил	2-цианофенокси	Пиперазин-1-ил
147	4-фторфенил	3-цианофенокси	Пиперазин-1-ил
148	4-фторфенил	2-трифторметилфенокси	Пиперазин-1-ил
149	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси	Пиперазин-1-ил
150	4-фторфенил	2-метилфенокси	Пиперазин-1-ил
151	4-фторфенил	4-метилфенокси	Пиперазин-1-ил
152	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси	Пиперазин-1-ил
153	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси	Пиперазин-1-ил
154	4-фторфенил	2-метоксифенокси	Пиперазин-1-ил
155	4-фторфенил	4-метоксифенокси	Пиперазин-1-ил
156	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Пиперазин-1-ил
157	4-фторфенил	Фенокси	Пирролидин-1-ил
158	4-фторфенил	2-фторфенокси	Пирролидин-1-ил
159	4-фторфенил	3-фторфенокси	Пирролидин-1-ил
160	4-фторфенил	4-фторфенокси	Пирролидин-1-ил
161	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси	Пирролидин-1-ил
162	4-фторфенил	2-цианофенокси	Пирролидин-1-ил
163	4-фторфенил	3-цианофенокси	Пирролидин-1-ил
164	4-фторфенил	2-трифторметилфенокси	Пирролидин-1-ил
165	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси	Пирролидин-1-ил
166	4-фторфенил	2-метилфенокси	Пирролидин-1-ил
167	4-фторфенил	4-метилфенокси	Пирролидин-1-ил
167	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси	Пирролидин-1-ил
169	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси	Пирролидин-1-ил
170	4-фторфенил	2-метоксифенокси	Пирролидин-1-ил
171	4-фторфенил	4-метоксифенокси	Пирролидин-1-ил
172	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Пирролидин-1-ил

Ниже дана схема получения соединений, относящихся к первому аспекту соединений Категории II согласно изобретению. На первом этапе предусмотрено использование промежуточных соединений типа III для введения R¹ (в данном примере 4-фторфенила) в молекулу. Промежуточные кетоны, такие как соединение 11 , могут быть использованы на следующем этапе для введения выбранной аминогруппы в позицию 6 пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оновой циклической системы.

Общая схема получения промежуточного соединения типа III

ПРИМЕР 5

Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-оксо-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (11)

Получение 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-метиленпиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты (8): К суспензии NaH (3,81 г, 95,4 ммоль) в ДМФ (80 мл) прикапывают раствор N-Cbz-N'-Boc-гидразина (12,1 г, 45,4 ммоль) в ДМФ (20 мл). Реакционную смесь перемешивают около 20 минут и прикапывают 3-хлор-2-хлорметилпропен (5,8 мл, 50 ммоль) и реакционную смесь оставляют перемешиваться при комнатной температуре до завершения реакции тонкослойной хроматографией, приблизительно 12 часов. Реакционный раствор распределяют между этилацетатом и водой, водный слой экстрагируют несколько раз растворителем. Органические слои объединяют, сушат, фильтруют и концентрируют до получения требуемого продукта в виде прозрачного масла, которое используют на последующих этапах без очистки.

Получение 1-бензилового эфира 4-метиленпиразолидин-1- карбоновой кислоты (9): К раствору неочищенного 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-метиленпиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 8, (30 г) в метаноле (300 мл) прикапывают при 0°С тионилхлорид. Реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 часов. После концентрации в вакууме реакционной смеси получают масло желтого цвета, которое кристаллизуется в результате выдерживания с получением 23 г (выход 97%) требуемого продукта в виде HCl соли.

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метиленпиразолидин-1-карбоновой кислоты (10): Гидроксид натрия (0,12 г, 3 ммоль) растворяют в смеси 1:2 воды с метиленхлоридом (30 мл) при интенсивном перемешивании и прибавляют 1-бензиловый эфир 4-метиленпиразолидин-1-карбоновой кислоты 9, (0,62 г, 2,8 ммоль) при комнатной температуре. Добавляют (4-фторфенил)ацетилхлорид (0,39 мл, 4,2 ммоль) и реакцию продолжают при перемешивании в течение 18 часов, затем реакционную смесь разбавляют водой (10 мл) и дают смеси разделиться на слои. Водный слой экстрагируют метиленхлоридом, органические слои объединяют, сушат и фильтруют. Концентрируют в вакууме и получают неочищенный продукт, который очищают на диоксиде кремния (1:3 этилацетат/гексан) и получают 0,54 г (выход 62%) требуемого продукта.

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-оксо-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (11): Барботируют озоновый газ через раствор бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метиленпиразолидин-1-карбоновой кислоты 10, (0,28 г, 0,8 ммоль) в метиленхлориде (15 мл) при -78°С до появления голубой окраски раствора. Удаляют источник озона и добавляют диметилсульфоксид (0,23 мл), реакционную смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают в течение 18 часов. Растворитель отгоняют в вакууме и полученное масло очищают на диоксиде кремния (1:3 этилацетат/гексан) и получают 0,15 г (выход 53%) требуемого продукта в виде прозрачного масла.

Синтезированные промежуточные продукты типа III, как, например, соединение 11, могут быть использованы в качестве шаблона для введения в позицию 6 желаемой аминогруппы, как описано ниже в примере.

Общая схема получения промежуточных соединений типа IV:

введение 6-аминогруппы в структуру соединений,

соответствующих первому аспекту соединений Категории II.

ПРИМЕР 6

2-(4-фторфенил)-1-(4-морфолин-4-ил-пиразолидин-1-ил)-этанон (13)

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-морфолин-4-ил-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (12): К раствору бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-оксо-пиразолидин-1-карбоновой кислоты 11, (0,14 г, 0,4 ммоль) и морфолина (0,038 мл, 0,43 ммоль) в ТГФ добавляют при комнатной температуре Na(OAc)₃ BH (0,125 г, 0,6 ммоль) и НОАс (0,022 мл, 0,4 ммоль).

Раствор перемешивают 12 часов, затем смесь распределяется между диэтиловым эфиром и NaHCO₃. Водный слой экстрагируют несколько раз простым эфиром и объединяют органические слои, сушат и концентрируют в вакууме до получения прозрачного масла, которое повторно растворяют в эфире, и добавляют 1 эквивалент раствора HCl в эфире и получают твердый продукт белого цвета. Отделяют твердый продукт с помощью фильтрации и выделяют требуемый продукт в количестве 100 мг (выход 60%) в виде HCl соли.

Получение 2-(4-фторфенил)-1-(4-морфолин-4-ил-пиразолидин-1-ил)-этанона (13): Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-морфолин-4-ил-пиразолидин-1-карбоновой кислоты в виде HCl соли 12, (100 мг, 0,2 ммоль) растворяют в метаноле и добавляют Pd/C (5 мг). Раствор затем гидирируют в аппарате Parr Hydrogenation Apparatus в течение 3 суток, после чего катализатор удаляют фильтрацией и фильтраты концентрируют в вакууме для получения 55 мг (выход 81%) требуемого продукта в виде твердого продукта желтовато-коричневого цвета.

Поскольку выбранная аминогруппа находится в положении 6 2-R'-замещенной-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оновой структуры, то фрагменты конечных соединений, содержащих выбранные R группы, могут быть введены на соответствующей стадии синтеза. На этой стадии используют промежуточные соединения типа V общей формулы:

вводя таким образом в структуру желаемую группу -OR³, причем названные промежуточные соединения типа V могут быть получены согласно методу, приведенному в схеме ниже.

Общая схема получения промежуточного соединения типа V

ПРИМЕР 7

2-Феноксипиримидин-4-карбонилхлорид (18)

Получение метилового эфира 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбоновой кислоты (14): К суспензии 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбоновой кислоты (15 г, 88 ммоль) в метаноле (200 мл) прикапывают тионилхлорид (25 мл). Раствор оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают 12 часов. Раствор затем концентрируют в вакууме и получают в остатке твердое вещество желтого цвета, которое можно обработать метиленхлоридом и повторно подвергнуть концентрированию для получения 19 г (выход 97%) HCl соли требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

Получение метилового эфира 2-метансульфонилпиримидин-4-карбоновой кислоты (15): Водный раствор (1 л) Oxone^® (211,7 г, 344 ммоль) вводят по каплям при 0°С в раствор метилового эфира 2-метилсульфанилпиримидин-4-карбоновой кислоты 14, (19 г, 86,1 ммоль) в смеси 1:1 метанола с ТГФ (1 л). Реакционный раствор доводят до комнатной температуры и перемешивают 1,5 часа. Полученную суспензию распределяют между метиленхлоридом и водой. Водную фазу подщелачивают добавлением NaOH и повторно экстрагируют растворителем. Органические слои объединяют, затем сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме до получения 18,4 г требуемого продукта в виде масла желтого цвета.

Получение метилового эфира 2-феноксипиримидин-4-карбоновой кислоты (16): NaH (3,5 г 60%-ной суспензии, 87,4 ммоль) добавляют к раствору фенола (8,23 г, 87,4 ммоль) в ТГФ (100 мл) при комнатной температуре. Метиловый эфир 2-метансульфонилпиримидин-4-карбоновой кислоты 15, (6,3 г, 29,1 ммоль) растворяют в ТГФ (60 мл) и прикапывают раствор фенола. Реакция протекает при перемешивании в течение 12 часов, затем ее гасят добавлением насыщенного водного раствора NH₄Cl. Водную фазу экстрагируют метиленхлоридом и объединенные органические слои сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения неочищенного масла, которое очищают на диоксиде кремния (этилацетат/гексан 2:3) с получением 1,72 г (выход 25%) требуемого продукта в виде твердого белого вещества.

Получение 2-феноксипиримидин-4-карбоновой кислоты (17) : К раствору метилового эфира 2 феноксипиримидин-4-карбоновой кислоты (16) (1,72 г, 74,8 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляют 50%-ный раствор NaOH (10 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 1,5 часа растворитель отгоняют в вакууме, а оставшуюся водную фазу экстрагируют этилацетатом. Водную фазу можно затем осторожно подкислить при помощи концентрированной HCl, и образующееся твердое белое вещество экстрагируют дважды этилацетатом. Органические слои объединяют, сушат и концентрируют в вакууме до получения 0,95 г (выход 60%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

Получение 2-феноксипиримидин-4-карбонилхлорида (18): К раствору 2-феноксипиримидин-4-карбоновой кислоты 17, (0,19 г, 0,89 ммоль) в метиленхлориде (10 мл), содержащей несколько капель ДМФ, добавляют оксалилхлорид (0,1 мл). Раствор перемешивают 2 часа при комнатной температуре и концентрируют в вакууме для получения требуемого продукта, который используют в дальнейшем без очистки.

Заключительная стадия получения соединений, которые входят в первый аспект соединений Категории II в соответствии с настоящим изобретением, может быть выполнена способом, описанным ниже. Этот способ включает стадию взаимодействия между первым компонентом, который содержит выбранную группу R¹ и аминогруппу в положении 6, например промежуточное соединение 13, и вторым компонентом, содержащим конечную группу R, уже введенную в пиримидиновое кольцо, например промежуточное соединение 18.

ПРИМЕР 8

2-(4-фторфенил)-6-морфолин-4-ил-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-он (20)

Получение 2-(4-фторфенил)-1-[4-морфолин-4-ил-2-(2-феноксипиримидин-4-карбонил)пиразолидин-1-ил]этанона (19): 2-феноксипиримидин-4-карбонилхлорид 18 (0,07 г, 0,28 ммоль) в метиленхлориде (1,5 мл) добавляют по каплям к суспензии 2-(4-фторфенил)-1-(4-морфолин-4-ил-пиразолидин-1-ил)этанона 13 (0,06 г, 0,18 ммоль) в растворе 2:5 воды в СН₂ Cl₂ (7 мл), содержащем NaOH (0,0112 г, 0,28 ммоль), при комнатной температуре. Раствор перемешивают в течение 18 часов и разбавляют дополнительной смесью 2:5 воды в CH₂ Cl₂. Слоям дают разделиться и водную фазу экстрагируют дополнительным количеством метиленхлорида. Органические слои объединяют, сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения твердого вещества желтовато-коричневого цвета, которое очищают путем препаративной ВЭЖХ, и получают 0,021 г (выход 23%) требуемого продукта в виде маслянистого твердого вещества.

Получение 2-(4-фторфенил)-6-морфолин-4-ил-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (20):

К раствору 2-(4-фторфенил)-1-[4-морфолин-4-ил-2-(2-феноксипиримидин-4-карбонил)пиразолидин-1-ил]этанона 19, (0,2 г, 0,4 ммоль) в ДМФ (10 мл) при 0°С добавляют NaH (0,024 г, 0,6 ммоль) и полученный раствор перемешивают 2 часа. Растворитель отгоняют в вакууме, остаток растворяют в метиленхлориде и экстрагируют водой, сушат и повторно концентрируют для получения 37 мг (выход 20%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета.

Указанные ниже соединения, относящиеся к первому аспекту соединений Категории II, могут быть получены по способу, описанному выше.

2-(4-Фторфенил)-6-морфолин-4-ил-3-[2-(4-фторфенокси)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он: ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 1,61 (с, 4H), 2,58 (с, 4H), 3,70-3,99 (м, 4H), 4,23-425 (м, 1H), 6,94 (д, 1H, J=5,1 Гц), 7,10 (т, 2H, J=8,7 Гц), 7,26-7,41 (м, 6H), 8,50 (д, 1H, J=5,1 Гц), ECI⁺ MS: м/z (относит. интенсивность) 491,9 (100, М⁺+H)

Анализ: С ₂₆Н₂₃F₂N₅O₃ 0,5 H₂O: рассчитано C, 62,39; H, 4,83; N, 13,99; найдено C, 62,02; H, 4,38; N, 13,62.

Второй аспект соединений Категории II относится к соединениям формулы:

в которой R является аминогруппой, указанной в формуле. Аналогичные соединения таблицы IV содержат группу R, имеющую формулу -NHC(HR^5b)R⁶, в которых R^4a обозначает водород и R¹, R^5b , R⁶, R^9a и R^9b имеют значения, указанные в таблице.

Таблица IV
№	R1	R5b	R 6	R9a	R9b
173	4-фторфенил	H	Фенил	H	H
174	4-фторфенил	H	4-фторфенил	H	H
175	4-фторфенил	H	2-аминофенил	H	H
176	4-фторфенил	H	2-метилфенил	H	H
177	4-фторфенил	H	4-метилфенил	H	H
178	4-фторфенил	H	4-метоксифенил	H	H
179	4-фторфенил	H	4-(пропансульфонил)фенил	H	H
180	4-фторфенил	H	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	H	H
181	4-фторфенил	H	Пиридин-2-ил	H	H
182	4-фторфенил	H	Пиридин-3-ил	H	H
183	4-фторфенил	Метил	Фенил	H	H
184	4-фторфенил	Метил	4-фторфенил	H	H
185	4-фторфенил	Метил	2-аминофенил	H	H
186	4-фторфенил	Метил	2-метилфенил	H	H
187	4-фторфенил	Метил	4-метилфенил	H	H
188	4-фторфенил	Метил	4-метоксифенил	H	H
189	4-фторфенил	Метил	4-(пропансульфонил)фенил	H	H
190	4-фторфенил	Метил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	H	H
191	4-фторфенил	Метил	Пиридин-2-ил	H	H
192	4-фторфенил	Метил	Пиридин-3-ил	H	H
193	4-фторфенил	H	Фенил	Метил	Метил
194	4-фторфенил	H	4-фторфенил	Метил	Метил
195	4-фторфенил	H	2-аминофенил	Метил	Метил
196	4-фторфенил	H	2-метилфенил	Метил	Метил
197	4-фторфенил	H	4-метилфенил	Метил	Метил
198	4-фторфенил	H	4-метоксифенил	Метил	Метил
199	4-фторфенил	H	4-(пропансульфонил)фенил	Метил	Метил
200	4-фторфенил	H	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Метил	Метил
201	4-фторфенил	H	Пиридин-2-ил	Метил	Метил
202	4-фторфенил	H	пиридин-3-ил	Метил	Метил
203	4-фторфенил	Метил	Фенил	Метил	Метил
204	4-фторфенил	Метил	4-фторфенил	Метил	Метил
205	4-фторфенил	Метил	2-аминофенил	Метил	Метил
206	4-фторфенил	Метил	2-метилфенил	Метил	Метил
207	4-фторфенил	Метил	4-метилфенил	Метил	Метил
208	4-фторфенил	Метил	4-метоксифенил	Метил	Метил
209	4-фторфенил	Метил	4-(пропансульфонил)фенил	Метил	Метил
210	4-фторфенил	Метил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Метил	Метил
211	4-фторфенил	Метил	Пиридин-2-ил	Метил	Метил
212	4-фторфенил	Метил	Пиридин-3-ил	Метил	Метил
213	4-фторфенил	-CO2CH3	Фенил	H	H
214	4-фторфенил	-CO2CH3	4-фторфенил	H	H
215	4-фторфенил	-CO2CH3	2-аминофенил	H	H
216	4-фторфенил	-CO2CH3	2-метилфенил	H	H
217	4-фторфенил	-CO2CH3	4-метилфенил	H	H
218	4-фторфенил	-CO2CH3	4-метоксифенил	H	H
219	4-фторфенил	-CO2CH3	4-(пропансульфонил)фенил	H	H
220	4-фторфенил	-CO2CH 3	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	H	H
221	4-фторфенил	-CO2CH 3	Пиридин-2-ил	H	H
222	4-фторфенил	-CO2CH 3	Пиридин-3-ил	H	H
223	4-фторфенил	-CO2CH 3	Фенил	Метил	Метил
224	4-фторфенил	-CO2CH 3	4-фторфенил	Метил	Метил
225	4-фторфенил	-CO2CH 3	2-аминофенил	Метил	Метил
226	4-фторфенил	-CO2CH 3	2-метилфенил	Метил	Метил
227	4-фторфенил	-CO2CH 3	4-метилфенил	Метил	Метил
228	4-фторфенил	-CO2CH 3	4-метоксифенил	Метил	Метил
229	4-фторфенил	-CO 2CH3	4-(пропансульфонил)фенил	Метил	Метил
230	4-фторфенил	-CO 2CH3	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Метил	Метил
231	4-фторфенил	-CO 2CH3	Пиридин-2-ил	Метил	Метил
232	4-фторфенил	-CO 2CH3	Пиридин-3-ил	Метил	Метил

Соединения, которые относятся к соединениям второго аспекта Категории II, в которых R является аминогруппой, могут быть получены согласно схеме, описанной ниже, исходя из общего промежуточного соединения 11. В следующем ниже примере R^9a и R^9b, каждый, обозначают метил и R обозначает (S)-(1-фенил)этиламиногруппу.

ПРИМЕР 9

6-Диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-[2-(1-фенилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (26)

Получение бензилового эфира 4-диметиламино-2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (21): К раствору бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил-4-оксо-пиразолидин-1-карбоновой кислоты 11 (3,6 г, 10 ммоль) и диметиламина (10 мл 2М раствора, 20 ммоль) в ТГФ добавляют при комнатной температуре Na(OAc) ₃BH (3,1 г, 15 ммоль) и НОАс (0,6 г, 10 ммоль). Раствор перемешивают 12 часов, затем распределяют между диэтиловым эфиром и NaHCO₃. Водные слои экстрагируют несколько раз эфиром, а органические слои объединяют, сушат и концентрируют в вакууме до получения прозрачного масла, которое повторно растворяют в эфире, вводят 1 эквивалент раствора HCl в эфире с образованием твердого вещества белого цвета. Твердое вещество отфильтровывают и получают требуемый продукт в виде HCl соли.

Получение 1-(4-диметиламинопиразолидин-1-ил)-2-(4-фторфенил)-этанона (22): Бензиловый эфир 4-диметиламино-2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-1-карбоновой кислоты, HCl соль, (21) (4,22 г, 10 ммоль) растворяют в метаноле и добавляют Pd/C (100 мг). Раствор затем гидрируют на аппарате Parr^® Hydrogenation Apparatus в течение 18 часов, после чего катализатор удаляют фильтрованием и фильтраты концентрируют в вакууме с получением требуемого продукта.

Получение 1-[4-диметиламино-2-(2-метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-1-ил]-2-(4-фторфенил)-этанона (23):

К раствору 1-(4-диметиламинопиразолидин-1-ил)-2-(4-фторфенил)-этанона 22 (2,5 г, 10 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляют 2-метилсульфонилпиримидин-4-карбонилхлорид (3,7 г, 20 ммоль) с последующим прикапыванием 1,0 N водного раствора гидроксида натрия (35 мл). Смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном (100 мл) и промывают водой (100 мл). Водный слой подвергают обратному экстрагированию дихлорметаном (100 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл) и рассолом (100 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученное сырое вещество очищают на диоксиде кремния (от 1:1 гексан/этилацетат до 100% этилацетата) для получения требуемого продукта.

Получение 6-диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (24):

1-[4-Диметиламино-2-(2-метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-1-ил]-2-(4-фторфенил)-этанон 23 (4,0 г, 10 ммоль) растворяют в ТГФ (75 мл). Этот раствор вводят по каплям через канюлю в суспензию NaH (0,440 г 60%-ной дисперсии в минеральном масле, 11 ммоль) при -30°С. Реакционную смесь постепенно доводят до 0°С в течение 3 часов. Реакцию гасят при помощи NH₄Cl (насыщенный водный раствор) (15 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре, затем концентрируют в вакууме. Остаток разбавляют тетрагидрофураном (250 мл) и смесь фильтруют через слой целита. Фильтрат концентрируют в вакууме до получения маслообразного вещества. Сырой продукт очищают на диоксиде кремния (от 100%-го этилацетата до смесей 5%, 10%, 20% метиловый спирт/этилацетат) для получения требуемого продукта.

Получение 6-диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (25):

К раствору 6-диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 24, (3,9 г, 10 ммоль) в смеси ТГФ:метанол (150 мл смеси 1:1) прикапывают раствор Oxone^® (пероксимоносульфата калия) (24,3 г, 39,5 ммоль) в воде (100 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа, разбавляют водным раствором NaHCO₃ и трижды экстрагируют этилацетатом. Органические слои объединяют, сушат и концентрируют в вакууме и получают сырой требуемый продукт, который используют в дальнейшем без очистки.

Получение 6-диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-[2-(1-(S)-фенилэтиламино)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (26): Раствор неочищенного 6-диметиламино-2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 25, полученного, как описано выше (4,2 г, 10 ммоль), и (S)-(-) -метилбензиламин (45,2 мл, 351 ммоль) растворяют в толуоле (100 мл). Полученную смесь нагревают до 140°С в течение 12 часов, охлаждают до комнатной температуры и растворитель отгоняют в вакууме. Полученный остаток очищают на диоксиде кремния (1:1 EtOAc/гексан) для получения требуемого продукта.

Соединения Категории III, являющиеся ингибиторами выделения воспалительных цитокинов, согласно настоящему изобретению характеризуется общей структурой, которая описывается формулой:

и в соответствии с первым аспектом относятся к эфирным аналогам формулы:

в которой R и R¹ имеют значения, указанные в таблице IV.

Таблица IV
№	R1	R
233	4-фторфенил	Фенокси
234	4-фторфенил	2-фторфенокси
235	4-фторфенил	3-фторфенокси
236	4-фторфенил	4-фторфенокси
237	4-фторфенил	2,6-дифторфенокси
238	4-фторфенил	2-цианофенокси
239	4-фторфенил	3-цианофенокси
240	4-фторфенил	2-трифторметилфенокси
241	4-фторфенил	4-трифторметилфенокси
242	4-фторфенил	2-метилфенокси
243	4-фторфенил	4-метилфенокси
244	4-фторфенил	2,4-диметилфенокси
245	4-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси
246	4-фторфенил	2-метоксифенокси
247	4-фторфенил	4-метоксифенокси
248	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
249	3-фторфенил	Фенокси
250	3-фторфенил	2-фторфенокси
251	3-фторфенил	3-фторфенокси
252	3-фторфенил	4-фторфенокси
253	3-фторфенил	2,6-дифторфенокси
254	3-фторфенил	2-цианофенокси
255	3-фторфенил	3-цианофенокси
256	3-фторфенил	2-трифторметилфенокси
257	3-фторфенил	4-трифторметилфенокси
258	3-фторфенил	2-метилфенокси
259	3-фторфенил	4-метилфенокси
260	3-фторфенил	2,4-диметилфенокси
261	3-фторфенил	3-N-ацетиламинофенокси
262	3-фторфенил	2-метоксифенокси
263	3-фторфенил	4-метоксифенокси
264	3-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
265	3-трифторметилфенил	Фенокси
266	3-трифторметилфенил	2-фторфенокси
267	3-трифторметилфенил	3-фторфенокси
268	3-трифторметилфенил	4-фторфенокси
269	3-трифторметилфенил	2,6-дифторфенокси
270	3-трифторметилфенил	2-цианофенокси
271	3-трифторметилфенил	3-цианофенокси
272	3-трифторметилфенил	2-трифторметилфенокси
273	3-трифторметилфенил	4-трифторметилфенокси
274	3-трифторметилфенил	2-метилфенокси
275	3-трифторметилфенил	4-метилфенокси
276	3-трифторметилфенил	2,4-диметилфенокси
277	3-трифторметилфенил	3-N-ацетиламинофенокси
278	3-трифторметилфенил	2-метоксифенокси
279	3-трифторметилфенил	4-метоксифенокси
280	3-трифторметилфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил

Соединения, которые соответствуют первому аспекту соединений Категории III, могут быть получены по схеме, описанной ниже, с использованием промежуточного соединения 8 в качестве соответствующего исходного материала.

ПРИМЕР 10

2-(4-Фторфенил)-6-гидрокси-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (36)

Получение 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-оксо-пиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты (27): 1-бензиловый эфир 2-трет-бутилоксикарбонил-4-метиленпиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 8 (23,9 г, 75,1 ммоль) растворяют в дихлорметане (200 мл). Раствор охлаждают до -78°С и продувают кислородом в течение 5 минут. Озоновый газ пропускают через раствор до тех пор, пока раствор не приобретет густой синий цвет (приблизительно 20 минут). Раствор продувают кислородом и аргоном, затем вводят 40 мл диметилсульфида. Охлаждающую баню устраняют и раствор перемешивают при комнатной температуре 12 часов. Реакционный раствор затем концентрируют в вакууме и полученное в результате масло очищают на диоксиде кремния (3:1-2:1 гексан/этилацетат) для получения 13,5 г (выход 56%) требуемого продукта в виде вязкого прозрачного масла.

Получение 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-гидроксипиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты (28): 1-бензиловый эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-оксо-пиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 27 (5,0 г, 15,6 ммоль) растворяют в тетрагидрофуране (150 мл) и раствор охлаждают до -78°С. Добавляет в него по каплям с помощью шприца 5М раствор комплекса боран-диметилсульфид в эфире (6,24 мл, 31,2 ммоль). После выдерживания реакции при -78°С в течение 40 минут реакцию гасят путем медленного добавления насыщенного водного раствора хлорида аммония (20 мл). Охлаждающую баню устраняют и смесь доводят до комнатной температуры при интенсивном перемешивании. Растворитель отгоняют в вакууме и остаток разбавляют дихлорметаном (200 мл). Смесь промывают водой (150 мл) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (150 мл), водой и рассолом. Объединенные водные слои экстрагируют дихлорметаном (200 мл), водой (150 мл), NaCl (насыщенный) (200 мл), сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения 4,66 г (выход 93%) требуемого продукта в виде вязкого прозрачного масла.

Получение 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты (29):

1-бензиловый эфир 2-трет-бутилоксикарбонил-4-гидроксипиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 28 (1,42 мг, 4,40 ммоль) растворяют в пиридине (22 мл). Добавляют 4-диметиламинопиридин (10 мг), затем триметилацетилхлорид (1,63 мл, 13,2 ммоль). Реакционную среду перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Мутную реакционную смесь затем концентрируют в вакууме и получают остаток белого цвета. К остатку добавляют дихлорметан (75 мл) и смесь промывают 1N водным раствором хлористоводородной кислоты (75 мл). Водный слой экстрагируют дихлорметаном (75 мл), объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором NaHCO₃ (75 мл), водой (75 мл), рассолом (75 мл), затем сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме до получения сырого продукта. Сырой продукт очищают на диоксиде кремния (4:1-1:1 гексан/этилацетат) и получают 1,76 г (выход 98%) требуемого продукта в виде прозрачного вязкого масла.

Получение 1-бензилового эфира 4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1-карбоновой кислоты (30):

1-Бензиловый эфир 2-трет-бутилоксикарбонил-4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 29 (1,76 г, 4,33 ммоль) растворяют в метаноле (40 мл) и раствор охлаждают до 0°С. Добавляют по каплям тионилхлорид (3,16 мл, 43,3 ммоль), реакционную среду доводят до комнатной температуры и перемешивание продолжают в течение 12 часов. Реакционный раствор концентрируют в вакууме с получением 1,45 г (выход 98%) требуемого продукта в виде соли HCl, представляющей твердое вещество не совсем белого цвета.

Получение 1-бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1-карбоновой кислоты (31):

1-Бензиловый эфир 4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1-карбоновой кислоты 30 (1,45 г, 4,23 ммоль) растворяют в дихлорметане (21 мл). Раствор охлаждают до 0°С и добавляют по каплям триэтиламин (1,30 мл, 9,31 ммоль) с помощью шприца. Охлаждающую баню устраняют и реакционную среду доводят до комнатной температуры и перемешивание продолжают 20 минут. Вводят 4-фторфенилуксусную кислоту (848 мг, 5,50 ммоль). После перемешивания в течение 5 минут реакционную смесь переносят через канюлю в раствор 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимидхлоргидрида в дихлорметане (21 мл), поддерживая температуру при 0°С. Реакционную среду оставляют перемешиваться, постепенно доводя температуру до комнатной в течение более 12 часов. Реакционную среду промывают 5%-ным водным раствором Na₂CO ₃ (2x50 мл). Объединенные водные слои экстрагируют несколько раз дихлорметаном (50 мл) и объединенные органические слои промывают рассолом, сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают на диоксиде кремния (2:1-1:1 гексан/этилацетат) и получают 1,71 г (выход 91%) требуемого продукта в виде твердого вещества белого цвета.

Получение 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты (32): 1-бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(2,2-диметилпропионилокси)пиразолидин-1-карбоновой кислоты 31 (1,71 г, 3,86 ммоль) растворяют в метаноле (40 мл). Колбу наполняют азотом и вводят 10%-ный палладий на угле (300 мг). Реакционную колбу интенсивно встряхивают при комнатной температуре и давлении 1 атм водорода в течение 6 часов. Колбу наполняют азотом и реакционную смесь фильтруют через слой целита, промывая этилацетатом (100 мг). Фильтрат концентрируют в вакууме для получения 1,18 г (выход 98%) требуемого продукта в виде желтовато-коричневого твердого вещества.

Получение 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-2-(метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-4-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты (33): К раствору 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты 32 (427 мг, 1,79 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляют 2-метилсульфонилпиримидин-4-карбонилхлорид (676 мг, 3,58 ммоль), затем по каплям прибавляют 1N водный раствор гидроксида натрия (6 мл). Смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном (25 мл) и промывают водой (25 мл). Водные слои подвергают обратному экстрагированию дихлорметаном (25 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (25 мл) и рассолом (25 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Полученное в результате сырое вещество очищают на диоксиде кремния (1:1 гексан/этилацетат до 100% этилацетата) и получают 464 мг (выход 96,6%) требуемого продукта в виде вязкого масла коричневого цвета.

Получение 6-(4-фторфенил)-7-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-5-оксо-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты (34): 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-2-(метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-4-иловый эфир 2,2-диметилпропионовой кислоты 33 (300 мг, 0,651 ммоль) растворяют в ТГФ (6 мл). Этот раствор добавляют затем через канюлю по каплям к суспензии NaH (29 мг 60%-ной дисперсии в минеральном масле, 0,716 ммоль) при -30°С. Реакционную смесь постепенно в течение 3 часов доводят до температуры 0°С. Реакцию гасят с помощью NH₄Cl (насыщенный водный раствор) (1 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре, затем концентрируют в вакууме. Остаток разбавляют тетрагидрофураном (50 мл) и смесь фильтруют через целит. Фильтрат концентрируют в вакууме до получения оранжевого масла. Сырой продукт очищают на диоксиде кремния (100% этилацетат до 5%, 10%, 20% метиловый спирт/этилацетат) для получения 87 мг (выход 30%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета.

Получение 6-(4-фторфенил)-7-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-5-оксо-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты (35): 6-(4-фторфенил)-7-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-5-оксо-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-иловый эфир 2,2-диметилпропионовой кислоты 34 (96 мг, 0,217 ммоль) растворяют в хлороформе (2 мл).

Раствор охлаждают до 0°С и добавляют по каплям к суспензии желтого цвета раствор 3-хлорнадбензойной кислоты (117 мг с чистотой около 77%, 0,521 ммоль) в хлороформе (3 мл). Реакционную среду перемешивают при 0°С в течение 3 часов, затем при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционный раствор, окрашенный в желтый цвет, промывают NaHSO₃ (насыщенный водный раствор) (2х15 мл). Слои разделяют и водный слой экстрагируют хлороформом (2х15 мл). Объединенные органические слои промывают NaHCO₃ (насыщенный водный раствор), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения 50 мг (выход 48%) требуемого продукта в виде масла желтого цвета.

Получение 2-(4-Фторфенил)-6-гидрокси-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (36): Раствор 6-(4-фторфенил)-7-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-5-оксо-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-илового эфира 2,2-диметилпропионовой кислоты 35 (50 мг, 0,105 ммоль) в ТГФ (1 мл) медленно сливают через канюлю в раствор фенолята натрия в ТГФ (1 мл) при 0°С. Охлаждающую баню убирают и реакционную среду перемешивают при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакцию гасят с помощью NH₄Cl (насыщенный водный раствор) (500 мкл). Реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток разбавляют в этилацетате (15 мл). Раствор промывают водой (20 мл) и 5%-ным водным раствором Na₂ CO₃ (20 мл). Объединенные водные слои экстрагируют этилацетатом (25 мл) и рассолом (20 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (100% этилацетат до 5, 10, 20% метиловый спирт/этилацетат) для получения 9 мг (выход 21%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl ₃) 8,43 (д, J=5,2 Гц, 1H), 7,46 (т, J=7,8 Гц, 2H), 7,31-7,27 (м, 3H), 7,19 (д, J=8,2 Гц, 2H), 7,03 (т, J=8,6 Гц, 2H), 6,80 (д, J=5,2 Гц, 1H), 5,41 (ушир. с, 1H), 4,82(м, 1H), 4,23 (д, J=12,4 Гц, 1H), 3,95-3,85 (м, 2H), 3,76 (дд, J=12,4, 4,4 Гц, 1H); HRMS m/z для С₂₂Н₁₈FN₄ O₃ (МН)⁺ рассчитано 405,1363; найдено 405,1365.

Описанную процедуру можно использовать для получения аналогичных соединений Категории III согласно первому аспекту, при котором R⁸ представляет собой С₁-С₄алкилом. Конверсия промежуточного соединения 28 до промежуточного соединения типа IV, например, до метокси-аналога 37, при помощи изложенной ниже процедуры, позволяет специалисту получить 6-алкоксильный циклический аналог соединения Категории III.

ПРИМЕР 11

Получение 1-бензилового эфира 2-трет-бутилоксикарбонил-4-метоксипиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты (37): 1-Бензиловый эфир 2-трет-бутилоксикарбонил-4-гидроксипиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 28 (2,55 г, 7,91 ммоль) растворяют в диметилформамиде (40 мл). Добавляют метилиодид (1,97 мл, 31,6 ммоль) и затем оксид серебра (3,67 г, 15,8 ммоль). Колбу закрывают фольгой и встряхивают в течение 12 часов в отсутствие света. Реакционную смесь вливают в эфир (150 мл). Смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре и фильтруют через слой целита. Фильтрат промывают водой (2х150 мл) и рассолом (150 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения 2,58 г (выход 97%) требуемого продукта в виде прозрачного масла желтого цвета.

Согласно второму аспекту соединения Категории III относятся к структуре, имеющей заместитель R² в положении 6 пиразоло[1,2-a]пиразол-1-оновой циклической системы, который содержит карбонильную группу, выбранную из группы, содержащей -(СН₂)_jCO₂ R¹⁰; -(CH₂)_jOCO₂R ¹⁰; -(CH₂)_jCON(R¹⁰) ₂ и -(CH₂)_jOCON(R¹⁰) ₂, в которых R¹⁰ имеет значения, описанные выше. Неограничивающий пример аналогичного соединения согласно второму аспекту соединений Категории III имеет формулу:

Таблица VII иллюстрирует примеры соединений этого аспекта согласно настоящему изобретению, в которых два заместителя R¹⁰, взятые вместе, образуют цикл.

Таблица VII
№	R1	R3	R 10 кольцо
281	4-фторфенил	Фенил	Морфолин-1-ил
282	4-фторфенил	4-фторфенил	Морфолин-1-ил
283	4-фторфенил	2-аминофенил	Морфолин-1-ил
284	4-фторфенил	2-метилфенил	Морфолин-1-ил
285	4-фторфенил	4-метилфенил	Морфолин-1-ил
286	4-фторфенил	4-метоксифенил	Морфолин-1-ил
287	4-фторфенил	4-(пропансульфонил)фенил	Морфолин-1-ил
288	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Морфолин-1-ил
289	4-фторфенил	Пиридин-2-ил	Морфолин-1-ил
290	4-фторфенил	Пиридин-3-ил	Морфолин-1-ил
291	4-фторфенил	Фенил	Пиперидин-1-ил
292	4-фторфенил	4-фторфенил	Пиперидин-1-ил
293	4-фторфенил	2-аминофенил	Пиперидин-1-ил
294	4-фторфенил	2-метилфенил	Пиперидин-1-ил
295	4-фторфенил	4-метилфенил	Пиперидин-1-ил
296	4-фторфенил	4-метоксифенил	Пиперидин-1-ил
297	4-фторфенил	4-(пропансульфонил)фенил	Пиперидин-1-ил
298	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Пиперидин-1-ил
299	4-фторфенил	Пиридин-2-ил	Пиперидин-1-ил
300	4-фторфенил	Пиридин-3-ил	Пиперидин-1-ил
301	4-фторфенил	Фенил	Пиперазин-1-ил
302	4-фторфенил	4-фторфенил	Пиперазин-1-ил
303	4-фторфенил	2-аминофенил	Пиперазин-1-ил
304	4-фторфенил	2-метилфенил	Пиперазин-1-ил
305	4-фторфенил	4-метилфенил	Пиперазин-1-ил
306	4-фторфенил	4-метоксифенил	Пиперазин-1-ил
307	4-фторфенил	4-(пропансульфонил)фенил	Пиперазин-1-ил
308	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Пиперазин-1-ил
309	4-фторфенил	Пиридин-2-ил	Пиперазин-1-ил
310	4-фторфенил	Пиридин-3-ил	Пиперазин-1-ил

Как описано выше, метод получения соединений, входящих в первый аспект соединений Категории III, включает конечный этап, на котором О-защитная группа, такая как, например, С(О)С(СН₃)₃ удаляется, в это же время группа -OR³ вводится в структуру соединения, например, в процессе конверсии соединения 35 в соединение 36. Что касается соединений, соответствующих второму аспекту, то нижеописанная процедура используется для получения соединений, в которых один из R² в положении 6 представляет карбонильную группу, описанную выше, как относящуюся ко второму аспекту соединений Категории III.

Следующая схема иллюстрирует получение соединений, изложенное выше, исходя из промежуточного соединения 11.

ПРИМЕР 12

6-(4-фторфенил)-5-оксо-7-(2-феноксипиримидин-4-ил)-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-иловый эфир морфолин-4-карбоновой кислоты (43)

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-гидроксипиразолидин-1-карбоновой кислоты (38): Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-оксо-пиразолидин-1-карбоновой кислоты 11 (1,0 г, 2,81 ммоль) растворяют в ТГФ (30 мл) и раствор охлаждают до -78°С. Прикапывают 5М раствор комплекса боран-диметилсульфида в эфире (1,2 мл, 5,61 ммоль). После выдерживания реакции при температуре -78°С в течение 1 часа реакцию гасят путем медленного добавления NH₄Cl (насыщенный водный раствор) (10 мл). Охлаждающую баню удаляют и смесь доводят до комнатной температуры при интенсивном перемешивании. Отгоняют тетрагидрофуран в вакууме и остаток разбавляют водой (50 мл). Смесь экстрагируют этилацетатом (2×100 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме до получения масла желтого цвета, которое очищают на диоксиде кремния (1:1-1:2 гексан/этилацетат до 100% этилацетата) и получают 731 мг (выход 73%) требуемого продукта в виде прозрачного вязкого масла.

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(4-нитрофеноксикарбонил)-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (39):

Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-гидроксипиразолидин-1-карбоновой кислоты 38 (366 мг, 1,02 ммоль) растворяют в дихлорметане (10 мл). Раствор охлаждают до 0°С и добавляют одной порцией п-нитрофенилхлорформиат (411 мг, 2,04 ммоль). Раствор перемешивают при 0°С и добавляют пиридин (198 мкл, 2,45 ммоль). Перемешивание продолжают при 0°С в течение 1 часа с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную среду разбавляют водой (40 мл) и экстрагируют дихлорметаном (40 мл). Органический слой промывают 0,5N NaOH (2×40 мл). Объединенные водные слои экстрагируют дихлорметаном (30 мл). Объединенные органические слои промывают рассолом (30 мл), сушат, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (3:1, 2:1, 1:1 гексан/этилацетат) и получают 462 мг (выход 86%) требуемого продукта в виде пены белого цвета.

Получение 1-бензилоксикарбонил-2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-иловый эфир морфолин-4-карбоновой кислоты (40):

Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(4-нитрофеноксикарбонил)-пиразолидин-1-карбоновой кислоты 39 (462 мг, 0,882 ммоль) растворяют в дихлорметане (9 мл). Добавляют морфолин (770 мкл, 8,82 ммоль), и реакционная среда сразу приобретает бледно-желтый цвет. После перемешивания в течение около 1,5 час при комнатной температуре реакционную среду разбавляют дихлорметаном (20 мл) и промывают 5%-ным раствором Na₂CO₃ (2×20 мл). Объединенные водные слои экстрагируют дихлорметаном (20 мл), органические слои объединяют, промывают водой, рассолом и сушат. Растворитель отгоняют в вакууме и получают 414 мг требуемого продукта в виде прозрачного масла.

Получение 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-илового эфира морфолин-4-карбоновой кислоты (41): 1-бензилоксикарбонил-2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-иловый эфир морфолин-4-карбоновой кислоты 40 (512 мг, 1,09 ммоль) растворяют в метаноле (10 мл) и колбу наполняют азотом, затем загружают 10%-ный палладий на угле (103 мг). Реакционную смесь интенсивно перемешивают и гидрируют при давлении 1 атм в течение 2,5 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтруют через слой целита, споласкивают этилацетатом (100 мл) и концентрируют в вакууме до получения 354 мг требуемого продукта в виде белого порошка.

Получение 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-2-(2-феноксипиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-4-илового эфира морфолин-4-карбоновой кислоты (42): 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-пиразолидин-4-иловый эфир морфолин-4-карбоновой кислоты (41) (354 мг, 1,05 ммоль) и 2-феноксипиримидин-4-карбонилхлорид 18 (345 мг, 1,47 ммоль) растворяют в дихлорметане (2 мл). При интенсивном перемешивании прикапывают 1N раствор NaOH (3 мл) при комнатной температуре. Реакция протекает в течение 12 часов, затем вводят дополнительное количество хлорида кислоты 18 и продолжают перемешивание в течение 3 часов. Вводят снова (83 мг) хлорид кислоты 18 и продолжают перемешивание еще 12 часов. Затем реакционную среду разбавляют дихлорметаном (50 мл) и промывают водой (50 мл). Объединенные органические слои промывают NaHCO ₃ (насыщенный раствор) (50 мл) и рассолом (50 мл), сушат, фильтруют и концентрируют до получения коричневого масла. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (100% этилацетат-5% метиловый спирт/этилацетат) и получают 348 мг (выход 61%) требуемого продукта в виде вязкого масла.

Получение 6-(4-фторфенил)-5-оксо-7-(2-феноксипиримидин-4-ил)-2,3-дигидро-1Н,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-2-илового эфира морфолин-4-карбоновой кислоты (43): Раствор 1-[2-(4-фторфенил)ацетил]-2-(2-феноксипиримидин-4-карбонил)-пиразолидин-4-илового эфира морфолин-4-карбоновой кислоты 42 (154 мг, 0,287 ммоль) в диметилформамиде (3 мл) прикапывают при -10°С к суспензии гидрида натрия (16,4 мг 60%-ной дисперсии в минеральном масле, 0,410 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл). После выдерживания при -10°С в течение часа реакционную среду нагревают до 0°С в течение 2 часов. Раствор оранжевого цвета затем гасят медленным добавлением насыщенного раствора NH₄Cl (400 мкл). Охлаждающую баню устраняют и раствор оставляют нагреваться до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и полученный в результате остаток растворяют в ТГФ (25 мл) и фильтруют через слой целита. Фильтрат концентрируют в вакууме и остаток очищают при помощи препаративной ВЭЖХ с получением 47 мг (выход 32%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,46 (д, J=4,9 Гц, 1H), 7,47-7,18 (м, 9H), 7,08 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,89 (д, J=4,9 Гц, 1H), 5,66 (м, 1H), 4,16 (м, 2H), 4,02 (д, J=12,9 Гц, 1H), 3,87 (дд, J=12,9, 5,1 Гц, 1H), 3,79-3,30 (м, 8H); HRMS m/z для C₂₇H₂₅FN₅ O₅ (MH⁺) рассчитано 518,1840, найдено 518,1815.

Согласно третему аспекту соединения Категории III относятся к амино-аналогам, соответствующим формуле:

в которой группы R являются аминогруппами формулы

-NH[CHR^5b]R⁶, и R¹, R ^5b, R⁶ и R⁸ имеют значения, указанные в таблице VIII.

Таблица VIII
№	R1	R5b	R 6	R8
311	4-фторфенил	H	Фенил	Метил
312	4-фторфенил	H	4-фторфенил	Метил
313	4-фторфенил	H	2-аминофенил	Метил
314	4-фторфенил	H	2-метилфенил	Метил
315	4-фторфенил	H	4-метилфенил	Метил
316	4-фторфенил	H	4-метоксифенил	Метил
317	4-фторфенил	H	4-(пропансульфонил)фенил	Метил
318	4-фторфенил	H	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Метил
319	4-фторфенил	H	Пиридин-2-ил	Метил
320	4-фторфенил	H	Пиридин-3-ил	Метил
321	4-фторфенил	H	H	Метил
322	4-фторфенил	H	Метил	Метил
323	4-фторфенил	H	Этил	Метил
324	4-фторфенил	H	Винил	Метил
325	4-фторфенил	H	Циклопропил	Метил
326	4-фторфенил	H	Циклогексил	Метил
327	4-фторфенил	H	Метоксиметил	Метил
328	4-фторфенил	H	Метоксиэтил	Метил
329	4-фторфенил	H	1-гидрокси-1-метилэтил	Метил
330	4-фторфенил	H	-CO 2H	Метил
331	4-фторфенил	Метил	Фенил	Метил
332	4-фторфенил	Метил	4-фторфенил	Метил
333	4-фторфенил	Метил	2-аминофенил	Метил
334	4-фторфенил	Метил	2-метилфенил	Метил
335	4-фторфенил	Метил	4-метилфенил	Метил
336	4-фторфенил	Метил	4-метоксифенил	Метил
337	4-фторфенил	Метил	4-(пропансульфонил)фенил	Метил
338	4-фторфенил	Метил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил	Метил
339	4-фторфенил	Метил	Пиридин-2-ил	Метил
340	4-фторфенил	Метил	Пиридин-3-ил	Метил
341	4-фторфенил	Метил	H	Метил
342	4-фторфенил	Метил	Метил	Метил
343	4-фторфенил	Метил	Этил	Метил
344	4-фторфенил	Метил	Винил	Метил
345	4-фторфенил	Метил	Циклопропил	Метил
346	4-фторфенил	Метил	Циклогексил	Метил
347	4-фторфенил	Метил	Метоксиметил	Метил
348	4-фторфенил	Метил	Метоксиэтил	Метил
349	4-фторфенил	Метил	1-гидрокси-1-метилэтил	Метил
350	4-фторфенил	Метил	-CO 2H	Метил

Соединения, относящиеся в третьему аспекту соединений Категории III настоящего изобретения, могут быть получены путем метода, описанного ниже, с использованием в качестве исходного соединения промежуточного соединения 28.

ПРИМЕР 13

2-(4-фторфенил)-6-метокси-3-[2-(2-(S)-метокси-1-метилэтиламино)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (51)

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метоксипиразолидин-1-карбоновой кислоты (44): 1-бензиловый эфир 2-трет-бутилоксикарбонил-4-гидроксипиразолидин-1,2-дикарбоновой кислоты 28 (2,55 г, 7,91 ммоль) растворяют в диметилформамиде (40 мл). Добавляют метилиодид (1,97 мл, 31,6 ммоль) с последующим добавлением оксида серебра (3,67 г, 15,8 ммоль). Колбу закрывают фольгой и перемешивают смесь в течение ночи в отсутствие света. Реакционную смесь выливают в эфир (150 мл). Смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре и фильтруют через слой целита. Фильтрат промывают водой (2×150 мл) и рассолом (150 мл), сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме для получения 2,58 г (выход 97%) требуемого продукта в виде прозрачного масла желтого цвета.

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(4-метокси)-пиразолидин-1-карбоновой кислоты (45): Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метоксипиразолидин-1-карбоновой кислоты 44, (2,57 г, 7,64 ммоль) растворяют в метиловом спирте (75 мл) и раствор охлаждают до 0°С. Добавляют по каплям тионилхлорид (5,58 мл, 76,4 ммоль) и температуру реакционной среды доводят до комнатной в течение ночи. Реакционный раствор концентрируют в вакууме и получают 2,07 г (выход 99%) требуемого продукта в виде соли HCl, представляющей собой твердое вещество не совсем белого цвета.

Получение бензилового эфира 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метоксипиразолидин-1-карбоновой кислоты (46): Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-(4-метокси)-пиразолидин-1-карбоновой кислоты 45, (8,81 г, 32,3 ммоль) растворяют в дихлорметане (150 мл). Добавляют 4-фторфенилацетилхлорид (5,31 г, 38,8 ммоль), затем добавляют 0,5N водный раствор гидроксида натрия (150 мл). Смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 6 часов. Реакционную среду разбавляют дихлорметаном (200 мл) и промывают водой (200 мл). Водный слой экстрагируют дихлорметаном (2×200 мл). Объединенные органические слои промывают 5%-ным водным раствором карбоната натрия (250 мл) и рассолом (250 мл), сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме до получения 12,0 г требуемого продукта в виде вязкого масла желтовато-коричневого цвета.

Получение 2-(4-фторфенил)-1-(4-метоксипиразолидин-1-ил)-этанона (47): Бензиловый эфир 2-[2-(4-фторфенил)ацетил]-4-метоксипиразолидин-1-карбоновой кислоты 46 (12,0 г, 32,2 ммоль) растворяют в метиловом спирте (300 мл). Колбу продувают азотом и загружают 10%-ным палладием на угле (1,2 г). Реакционную смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре при давлении водорода 1 атм в течение 3 часов. Колбу продувают азотом и реакционную смесь фильтруют через слой целита, споласкивают этилацетатом (100 мл). Фильтрат концентрируют в вакууме до получения 7,67 г требуемого продукта в виде вязкого прозрачного масла.

Получение 2-(4-фторфенил)-1-[4-метокси-2-(2-метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)пиразолидин-1-ил]-этанона (48): 2-(4-фторфенил)-1-(4-метоксипиразолидин-1-ил)-этанон 47, (7,67 г, 32,2 ммоль) и 2-метилсульфонилпиримидин-4-карбонилхлорид (9,11 г, 48,3 ммоль) растворяют в дихлорметане (150 мл). Медленно прибавляют 0,5N водный раствор гидроксида натрия (150 мл) при помощи воронки и смесь интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь разбавляют 5%-ным водным раствором карбоната натрия (1 л). Смесь экстрагируют дихлорметаном (6х200 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют до получения красного масла. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (1:1-1:3 гексан/этилацетат до 100% этилацетата) для получения 10,3 г требуемого продукта в виде вязкого масла коричневого цвета.

Получение 2-(4-фторфенил)-6-метокси-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (49):

Раствор 2-(4-фторфенил)-1-[4-метокси-2-(2 -метилсульфанилпиримидин-4-карбонил)пиразолидин-1-ил]-этанона 48, (2,04 г, 5,22 ммоль) в смеси диметилформамида и тетрагидрофурана 1:1 (30 мл) прикапывают при 0°С к суспензии гидрида натрия (230 мг 60%-ной дисперсии минерального масла, 5,75 ммоль) в диметилформамиде (60 мл). После проведения реакции в течение 2 часов при 0°С с образованием ярко-красного раствора реакцию гасят медленным введением насыщенного водного раствора хлорида аммония (5 мл). Охлаждающую баню устраняют и раствор доводят до комнатной температуры. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и образующийся остаток разбавляют этилацетатом (175 мл). Смесь промывают насыщенным водным раствором хлорида аммония (150 мл). Водный слой экстрагируют этилацетатом (4х75 мл). Объединенные органические слои сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (100% этилацетат до 5, 10, 20% метиловый спирт/этилацетат) для получения 1,1 г (выход 57%) требуемого продукта в виде оранжевого масла.

Получение 2-(4-фторфенил)-6-метокси-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (50): 2-(4-фторфенил)-6-метокси-3-(2-метилсульфанилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он 49 (1,10 г, 2,95 ммоль) разбавляют дихлорметаном (60 мл). Добавляют 3-хлорнадбензойную кислоту (662 мг с чистотой около 77%, 2,95 ммоль) за один прием с образованием суспензии желтого цвета. Спустя 20 минут вводят дополнительное количество 3-хлорнадбензойной кислоты (240 мг, 1,07 ммоль). Спустя 10 минут образовавшийся прозрачный желтый раствор выливают в 10%-ный водный раствор бисульфида натрия (60 мл). Слои разделяют и водный слой экстрагируют дихлорметаном (2×50 мл). Объединенные органические слои промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (2×50 мл), сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют в вакууме до получения 948 мг смеси соответствующего сульфоксида и сульфона в виде желтого твердого вещества. Используют на следующей стадии в том виде, как получено.

Получение 2-(4-фторфенил)-6-метокси-3-[2-(2-(S)-метокси-1-метилэтиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (51): 2-(4-Фторфенил)-6-метокси-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он в виде смеси 50 (948 мг, 2,44 ммоль) и (S)-2-амино-1-метоксипропан (652 мг, 7,32 ммоль) разбавляют толуолом (16 мл). Смесь нагревают при 120°С в течение 2 часов.

Оранжевый раствор оставляют охлаждаться до комнатной температуры, затем концентрируют в вакууме до получения остатка оранжевого цвета. Сырое вещество очищают на диоксиде кремния (5%, 10% метиловый спирт/дихлорметан) и получают 550 мг требуемого продукта в виде твердого флуоресцирующего вещества желтого цвета. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,16 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,40 (дд, J=8,8, 5,5 Гц, 2H), 7,03 (т, J=8,8 Гц, 2H), 6,39 (д, J=5,1 Гц, 1H), 5,39 (ушир. д, J=8,0 Гц, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,30-4,02 (м, 5H), 3,45 (д, J=4,6 Гц, 2H), 3,42 (с, 3H), 3,39 (с, 3H), 1,28 (д, J=6,6 Гц, 3H); HRMS, m/z для С₂₁Н₂₅FN₅О ₃ (МН⁺) рассчитано 414,1941, найдено 414,1945.

Используя промежуточное соединение 10, которое содержит 6-метиленовую группу, можно получить согласно описанной выше процедуре следующее соединение:

2-(4-фторфенил)-6-метилен-3-[2-(2-(S)-фенил-1-метилэтиламино)-пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она 52; ¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) 1,60 (д, 3H, J=6,9 Гц), 4,52 (дд, 2H, J=15,9, 24 Гц), 5,08-5,15 (м, 2H), 5,26 (с, 1H), 6,03 (с, 1H), 6,38 (д, 1H, J=5,1 Гц), 7,00-7,05 (м, 2H), 7,22-7,42 (м, 8H), 8,16 (д, 1H, J=5,1 Гц) HRMS: точная масса С₂₅Н₂₂FN₅ O 428,1887 (М⁺+Н), найдено 428,1871.

Промежуточное соединение 10 можно также окислить с помощью OsO₄ в стандартных условиях и получить промежуточное соединение 53 в соответствии с нижеприведенной схемой:

которое может быть использовано для получения следующего соединения:

2-(4-фторфенил)-6-гидрокси-6-гидроксиметил-3-(2-феноксипиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он 54; ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 300 МГц) 3,41-3,52 (м, 2H), 3,72-3,86 (м, 3H), 3,94 (д, 1H, J=11,1 Гц), 5,23 (т, 1H, J=5,7 Гц), 5,71 (с, 1H), 7,06 (д, 1H, J=4,8 Гц), 7,18-7,34 (м, 5H), 7,40-7,50 (м, 4H), 8,69 (д, 1H, J=4,8 Гц), ESI⁼ MS: m/z (относительная интенсивность) 435,32 (100, М⁺+Н) Анализ для C₂₃H ₁₉FN₄O₄ 0,5H₂O: рассчитано С, 62,30; H, 4,55; N, 12,63. Найдено: C, 62,33; H, 4,13; N, 12,41.

Согласно процедуре, описанной выше, или путем ее модификации можно получить другие соединения согласно настоящему изобретению, среди которых следующие:

2-(3-фторметилфенил)-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фтофенил)-3-(2-(6-аминопиримидин-4-илокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-[2-(3-фторфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-[2-(2,4-диметилфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(2,4-дифторфенил)-3-(2-феноксипиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-[2-(4-хлорфенокси)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-{2-[1-(R,S)-(4-фторфенил)этиламино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-{4-[2-(4-фторфенил)-3-оксо-6,7-дигидро-3H,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-ил]-пиримидин-2-иламино}-пропионовая кислота;

2-{4-[2-(4-фторфенил)-3-оксо-6,7-дигидро-3H,5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-ил]-пиримидин-2-иламино}-N,N-диметилпропионовая кислота;

2-(4-фторфенил)-3-(2-([1,3,4]тиадиазол-2-иламино)пиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(пиридин-2-илметил)амино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-[(2-метоксипропиламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(фуран-2-илметил)амино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(3-бензо[1,3]диоксол-5-ил)амино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(1-(пропан-1-сульфонил)пиперидин-4-иламино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он; и

2-(4-фторфенил)-3-{2-[(4-метоксибензиламино)амино]пиримидин-4-ил}-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он;

Соединения Категории IV, являющиеся ингибиторами выделения воспалительного цитокина, в соответствии с настоящим изобретением имеет общую структуру, отвечающую формуле:

и согласно первому аспекту относятся к соединениям, у которых радикалы R¹ и R^4b имеют значения, указанные ниже в таблице IX.

Таблица IX
№	R1	R4b
351	4-фторфенил	Фенил
352	4-фторфенил	2-фторфенил
353	4-фторфенил	3-фторфенил
354	4-фторфенил	4-фторфенил
355	4-фторфенил	2-хлорфенил
356	4-фторфенил	3-хлорфенил
357	4-фторфенил	4-хлорфенил
358	4-фторфенил	2,4-дифторфенил
359	4-фторфенил	2,6-дифторфенил
360	4-фторфенил	3,5-дифторфенил
361	4-фторфенил	2,4,6-трифторфенил
362	4-фторфенил	2,4-дихлорфенил
363	4-фторфенил	2,6-дихлорфенил
364	4-фторфенил	3,5-дихлорфенил
365	4-фторфенил	2,4,6-трихлорфенил
366	4-фторфенил	Нафтилен-1-ил
367	4-фторфенил	Нафтилен-2-ил
368	4-фторфенил	2-аминофенил
369	4-фторфенил	3-аминофенил
370	4-фторфенил	4-аминофенил
371	4-фторфенил	2-цианофенил
372	4-фторфенил	3-цианофенил
373	4-фторфенил	4-цианофенил
374	4-фторфенил	2-метилфенил
375	4-фторфенил	3-метилфенил
376	4-фторфенил	4-метилфенил
377	4-фторфенил	2-метоксифенил
378	4-фторфенил	3-метоксифенил
379	4-фторфенил	4-метоксифенил
380	4-фторфенил	2-метоксифенокси
381	4-фторфенил	4-метоксифенокси
382	4-фторфенил	2-(N-ациламино)фенил
383	4-фторфенил	3-(N-ациламино)фенил
384	4-фторфенил	4-(N-ациламино)фенил
385	4-фторфенил	4-(метансульфонил)фенил
386	4-фторфенил	4-(этансульфонил)фенил
387	4-фторфенил	4-(пропансульфонил)фенил
388	4-фторфенил	2-трифторметилфенил
389	4-фторфенил	3-трифторметилфенил
390	4-фторфенил	4-трифторметилфенил
391	4-фторфенил	3,5-бис(трифторметил)фенил
392	4-фторфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил
393	3-трифторметилфенил	Фенил
394	3-трифторметилфенил	2-фторфенил
395	3-трифторметилфенил	3-фторфенил
396	3-трифторметилфенил	4-фторфенил
397	3-трифторметилфенил	2-хлорфенил
398	3-трифторметилфенил	3-хлорфенил
399	3-трифторметилфенил	4-хлорфенил
400	3-трифторметилфенил	2,4-дифторфенил
401	3-трифторметилфенил	2,6-дифторфенил
402	3-трифторметилфенил	3,5-дифторфенил
403	3-трифторметилфенил	2,4,6-трифторфенил
404	3-трифторметилфенил	2,4-дихлорфенил
405	3-трифторметилфенил	2,6-дихлорфенил
406	3-трифторметилфенил	3,5-дихлорфенил
407	3-трифторметилфенил	2,4,6-трихлорфенил
408	3-трифторметилфенил	Нафтилен-1-ил
409	3-трифторметилфенил	Нафтилен-2-ил
410	3-трифторметилфенил	2-аминофенил
411	3-трифторметилфенил	3-аминофенил
412	3-трифторметилфенил	4-аминофенил
413	3-трифторметилфенил	2-цианофенил
414	3-трифторметилфенил	3-цианофенил
415	3-трифторметилфенил	4-цианофенил
416	3-трифторметилфенил	2-метилфенил
417	3-трифторметилфенил	3-метилфенил
418	3-трифторметилфенил	4-метилфенил
419	3-трифторметилфенил	2-метоксифенил
420	3-трифторметилфенил	3-метоксифенил
421	3-трифторметилфенил	4-метоксифенил
422	3-трифторметилфенил	2-метоксифенокси
423	3-трифторметилфенил	4-метоксифенокси
424	3-трифторметилфенил	2-(N-ациламино)фенил
425	3-трифторметилфенил	3-(N-ациламино)фенил
426	3-трифторметилфенил	4-(N-ациламино)фенил
427	3-трифторметилфенил	4-(метансульфонил)фенил
428	3-трифторметилфенил	4-(этансульфонил)фенил
429	3-трифторметилфенил	4-(пропансульфонил)фенил
430	3-трифторметилфенил	2-трифторметилфенил
431	3-трифторметилфенил	3-трифторметилфенил
432	3-трифторметилфенил	4-трифторметилфенил
433	3-трифторметилфенил	3,5-бис(трифторметил)фенил
434	3-трифторметилфенил	3-бензо[1,3]диоксол-5-ил

Соединения, которые относятся в первому аспекту соединений Категории IV, могут быть получены согласно схеме, приведенной ниже, с использованием промежуточного соединения 5 в качестве подходящего исходного продукта.

ПРИМЕР 14

2-(4-фторфенил)-3-(2-фениламинопиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло-[1,2-a]пиразол-1-он (2)

Получение 2-(4-фторфенил)-3-(2-фениламинопиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-а]пиразол-1-она (55): К раствору анилина (0,12 мл, 1,34 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляют NaH (0,07 г, 1,00 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 минут при комнатной температуре в нее добавляют 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он 5 (0,25 г, 0,67 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником и перемешивают в течение 1 часа. Смесь разбавляют насыщенным водным раствором NH₄Cl и экстрагируют дважды хлороформом. Органические слои объединяют, сушат над MgSO ₄ и концентрируют в вакууме до получения сырого вещества, которое затем очищают на диоксиде кремния (5% МеОН/хлороформ) и получают 0,05 г (выход 20%) требуемого продукта в виде твердого вещества желтого цвета ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃ ) 8,34 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,57 (дд, J=8,7, 1,2 Гц, 2H), 7,47-7,29 (м, 4H), 7,16-7,05 (м, 3H), 6,62 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,11 (т, J=6,9 Гц, 2H), 4,06 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,70 (дддд, J=6,9, 6,9, 6,9, 6,9 Гц, 2H), ESI⁺ MS m/z (относительная интенсивность) 388,1 (100, М⁺+Н). Анализ для С ₂₂Н₁₈FN₅O 0,5H₂O: рассчитано С, 66,66; H, 4,83; N, 17,67; найдено: С, 66,55; H, 4,49; N, 17,39. Это соединение соответствует аналогичному соединению 351 в таблице IX.

Согласно способу, описанному выше, могут быть получены следующие соединения, относящиеся к первому аспекту соединений Категории IV.

3-[2-(2,6-дифторфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он: ¹H ЯМР (300 МГц, d₆-DMSO) 9,36 (с, NH), 8,38 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,40-7,33 (м, 3H), 7,21-7,11 (м, 4H), 6,58 (д, J=5,1 Гц, 1H), 3,90-3,82 (м, 4H), 2,55-2,51 (м, 2H), ESI⁺ MS m/z (относительная интенсивность) 424,1 (100, М⁺+Н). Анализ для С ₂₂Н₁₆F₃N₅O 0,5H₂ O: рассчитано С, 61,11; H, 3,96; N, 16,20; найдено С, 61,67; H, 4,03; N, 15,73.

3-[2-(2,6-дихлоррфениламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он: ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,32 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,47 (д, J=8,1 Гц, 2H), 7,41 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,29-7,25 (м, 1H), 7,08 (т, J=8,7 Гц, 2H), 6,93 (ушир. с, NH), 6,64 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,06 (т, J=6,9 Гц, 2H), 3,93 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,61 (дддд, J=6,9, 6,9, 6,9, 6,9 Гц, 2H), ESI⁺ MS m/z (относительная интенсивность) 433,1 (100, М⁺+Н). Анализ для С₂₂Н ₁₆FCl₂N₅O 0,5H₂O: рассчитано С, 56,79; H, 3,68; N, 15,05; найдено С, 56,50; H, 3,63; N, 14,59.

2-(4-фторфенил)-3-[2-(пиридин-2-иламино)пиримидин-4-ил]-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он: ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,46 (д, J=5,1 Гц, 1H), 8,38-8,36 (м, 2H), 8,22 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,69 (ддд, J=9,0, 7,5, 1,8 Гц, 1H), 7,45 (дд, J=8,7, 5,4 Гц, 2H), 7,07 (дд, J=8,7, 8,7 Гц, 2H), 7,02-6,98 (м, 1H), 6,72 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,09 (т, J=6,9 Гц, 2H), 4,06 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,73 (дддд, J=6,9, 6,9, 6,9, 6,9 Гц, 2H), ESI ⁺ MS m/z (относительная интенсивность) 389,1 (70, М ⁺+Н). Анализ для С₂₁Н₁₇FN₆ O H₂O: рассчитано С, 62,06; H, 4,71; N, 20,68; найдено С, 61,77; H, 4,26; N, 20,05.

Согласно второму аспекту соединения этой Категории относятся к соединениям, у которых радикалы R ¹ и R^4b имеют значения, указанные ниже в таблице X.

Таблица Х
№	R1	R4b
435	4-фторфенил	Пиридин-2-ил
436	4-фторфенил	Пиридин-3-ил
437	4-фторфенил	Пиридин-4-ил
438	4-фторфенил	Пиримидин-2-ил
439	4-фторфенил	Пиримидин-4-ил
440	4-фторфенил	Пиримидин-5-ил
441	4-фторфенил	4,6-дихлорпиримидин-5-ил
442	4-фторфенил	s-триазинил
443	3-трифторметилфенил	Пиридин-2-ил
444	3-трифторметилфенил	Пиридин-3-ил
445	3-трифторметилфенил	Пиридин-4-ил
446	3-трифторметилфенил	Пиримидин-2-ил
447	3-трифторметилфенил	Пиримидин-4-ил
448	3-трифторметилфенил	Пиримидин-5-ил
449	3-трифторметилфенил	4,6-дихлорпиримидин-5-ил
450	3-трифторметилфенил	s-триазинил

Соединения, которые относятся ко второму аспекту соединений Категории IV, могут быть получены по схеме, приведенной ниже, с использованием промежуточного соединения 5 в качестве подходящего исходного продукта.

ПРИМЕР 15

3-[2-(4,6-Дихлорпиримидин-5-иламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он (56)

Получение 3-[2-(4,6-дихлорпиримидин-5-иламино)-пиримидин-4-ил]-2-(4-фторфенил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-она (56):

К раствору 5-амино-4,6-дихлорпиримидина (219 мг, 1,34 ммоль) в ТГФ (4 мл) добавляют NaH (0,07 г, 1,00 ммоль). После перемешивания смеси в течение 5 минут при комнатной температуре добавляют в реакционную смесь 2-(4-фторфенил)-3-(2-метансульфонилпиримидин-4-ил)-6,7-дигидро-5Н-пиразоло[1,2-a]пиразол-1-он 5 (0,25 г, 0,67 ммоль). Реакционную среду доводят до температуры кипения с обратным холодильником и перемешивают смесь в течение 1 часа. Смесь разбавляют насыщенным водным раствором NH₄ Cl и экстрагируют дважды хлороформом. Органические слои объединяют, сушат над MgSO₄ и концентрируют в вакууме до получения сырого продукта, который очищают на диоксиде кремния (5% МеОН/хлороформ) и получают требуемый продукт в виде твердого вещества желтого цвета. ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) 8,77 (с, 1 H), 8,35 (д, J=5,1 Гц, 1H), 7,35 (дд, J=9,0, 5,1 Гц, 1H), 7,10 (дд, J=8,7, 8,7 Гц, 2H), 6,71 (д, J=5,1 Гц, 1H), 4,25 (т, J=6,9 Гц, 2H), 4,12 (т, J=6,9 Гц, 2H), 2,74 (дддд, J=6,9, 6,9, 6,9, 6,9 Гц, 2H), ESI⁺ MS m/z (относительная интенсивность) 458,1 (100, М⁺+Н). Это соединение соответствует аналогичному соединению 441 в таблице Х.

Соединения согласно настоящему изобретению распределены по нескольким категориям для того, чтобы предоставить возможность специалисту применить рациональную стратегию синтеза для получения аналогичных соединений, которые не были конкретно иллюстрированы примерами в данном описании. Распределение соединений по категориям не подразумевает увеличение или уменьшение эффективности каких-либо композиций на их основе, которые приводятся в данном описании.

Было обнаружено, что перечисленные и описанные выше соединения продемонстрировали во многих примерах активность (IC₅₀ в клетке на основе примера, приведенного ниже, или в примерах, на которые дана ссылка в данном описании) при концентрациях на уровне ниже 1 микромоль (мкМ).

Соединения согласно настоящему изобретению способны эффективно блокировать продуцирование воспалительного цитокина из клеток, что таким образом уменьшает, смягчает, регулирует, снижает, замедляет или предупреждает одно или несколько болезненных состояний или синдромов, которые связаны с внеклеточным выделением одного или более цитокинов. Воспалительные болезненные состояния включают в себя такие, которые связаны со следующими не ограничивающими примерами:

(i) Интерлейкин-1 (IL-1): участвует как молекула, ответственная за большое число болезненных состояний, среди которых ревматоидный артрит, остеоартрит, так же, как и другие болезненные состояния, которые связаны с разрушением соединительной ткани.

(ii) Циклооксигеназа-2 (СОХ-2): ингибиторы выделения цитокина предложены в качестве ингибиторов наведенной экспрессии СОХ-2, которая увеличивается под действием цитокинов. M.K.O'Banlon et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89, 4888 (1998).

(iii) Фактор- некроза опухоли (TNF- ): Этот провоспалительный цитокин считается главным медиатором во многих болезненных состояниях или синдромах, среди которых ревматоидный артрит, остеоартрит, синдром раздраженной толстой кишки (IBS), септический шок, сердечно-легочная дисфункция, острое респираторное заболевание и кахексия.

Каждое из болезненных состояний, которое специалист желает вылечить, может потребовать различных количеств или концентраций соединений, описанных в данном изобретении, для достижения терапевтического результата. Специалист может определить это количество любым известным методом тестирования, с которым знаком простой лаборант.

Настоящее изобретение относится также к формам, в которых выпускаются соединения согласно настоящему изобретению, которые, в зависимости от физиологических условий человека или высшего млекопитающего, способны высвобождать описанные соединения. Один вариант этого аспекта изобретения включает фармацевтически приемлемые соли указанных соединений. Специалист исходя из соображений совместимости с методом доставки, с эксципиентами и тому подобное, может сам выбрать одну солевую форму настоящих соединений среди прочих, поскольку сами соединения являются активными веществами, которые смягчают развитие описанных патологических процессов.

К этому же аспекту изобретения относятся многочисленные "пролекарственные" формы соединений согласно изобретению. При составлении композиций может оказаться целесообразным выпускать соединения согласно изобретению в виде таких химических форм, которые сами не являются активными в отношении активности цитокина, описанной в данном изобретении, но взамен этому соединения согласно изобретению находятся в формах, которые, будучи введены в организм человека или высшего млекопитающего, подвергаются химической реакции, катализируемой при нормальном функционировании организма, например, ферментами, находящимися в желудке, сыворотке крови, причем химическая реакция высвобождает родственный аналог. Термин "пролекарство" относится к таким формам, которые превращаются in vivo в активную фармацевтическую форму.

Композиции

Настоящее изобретение относится также к композициям или составам, которые содержат соединения согласно изобретению, ингибирующие выделение воспалительного цитокина. В целом композиции согласно настоящему изобретению содержат:

a) эффективное количество одного или нескольких бициклических пиразолонов и их производных согласно изобретению, которое является эффективным в отношении ингибирования выделения воспалительных цитокинов; и

б) один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

В соответствии с целью настоящего изобретения термины "эксципиент" и "носитель" используются как взаимозаменяемые в данном описании и обозначают "ингредиенты, которые используются в практике составления безопасных и эффективных фармацевтических композиций".

Специалисту ясно, что эксципиенты используют в первую очередь для того, чтобы обеспечить безопасную, стабильную доставку и функциональность фармацевтического препарата, это назначение заключается не только в том, чтобы выполнять роль общего транспортного средства при доставке, но также и в том, чтобы обеспечить эффективную абсорбцию реципиентом активного вещества. Эксципиент может играть простую и прямую роль инертного носителя или выполнять роль стабилизатора рН системы или покрывающего агента для обеспечения безопасности желудка при доставке ингредиентов. Специалист может также извлечь преимущество из того факта, что соединения согласно настоящему изобретению улучшают клеточную потенцию, фармакокинетические свойства, а также улучшает биодоступность при оральном применении лекарственного средства.

Настоящее изобретение относится также к композициям или составам, которые содержат предшественник или "пролекарственную" форму соединений, которые являются ингибиторами выделения воспалительного цитокина согласно настоящему изобретению. В целом эта композиция, содержащая предшественник согласно настоящему изобретению, содержит:

а) эффективное количество одного или более производных бициклических пиразолонов согласно изобретению, которые вызывают выделение in vivo соответствующего аналога, которое является эффективным в отношении ингибирования воспалительных цитокинов; и

б) один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Способ использования

Настоящее изобретение относится также к способу регулирования уровня одного или более цитокинов, индуцирующих воспаление, среди которых Интелейкин-1 (IL-1), фактор- некроза опухоли (TNF- ) и Интерлейкин-8 (IL-8), и таким образом позволяющему осуществлять контроль, посредничество или смягчение болезненных состояний, воздействуя на количество внеклеточных воспалительных цитокинов. Настоящий способ включает этап введения человеку или высшему млекопитающему эффективного количества композиции, содержащей один или более ингибиторов воспалительного цитокина согласно изобретению.

Поскольку ингибиторы воспалительного цитокина согласно настоящему изобретению могут доставляться методом, при котором может быть достигнут более чем один участок контроля, то можно воздействовать на более чем одно болезненное состояние в одно и то же время. Неограничивающими примерами заболеваний, которые поддаются регулированию или ингибированию ингибиторами воспалительного цитокина, можно назвать такие заболевания, как остеоартрит, ревматоидный артрит, диабет, вирусный иммунодефицит человека (HIV), инфекция.

Процедуры

Соединения настоящего изобретения могут оцениваться по их эффективности, например, путем измерения константы ингибирования цитокина K _i и показателей IC₅₀, которые можно осуществить методом, выбираемым специалистом.

Неограничивающие примеры подходящих методов включают:

i) Метод определения ферментной активности по субстрату, видимому в УФ области, описанный авторами L.Al Relter, Int.J.Peptide Protein Res., 43, 87-96 (1994).

ii) Метод определения ферментной активности по флуоресцирующему субстрату, описанный Thornberry et al., Nature, 356, 768-774 (1992).

iii) Клеточный метод PBMC, описанный в US 6204261 B1 Batchelor et al., от 20 марта 2001 г.

Каждый из указанных методов включен в данное описании в виде ссылки.

Кроме того, в случае фактора- некроза опухоли (TNF- ) ингибирование может быть измерено с помощью липополисахарида (LPS), стимулирующего моноцитарные клетки человека (ТНР-1), так, как описано в документах:

i) K.M.Mohler et al., "Protection Against a Lethal Dose of Endotoxin by an Inhibitor of Tumour Necrosis Factor processing", Nature, 370, pp. 218-220 (1994).

ii) US 6297381 B1 Cirillo et al., от 2 октября 2001 г., метод включен в виде ссылки, и из него воспроизведена ниже релевантная часть.

Ингибирование продуцирования цитокина может наблюдаться путем измерения ингибирования TNF- в клетках ТНР, стимулированных липополисахаридом. Все клетки и реагенты разбавляют в RPMI 1640 красным фенолом и L-глутамином, дополненным дополнительным количеством L-глутамина (в целом: 4 мМ), пенициллином и стрептомицином (каждого по 50 ед/мл) и околоплодной бычьей сывороткой (FBS 3%) (GIBCO, до конечной концентрации). Опыт проводили в стерильных условиях, только препарат исследуемого соединения не был стерилен. Исходные сток-растворы готовят в ДМСО c последующим разбавлением в RPMI 1640 до концентрации, в 2 раза выше, чем желаемая конечная концентрация опыта. Суспензию клеток ТНР-1 (2х10⁶ клеток/мл, конечная концентрация; American Type Culture Company, Rockville, Md.) помещают в 96-луночный круглый полипропиленовый культуральный плоскодонный планшет (Costar 3790; стерильный), содержащий 125 мкл исследуемого соединения (дважды сконцентрированного) или ДМСО в качестве наполнителя (контрольные пробы, холостые пробы). Конечная концентрация ДМСО не должна превышать 0,2%. Смесь клеток подвергали инкубированию в течение 30 минут при температуре 37°С и концентрации СО ₂ 5%, а затем стимулированию липополисахаридом (LPS, конечная концентрация 1 мкг/мл; Sigma L-2630, от E.coli серотип 0111.В4; хранили в концентрации 1 мг/мл сток-раствора в отсортированном эндотоксине, разбавленном Н₂О в качестве носителя при -80°С). Холостые пробы (нестимулированные) получали с Н₂О носителем; конечный инкубационный объем составлял 250 мкл. Инкубацию (4 часа) проводили, как указано выше. В конце опыта осуществляли центрифугирование в течение 5 минут при комнатной температуре при скорости 1600 об/мин (4033 g); супернатанты размещали в чистых 96-луночных планшетах и хранили при -80°С, затем анализировали на факторе- некроза опухоли человека (TNF- ) с помощью соответствующего коммерчески доступного набора ELISA (биоисточник #КНС3015, Camarillo, Ca.). Рассчитанные значения IC₅₀ означают концентрацию исследуемого соединения, при которой происходит 50%-ное снижение максимального продуцирования TNF- .

Хотя были иллюстрированы и описаны конкретные варианты осуществления настоящего изобретения, разумеется, что специалист в данной области может внести другие различные изменения и модификации, не выходя на рамки объема изобретения. При этом имеется в виду, что приложенная формула изобретения охватывает все изменения и модификации, которые входят в объем настоящего изобретения.