способ иммунокоррекции у коров

Формула изобретения

1. Способ иммунокоррекции у коров, включающий введение смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе от 0,5 до 1,5 г на голову в сутки per os в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.

Описание изобретения к патенту

Изобретение относится к ветеринарии, касается способа иммунокоррекции у коров, направленного на предотвращение (профилактику) различных нарушений воспроизводительной функции коров в послеотельный период.

Ослабление защитно-адаптационных механизмов организма - основной предрасполагающий фактор в этиопатогенезе послеродовых заболеваний у коров.

Постоянство клеточного и гуморального состава (гомеостаз) организма контролируется иммунной системой. Работа иммунной системы определяется иммунокомпетентными клетками, из которых основными являются лейкоцит во всем многообразии его популяций и субпопуляций и тканевые макрофаги. Все иммунокомпетентные клетки действуют комплексно (клеточная кооперация) в соответствии с их функцией. Так, фагоциты (моноциты, нейтрофилы и тканевые макрофаги) обеспечивают киллинг и элиминацию чужеродного агента, развитие вспомогательных процессов и запуск многих механизмов специфических реакций, активизирующих или подавляющих иммунный ответ, Т-лимфоциты - клеточный, а макрофаги и В-лимфоциты - гуморальный иммунитет. Под воздействием различного рода иммунодепрессантов развивается недостаточность механизмов иммунитета (клеточного или гуморального или отдельных его звеньев) [1, 2].

Для восполнения иммунологической недостаточности применяют различные группы препаратов - неспецифических иммуностимуляторов (корпускулярные иммуностимуляторы: липосомы, латекс, микроцеллюлоза и др.; препараты микробного, вирусного происхождения и их синтетические аналоги: продигиозан, зимозан, ликопид и др.; препараты из тканей человека и животных и их синтетические аналоги: тимоген, спленин, пантокрин, препараты из крови и сыворотки и др.; препараты растительного происхождения: чайного дерева, лимона, чеснока, эхинацеи и др.; синтетические иммуномодуляторы: дибазол, метилурацил, левамизол и др.; гормоны: эстрадиол, синэстрол, тироксин, тиреоидин и др.; витамины, микроэлементы и их соли) [3]. Многие витамины и микроэлементы участвуют в иммунологических реакциях, активизируя (или супрессируя) действия различных ферментов, например соединения селена, в частности натрий селенит [4], барий селенистокислый [5], селенопиран [6].

В основе механизмов действия каждого иммуностимулятора лежат особенности его химического строения, в зависимости от которых активизируется та или иная система организма. В то же время патогенез различных болезней не одинаков, поэтому при выборе иммуностимулятора необходимо иметь четкое представление о том, какие системы наиболее задействованы в данной патологии и какие он может активизировать.

Совокупность неблагоприятно воздействующих организационно-технологических факторов с физиологическими изменениями повышает окислительную нагрузку на организм отельных коров, что вызывает окислительный стресс. В предварительных исследованиях нами установлена взаимосвязь между окислительным стрессом и иммунобиохимическим гомеостазом у стельных коров, указывающая на то, что в этиопатогенезе массовых послеродовых патологий лежит состояние стрессовой дезадаптации. У коров с акушерской патологией отмечали нарушение иммунобиохимического гомеостаза за 15 дней до отела (снижение показателей гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, Т- и В-лимфоцитов, общего белка сыворотки крови (ОБС), нарушение межфракционных соотношений, повышение уровня общих липидов и холестерина, снижение уровня общих иммуноглобулинов, витамина Е, лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов) при значительном по сравнению с коровами с нормальным течением родов и послеродового периода повышении продуктов перекисного окисления (ПОЛ), в частности малонового диальдегида. Следовательно, накопление в организме высокоактивных продуктов ПОЛ является одной из причин, приводящих к супрессии факторов неспецифической иммунологической резистентности организма, т.е. иммунологической недостаточности (таблица 1).

Техническим результатом изобретения является разработка способа иммунокоррекции у сухостойных коров с одновременной профилактикой нарушений воспроизводительной функции коров в послеродовом периоде.

Технический результат достигается тем, что в способе иммунокоррекции, включающем введение биологически активных веществ, в качестве биологически активных веществ используют антиоксиданты, в качестве которых используют янтарную и аскорбиновую кислоты, при этом янтарную и аскорбиновую кислоты вводят в виде смеси в соотношении 1:1, а введение осуществляет per os в течение 20-25 дней до отела и 20-25 дней после отела. Кроме того, в данном способе смесь антиоксидантов вводят в дозе 1,0 г на голову в сутки.

Сравнение заявленных технических решений с известными позволило выявить отличные от них признаками, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "новизна".

Таблица 1.
Показатели иммунобиохимического гомеостаза коров за 15 дней до отела
Показатели	Норма	Группы коров
		с нормальным течением послеродового периода	с послеродовой патологией
Гемоглобин, г/л	99,0-129,0	101.0±1,5	89,5±1,8
Эритроциты, 10 12/л	5,0-8,0	6,1±0,2	4,7±0.1
Лейкоциты, 109 л	4,5-12,0	7,7±0,4	5,0±0,5
Т-лимфоциты, %	45-60	42.9±0,5	31,2±1,9
В-лимфоциты, %	8-15	12,8±0,8	7,4±0,6
Иммуноглобулины общие, г/л	15-25	18,9±0,3	15,5±0.2
Бактерицидная активность сыворотки крови, %	65-85	66,8±0,7	60,2±1,1
Лизоцимная активность сыворотки крови, %	6-9	6,9±0,7	4,9±0,5
Фагоцитарная активность нейтрофилов крови, %	50-60	51,2±1,5	45,2±1,4
Общий белок сыворотки крови, г/л	72-86	76,0±1,5	72,2±1,7
Альбумины, %	40 (30-50)	46,0±1,5	41,2±1,4
Глобулины, %	60
- альфа	17(12-20)	13,7±0,9	12,1±0,6
- бета	13(10-16)	14,9±1,1	13,2±0,8
- гамма	30(25-40)	25,4±1,3	33,5±1,5
Глюкоза, ммоль/л	2,2-3,3	2,24±0,2	2,09±0,1
Общие липиды, г/л	3,5-4,5	4,0±0,4	5,9±0,6
Общий холестерин, ммоль/л	2,34-4,68	4,03±0,02	12,9±0,02
Витамин Е, мкм/л	14-33	25,2±1,2	12,9±1,1
Малоновый диальдегид, мкм/л	0,59-0,95	0,89-0,03	1,79±0,02

Анализ технических решений показал, что заявленная совокупность существенных признаков неизвестна из уровня техники, следовательно, данные технические решения соответствуют критерию "изобретательский уровень".

Осуществимость и эффективность способа иммунокоррекции определяли в научно-производственных экспериментах на сухостойных коровах черно-пестрой породы с молочной продуктивностью 3500-3800 кг в условиях хозяйства с высокой (более 90%) заболеваемостью репродуктивных органов после отела. Состояние иммунобиохимического гоместаза оценивали по уровню следующих показателей: гемоглобина, эритроцитов, ОБС, общих иммуноглобулинов (определяли общепринятыми методами), глюкозы (определяли ортотолуидиновым методом), общих липидов (определяли по Криницкому в модификации Волгина,1969), продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты и кетодиены (определяли по Плацерту,1976), малоновый диальдегид (определяли с тиобарбитуровой кислотой), лизоцимной активности сыворотки крови (определяли по В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определяли по О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определяли по B.C.Гостеву).

Результаты исследований подвергали биометрической обработке и корреляционному анализу с применением компьютерной программы.

Сущность способа поясняется примерами.

Пример 1. Эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 как иммунокорректора изучали на 5 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В течение 20-25 дней до предполагаемого отела и 20-25 дней после отела коровам опытных групп применяли внутрь янтарную кислоту и смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 по следующей схеме: первая группа - янтарная кислота в дозе 1,0 г на голову в сутки; вторая, третья и четвертая группы: смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 0,5, 1,0 и 1,5 г на голову в сутки соответственно. Перед проведением опыта и на 2-3 день после отела брали кровь для изучения иммунобиохимического гомеостаза. Результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2.
Иммунокорригирующая эффективность янтарной и аскорбиновой кислот (1:1)
ПОКАЗАТЕЛИ	Группы коров
	1-ая	2-ая	3-ая	4-ая	5-ая
	Янтарная кислота 1,0 г на голову в сутки	Смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1), г на голову в сутки			Контроль (без препаратов)
		0,5	1,0	1,5
Гемоглобин, г/л	93,7±2,0	94,4±1,9	95,0±2,5	93,9±2,5	95,7±3,0
	112,0±2,5	114,0±1,1	119,0±2,0	119,0±2,0	98,0±2,0
Эритроциты, 10 12/л	5,4±0,25	5,4±0,1	5,2±0,25	5.2±0.25	5,2±0,24
	5,9±0,3	6,1±0,2	6,0±0,2	6,0±0,1	5,3±0,15
ОБС, г/л	72,0+1,3	72.3+1.5	70,7±1,1	72,0±1,4	72,2±1,5
	76,7±1,4	77,3±1,7	79,0±1,2	79,0±1,2	73,0±1,1
Гамма-глобулины, %	23,1±1,6	23.5±1,2	23,0±2,0	22,9±1,5	23,9±1,7
	28,0±1,3	28,5±1,2	29,9±1,3	29,8±2,0	21,0±1,4
Глюкоза, м моль/л	2,03±0,3	2.01±0.2	2,09±0,2	2,05±0,2	2,15±0,3
	2,45±0,2	2,46±0,1	2.64±0,2	2,58±0,2	1,13±0,4
Общие липиды, г/л	5.69±0.5	5.70±0.5	5.61+0.3	5.65±0.5	5.72±0.5
	4,98±0,5	4,99±0,4	4,87±0,5	4,93±0,4	5,96±0,6
Лизоцимная	3,3±0,1	3,5+0,2	3,6+0,1	3,4±0,3	3,5±0,3
активность, %	4,2±0,2	4,4±0,2	4,8±0,2	4,4±0,2	2,0±0,2
Бактерицидная	64,4±1,7	64,0±1,6	63,0±1,5	64,5±1,8	65,5±1,7
активность, %	73,0±1,7	74,2±1,7	79,7±1,8	79,0±1,9	60,7±1,6
Фагоцитарная активность	45,7±1,8	45,0±1,4	43,5±1,3	44,0±1,5	45,8±1,5
нейтрофилов, %	49,0±0,2	51,0±1,5	52,2±1,5	51.5±1,6	38,9±1,4
Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела; в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела

Полученные данные подтвердили стимулирующее действие янтарной кислоты и смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 на показатели иммунобиохимического гомеостаза, которое было наиболее выраженным при применении смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1, причем оно оказалось дозозависимым. Так, средняя доза (1,0 г на голову в сутки) обеспечивала максимальные показатели иммунной активности. Максимальная доза (1,5 г на голову в сутки) обеспечивала показатели выше минимальной (0,5 г на голову в сутки), но ниже или на уровне средней дозы, что делало повышение дозы нецелесообразным. Результаты, полученные при испытании граничных значений доз, позволили рекомендовать дозу 1,0 г на голову в сутки как оптимальную для применения на практике.

Пример 2. Профилактическую эффективность смеси янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в сравнении с известными способами изучали на 4 группах сухостойных коров, сформированных по принципу аналогов, из них одна - контрольная. Все животные содержались в одинаковых условиях на рационах, сбалансированных по питательным, витаминным и минеральным веществам. В 1-й группе коровам за 20-25 дней до отела вводили внутримышечно однократно 0,5% раствор селенита натрия (способ-аналог), во 2-й группе коровам за 20-25 дней до и в первые 20 дней после отела вводили внутримышечно тетравит один раз в 10 дней (базовый способ), в 3-й группе коровам в течение 20-25 дней до и 20-25 дней после отела давали внутрь смесь янтарной и аскорбиновой кислот в соотношении 1:1 в дозе 1,0 г на голову в сутки. За животными вели наблюдения, отмечали характер течения предродового, родов и послеродового периодов, проводили клинико-гинекологические обследования коров, учитывали количество заболевших животных, сроки инволюции репродуктивных органов и осеменения. Состояние иммунобиохимического гомеостаза определяли, как в примере 1. Результаты представлены в таблицах 3, 4.

Таблица 3.
Состояние иммунобиохимического гомеостаза
Показатели	Группы коров
	1-я	2-я	3-я	4-я
Примененный способ	Аналог: натрия селенит внутримышечно	Базовый: тетравит внутримышечно	Заявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1) внутрь	Без препаратов
Гемоглобин, г/л	93,7±2,0	94,0±2,2	95,0±2,5	95,7±3,0
	112,0±2,5	101,0±2,0	119,0±2,0	98,0±2,0
Эритроциты,	5,4±0,25	5,2±0,3	5,2±0,25	5,2±0,24
1012/л	5,9±0,3	5,7±0,2	6,0±0,2	5,3±0,15
Общий белок	72,0±1,3	71,0±1,2	70,7±1,1	72,2±1,5
сыворотки, г/л	76,7±1,4	75,2±1,5	79,0±1,2	73,0±1,1
Гамма-глобулины,	23.1±1.6	22.8±1.3	23.0±2.0	23,9±1.7
%	28,0±1,3	26,2±1,5	29,9±1,3	21,0±1,4
Глюкоза, ммоль/л	2,03±0,3	2.20±0.4	2,09±0,2	2,15±0,3
	2,45±0,2	2,87±0.3	2,64±0,2	1,13±0,4
Лизоцимная	3,3±0,1	3,4±0,3	3,6±0,1	3,5±0,3
активность, %	4,2±0,2	4,0±0.1	4,8±0.2	2,0±0,2
Бактерицидная	64,4±1,7	66,3±1,6	63,0±1,5	65,5±1,7
активность, %	73,0±1,7	75,5±1,7	79,7±1,8	60,7±1,6
Фагоцитарная	45,7±1,8	44.8±1.4	43.5±1.3	45,8±1.5
активность нейтрофилов, %	49,0±0,2	49,2±1,5	52,2±1,5	38,9±1,4
Диеновые конъюгаты,	0,24±0,02	0,24±0,02	0,23±0,03	0,22±0,03
ед. А/мл	0,28±0,02	0,32±0,03	0,24±0,01	0,36±0,04
Кетодиены, ед. А/мл	0.055±0.001	0.055±0.001	0.056±0.001	0,056±0,001
	0,065±0,002	0,065±0,002	0,061±0,002	0,098±0,001
Малоновый	2,72±0,03	2,73±0,002	2,74±0,02	2,72±0,03
диальдегид, мкмоль/л	2,76±0,02	3,00±0,03	2,76±0,02	3,60±0,03

Таблица 4.
Сравнительная эффективность способов профилактики послеродового эндометрита коров
Показатели	Группы коров
	1-я	2-я	3-я	4-я
	Аналог: натрия селенит	Базовый: тетравит	Заявленный: смесь янтарной и аскорбиновой кислот (1:1)	Без препаратов
Количество коров, подвергнутых профилактической обработке, гол.	32	27	33	10
Заболело послеродовым эндометритом, гол.	11	16	3	10
Профилактическая эффективность, %	65,6	40,7	90,9	0
Сроки инволюции половых органов, дни	26,7±2,5	34,2±4,5	23,3±1,9	49,7±5,0
Период от отела до осеменения, дни	64,4±3,2	72,2±3,7	48,2±2,5	93,5±8,5

Иммунобиохимический статус коров за 20-25 дней до отела характеризовался низкими показателями гемоглобина (на 3,3-5,6% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), эритроцитов (на 10-13% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), ОБС (на уровне нижней границы физиологической нормы), гамма-глобулинов (на 4,4-8,8% ниже уровня нижней границы физиологической нормы), глюкозы (на уровне нижней границы физиологической нормы), лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов крови (на уровне нижней границы физиологической нормы) на фоне высокого уровня продуктов ПОЛ: диеновых конъюгатов (в 1,59-1,74 раза выше физиологической нормы), кетодиенов (в 1,08-1,1 раза выше физиологической нормы), малонового диальдегида (в 4,59-4,64 раза выше физиологической нормы). После отела у коров контрольной группы отмечалось дальнейшее снижение показателей иммунологической реактивности (лизоцимная активность сыворотки крови понизилась на 42,9%, бактерицидная активность сыворотки крови - на 7,3%, фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 15%) при более выраженном, чем в опытных группах, повышении показателей продуктов ПОЛ. Так, уровень диеновых конъюгатов повысился на 63,6% по сравнению с 16,7% (способ-аналог), 33,3% (базовый способ) и 4,4% (заявленный способ), уровень кетодиенов - на 75,0% по сравнению с 18,2% (способ-аналог), 54,2% (базовый способ), 8,9% (заявленный способ), уровень малонового диальдегида - на 32,4% по сравнению с 1,5% (способ-аналог), 9,9% (базовый способ) и 0,7% (заявленный способ). Во всех опытных группах проявилась тенденция к нормализации иммунобиохимических показателей. Более ярко выраженные изменения нормализующего характера установлены в третьей опытной группе (заявленный способ). Так, лизоцимная активность сыворотки крови повысилась на 33,3% по сравнению с 21,9% (способ-аналог) и 17,7% (базовый способ), бактерицидная активность сыворотки крови - на 26,5% по сравнению с 14,8% (способ-аналог) и 13,9% (базовый способ) и фагоцитарная активность нейтрофилов крови - на 20% по сравнению с 8% (способ-аналог) и 9,8% (базовый способ) (таблица 3). Эффективность профилактики послеродового эндометрита у коров в третьей группе составила 90,9% по сравнению с 65,6% в первой группе (способ-аналог), 40,7% во второй группе (базовый способ) и 0% в четвертой группе (таблица 4).

Результаты проведенных исследований подтвердили, что при реализации заявленной совокупности существенных признаков достигается технический результат - иммунокоррекция у сухостойных коров, проявляющаяся нормализацией основных показателей иммунобиохимического гомеостаза, включая показатели естественной резистентности, что обеспечивает нормальное течение родов и послеродового периода.

Источники информации

1. Притулин П.И., Калмыкова Т.П. Инфекционные проблемы иммунодефицита животных //Вестник сельскохозяйственной науки. - 1989. - №2. - С.95-100.

2. Игнатов П.Е. Иммунитет и инфекция. Возможности управления. - М.: Время, 2002. - 350 с.

3. Теория и практика использования биологически активных веществ в животноводстве, Киров, 6-7 октября 1998 г.: Тез. докл. науч. конф. Киров, 1998. - 98 с.

4. Соколов В.Д. Фармакология, 2-е изд., исправленное и дополненное. М.: Колос, 2000. - С.360-361.

5. RU 2201237 C2, 27.03.2003.

6. RU 2212888 C2, 07.09.2003.